2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法
阅读说明：本技术 2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法 (Chiral separation and detection method of 2, 3-dibenzoyloxy-4-dimethylamino-4-oxobutyric acid ) 是由 陆茜 刘青鲜 孙雅丽 于 2021-09-03 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法,属于分析检测方法领域。本发明提供的分离检测方法,包括：包括如下步骤：使用稀释剂溶解待测样品,得待检测液；使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测,正相高效液相色谱法的色谱条件为：IC 4.6×250mm,5μm手性色谱柱,流动相由流动相A和流动相B组成,紫外检测波长为220nm-260nm,流速为0.5mL/min-1.5mL/min,柱温为25℃-35℃,流动相A为含有添加剂的乙醇,流动相B为正己烷,添加剂选自三乙胺、三乙醇胺以及甲酸中的任意一种或多种,洗脱程序为流动相A与流动相B的体积比为(60-70)：(30-40)。本发明能够简单有效地分离检测,而且峰型良好,分离度高。(The invention provides a chiral separation detection method of 2, 3-dibenzoyloxy-4-dimethylamino-4-oxobutyric acid, belonging to the field of analysis detection methods. The separation detection method provided by the invention comprises the following steps: the method comprises the following steps: dissolving a sample to be detected by using a diluent to obtain a liquid to be detected; detecting the liquid to be detected by using normal-phase high performance liquid chromatography, wherein the chromatographic conditions of the normal-phase high performance liquid chromatography are as follows: IC 4.6 is multiplied by 250mm,5 μm chiral chromatographic column, mobile phase is composed of mobile phase A and mobile phase B, ultraviolet detection wavelength is 220nm-260nm, flow rate is 0.5mL/min-1.5mL/min, column temperature is 25 ℃ -35 ℃, mobile phase A is ethanol containing additive, mobile phase B is n-hexane, additive is selected from one or more of triethylamine, triethanolamine and formic acid, elution procedure is that volume ratio of mobile phase A and mobile phase B is (60-70): (30-40). The invention can simply and effectively separate and detect, and has good peak shape and high separation degree.)
技术领域
本发明涉及一种分析检测方法，具体涉及一种2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法。
背景技术
(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸(下面简称为化合物I)的结构式为：
化合物I的对映异构体为(2R，3R)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸(下面简称为化合物II)，其结构式为：
在现有技术中，化合物I以及化合物II通常被用来与手性胺成盐，再利用不同手性盐的溶解性差异从而实现手性拆分。
如申请号为201880031547.4的中国专利公开了使用化合物I来对外消旋的(顺)-3-乙酰胺基-4-烯丙基-N-(叔丁基)吡咯烷-3-羧酰胺进行拆分，最终能以77％的收率和99.5％的ee值得到单一构型的产物。
然而，现有技术中，很难用常规的方法对化合物I和化合物II这对对映异构体进行拆分和监测。
发明内容
本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种高效准确的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法。
本发明提供了一种2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法，具有这样的特征，包括：包括如下步骤：步骤1，使用稀释剂溶解待测样品，得待检测液；步骤2，使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测，其中，正相高效液相色谱法的色谱条件为：IC 4.6×250mm，5μm手性色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，紫外检测波长为220nm-260nm，流速为0.5mL/min-1.5mL/min，柱温为25℃-35℃，流动相A为含有添加剂的乙醇，流动相B为正己烷，添加剂选自三乙胺、三乙醇胺以及甲酸中的任意一种或多种，洗脱程序为流动相A与流动相B的体积比为(60-70)：(30-40)。
在本发明提供的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，稀释剂为甲醇、乙醇、乙腈、水中的任意一种或多种。
在本发明提供的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，稀释剂为乙醇。
在本发明提供的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，待检测液中待测样品的浓度为5mg/mL-20mg/mL。
在本发明提供的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，添加剂为0.2vol％-0.5vol％的三乙胺。
在本发明提供的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，添加剂为0.2vol％-0.5vol％的三乙醇胺以及0.2vol％-0.5vol％甲酸。
在本发明提供的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，洗脱程序中流动相A与流动相B的体积比为60:40。
在本发明提供的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，流速为0.5mL/min-0.8mL/min。
在本发明提供的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，检测波长为230nm-245nm。
在本发明提供的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法中，还可以具有这样的特征：其中，色谱条件还包括：待检测液的进样量为1μL-5μL。
发明的作用与效果
根据本发明所涉及的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法，因为选用了常规的手性柱以及合适的流动相，所以，本发明不仅能够简单有效地分离检测，而且峰型良好，分离度高，适用于在实验中中快速检测该化合物及其对映异构体。
附图说明
图1是本发明的实施例1-1中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的高效液相色谱图；
图2是本发明的实施例1-2中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的高效液相色谱图；
图3是本发明的实施例1-2中(2R，3R)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的高效液相色谱图；
图4是本发明的实施例2中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的高效液相色谱图；
图5是本发明的实施例2中(2R，3R)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的高效液相色谱图；
图6是本发明的实施例3中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的高效液相色谱图；
图7是本发明的实施例4中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的高效液相色谱图；
图8是本发明的对比例1中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的高效液相色谱图；
图9是本发明的对比例2中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的高效液相色谱图；
图10是本发明的对比例3中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的高效液相色谱图；
图11是本发明的对比例4中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的高效液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下结合实施例及附图对本发明作具体阐述。
在下述实施例及对比例中，所使用的液相设备为安捷伦公司生产的1100型号高效液相色谱仪。
在下述实施例及对比例中，所使用的色谱柱均为大赛璐公司Daicel ChiralcelIC生产的手性色谱柱。
在下述实施例及对比例中，流动相中涉及的比例除另有注明外均为体积比，洗脱梯度中涉及的比例除另有注明外均为体积比。
在下述实施例及对比例中，(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸和(2R，3R)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸均参考申请号为201880031547.4的中国专利自行制备。
在下述实施例及对比例中，2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品由自制的(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸和自制的(2R，3R)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合得到。
在下述实施例中，乙醇(含有0.5％三乙醇胺以及0.5％无水甲酸)为100个单位体积的乙醇中添加0.5个单位体积的三乙醇胺和0.5个单位体积的无水甲酸后混合均匀得到的，一般的配制方法可以是向100mL乙醇中加入0.5mL三乙醇胺以及0.5mL无水甲酸，混合均匀得到。
在下述实施例中，乙醇(含有0.2％三乙胺)为100个单位体积的乙醇中添加0.2个单位体积的三乙胺后混合均匀得到的，一般的配制方法可以是向100mL乙醇中加入0.2mL三乙胺，混合均匀得到。
<实施例1-1>
本实施例提供了一种2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法，具体步骤如下：
步骤1，使用乙醇稀释2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品，得到待检测液，待检测液中2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品的浓度为10mg/mL。
步骤2，使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测，正相高效液相色谱法的色谱条件如表1所示。
表1实施例1的液相条件表
色谱柱
IC柱(4.6×250mm,5μm)
流动相A
乙醇(含有0.5％三乙醇胺以及0.5％无水甲酸)
流动相B
正己烷
洗脱梯度
A-B(60:40)
柱温
35℃
流速
0.8mL/min
运行时间
25min
检测波长
230nm
稀释剂
乙醇
样品浓度
10mg/mL
进样量
2μL
保留时间
化合物IRT＝9.942分钟，化合物IIRT＝18.627分钟
液相谱图如图1所示，一对对映异构体在谱图中完全分离，且基线平稳，峰型良好，并且能够在25分钟之内出峰完毕。
<实施例1-2>
本实施例采用与实施例1相同的方法分别对(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸和(2R，3R)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸进行检测，液相谱图如图2-3所示，其中，图2对应的化合物为(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸，图3对应的化合物为(2R，3R)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸。
如图2-3所示，目标化合物出峰位置不存在杂峰干扰，且基线平稳，峰型良好。
<实施例2>
本实施例提供了一种2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法，具体步骤如下：
步骤1，使用乙醇稀释(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸或(2R，3R)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸，得到待检测液，待检测液中(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸或的2R，3R)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸浓度为10mg/mL。
步骤2，使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测，正相高效液相色谱法的色谱条件如表2所示。
表2实施例2的液相条件表
液相谱图如图4-5所示，采用本实施例提供的液相条件时，(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的液相谱图分离度较好且基线平稳，峰型良好，但保留时间相对于实施例1变长，但是也能在35分钟内出峰完毕。
<实施例3>
本实施例提供了一种2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法，具体步骤如下：
步骤1，使用乙醇稀释2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品，得到待检测液，待检测液中2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品的浓度为10mg/mL。
步骤2，使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测，正相高效液相色谱法的色谱条件如表3所示。
表3实施例3的液相条件表
液相谱图如图6所示，采用本实施例提供的液相条件时，(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的液相谱图分离度较好且基线平稳，但是峰型较差。
<实施例4>
本实施例提供了一种2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法，具体步骤如下：
步骤1，使用乙醇稀释2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品，得到待检测液，待检测液中2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品的浓度为10mg/mL。
步骤2，使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测，正相高效液相色谱法的色谱条件如表4所示。
表4实施例4的液相条件表
液相谱图如图7所示，采用本实施例提供的液相条件时，(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体的峰能够分离，且出峰快，能够在15分钟以内出峰完毕，但是分离度较差，且基线不够平稳。
<对比例1>
本对比例提供了一种分离检测方法，具体步骤如下：
步骤1，使用乙醇稀释2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品，得到待检测液，待检测液中2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品的浓度为10mg/mL。
步骤2，使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测，正相高效液相色谱法的色谱条件如表5所示。
表5对比例1的液相条件表
色谱柱
IC柱(4.6×250mm,5um)
流动相A
乙醇
流动相B
正己烷
洗脱梯度
A-B(100:0)
柱温
35℃
流速
0.5mL/min
运行时间
30min
检测波长
230nm
稀释剂
乙醇
样品浓度
10mg/mL
进样量
2μL
液相谱图如图8所示，(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体在该液相条件下无法分离。
<对比例2>
本对比例提供了一种分离检测方法，具体步骤如下：
步骤1，使用乙醇稀释2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品，得到待检测液，待检测液中2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品的浓度为10mg/mL。
步骤2，使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测，正相高效液相色谱法的色谱条件如表6所示。
表6对比例2的液相条件表
色谱柱
IC柱(4.6×250mm,5um)
流动相A
乙醇
流动相B
正己烷
洗脱梯度
A-B(70:30)
柱温
35℃
流速
0.5mL/min
运行时间
20min
检测波长
230nm
稀释剂
乙醇
样品浓度
10mg/mL
进样量
2μL
液相谱图如图8所示，(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体在该液相条件下无法完全分离。
<对比例3>
本对比例提供了一种分离检测方法，具体步骤如下：
步骤1，使用乙醇稀释2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品，得到待检测液，待检测液中2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品的浓度为10mg/mL。
步骤2，使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测，正相高效液相色谱法的色谱条件如表7所示。
表7对比例3的液相条件表
色谱柱
AD-H柱(4.6×250mm,5um)
流动相A
乙醇
流动相B
正己烷
洗脱梯度
A-B(70:30)
柱温
35℃
流速
0.5mL/min
运行时间
20min
检测波长
230nm
稀释剂
乙醇
样品浓度
10mg/ml
进样量
2μL
液相谱图如图9所示，(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体在该液相条件下也无法完全分离。
<对比例4>
本对比例提供了一种分离检测方法，具体步骤如下：
步骤1，使用乙醇稀释2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品，得到待检测液，待检测液中2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸混合样品的浓度为10mg/mL。
步骤2，使用正相高效液相色谱法对待检测液进行检测，正相高效液相色谱法的色谱条件如表8所示。
表8对比例4的液相条件表
色谱柱
OD-H柱(4.6×250mm,5um)
流动相A
乙醇
流动相B
正己烷
洗脱梯度
A-B(70:30)
柱温
35℃
流速
0.5mL/min
运行时间
30min
检测波长
230nm
稀释剂
乙醇
样品浓度
10mg/mL
进样量
2μL
液相谱图如图9所示，(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体在该液相条件下不仅无法分离，而且基线不平，无法适用。
实施例的作用与效果
根据本发明所涉及的2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸的手性分离检测方法，因为在流动相A中添加了合适的添加剂，从而能够顺利地将(2S，3S)-2,3-二苯甲酰氧基-4-二甲基氨基-4-氧代丁酸及其对映异构体有效分离，尤其是在流动相A中添加了0.5％三乙醇胺以及0.5％无水甲酸后，不仅能够以高分离度分离两个峰，而且峰型良好，基线平稳。
上述实施方式为本发明的优选案例，并不用来限制本发明的保护范围。