一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉及其制备方法
阅读说明：本技术 一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉及其制备方法 (Freeze-dried powder of composite hormone of somatotropin and chorionic gonadotropin and preparation method thereof ) 是由 岳春梅 张世忠 陈君德 方斌奇 王亚佩 施明华 王国源 杜雄伟 于 2021-01-26 设计创作，主要内容包括：本发明属于兽药技术领域,具体涉及一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉及其制备方法。一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉,制备原料包括：血促性素、绒促性素、稳定剂、赋形剂、缓冲剂和水。发明人发现血促性素和绒促性素复合具有协同和增效作用,本发明的技术方案将血促性素和绒促性素按一定比例溶解混合均匀后,通过调节冷冻干燥技术中的参数,可以最大限度的保持血促性素和绒促性素的生物活性和稳定性,延长保存时间,同时没有任何副作用和安全隐患。同时大幅度提高了复合激素的作用效果,很好的解决了母畜或公畜的繁殖问题。(The invention belongs to the technical field of veterinary drugs, and particularly relates to freeze-dried powder of a compound hormone of a gonadotropin and a chorionic gonadotropin and a preparation method thereof. A freeze-dried powder of composite hormone of blood gonadotropin and chorionic gonadotropin is prepared from the following raw materials: menotropins, chorionic gonadotropins, stabilizers, excipients, buffers and water. The inventor finds that the composite of the gonadotropins and the chorionic gonadotropins has synergistic and synergistic effects, and the technical scheme of the invention can maintain the biological activity and stability of the gonadotropins and the chorionic gonadotropins to the maximum extent and prolong the storage time by adjusting the parameters in the freeze drying technology after the gonadotropins and the chorionic gonadotropins are dissolved and mixed uniformly according to a certain proportion, and does not have any side effect or potential safety hazard. Meanwhile, the action effect of the compound hormone is greatly improved, and the breeding problem of female livestock or male livestock is well solved.)
技术领域
本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉及其制备方法。
背景技术
血促性素全称为孕马血清促性腺激素(PMSG)，来源于马属动物胎盘的杯状结构。是糖蛋白激素中唯一独特的促性腺激素，同一分子中具有黄体生成素(LH)和促卵泡生成素(FSH)两种促性腺激素的活性，对母畜可以刺激卵巢增长，进而增加卵巢重量。促进卵泡发育至接近成熟，使卵泡颗粒细胞增生，卵泡液分泌增多，促卵泡素与促黄体素协同作用可促使卵泡内膜细胞分泌雌激素，引起母畜发情。对公畜促进睾丸生精上皮发育和精子形成,提升精液质量，能增加雄激素分泌，提高性兴奋。绒促性素(HCG)是胎盘产生的一种糖蛋白激素，能刺激性腺活动，同样具有促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)作用，对母畜可促进黄体生成黄体素并能促进排卵。对公畜可促进睾丸间质细胞分化和雄激素分泌，促使性器副性征的发育、成熟。
目前兽药市场上，单独的血促性素和绒促性素冻干粉产品很多，效果也参差不齐，主要是由于配方差异、冷冻干燥过程的差异造成的，但是单一的血促性素或者绒促性素不能很好的解决母畜或公畜的繁殖问题。目前兽药市场上还未有血促性素和绒促性素复合激素的产品。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的第一个方面提供了一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉，制备原料包括：血促性素、绒促性素、稳定剂、赋形剂、缓冲剂和水。
优选的，所述稳定剂为环氧丙基二钠盐和/或卵磷脂。
优选的，所述赋形剂选自甘露醇、山梨醇、α-乳糖、海藻糖、右旋糖酐40、右旋糖酐70中的至少一种。
优选的，所述赋形剂为甘露醇和α-乳糖的混合物，所述甘露醇和α-乳糖的质量比为(3-5)：1。
优选的，所述缓冲剂选自盐酸、柠檬酸、山梨酸和钠盐中的至少一种。
优选的，所述缓冲剂为柠檬酸和钠盐的混合物，所述柠檬酸和钠盐的质量比为1：(2-3)。
优选的，所述钠盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和碳酸氢钠中的至少一种。
优选的，所述水为注射用生理盐水。
本发明的第二个方面提供了一种所述的血促性素和绒促性素复合激素冻干粉的制备方法，至少包括以下步骤：
(1)在无菌环境下，将血促性素和绒促性素加入到0-40℃的水中，并进行搅拌得到混合物A；
(2)在无菌环境下，将赋形剂加入到混合物A中，并搅拌得到混合物B；
(3)在无菌环境下，在混合物B中加入缓冲剂得到混合物C,所述混合物C的PH在6.8-7.3；
(4)对混合物C进行除菌和过滤，之后进行灌装，灌装完成后得到产品D,并对产品D进行冷冻干燥和轧盖，即得到包装好的复合激素冻干粉。
优选的，所述冷冻干燥至少包括以下步骤：
(1)将所述产品D放入埋植有感温仪的冷冻干燥箱中，并进行持续降温至-40℃进行冷冻，降温和冷冻的总时间控制在3-6h；
(2)对冷冻干燥箱进行抽真空至2-30Pa，并进行缓慢升温，升温至20-35℃，总时间控制在10-12h；
(3)在真空状态下，在6-8h内升温至35-40℃，然后继续保温2-4h。
有益效果：发明人发现血促性素和绒促性素复合具有协同和增效作用，本发明的技术方案将血促性素和绒促性素按一定比例溶解混合均匀后，通过调节冷冻干燥技术中的参数，可以最大限度的保持血促性素和绒促性素的生物活性和稳定性，延长保存时间，同时没有任何副作用和安全隐患。同时大幅度提高了复合激素的作用效果，很好的解决了母畜或公畜的繁殖问题。
附图说明
图1是实施例1中的血促性素和绒促性素复合激素冻干粉制备方法的流程工艺图。
具体实施方式
为了下面的详细描述的目的，应当理解，本发明可采用各种替代的变化和步骤顺序，除非明确规定相反。此外，除了在任何操作实例中，或者以其他方式指出的情况下，表示例如说明书和权利要求中使用的成分的量的所有数字应被理解为在所有情况下被术语“约”修饰。因此，除非相反指出，否则在以下说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是根据本发明所要获得的期望性能而变化的近似值。至少并不是试图将等同原则的适用限制在权利要求的范围内，每个数值参数至少应该根据报告的有效数字的个数并通过应用普通舍入技术来解释。
尽管阐述本发明的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但是具体实例中列出的数值尽可能精确地报告。然而，任何数值固有地包含由其各自测试测量中发现的标准偏差必然产生的某些误差。
当本文中公开一个数值范围时，上述范围视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。例如，从“1至10”的指定范围应视为包括最小值1与最大值10之间的任何及所有的子范围。范围1至10的示例性子范围包括但不限于1至6.1、3.5至7.8、5.5至10等。
为解决上述技术问题，本发明的第一个方面提供了一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉，制备原料包括：血促性素、绒促性素、稳定剂、赋形剂、缓冲剂和水。
作为一种优选的技术方案，所述稳定剂为环氧丙基二钠盐和/或卵磷脂。
本技术方案中的稳定剂起到维持血促性素和绒促性素的结构稳定性，能够有效限制血促性素和绒促性素分子内部的结构变化，同时增强血促性素和绒促性素在动物体内的作用效果。
作为一种优选的技术方案，所述赋形剂选自甘露醇、山梨醇、α-乳糖、海藻糖、右旋糖酐40、右旋糖酐70中的至少一种。
作为一种优选的技术方案，所述赋形剂为甘露醇和α-乳糖的混合物，所述甘露醇和α-乳糖的质量比为(3-5)：1。
本技术方案中通过赋形剂提供冻干粉的基本骨架，形成疏松结实的均匀骨架，改善冻干粉的外观，防止在产品冻干过程中因塌陷而诱导血促性素和绒促性素结构的破坏。
作为一种优选的技术方案，所述缓冲剂选自盐酸、柠檬酸、山梨酸和钠盐中的至少一种。
作为一种优选的技术方案，所述缓冲剂为柠檬酸和钠盐的混合物，所述柠檬酸和钠盐的质量比为1：(2-3)。
作为一种优选的技术方案，所述钠盐选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和碳酸氢钠中的至少一种。
本技术方案中通过添加缓冲剂，保证冻干粉的pH在一定的范围内，保证成分的稳定，以及在临床中的适用性。
作为一种优选的技术方案，所述水为注射用生理盐水。
本发明的第二个方面提供了一种所述的血促性素和绒促性素复合激素冻干粉的制备方法，至少包括以下步骤：
(1)在无菌环境下，将血促性素和绒促性素加入到0-40℃的水中，并进行搅拌得到混合物A；
(2)在无菌环境下，将赋形剂加入到混合物A中，并搅拌得到混合物B；
(3)在无菌环境下，在混合物B中加入缓冲剂得到混合物C,所述混合物C的PH在6.8-7.3；
(4)对混合物C进行除菌和过滤，之后进行灌装，灌装完成后得到产品D,并对产品D进行冷冻干燥和轧盖，即得到包装好的复合激素冻干粉。
作为一种优选的技术方案，所述冷冻干燥至少包括以下步骤：
(1)将所述产品D放入埋植有感温仪的冷冻干燥箱中，并进行持续降温至-40℃进行冷冻，降温和冷冻的总时间控制在3-6h；
(2)对冷冻干燥箱进行抽真空至2-30Pa，并进行缓慢升温，升温至20-35℃，总时间控制在10-12h；
(3)在真空状态下，在6-8h内升温至35-40℃，然后继续保温2-4h。
另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售得到的。
实施例1
本实施例中的一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉，每1g血促性素和绒促性素复合激素冻干粉的制备原料包括：300IU血促性素、100IU绒促性素、20mg稳定剂、100mg赋形剂、缓冲剂和水，所述血促性素购自宁波三生药业有限公司，所述绒促性素购自山东鑫康生物科技有限公司。
所述稳定剂为卵磷脂，所述卵磷脂购自西亚试剂，CAS号：8002-43-5。
所述赋形剂为甘露醇和α-乳糖的混合物，所述甘露醇和α-乳糖的质量比为3：1，所述甘露醇购自阿拉丁试剂，CAS号：69-65-8，所述α-乳糖购自西亚试剂，CAS号：5989-81-1。
所述缓冲剂为柠檬酸和钠盐的混合物，所述柠檬酸和钠盐的质量比为1：3，所述钠盐为磷酸氢二钠，所述柠檬酸购自阿拉丁试剂，CAS号：5949-29-1，所述磷酸氢二钠购自阿拉丁试剂，CAS号：10028-24-7。
所述水为注射用生理盐水。
所述的血促性素和绒促性素复合激素冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)在C级洁净区中，将血促性素和绒促性素加入到40℃的生理盐水中，并进行搅拌得到混合物A；
(2)在C级洁净区中，将甘露醇和α-乳糖加入到混合物A中，并搅拌得到混合物B；
(3)在C级洁净区中，在混合物B中加入柠檬酸和磷酸氢二钠得到混合物C,使得混合物C的pH为7.0；
(4)在C级洁净区中，对混合物C进行除菌和过滤，之后在B级洁净区中灌装到西林瓶中，所述西林瓶经过生理盐水清洗两次后，再经干燥灭菌后使用，灌装后半加丁基胶塞，所述丁基胶塞先经纯化水洗后再经生理盐水进行清洗，再经干燥灭菌后使用，灌装完成后进行冷冻干燥和在A+B级洁净区中轧瓶盖、目检、贴标入托、装盒、装箱、检验和入库，即得到包装好的复合激素冻干粉，所述瓶盖为经干燥灭菌的铝制瓶盖。
所述冷冻干燥包括以下步骤：
(1)将所述产品D放入埋植有感温仪的冷冻干燥箱中，并进行持续降温至-40℃进行冷冻，降温和冷冻的总时间控制在3h；
(2)对冷冻干燥箱进行抽真空至10Pa，并进行缓慢升温，升温至30℃，总时间控制在10h；
(3)在真空状态下，在6h内升温至38℃，然后继续保温2h。
实施例2
本实施例中的一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉，每1g血促性素和绒促性素复合激素冻干粉的制备原料包括：300IU血促性素、100IU绒促性素、20mg稳定剂、100mg赋形剂、缓冲剂和水，所述血促性素购自宁波三生药业有限公司，所述绒促性素购自山东鑫康生物科技有限公司。
所述稳定剂为卵磷脂，所述卵磷脂购自西亚试剂，CAS号：8002-43-5。
所述赋形剂为甘露醇和α-乳糖的混合物，所述甘露醇和α-乳糖的质量比为4：1，所述甘露醇购自阿拉丁试剂，CAS号：69-65-8，所述α-乳糖购自西亚试剂，CAS号：5989-81-1。
所述缓冲剂为柠檬酸和钠盐的混合物，所述柠檬酸和钠盐的质量比为1：3，所述钠盐为磷酸氢二钠，所述柠檬酸购自阿拉丁试剂，CAS号：5949-29-1，所述磷酸氢二钠购自阿拉丁试剂，CAS号：10028-24-7。
所述水为注射用生理盐水。
所述的血促性素和绒促性素复合激素冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)在C级洁净区中，将血促性素和绒促性素加入到40℃的生理盐水中，并进行搅拌得到混合物A；
(2)在C级洁净区中，将甘露醇和α-乳糖加入到混合物A中，并搅拌得到混合物B；
(3)在C级洁净区中，在混合物B中加入柠檬酸和磷酸氢二钠得到混合物C,使得混合物C的pH为7.0；
(4)在C级洁净区中，对混合物C进行除菌和过滤，之后在B级洁净区中灌装到西林瓶中，所述西林瓶经过生理盐水清洗两次后，再经干燥灭菌后使用，灌装后半加丁基胶塞，所述丁基胶塞先经纯化水洗后再经生理盐水进行清洗，再经干燥灭菌后使用，灌装完成后进行冷冻干燥和在A+B级洁净区中轧瓶盖、目检、贴标入托、装盒、装箱、检验和入库，即得到包装好的复合激素冻干粉，所述瓶盖为经干燥灭菌的铝制瓶盖。
所述冷冻干燥包括以下步骤：
(1)将所述产品D放入埋植有感温仪的冷冻干燥箱中，并进行持续降温至-40℃进行冷冻，降温和冷冻的总时间控制在3h；
(2)对冷冻干燥箱进行抽真空至10Pa，并进行缓慢升温，升温至30℃，总时间控制在10h；
(3)在真空状态下，在6h内升温至38℃，然后继续保温2h。
实施例3
本实施例中的一种血促性素和绒促性素复合激素冻干粉，每1g血促性素和绒促性素复合激素冻干粉的制备原料包括：300IU血促性素、100IU绒促性素、20mg稳定剂、100mg赋形剂、缓冲剂和水，所述血促性素购自宁波三生药业有限公司，所述绒促性素购自山东鑫康生物科技有限公司。
所述稳定剂为卵磷脂，所述卵磷脂购自西亚试剂，CAS号：8002-43-5。
所述赋形剂为甘露醇和α-乳糖的混合物，所述甘露醇和α-乳糖的质量比为5：1，所述甘露醇购自阿拉丁试剂，CAS号：69-65-8，所述α-乳糖购自西亚试剂，CAS号：5989-81-1。
所述缓冲剂为柠檬酸和钠盐的混合物，所述柠檬酸和钠盐的质量比为1：3，所述钠盐为磷酸氢二钠，所述柠檬酸购自阿拉丁试剂，CAS号：5949-29-1，所述磷酸氢二钠购自阿拉丁试剂，CAS号：10028-24-7。
所述水为注射用生理盐水。
所述的血促性素和绒促性素复合激素冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)在C级洁净区中，将血促性素和绒促性素加入到40℃的生理盐水中，并进行搅拌得到混合物A；
(2)在C级洁净区中，将甘露醇和α-乳糖加入到混合物A中，并搅拌得到混合物B；
(3)在C级洁净区中，在混合物B中加入柠檬酸和磷酸氢二钠得到混合物C,使得混合物C的pH为7.0；
(4)在C级洁净区中，对混合物C进行除菌和过滤，之后在B级洁净区中灌装到西林瓶中，所述西林瓶经过生理盐水清洗两次后，再经干燥灭菌后使用，灌装后半加丁基胶塞，所述丁基胶塞先经纯化水洗后再经生理盐水进行清洗，再经干燥灭菌后使用，灌装完成后进行冷冻干燥和在A+B级洁净区中轧瓶盖、目检、贴标入托、装盒、装箱、检验和入库，即得到包装好的复合激素冻干粉，所述瓶盖为经干燥灭菌的铝制瓶盖。
所述冷冻干燥包括以下步骤：
(1)将所述产品D放入埋植有感温仪的冷冻干燥箱中，并进行持续降温至-40℃进行冷冻，降温和冷冻的总时间控制在3h；
(2)对冷冻干燥箱进行抽真空至10Pa，并进行缓慢升温，升温至30℃，总时间控制在10h；
(3)在真空状态下，在6h内升温至38℃，然后继续保温2h。
对比例1
该实施例中与实施例1不同的点在于，所述赋形剂为α-乳糖，所述α-乳糖购自西亚试剂，CAS号：5989-81-1。
对比例2
该实施例中与实施例1不同的点在于，所述赋形剂为甘露醇，所述甘露醇购自阿拉丁试剂，CAS号：69-65-8。
对比例3
该对比例中与实施例1不同的点在于所述冷冻干燥步骤：(2)对冷冻干燥箱进行抽真空至1Pa，并进行缓慢升温，升温至30℃，总时间控制在10h；其余均与实施例1中的技术特征相同。
对比例4
该对比例中与实施例1不同的点在于所述冷冻干燥步骤：(2)对冷冻干燥箱进行抽真空至15Pa，并进行缓慢升温，升温至30℃，总时间控制在10h；其余均与实施例1中的技术特征相同。
对比例5
该对比例中与实施例1不同的点在于该对比例中不含有血促性素。
对比例6
该对比例中与实施例1不同的点在于该对比例中不含有绒促性素。
性能测试
性能测试一
按照实施例1-施例3和对比例1-对比例6中的实验方法制备激素冻干粉，每组取10份进行观察，观察有无塌陷，表征冻干粉的形态。在0℃的条件下储存60天后，再观察颜色有无变化，以表征冻干粉的稳定性，有颜色变化，稳定性记录为不合格，无颜色变化，稳定性记录为合格。
性能测试二
选取90只大小、年龄相仿的健康的母兔，平均分成9组。取1g实施例1-3和对比例1-6中的激素冻干粉，加生理盐水调配成1ml注射液，试验第1天，每组母兔对应注射对应的注射液。第7天去除各组母兔的卵巢，并进行称重，表征冻干粉的效果。
有无塌陷
稳定性
卵巢重量(g)
实施例1
无
合格
0.1028
实施例2
无
合格
0.1054
实施例3
无
合格
0.1031
对比例1
有
合格
0.0997
对比例2
有
合格
0.0995
对比例3
无
不合格
0.0784
对比例4
有
不合格
0.0469
对比例5
无
合格
0.0542
对比例6
无
合格
0.0531
通过以上数据可以看出，本技术方案中通过选择合理的赋性剂、冷冻干燥过程中的各参数，使血促性素与绒促性素的复合激素冻干粉较好的实现升华，降低冻干粉中的水分，提高冻干粉的稳定应以及协同效应。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对发明作其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或更改为等同变化的等效实施例，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改，等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
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