一种核桃小分子多肽的发酵制备方法
阅读说明：本技术 一种核桃小分子多肽的发酵制备方法 (Fermentation preparation method of walnut micromolecule polypeptide ) 是由 盛军 赵存朝 王娅 刘佳 彭磊 于 2021-01-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了核桃小分子多肽发酵制备方法技术领域的一种核桃小分子多肽的发酵制备方法,将核桃仁利用低温物理压榨技术进行压榨,压榨完成后可得到核桃油和核桃粕两种产物,将核桃粕收集后将这些核桃粕导入到粉碎机中进行研磨粉碎处理,经粉碎后过40目筛,然后准备若干个250mL烧杯,每个烧杯盛装40.00g核桃粕,然后将这些烧杯放置在灭菌条件下进行无菌操作添加无菌水,利用乳酸菌结合生物发酵技术进行固态发酵,且针对多肽发酵的影响条件进行优化处理,对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录,以确定影响多肽发酵的因素,能够确定多肽产量最多的最佳条件,提高多肽发酵产量。(The invention discloses a fermentation preparation method of walnut micromolecule polypeptide in the technical field of fermentation preparation methods of walnut micromolecule polypeptide, which comprises the steps of squeezing walnut kernels by using a low-temperature physical squeezing technology to obtain two products of walnut oil and walnut dregs after squeezing is finished, collecting the walnut dregs, guiding the walnut dregs into a grinder to be ground and crushed, sieving the crushed walnut dregs by a 40-mesh sieve, preparing a plurality of 250mL beakers, containing 40.00g of walnut dregs, placing the beakers under a sterilization condition to perform aseptic operation and adding aseptic water, performing solid state fermentation by using lactic acid bacteria in combination with a biological fermentation technology, optimizing the influence conditions of polypeptide fermentation, detecting and respectively recording the output of polypeptide of each group of test objects to determine the factors influencing the polypeptide fermentation, and determining the optimal conditions of the maximum output of the polypeptide, the polypeptide fermentation yield is improved.)
技术领域
本发明涉及核桃小分子多肽发酵制备方法技术领域，具体为一种核桃小分子多肽的发酵制备方法。
背景技术
失眠病是指夜间睡眠时难以保证睡眠质量，入睡困难或睡眠时间短，睡眠浅多梦，易醒，现代医学认为导致失眠的主要原因是脑内神经长期处于过度紧张状态或情绪波动状态，如长时间的工作、高强度的心理压力、频繁倒班、过喜过悲等，长期失眠让患者精神萎靡不振，神经紊乱，免疫力降低，记忆力减退等，更可能导致脑溢血、高血压、偏瘫、糖尿病等多种疾病发作，因此增加了患者的死亡几率，为了缓解大脑皮层兴奋和抑制失衡，通常情况下采用放松疗法和药物治疗，其中治疗失眠最好的成分——小分子多肽能够达到良好的增强免疫力以及安神助眠效果，在治疗失眠方面占据着很重要的作用，但是目前市面上在核桃小分子多肽发酵方法上发酵条件不成熟，发酵条件不准确，导致小分子多肽的发酵产量较小，因此不能够充分发挥小分子多肽的作用，为此，我们提出一种核桃小分子多肽的发酵制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种核桃小分子多肽的发酵制备方法，以解决背景技术中提到的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种核桃小分子多肽的发酵制备方法，核桃小分子多肽发酵方法为：首先对核桃仁进行前处理，即将核桃仁利用低温物理压榨技术进行压榨，压榨完成后可得到核桃油和核桃粕两种产物，对其进行分离，核桃油收装食用，将核桃粕收集后将这些核桃粕导入到粉碎机中进行研磨粉碎处理，经粉碎后过40目筛，然后准备若干个250mL烧杯，每个烧杯盛装40.00g核桃粕，然后将这些烧杯放置在灭菌条件下进行无菌操作添加无菌水，其中按接种量接入发酵种子液，并通过玻璃棒搅拌搅拌5分钟，促使烧杯内的物料混合混匀，然后用纱布封口，利用乳酸菌结合生物发酵技术进行固态发酵，即可完成。
优选的，核桃小分子多肽发酵制备方法的具体步骤为：
步骤一：将权利要求1中发酵完毕后的样品取出，放置于烘箱在55度条件下干燥48小时；
步骤二：烘干完成后再将这些物料进行粉碎处理，然后过40目筛当做试验的基础原料备用；
步骤三：以发酵时间(1、2、3、4、5、6、7、8和9天)为单一研究参数，研究最佳的发酵时间参数，经过各自的发酵时间后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，在每次发酵时间完成后对多肽的产量进行分别记录，经试验得知，其最佳的发酵时间为3天；
步骤四：在确定发酵时间(3天)后，在最佳发酵时间条件下以原料粉碎粒径(不粉碎、20、40和60目)为单一研究参数，研究最佳的原料颗粒粒径发酵参数，经过3天的发酵时间后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在最佳发酵时间为3天条件下最佳的发酵原料粒径为过40目筛；
步骤五：在确定发酵时间(3天)和原料粒径(40目筛)后，在这些条件下以发酵温度(28、31、34和37度)为单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵温度参数，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在发酵时间(3天)和原料粒径(40目筛)的条件下最佳发酵温度为28度；
步骤六：在确定发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)和发酵温度(28度)后，在这些条件下以接种量(5、10、15、20和25％)为单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵接种量，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)和发酵温度(28度)的条件下最佳发酵接种量为5％；
步骤七：在确定发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)、发酵温度(28度)和发酵接种量(5％)后，在这些条件下以复合菌种比例-植物乳杆菌：嗜热链球菌：枯草芽孢杆菌(2:2:1、2:1:1、1:1:1、1:1:2、1:2:2)为单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵接种量，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)、发酵温度(28度)和发酵接种量(5％)的条件下最佳乳酸菌比例为1:1:1；
步骤八：在确定发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)、发酵温度(28度)、发酵接种量(5％)和乳酸菌比例(1:1:1)后，在这些条件下以料液比(1:0.5、1:0.75、1:1、1:1.25和1:1.5)为单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵接种量，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)、发酵温度(28度)、发酵接种量(5％)和乳酸菌比例(1:1:1)的条件下最佳料液比为1:1.25；
步骤九：在进行核桃小分子多肽发酵制备时，其最佳的发酵条件为：发酵时间3天、原料粒径40目、发酵温度28度、接种量5％、乳酸菌比例1:1:1和料液比1:1.25，在此条件下，多肽发酵量最多。
优选的，将核桃油和核桃粕两种产物通过滤筛采用晃动的方式进行分离，同时将滤筛静置一段时间，促使核桃油不会黏着在滤筛上，提高对核桃油的提取率。
优选的，在烧杯盛装核桃粕时需要用精准小天平进行称量；控制灭菌条件为：灭菌温度为121度，且灭菌时间为20分钟；纱布封口时用皮筋将烧杯口封住。
优选的，步骤三中试验过程中将单一因素的发酵时间作为变量，登记表格，得出不同发酵时间下的九组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的发酵时间。
优选的，步骤四中试验过程中将单一因素的原料粉碎粒径作为变量，登记表格，得出不同原料粉碎粒径下的四组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的原料粉碎粒径。
优选的，步骤五中试验过程中将单一因素的发酵温度作为变量，登记表格，得出不同发酵温度下的四组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的发酵温度。
优选的，步骤六中试验过程中将单一因素的接种量作为变量，登记表格，得出不同接种量下的五组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的接种量。
优选的，步骤七中试验过程中将单一因素的复合菌种比例-植物乳杆菌：嗜热链球菌：枯草芽孢杆菌作为变量，登记表格，得出不同复合菌种比例下的五组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的复合菌种比例。
优选的，步骤八中试验过程中将单一因素的料液比作为变量，登记表格，得出不同发酵时间下的五组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的料液比。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1.本发明将核桃仁利用低温物理压榨技术进行压榨，压榨完成后可得到核桃油和核桃粕两种产物，对其进行分离，核桃油收装食用，将核桃粕收集后将这些核桃粕导入到粉碎机中进行研磨粉碎处理，经粉碎后过40目筛，然后准备若干个250mL烧杯，每个烧杯盛装40.00g核桃粕，然后将这些烧杯放置在灭菌条件下进行无菌操作添加无菌水，其中按接种量接入发酵种子液，并通过玻璃棒搅拌搅拌5分钟，促使烧杯内的物料混合混匀，然后用纱布封口，利用乳酸菌结合生物发酵技术进行固态发酵；
2.本发明不同于传统的酶法制备多肽方法，为核桃多肽的制备提供一个新途径，本发明针对多肽发酵的影响条件进行优化处理，能够以发酵时间(1、2、3、4、5、6、7、8和9天)、原料粉碎粒径(不粉碎、20、40和60目)、发酵温度(28、31、34和37度)、接种量(5、10、15、20和25％)、复合菌种比例-植物乳杆菌：嗜热链球菌：枯草芽孢杆菌(2:2:1、2:1:1、1:1:1、1:1:2、1:2:2)和料液比(1:0.5、1:0.75、1:1、1:1.25和1:1.5)单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵参数，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，以确定影响多肽发酵的因素，能够确定多肽产量最多的最佳条件，能够提高多肽发酵产量，最佳发酵条件为：发酵时间3天、原料粒径40目、料液比1:1.25、接种量5％、发酵温度28度且复合菌种比例-植物乳杆菌：嗜热链球菌：枯草芽孢杆菌为1:1:1，此等条件下，多肽产量最多。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种核桃小分子多肽的发酵制备方法，核桃小分子多肽发酵方法为：首先对核桃仁进行前处理，即将核桃仁利用低温物理压榨技术进行压榨，压榨完成后可得到核桃油和核桃粕两种产物，对其进行分离，其分离方式为：将核桃油和核桃粕两种产物通过滤筛采用晃动的方式进行分离，同时将滤筛静置一段时间，促使核桃油不会黏着在滤筛上，提高对核桃油的提取率；核桃油收装食用，将核桃粕收集后将这些核桃粕导入到粉碎机中进行研磨粉碎处理，经粉碎后过40目筛，然后准备若干个250mL烧杯，每个烧杯盛装40.00g核桃粕，然后将这些烧杯放置在灭菌条件下进行无菌操作添加无菌水，其中按接种量接入发酵种子液，并通过玻璃棒搅拌搅拌5分钟，促使烧杯内的物料混合混匀，然后用纱布封口，利用乳酸菌结合生物发酵技术进行固态发酵，即可完成，其中，在烧杯盛装核桃粕时需要用精准小天平进行称量；控制灭菌条件为：灭菌温度为121度，且灭菌时间为20分钟；纱布封口时用皮筋将烧杯口封住。
核桃小分子多肽发酵制备方法的具体步骤为：
步骤一：步骤一：将权利要求1中发酵完毕后的样品取出，放置于烘箱在55度条件下干燥48小时；
步骤二：烘干完成后再将这些物料进行粉碎处理，然后过40目筛当做试验的基础原料备用；
步骤三：以发酵时间(1、2、3、4、5、6、7、8和9天)为单一研究参数，研究最佳的发酵时间参数，经过各自的发酵时间后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，在每次发酵时间完成后对多肽的产量进行分别记录，经试验得知，其最佳的发酵时间为3天，步骤三中试验过程中将单一因素的发酵时间作为变量，登记表格，得出不同发酵时间下的九组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的发酵时间；
步骤四：在确定发酵时间(3天)后，在最佳发酵时间条件下以原料粉碎粒径(不粉碎、20、40和60目)为单一研究参数，研究最佳的原料颗粒粒径发酵参数，经过3天的发酵时间后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在最佳发酵时间为3天条件下最佳的发酵原料粒径为过40目筛，步骤四中试验过程中将单一因素的原料粉碎粒径作为变量，登记表格，得出不同原料粉碎粒径下的四组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的原料粉碎粒径；
步骤五：在确定发酵时间(3天)和原料粒径(40目筛)后，在这些条件下以发酵温度(28、31、34和37度)为单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵温度参数，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在发酵时间(3天)和原料粒径(40目筛)的条件下最佳发酵温度为28度，步骤五中试验过程中将单一因素的发酵温度作为变量，登记表格，得出不同发酵温度下的四组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的发酵温度；
步骤六：在确定发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)和发酵温度(28度)后，在这些条件下以接种量(5、10、15、20和25％)为单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵接种量，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)和发酵温度(28度)的条件下最佳发酵接种量为5％，步骤六中试验过程中将单一因素的接种量作为变量，登记表格，得出不同接种量下的五组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的接种量；
步骤七：在确定发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)、发酵温度(28度)和发酵接种量(5％)后，在这些条件下以复合菌种比例-植物乳杆菌：嗜热链球菌：枯草芽孢杆菌(2:2:1、2:1:1、1:1:1、1:1:2、1:2:2)为单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵接种量，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)、发酵温度(28度)和发酵接种量(5％)的条件下最佳乳酸菌比例为1:1:1，步骤七中试验过程中将单一因素的复合菌种比例-植物乳杆菌：嗜热链球菌：枯草芽孢杆菌作为变量，登记表格，得出不同复合菌种比例下的五组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的复合菌种比例；
步骤八：在确定发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)、发酵温度(28度)、发酵接种量(5％)和乳酸菌比例(1:1:1)后，在这些条件下以料液比(1:0.5、1:0.75、1:1、1:1.25和1:1.5)为单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵接种量，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，经试验得知，在发酵时间(3天)、原料粒径(40目筛)、发酵温度(28度)、发酵接种量(5％)和乳酸菌比例(1:1:1)的条件下最佳料液比为1:1.25，步骤八中试验过程中将单一因素的料液比作为变量，登记表格，得出不同发酵时间下的五组多肽含量实验数据，将数据绘制折线图，直观判断出最佳的料液比；
步骤九：在进行核桃小分子多肽发酵制备时，其最佳的发酵条件为：发酵时间3天、原料粒径40目、发酵温度28度、接种量5％、乳酸菌比例1:1:1和料液比1:1.25，在此条件下，多肽发酵量最多。
本发明将核桃仁利用低温物理压榨技术进行压榨，压榨完成后可得到核桃油和核桃粕两种产物，对其进行分离，核桃油收装食用，将核桃粕收集后将这些核桃粕导入到粉碎机中进行研磨粉碎处理，经粉碎后过40目筛，然后准备若干个250mL烧杯，每个烧杯盛装40.00g核桃粕，然后将这些烧杯放置在灭菌条件下进行无菌操作添加无菌水，其中按接种量接入发酵种子液，并通过玻璃棒搅拌搅拌5分钟，促使烧杯内的物料混合混匀，然后用纱布封口，利用乳酸菌结合生物发酵技术进行固态发酵，针对多肽发酵的影响条件进行优化处理，能够以发酵时间(1、2、3、4、5、6、7、8和9天)、原料粉碎粒径(不粉碎、20、40和60目)、发酵温度(28、31、34和37度)、接种量(5、10、15、20和25％)、复合菌种比例-植物乳杆菌：嗜热链球菌：枯草芽孢杆菌(2:2:1、2:1:1、1:1:1、1:1:2、1:2:2)和料液比(1:0.5、1:0.75、1:1、1:1.25和1:1.5)单一研究参数分组试验以研究最佳的发酵参数，在这些试验结束后对试验结果进行检测，其检测结果以多肽的产量为指标，对每一组试验对象进行多肽的产量检测并进行分别记录，以确定影响多肽发酵的因素，能够确定多肽产量最多的最佳条件，能够提高多肽发酵产量。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
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