具体实施方式

结合ICOS的抗原结合蛋白和抗体

“抗原结合蛋白（ABP）”意指结合抗原的蛋白，包括以与抗体相似的方式起作用的抗体或人工改造的分子。这种备择的抗体形式包括三链抗体（triabody）、四链抗体（tetrabody）、微型抗体（miniantibody）和minibody。还包括的是备择的支架，其中根据本公开内容的任何分子的一个或多个CDRs可以排列到合适的非免疫球蛋白蛋白支架或骨架上，例如affibody、SpA支架、LDL受体A类结构域、avimer（参见，例如，美国专利申请公开Nos. 2005/0053973、2005/0089932、2005/0164301）或EGF结构域。ABP还包括这种抗体或其他分子的抗原结合片段。进一步地，ABP可以包含本发明的VH区，当与适当的轻链配对时，所述VH区格式化为全长抗体、(Fab')2片段、Fab片段、双特异性或双互补位（biparatopic）分子或其等同物（例如scFV，双-三链-或四链-抗体，Tandabs等）。ABP可以包含其为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4；或IgM；IgA、IgE或IgD或其修饰的变体的抗体。抗体重链的恒定结构域可以相应地加以选择。轻链恒定结构域可以是κ或λ恒定结构域。ABP也可以是WO86/01533中所述类型的嵌合抗体，其包含抗原结合区和非免疫球蛋白区。术语“ABP”、“抗原结合蛋白”和“结合蛋白”在本文可互换使用。

如本文所使用的，“ICOS”意指任何诱导型T-细胞共刺激物蛋白。ICOS（诱导型T-细胞共刺激物）的别名包括AILIM；CD278；CVID1、JTT-1或JTT-2、MGC39850或8F4。ICOS是在激活的T细胞上表达的CD28-超家族共刺激分子。由所述基因编码的蛋白属于CD28和CTLA-4细胞表面受体家族。它形成同二聚体，并且在细胞-细胞信号传导、免疫应答和细胞增殖的调节中起重要作用。人ICOS（同种型2）的氨基酸序列（检索号：UniProtKB - Q9Y6W8-2）在下文显示为SEQ ID NO：9。

人ICOS（同种型1）的氨基酸序列（检索号：UniProtKB - Q9Y6W8-1）在下文显示为SEQ ID NO：10。

ICOS的激活通过经由ICOS-L（B7RP-1/B7-H2）结合而发生。B7-1和B7-2（CD28和CTLA4的配体）两者均不结合或激活ICOS。然而，ICOS-L已显示与CD28和CTLA-4两者弱结合（Yao S等人，“B7-H2 is a costimulatory ligand for CD28 in human”，Immunity，34(5)；729-40（2011））。ICOS的表达看来似乎限于T细胞。ICOS表达水平在不同的T细胞亚群之间以及在T细胞激活状态上不同。ICOS表达已在静息TH17细胞、T滤泡辅助（TFH）细胞和调节T（Treg）细胞上显示；然而，与CD28不同；它在幼稚T_H1和T_H2效应T细胞群体上未高度表达（Paulos CM等人，“The inducible costimulator(ICOS) is critical for thedevelopment of human Th17 cells”，Sci Transl Med，2(55)；55ra78（2010））。在通过TCR接合激活之后，ICOS表达在CD4+和CD8+效应T细胞上被高度诱导（Wakamatsu E等人，“Convergent and divergent effects of costimulatory molecules in conventionaland regulatory CD4+ T cells”，Proc Natl Acad Sci USA，110(3)；1023-8（2013））。通过ICOS受体的共刺激信号传导仅在接受同时存在的TCR激活信号的T细胞中发生（Sharpe AH和Freeman GJ. “The B7-CD28 Superfamily”，Nat. Rev Immunol，2(2)；116-26（2002））。在激活的抗原特异性T细胞中，ICOS调节T_H1和T_H2细胞因子两者的产生，所述细胞因子包括IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-4、IL-13等。ICOS还刺激效应T细胞增殖，尽管程度小于CD28（Sharpe AH和Freeman GJ. “The B7-CD28 Superfamily”，Nat. Rev Immunol，2(2)；116-26（2002））。针对ICOS的抗体以及在疾病治疗中的使用方法例如在WO 2012/131004、US20110243929和US20160215059中进行描述。US20160215059引入本文作为参考。具有激动剂活性的针对人ICOS的鼠抗体的CDRs显示于PCT/EP2012/055735（WO 2012/131004）中。针对ICOS的抗体还公开于WO 2008/137915、WO 2010/056804、EP 1374902、EP1374901和EP1125585中。针对ICOS的激动剂抗体或ICOS结合蛋白公开于WO2012/13004、WO2014/033327、WO2016/120789、US20160215059和US20160304610中。US2016/0304610中的示例性抗体包括37A10S713。37A10S713的序列在下文作为SEQ ID NO：14-21再现。

37A10S713重链可变区：

37A10S713轻链可变区：

US2018/0289790中的示例性抗体包括ICOS.33 IgG1f S267E。ICOS.33 IgG1fS267E的序列在下文作为SEQ ID NO：22-23再现：

ICOS.33 IgG1f S267E重链可变结构域

ICOS.33 IgG1f S267E轻链可变结构域

WO2018/029474中的示例性抗体包括STIM003。STIM003的序列在下文作为SEQ IDNO：24-25再现。

STIM003重链可变结构域

STIM003轻链可变结构域

WO2018/049497中的示例性抗体包括XENP23104。XENP23104的ICOS结合Fab侧（[ICOS]_H0.66_L0）的序列在下文作为SEQ ID NO：26-33再现。

XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0重链可变结构域

XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0轻链可变结构域

所谓“针对ICOS的试剂”指的是能够结合ICOS的任何化合物或生物分子。在一些实施方案中，针对ICOS的试剂是ICOS结合蛋白。在一些其他实施方案中，针对ICOS的试剂是ICOS激动剂。在一些实施方案中，ICOS结合蛋白是激动剂ICOS结合蛋白。

如本文所使用的术语“ICOS结合蛋白”指能够与ICOS结合的抗体和其他蛋白构建体，例如结构域。在一些情况中，ICOS是人ICOS。术语“ICOS结合蛋白”可以与“ICOS抗原结合蛋白”互换使用。因此，如本领域中所理解的，抗-ICOS抗体和/或ICOS抗原结合蛋白将被认为是ICOS结合蛋白。如本文所使用的，“抗原结合蛋白”是与抗原例如ICOS结合的任何蛋白，包括但不限于本文所述的抗体、结构域和其他构建体。如本文所使用的，ICOS结合蛋白的“抗原结合部分”将包括能够与ICOS结合的ICOS结合蛋白的任何部分，包括但不限于抗原结合抗体片段。

在一个实施方案中，本发明的ICOS抗体包含下述CDRs的任何一种或组合：

在一些实施方案中，本发明的抗-ICOS抗体包含与SEQ ID NO：7具有至少90%序列同一性的重链可变区。适当地，本发明的ICOS结合蛋白可以包含与SEQ ID NO：7具有约85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链可变区。

人源化重链（V_H）可变区（H2）：

在本发明的一个实施方案中，ICOS抗体包含在具有SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列的轻链可变区中的CDRL1（SEQ ID NO：4）、CDRL2（SEQ ID NO：5）和CDRL3（SEQ ID NO：6）。包含SEQ ID NO：8中所示的人源化轻链可变区的本发明的ICOS结合蛋白被定名为“L5”。因此，包含SEQ ID NO：7的重链可变区和SEQ ID NO：8的轻链可变区的本发明的ICOS结合蛋白在本文中可以被定名为H2L5。

在一些实施方案中，本发明的ICOS结合蛋白包含与SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的轻链可变区。适当地，本发明的ICOS结合蛋白可以包含与SEQ ID NO：8具有约85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的轻链可变区。

人源化轻链（V_L）可变区（L5）

在一个实施方案中，ICOS结合蛋白是人源化单克隆抗体，其包含与SEQ ID NO：34中所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重链氨基酸序列。

在一个实施方案中，ICOS结合蛋白是人源化单克隆抗体，其包含与SEQ ID NO：35中所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的轻链氨基酸序列。

CDRs或最小结合单位可以通过至少一个氨基酸取代、缺失或添加进行修饰，其中所述变体抗原结合蛋白基本上保留未修饰的蛋白例如包含SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8的抗体的生物学特征。

将理解的是，CDR H1、H2、H3、L1、L2、L3各自可以单独进行修饰，或者以任何排列或组合与任何其他CDR组合进行修饰。在一个实施方案中，通过最多到3个氨基酸，例如1或2个氨基酸，例如1个氨基酸的取代、缺失或添加来修饰CDR。一般，修饰是取代，特别是保守取代（在本文中也称为直接等同物），例如如下表1中所示的。

表1

抗体的亚类部分决定了次级效应子功能，例如补体激活或Fc受体（FcR）结合以及抗体依赖性细胞毒作用（ADCC）（Huber等人，Nature 229(5284)：419-20（1971）；Brunhouse等人，Mol Immunol 16(11)：907-17（1979））。在鉴定用于特定应用的最佳抗体类型时，可以将抗体的效应子功能考虑进去。例如，hIgG1抗体具有相对长的半衰期，在固定补体方面非常有效，并且它们与FcγRI和FcγRII两者结合。相比之下，人IgG4抗体具有较短的半衰期，不固定补体，并且对于FcRs具有较低的亲和力。在IgG4的Fc区中用脯氨酸置换丝氨酸228（S228P）减少了用hIgG4观察到的异质性，并且延长了血清半衰期（Kabat等人，“Sequencesof proteins of immunological interest” 第5版(1991)；Angal等人，Mol Immunol 30(1)：105-8（1993））。用谷氨酸置换亮氨酸235（L235E）的第二种突变消除了残留的FcR结合和补体结合活性（Alegre等人，J Immunol 148(11)：3461-8（1992））。具有两种突变的所得到的抗体被称为IgG4PE。hIgG4氨基酸的编号衍生自EU编号参考：Edelman，G.M.等人，Proc.Natl. Acad. USA，63，78-85(1969). PMID：5257969。在本发明的一个实施方案中，ICOS抗体是IgG4同种型。在一个实施方案中，包含含有置换S228P和L235E的IgG4 Fc区的ICOS抗体可以具有名称IgG4PE。

如本文所使用的，“ICOS-L”和“ICOS配体”可互换使用，并且指人ICOS的膜结合的天然配体。ICOS配体是在人中由ICOSLG基因编码的蛋白。ICOSLG还已被定名为CD275（分化簇275）。ICOS-L的别名包括B7RP-1和B7-H2。

PD1拮抗剂

如本文所使用的，“针对PD-1的试剂”或“针对PD1的试剂”意指能够结合PD1的任何化合物或生物分子。在一些实施方案中，针对PD1的试剂是PD1拮抗剂。

如本文所使用的术语“PD1结合蛋白”或“PD-1结合蛋白”是指能够结合PD1的抗体和其他蛋白构建体，例如结构域。在一些情况中，PD1是人PD1。术语“PD1结合蛋白”可以与“PD1抗原结合蛋白”互换使用。因此，如本领域中所理解的，抗-PD1抗体和/或PD1抗原结合蛋白将被认为是PD1结合蛋白。如本文所使用的，“抗原结合蛋白”是与抗原例如PD1结合的任何蛋白，包括但不限于本文所述的抗体、结构域和其他构建体。如本文所使用的，PD1结合蛋白的“抗原结合部分”将包括能够结合PD1的PD1结合蛋白的任何部分，包括但不限于抗原结合抗体片段。

蛋白程序性死亡1（PD-1）是CD28受体家族的抑制成员，所述家族还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1在活化的B细胞、T细胞和髓样细胞上表达（Agata等人，上文；Okazaki等人(2002) Curr. Opin. Immunol 14:391779-82；Bennett等人(2003) JImmunol 170:711-8）通过在添加单克隆抗体后对增加T细胞增殖的功能作用发现了所述家族的最初成员CD28和ICOS（Hutloff等人(1999) Nature 397:263-266；Hansen等人(1980)Immunogenics 10:247-260）。PD-1是通过凋亡细胞中的差异表达筛选而发现的（Ishida等人(1992) EMBO J 11:3887-95）分别通过细胞毒性T淋巴细胞和TH1细胞中的差异表达筛选，发现了所述家族的其他成员CTLA-4和BTLA。CD28、ICOS和CTLA-4均具有非配对的半胱氨酸残基，从而允许同二聚化（homodimerization）。相比之下，PD-1被提示作为单体存在，从而缺乏在其他CD28家族成员中的非配对的半胱氨酸残基特征。PD-1抗体以及在疾病治疗中的使用方法描述于美国专利Nos.：US 7,595,048；US 8,168,179；US 8,728,474；US 7,722,868；US 8,008,449；US 7,488,802；US 7,521,051；US 8,088,905；US 8,168,757；US 8,354,509；和美国公开Nos. US20110171220；US20110171215；和US20110271358。在美国专利No. 9,084,776中描述了CTLA-4和PD-1抗体的组合。

在一些实施方案中，针对PD1的试剂是PD1拮抗剂，且阻断在癌细胞上表达的PD-L1与在免疫细胞（T细胞、B细胞或NKT细胞）上表达的PD-1的结合，且也可阻断在癌细胞上表达的PD-L2与免疫细胞表达的PD-1的结合。PD-1及其配体的备择名称或同义词包括：PD-1的PDCD1、PD1、CD279和SLEB2；PD-L1的PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274和B7-H；以及PD-L2的PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc和CD273。人PD-1氨基酸序列可在NCBI Locus No.：NP_005009中找到。NCBI Locus No.：NP_005009中的氨基酸序列在下文再现：

人PD-L1和PD-L2氨基酸序列可以分别在NCBI Locus No.：NP_054862和NP_079515中找到。

NCBI Locus No.：NP_054862中的氨基酸序列在下文再现：

NCBI Locus No.：NP_079515中的氨基酸序列在下文再现：

在本发明的任何方面或实施方案中针对PD-1的试剂包括特异性结合PD-1的单克隆抗体（mAb）或其抗原结合片段。在一些实施方案中，PD-1的mAb特异性结合人PD-1。mAb可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，并且在优选的实施方案中，人恒定区是IgG1或IgG4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')2、scFv和Fv片段。

结合人PD-1且用于本发明的各方面和实施方案中的mAbs的实例描述于美国专利No. 8,552,154；美国专利No. 8,354,509；美国专利No. 8,168,757；美国专利No. 8,008,449；美国专利No. 7,521,051；美国专利No. 7,488,802；WO2004072286；WO2004056875；和WO2004004771。

用于本发明的任何方面和实施方案中的其他PD-1结合蛋白包括特异性结合PD-1，并且优选特异性结合人PD-1的免疫黏附素，例如，含有融合至恒定区如免疫球蛋白分子的Fc区的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的融合蛋白。特异性结合PD-1的免疫黏附素分子的实例描述于WO2010027827和WO2011066342中。在本发明的治疗方法、药物和用途中用作PD-1拮抗剂的特异性融合蛋白包括AMP-224（也称为B7-DCIg），它是PD-L2-FC融合蛋白，且与人PD-1结合。

欧狄沃（OPDIVO）/纳武单抗（nivolumab）是具有免疫强化活性的针对负免疫调节人细胞表面受体PD-1（程序性死亡-1或程序性细胞死亡-1/PCD-1）的由Bristol MyersSquibb销售的完全人单克隆抗体。纳武单抗结合PD-1（一种Ig超家族跨膜蛋白）并阻断其由其配体PD-L1和PD-L2的活化，从而导致T-细胞活化以及针对肿瘤细胞或病原体的细胞介导的免疫应答。活化的PD-1通过抑制P13k/Akt途径激活来负调节T-细胞活化和效应子功能。纳武单抗的其他名称包括：BMS-936558、MDX-1106和ONO-4538。美国专利No. US 8,008,449中公开了纳武单抗的氨基酸序列以及使用和制备方法。于每2周240 mg或每4周480 mg作为IV输注施用的。

可瑞达（KEYTRUDA）/派姆单抗（pembrolizumab）是由Merck销售用于治疗肺癌的抗-PD-1抗体。派姆单抗的氨基酸序列和使用方法在美国专利No. 8,168,757中公开。于每3周200 mg作为IV输注施用的。

LIBTAYO/cemiplimab-rwlc是由Regeneron和Sanofi销售用于治疗晚期皮肤鳞状细胞癌的抗-PD-1抗体。于每3周350 mg作为IV输注施用的。

所谓“针对PD-L1的试剂”指的是能够结合PD-L1的任何化合物或生物分子。在一些实施方案中，针对PD-L1的试剂是PD-L1结合蛋白。如本文所使用的术语“PDL1结合蛋白”或“PD-L1结合蛋白”是指能够结合PD-L1的抗体和其他蛋白构建体，例如结构域。在一些情况中，PD-L1是人PD1。术语“PD-L1结合蛋白”可以与“PD-L1抗原结合蛋白”互换使用。因此，如本领域中所理解的，抗-PD-L1抗体和/或PD-L1抗原结合蛋白将被认为是PD-L1结合蛋白。如本文所使用的，“抗原结合蛋白”是与抗原例如PD-L1结合的任何蛋白，包括但不限于本文所述的抗体、结构域和其他构建体。如本文所使用的，PD-L1结合蛋白的“抗原结合部分”将包括能够结合PD-L1的PD-L1结合蛋白的任何部分，包括但不限于抗原结合抗体片段。

在一些实施方案中，针对PD-L1的试剂是PD1拮抗剂，且阻断在癌细胞上表达的PD-L1与在免疫细胞（T细胞、B细胞或NKT细胞）上表达的PD-1的结合，且也可阻断在癌细胞上表达的PD-L2与免疫细胞表达的PD-1的结合。

PD-L1是在多种细胞类型包括APCs和活化的T细胞上表达的B7家族成员（Yamazaki等人(2002) J. Immunol. 169:5538）。PD-L1与PD-1和B7-1两者都结合。由PD-L1对T-细胞表达的B7-1的结合以和由B7-1对T-细胞表达的PD-L1的结合两者均导致T细胞抑制（Butte等人(2007) Immunity 27:111）。也有证据表明，与其他B7家族成员一样，PD-L1也可以向T细胞提供共刺激信号（Subudhi等人(2004) J. Clin. Invest. 113:694；Tamura等人(2001) Blood 97:1809）。作为PD-1的配体的PD-L1（人PD-L1 cDNA由EMBL/GenBank Acc.No. AF233516所示的碱基序列组成且小鼠PD-L1 cDNA由NM.sub.--021893所示的碱基序列组成）在所谓的抗原呈递细胞（APCs）中表达，例如活化的单核细胞和树突细胞（Journal ofExperimental Medicine (2000), 第19卷, 第7期, 第1027-1034页）。这些细胞将诱导多种免疫诱导信号的相互作用分子呈递给T淋巴细胞，而PD-L1是通过PD-1诱导抑制信号的这些分子之一。已经揭示了PD-L1配体刺激抑制了表达PD-1的T淋巴细胞的活化（细胞增殖和各种细胞因子产生的诱导）。PD-L1的表达不仅在免疫活性细胞中得到证实，而且还在某种类型的肿瘤细胞系中得到证实（衍生自单核细胞性白血病的细胞系、衍生自肥大细胞的细胞系、衍生自肝癌的细胞系、衍生自成神经细胞的细胞系以及衍生自乳癌的细胞系）（Nature Immunology (2001), 第2卷, 第3期, 第261-267页）。

抗-PD-L1抗体及其制备方法是本领域中已知的。这种针对PD-L1的抗体可以是多克隆或单克隆的，和/或重组的，和/或人源化的，和/或完全人的。PD-L1抗体作为用于治疗癌症的免疫调谐剂正在开发中。

示例性PD-L1抗体公开于美国专利No. 9,212,224；美国专利No. 8,779,108；美国专利No 8,552,154；美国专利No. 8,383,796；美国专利No. 8,217,149；美国专利公开No.20110280877；WO2013079174；和WO2013019906。针对PD-L1（也称为CD274或B7-H1）的额外的示例性抗体和使用方法公开于美国专利No. 8,168,179；美国专利No. 7,943,743；美国专利No. 7,595,048；WO2014055897；WO2013019906；和WO2010077634。在本发明的治疗方法、药物和用途中用作PD-1拮抗剂的特异性抗人PD-L1单克隆抗体包括MPDL3280A、BMS-936559、MEDI4736、MSB0010718C。

阿特珠单抗（Atezolizumab）是可作为TECENTRIQ商购获得的完全人源化的单克隆抗-PD-L1抗体。阿特珠单抗被指出用于治疗一些局部晚期或转移尿道上皮癌。阿特珠单抗阻断PD-L1与PD-1和CD80的相互作用。阿特珠单抗于每2周840 mg、每3周1200 mg或每4周1680 mg通过IV输注施用。

阿维单抗（Avelumab）是可作为BAVENCIO商购获得的抗-PD-L1抗体。阿维单抗于每2周800 mg通过IV输注施用。

德瓦鲁单抗（Durvalumab）（先前称为MEDI4736）是针对PD-L1的人单克隆抗体。德瓦鲁单抗阻断PD-L1与PD-1和CD80的相互作用。德瓦鲁单抗可作为IMFINZI^TM商购获得。德瓦鲁单抗于每2周10 mg/kg通过IV输注施用。

在美国专利No. 7,943,743；美国专利No. 8,383,796； US20130034559、WO2014055897、美国专利No. 8,168,179；和美国专利No. 7,595,048中公开了针对PD-L1（也称为CD274或B7-H1）的抗体和使用方法。PD-L1抗体作为用于治疗癌症的免疫调谐剂正在开发中。

如本文所使用的，“免疫调谐剂”或“免疫调谐试剂”指影响免疫系统的任何物质，包括单克隆抗体。在一些实施方案中，免疫调谐剂或免疫调谐试剂上调免疫系统。免疫调谐剂可以用作用于癌症治疗的抗肿瘤剂。例如，免疫调谐剂包括，但不限于，抗-PD-1抗体（欧狄沃/纳武单抗和可瑞达/派姆单抗）、抗-CTLA-4抗体例如伊匹单抗（ipilimumab）（YERVOY）和抗-ICOS抗体。

如本文所使用的，术语“激动剂”指抗原结合蛋白，包括但不限于抗体，其在与共信号传导受体（co-signalling receptor）接触时引起下述中的一种或多种：（1）刺激或激活受体，（2）增强、增加或促进、诱导或延长受体的活性、功能或存在，和/或（3）增强、增加、促进或诱导受体的表达。激动剂活性可以通过本领域已知的各种测定在体外进行测量，例如，但不限于，细胞信号传导、细胞增殖、免疫细胞活化标记、细胞因子产生的测量。激动剂活性还可以通过测量替代终点的各种测定在体内进行测量，例如，但不限于，T细胞增殖或细胞因子产生的测量。

如本文所使用的，术语“拮抗剂”指抗原结合蛋白，包括但不限于抗体，其在与共信号传导受体接触时引起下述中的一种或多种：（1）减弱、阻断或灭活受体和/或阻断受体由其天然配体的激活，（2）减少、降低或缩短受体的活性、功能或存在，和/或（3）减少、降低、取消受体的表达。拮抗剂活性可以通过本领域已知的各种测定在体外进行测量，例如，但不限于，细胞信号传导、细胞增殖、免疫细胞活化标记、细胞因子产生中的增加或减少的测量。拮抗剂活性还可以通过测量替代终点的各种测定在体内进行测量，例如，但不限于，T细胞增殖或细胞因子产生的测量。

术语“抗体”在本文中以最广泛的意义用于指具有免疫球蛋白样结构域的分子（例如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE），并且包括单克隆、重组、多克隆、嵌合、人、人源化、多特异性抗体，包括双特异性抗体和异缀合（heteroconjugate）抗体；单可变结构域（例如，V_H、V_HH、VL、结构域抗体（dAb^TM）），抗原结合抗体片段，Fab，F(ab')₂，Fv，二硫键连接的Fv，单链Fv，二硫键连接的scFv，双抗体，TANDABS™等，以及前述任一种的修饰形式（关于备择的“抗体”形式的概括，参见，例如，Holliger和Hudson，Nature Biotechnology，2005，第23卷，第9期，1126-1136）。

备择的抗体形式包括备择的支架，其中抗原结合蛋白的一个或多个CDRs可以排列到合适的非免疫球蛋白蛋白支架或骨架上，例如affibody、SpA支架、LDL受体A类结构域、avimer（参见，例如，美国专利申请公开Nos. 2005/0053973、2005/0089932、2005/0164301）或EGF结构域。

术语“结构域”指折叠的蛋白结构，其不依赖于蛋白的剩余部分而保持其三级结构。通常，结构域决定着蛋白的独立功能性质，并且在许多情况下，可以在不丧失蛋白的剩余部分和/或结构域的功能的情况下被添加、去除或转移至其他蛋白。

术语“单可变结构域”指包含为抗体可变结构域特有的序列的折叠的多肽结构域。因此，它包括完整的抗体可变结构域，例如V_H、V_HH和V_L，以及修饰的抗体可变结构域，例如其中一个或多个环已被并非抗体可变结构域特有的序列置换，或者已被截短或者包含N-或C-末端延伸的抗体可变结构域，以及保留全长结构域的至少结合活性和特异性的可变结构域的折叠片段。单可变结构域能够不取决于不同的可变区或结构域来结合抗原或表位。“结构域抗体”或“dAb^(TM)”可以被认为与“单可变结构域”相同。单可变结构域可以是人单可变结构域，但也包括来自其他物种的单可变结构域，例如啮齿类动物铰口鲨（nurse shark）和骆驼科动物（Camelid）V_HH dAbs^TM。骆驼科动物V_HH是衍生自包括骆驼、美洲驼、羊驼、单峰骆驼和原驼（guanaco）的物种的免疫球蛋白单可变结构域多肽，其产生天然缺乏轻链的重链抗体。这种V_HH结构域可以根据本领域中可获得的标准技术进行人源化，并且这种结构域被认为是“单可变结构域”。如本文所使用的，V_H包括骆驼科动物V_HH结构域。

可以借助于在非抗体蛋白支架上排列一个或多个CDRs来提供抗原结合片段。如本文所使用的“蛋白支架”包括但不限于免疫球蛋白（Ig）支架，例如IgG支架，其可以是四链或二链抗体，或者其可以仅包含抗体的Fc区，或者其可以包含来自抗体的一个或多个恒定区，所述恒定区可以起源于人或灵长类动物，或者其可以是人和灵长类动物恒定区的人工嵌合体。

蛋白支架可以是Ig支架，例如IgG或IgA支架。IgG支架可以包含抗体的一些或全部结构域（即，CH1、CH2、CH3、V_H、V_L）。抗原结合蛋白可以包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgG4PE的IgG支架。例如，支架可以是IgG1。支架可以由抗体的Fc区组成或包含抗体的Fc区，或者是其部分。

亲和力是一种分子例如本发明的抗原结合蛋白与另一种分子例如其靶抗原在单个结合部位处的结合强度。抗原结合蛋白与其靶的结合亲和力可以通过平衡方法（例如酶联免疫吸附测定（ELISA）或放射免疫测定（RIA）），或动力学（例如BIACORE^TM分析）来测定。亲合力（avidity）是两种分子在多重部位处彼此结合的结合强度的总计，例如考虑到相互作用的价。

所谓“分离的”指的是将分子例如抗原结合蛋白或核酸从它可能在自然界中在其中发现的环境中取出。例如，分子可以被纯化离开在自然界中通常与其一起存在的物质。例如，样品中的分子质量可以是总质量的95%。

如本文所使用的术语“表达载体”意指分离的核酸，其可以用于将感兴趣的核酸引入细胞例如真核细胞或原核细胞或无细胞表达系统内，在那里感兴趣的核酸序列作为肽链如蛋白进行表达。这种表达载体可以是例如包含感兴趣的核酸的黏粒、质粒、病毒序列、转座子和线性核酸。一旦将表达载体引入细胞或无细胞表达系统（例如，网织红细胞裂解物）内，就通过转录/翻译机产生由感兴趣的核酸编码的蛋白。在本公开内容的范围内的表达载体可以提供用于真核或原核表达的必要元件，并且包括病毒启动子驱动的载体，例如CMV启动子驱动的载体，例如，pcDNA3.1、pCEP4及其衍生物，杆状病毒表达载体，果蝇属（Drosophila）表达载体，以及由哺乳动物基因启动子（例如人Ig基因启动子）驱动的表达载体。其他实例包括原核表达载体，例如T7启动子驱动的载体，例如pET41，乳糖启动子驱动的载体和阿拉伯糖基因启动子驱动的载体。本领域普通技术人员将认识到许多其他合适的表达载体和表达系统。

如本文所使用的术语“重组宿主细胞”意指包含感兴趣的核酸序列的细胞，所述感兴趣的核酸序列在其引入细胞内之前是分离的。例如，感兴趣的核酸序列可以在表达载体中，而细胞可以是原核或真核的。示例性的真核细胞是哺乳动物细胞，例如但不限于，COS-1、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、HepG2、653、SP2/0、NS0、293、HeLa、骨髓瘤、淋巴瘤细胞或其任何衍生物。最优选地，真核细胞是HEK293、NS0、SP2/0或CHO细胞。大肠杆菌（E. coli）是示例性的原核细胞。根据本公开内容的重组细胞可以通过转染、细胞融合、无限增殖化或本领域众所周知的其他程序来生成。转染到细胞内的感兴趣的核酸序列，例如表达载体，可以是染色体外的或稳定整合到细胞的染色体内。

“嵌合抗体”指一类人工改造的抗体，其含有与衍生自接纳体抗体的轻链和重链恒定区结合的、衍生自供体抗体的天然存在的可变区（轻链和重链）。

“人源化抗体”指其CDRs衍生自非人供体免疫球蛋白的一类人工改造的抗体，所述分子的剩余免疫球蛋白衍生的部分衍生自一种或多种人免疫球蛋白。此外，可以改变构架支持残基，以保持结合亲和力（参见，例如，Queen等人Proc. Natl Acad Sci USA，86：10029-10032（1989），Hodgson等人，Bio/Technology，9：421（1991））。合适的人接纳体抗体可以是通过与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性而选自常规数据库，例如，KABAT™数据库、Los Alamos数据库和Swiss Protein数据库的那种。特征在于与供体抗体的构架区的同源性（在氨基酸的基础上）的人抗体可以适合提供用于插入供体CDRs的重链恒定区和/或重链可变构架区。可以以相似的方式选择能够贡献出轻链恒定或可变构架区的合适的接纳体抗体。应当注意，接纳体抗体重链和轻链不需要起源于相同的接纳体抗体。现有技术描述了产生这种人源化抗体的几种方式 – 参见，例如，EP-A-0239400和EP-A-054951。

术语“全人抗体”包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区（如果存在的话）的抗体。本发明的人序列抗体可以包括未由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基（例如，通过体外随机或位点特异性诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变）。全人抗体包含仅由最终具有人起源的多核苷酸编码的氨基酸序列，或与这种序列等同的氨基酸序列。如本文所意指的，转基因小鼠中产生的由插入小鼠基因组内的编码人免疫球蛋白的DNA编码的抗体是全人抗体，这是因为它们由最终具有人起源的DNA编码。在这种情况中，编码人免疫球蛋白的DNA可以在小鼠内重排（以编码抗体），并且也可能发生体细胞突变。在小鼠中已经历这种改变的由最初人DNA编码的抗体是如本文所意指的全人抗体。这种转基因小鼠的使用使得可能选择针对人抗原的全人抗体。如本领域中所理解的，可以使用噬菌体展示技术来制备全人抗体，其中将人DNA文库插入噬菌体中，用于生成包含人种系DNA序列的抗体。

术语“供体抗体”指将其可变区、CDRs或其他功能片段或其类似物的氨基酸序列贡献给第一免疫球蛋白配偶体的抗体。因此，供体提供了改变的免疫球蛋白编码区以及具有为供体抗体所特有的抗原特异性和中和活性的所得到的表达的改变的抗体。

术语“接纳体抗体”指与供体抗体异源的抗体，其将编码其重链和/或轻链构架区和/或其重链和/或轻链恒定区的氨基酸序列的全部（或任何部分）贡献给第一免疫球蛋白配偶体。人抗体可以是接纳体抗体。

术语“V_H”和“V_L”在本文中分别用于指抗原结合蛋白的重链可变区和轻链可变区。

“CDRs”定义为抗原结合蛋白的互补性决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高变区。在免疫球蛋白的可变部分中存在三个重链和三个轻链CDRs（或CDRs区）。因此，如本文所使用的“CDRs”指所有三个重链CDRs、所有三个轻链CDRs、所有重链和轻链CDRs或至少两个CDRs。

在整个本说明书中，可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基根据Kabat编号惯例进行编号。类似地，实施例中使用的术语“CDR”、“CDRL1”、“CDRL2”、“CDRL3”、“CDRH1”、“CDRH2”、“CDRH3”遵循Kabat编号惯例。关于进一步的信息，参见Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S. Department ofHealth and Human Services，National Institutes of Health（1991）。

对于本领域技术人员将显而易见的是，对于可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基，存在备择的编号惯例。对于CDR序列也存在备择的编号惯例，例如Chothia等人(1989)Nature 342：877-883中陈述的那些。抗体的结构和蛋白折叠可能意味着其他残基被认为是CDR序列的部分，并且将由技术人员理解为如此。

技术人员可获得的关于CDR序列的其他编号惯例包括“AbM”（University ofBath）和“接触”（University College London）方法。可以确定使用Kabat、Chothia、AbM和接触方法中的至少两种的最小重叠区域，以提供“最小结合单位”。最小结合单位可以是CDR的子部分（sub-portion）。

查询（query）氨基酸序列和目标（subject）氨基酸序列之间的“百分比同一性”是表示为百分比的“同一性”值，其是在已使用合适的算法/软件（例如BLASTP、FASTA、ClustalW、MUSCLE、MAFFT、EMBOSS Needle、T-Coffee和DNASTAR Lasergene）进行配对总体序列比对后，在查询序列的整个长度上使用合适的算法或软件（例如BLASTP、FASTA、DNASTAR Lasergene、GeneDoc、Bioedit、EMBOSS needle或EMBOSS infoalign）计算的。重要的是，查询氨基酸序列可以通过本文一项或多项权利要求中鉴定的氨基酸序列来描述。

查询序列可以与目标序列100％相同，或者与目标序列相比，其可以包括最多到一定整数数目的氨基酸或核苷酸改变，从而使得％同一性小于100％。例如，查询序列与目标序列至少50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98或99%相同。这种改变包括至少一个氨基酸缺失、取代（包括保守和非保守取代）或插入，并且其中所述改变可以发生在查询序列的氨基或羧基末端位置或那些末端位置之间的任何位置，各自散布在查询序列的氨基酸或核苷酸之中，或散布在查询序列内的一个或多个邻接组中。

可以在查询序列的整个长度上（包括CDRs）确定％同一性。另一方面，％同一性可以排除一个或多个或所有CDRs，例如所有CDRs与目标序列100％相同，并且％同一性变化在查询序列的剩余部分，例如构架序列中，从而使得CDR序列是固定的和完整的。

变体序列基本上保留了未修饰的蛋白的生物特征，例如ICOS的激动剂。

治疗方法

在一个方面，提供了在人中治疗癌症的方法，所述方法包括以约0.08 mg至约240mg的剂量向所述人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分且向所述人施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分以8 mg、24 mg、80 mg或240 mg的剂量施用。在另一个实施方案中，以8 mg、24 mg、80 mg或240 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以200 mg的剂量施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。

在一个方面，提供了在有需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括以约0.08 mg至约240 mg的剂量向所述人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分且向所述人施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以200 mg的剂量施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。

在一个实施方案中，有在有需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括以约0.08mg至约240 mg的剂量向所述人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以约200 mg的剂量向所述人施用PD1拮抗剂。

在一个方面，提供了用于同时或序贯用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂，其中所述ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约0.08 mg至约240 mg的剂量施用。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以200 mg的剂量施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。

在一个实施方案中，有用于同时或序贯用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂，其中所述ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约0.08 mg至约240 mg的剂量施用，且所述PD1拮抗剂将以约200 mg的剂量施用。

在另一个方面，提供了用于治疗癌症的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，其中所述ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约0.08 mg至约240 mg的剂量施用，且将与PD1拮抗剂同时或序贯施用。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以200 mg的剂量施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。

在一个实施方案中，有用于治疗癌症的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，其中所述ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约0.08 mg至约240 mg的剂量施用，且将与约200mg的剂量的PD1拮抗剂同时或序贯施用。

在另一个方面，提供了激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约0.08 mg至约240 mg的剂量施用，且将与PD1拮抗剂同时或序贯施用。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以200 mg的剂量施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。

在一个实施方案中，有激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约0.08 mg至约240 mg的剂量施用，且将与约200 mg的剂量的PD1拮抗剂同时或序贯施用。

在一个方面，提供了药物试剂盒，其包括约0.08 mg至约240 mg的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂。在一个实施方案中，药物试剂盒包括约200 mg的PD1拮抗剂。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。在一个实施方案中，药物试剂盒包括浓度为10mg/ml的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和浓度为25 mg/ml的PD1拮抗剂。

在一个实施方案中，有包括约0.08 mg至约240 mg的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和约200 mg的PD1拮抗剂的药物试剂盒。

在一个实施方案中，药物试剂盒包括制剂，所述制剂包含浓度为10 mg/ml的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。

在一个实施方案中，PD1拮抗剂以每3周约200 mg的剂量施用。在一个实施方案中，PD1拮抗剂以每3周约240 mg的剂量施用。在一个实施方案中，PD1拮抗剂以每3周约350 mg的剂量施用。在一个实施方案中，PD1拮抗剂以每2周约840 mg、每3周约1200 mg或每4周约1680 mg的剂量施用。在一个实施方案中，PD1拮抗剂以每2周约800 mg的剂量施用。在一个实施方案中，PD1拮抗剂以每2周约10 mg/kg的剂量施用。

在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。在一个实施方案中，派姆单抗以每3周200 mg的剂量施用。

在一个实施方案中，PD1拮抗剂是纳武单抗。在一个实施方案中，纳武单抗以每3周240 mg的剂量施用。

在一个实施方案中，PD1拮抗剂是cemiplimab。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是cemiplimab。在一个实施方案中，cemiplimab以每3周350 mg的剂量施用。

在一个实施方案中，PD1拮抗剂是阿特珠单抗。在一个实施方案中，阿特珠单抗以每2周840 mg、每3周1200 mg或每4周1680 mg的剂量施用。

在一个实施方案中，PD1拮抗剂是阿维单抗。在一个实施方案中，阿维单抗以每2周800 mg的剂量施用。

在一个实施方案中，PD1拮抗剂是德瓦鲁单抗。在一个实施方案中，德瓦鲁单抗以每2周10 mg/kg的剂量施用。

在另一个方面，提供了药物制剂，其包含浓度为10 mg/ml的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。

在另一个方面，提供了药物制剂，其包含浓度为25 mg/ml的PD1拮抗剂。

在一个实施方案中，药物制剂包含浓度为10 mg/ml的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和浓度为25 mg/ml的PD1拮抗剂。

本文公开的组合的各个组分可以通过任何方便的途径以分开的或组合的药物制剂的形式施用。

在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量在约0.08 mg至约800mg的范围内。在另一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量在约0.8 mg至约240 mg的范围内。

在另一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量在约8 mg至约80mg的范围内。在另一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为约0.08 mg、约0.24 mg、约0.8 mg、约2.4 mg、约8 mg、约24 mg、约80 mg或约240 mg。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为约8 mg、约24 mg或约80 mg。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为至少240 mg。在一个实施方案中，激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为至少80 mg。

要理解的是，在使用mg/kg的场合，这是mg/kg体重。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为约0.001 mg/kg至约3.0 mg/kg。在另一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为约0.001 mg/kg、约0.003 mg/kg、约0.01 mg/kg、约0.03 mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.3 mg/kg、约1.0 mg/kg、约3.0 mg/kg或约10 mg/kg。在另一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为至少3.0 mg/kg。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量在约0.001 mg/kg至约10 mg/kg的范围内。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为约0.1 mg/kg至约1.0 mg/kg。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为约0.1 mg/kg。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量为至少0.1 mg/kg。在另一个实施方案中，ICOS结合蛋白的剂量为约0.3 mg/kg。在另一个实施方案中，ICOS结合蛋白的剂量为约1mg/kg。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白的剂量为约3 mg/kg。在一个实施方案中，假定80kg的典型中位数重量，可以施用固定剂量的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。

在一个实施方案中，在治疗方案期间增加ICOS结合蛋白或其抗原结合部分的剂量。在一个实施方案中，将约0.001 mg/kg、约0.003 mg/kg、约0.01 mg/kg、约0.03 mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.3 mg/kg、约1.0 mg/kg的初始剂量增加至约0.003 mg/kg、约0.01 mg/kg、约0.03 mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.3 mg/kg、约1.0 mg/kg 、约3.0 mg/kg或至少3.0 mg/kg。在一个实施方案中，将0.1 mg/kg的初始剂量增加至1 mg/kg。在一个实施方案中，将0.3mg/kg的初始剂量增加至1 mg/kg。

在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分以0.1 mg/kg×3剂然后1mg/kg施用。在一个实施方案中，以约0.001 mg/kg、约0.003 mg/kg、约0.01 mg/kg、约0.03mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.3 mg/kg、约1.0 mg/kg或约3.0 mg/kg然后增加至约0.01 mg/kg、约0.03 mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.3 mg/kg、约1.0 mg/kg、约3.0 mg/kg或约10 mg/kg施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。

假定80 kg的典型中位数重量，可以测试固定剂量。

治疗用单克隆抗体经常基于体型来给药，其归因于这降低药物暴露中主体间的变异性的概念。然而，PK参数的体重依赖并不总是解释观察到的单克隆抗体暴露中的变异性（Zhao X, Suryawanshi, S; Hruska, M. Assessment of nivolumab benefit-riskprofile of a 240-mg flat dose relative to a 3 mg/kg dosing regimen in patientwith advanced tumors. Annals of Oncology. 2017;28:2002-2008）。通过群体PK模造和模拟工作评价了在实施例中提供的研究中基于体重的给药与固定给药比较的优点。由单一疗法剂量递增开发了初步的群体PK模型（数据最多到1 mg/kg剂量；n = 19名主体）。

在基于初步数据集中观察到的分布的模拟中，通过考虑体重分布来进行模拟。在体重的第5个百分位（40-47 kg），在中位数稳态AUC（0-）中有70-100％的增加；在当前的1期研究中，已以3 mg/kg的剂量方案评价了高于这些增加的H2L5 IgG4PE暴露。在体重的第95个百分位（107-118 kg），与中位数80 kg暴露相比，在中位数稳态AUC（0-）中有23-32％的降低，从而提供了在最低限度降低暴露的情况下足够的受体占用（RO）。对于基于体重的给药和固定给药之间的稳态Cmax和谷浓度预期类似的结果。

总的说来，这些初步的群体PK模拟表明，使用固定给药将导致与基于体重的给药相似的暴露范围。同样，固定给药提供了降低的给药错误、降低的药物损耗、缩短制备时间和改善施用容易程度的优点。因此，转换到基于80 kg参考体重的固定剂量是合理和适当的。

表3提供了使用80 kg重量的基于重量的H2L5 IgG4PE剂量水平的固定剂量当量（equivalents）。

在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分通过IV输注施用。在一个实施方案中，PD1拮抗剂通过IV输注施用。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原每3周通过IV输注以0.3 mg/kg的剂量施用，且派姆单抗每3周通过IV输注以200 mg的剂量施用。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原每3周通过IV输注以24 mg的剂量施用，且派姆单抗每3周通过IV输注以200 mg的剂量施用。

在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS。

在一个实施方案中，每1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天或40天一次施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。

在一个实施方案中，每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在一个实施方案中，每三周一次施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在一个实施方案中，每三周一次施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，直到疾病进展为止。在一个实施方案中，每三周一次施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分达35个循环。在一个实施方案中，每三周一次施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。在一个实施方案中，每3周通过IV输注施用200 mg派姆单抗。在一个实施方案中，每3周通过IV输注施用200 mg派姆单抗，直到疾病进展为止。在一个实施方案中，以每三周约0.08mg、约0.24 mg、约0.8 mg、约2.4 mg、约8 mg、约24 mg、约80 mg或约240 mg的剂量通过IV输注施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在一个实施方案中，每三周通过IV输注以24 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原。在一个实施方案中，每三周施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和/或PD1拮抗剂，直到疾病进展为止。在一个实施方案中，每三周施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和/或PD1拮抗剂，最多到3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个循环。在一个实施方案中，每三周施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和/或PD1拮抗剂最多到35个循环。

在一些实施方案中，患者首先被施用作为单一疗法方案的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，以及然后作为联合治疗方案的在有PD1拮抗剂的情况下的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在一些实施方案中，患者被首先施用作为单一疗法方案的PD1拮抗剂，且然后施用作为联合治疗方案的在有PD1拮抗剂的情况下的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。

在一个方面，提供了在有需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括以约8 mg至约80 mg的剂量向所述人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分且向所述人施用PD1拮抗剂，其中所述ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQ IDNO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS，且所述PD1拮抗剂是派姆单抗。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以200 mg的剂量施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含一个或多个：SEQ ID NO：1所示的CDRH1；SEQ ID NO：2所示的CDRH2；SEQID NO：3所示的CDRH3；SEQ ID NO：4所示的CDRL1；SEQ ID NO：5所示的CDRL2和/或SEQ IDNO：6所示的CDRL3或每个CDR的直接等价物，其中所述直接等价物在所述CDR中具有不多于两个氨基酸取代。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3中的一个或多个，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6中的一个或多个。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，所述VL结构域包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列。

在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含VH结构域和/或VL结构域，所述VH结构域包含与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述VL结构域包含与SEQID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，所述VL结构域包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。

在一个方面，提供了用于同时或序贯用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂，其中所述ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约8 mg至约80 mg的剂量施用，且所述PD1拮抗剂将以约200 mg的剂量施用，其中所述ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约8 mg至约80 mg的剂量施用，且PD1拮抗剂将以约200 mg的剂量施用，其中所述ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS，且所述PD1拮抗剂是派姆单抗。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以200 mg的剂量施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含一个或多个：SEQ ID NO：1所示的CDRH1；SEQ ID NO：2所示的CDRH2；SEQ ID NO：3所示的CDRH3；SEQ ID NO：4所示的CDRL1；SEQ ID NO：5所示的CDRL2和/或SEQ ID NO：6所示的CDRL3或每个CDR的直接等价物，其中所述直接等价物在所述CDR中具有不多于两个氨基酸取代。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3中的一个或多个，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6中的一个或多个。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ IDNO：2；和SEQ ID NO：3，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，所述VL结构域包含SEQ IDNO：8所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列。

在另一个方面，提供了用于治疗癌症的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，其中所述ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约8 mg至约80 mg的剂量施用，且将与PD1拮抗剂同时或序贯施用，其中所述ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQ IDNO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约8 mg至约80 mg的剂量施用，且将与PD1拮抗剂同时或序贯施用，其中所述ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS，且所述PD1拮抗剂是派姆单抗。在一个实施方案中，以8mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，以8mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以200 mg的剂量施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含一个或多个：SEQ ID NO：1所示的CDRH1；SEQID NO：2所示的CDRH2；SEQ ID NO：3所示的CDRH3；SEQ ID NO：4所示的CDRL1；SEQ ID NO：5所示的CDRL2和/或SEQ ID NO：6所示的CDRL3或每个CDR的直接等价物，其中所述直接等价物在所述CDR中具有不多于两个氨基酸取代。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3中的一个或多个，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6中的一个或多个。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，所述VL结构域包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列。

在另一个方面，提供了激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约8 mg至约80mg的剂量施用且将与PD1拮抗剂同时或序贯施用，其中所述ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，且以200 mg的剂量施用PD1拮抗剂。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含一个或多个：SEQ ID NO：1所示的CDRH1；SEQ ID NO：2所示的CDRH2；SEQ ID NO：3所示的CDRH3；SEQ ID NO：4所示的CDRL1；SEQ ID NO：5所示的CDRL2和/或SEQ ID NO：6所示的CDRL3或每个CDR的直接等价物，其中所述直接等价物在所述CDR中具有不多于两个氨基酸取代。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3中的一个或多个，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ IDNO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6中的一个或多个。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ IDNO：6。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包含SEQID NO：7所示的氨基酸序列，所述VL结构域包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列。

在一个方面，提供了药物试剂盒，其包括约8 mg至约80 mg的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂，其中所述ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。在一个实施方案中，试剂盒包括8 mg、24 mg或80 mg的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，试剂盒包括8 mg、24 mg或80 mg的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和200 mg的PD1拮抗剂。在一个实施方案中，PD1拮抗剂是派姆单抗。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含一个或多个：SEQID NO：1所示的CDRH1；SEQ ID NO：2所示的CDRH2；SEQ ID NO：3所示的CDRH3；SEQ ID NO：4所示的CDRL1；SEQ ID NO：5所示的CDRL2和/或SEQ ID NO：6所示的CDRL3或每个CDR的直接等价物，其中所述直接等价物在所述CDR中具有不多于两个氨基酸取代。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQID NO：3中的一个或多个，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6中的一个或多个。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，所述VL结构域包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列。

在一个方面，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括以某一剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述激动剂ICOS结合蛋白的中位数血浆浓度在第一剂后为100 µg/ml至0.1 µg/ml达至少7天。

在一个方面，提供了用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中以某一剂量施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述激动剂ICOS结合蛋白的中位数血浆浓度在第一剂后为100 µg/ml至0.1 µg/ml达至少7天。

在另一个方面，提供了激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中以某一剂量施用所述激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述激动剂ICOS结合蛋白的中位数血浆浓度在第一剂后为100 µg/ml至0.1 µg/ml达至少7天。

在一个实施方案中，以某一剂量施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述激动剂ICOS结合蛋白的中位数血浆浓度在第一剂后为100 µg/ml、10 µg/ml、1 µg/ml或0.1 µg/ml至10 µg/ml、1 µg/ml 或0.1 µg/ml达至少1、2.5、4.5、7、14或21天。

在一个实施方案中，以某一剂量施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述激动剂ICOS结合蛋白的中位数血浆浓度在第一剂后为100 µg/ml、90 µg/ml、80 µg/ml、70 µg/ml、60 µg/ml、50 µg/ml、40 µg/ml、30 µg/ml、20 µg/ml、10 µg/ml、9 µg/ml、8 µg/ml、7 µg/ml、6 µg/ml、5 µg/ml、4 µg/ml、3 µg/ml、2 µg/ml、1 µg/ml、0.9 µg/ml、0.8 µg/ml、0.7 µg/ml、0.6 µg/ml、0.5 µg/ml、0.4 µg/ml、0.3 µg/ml或0.2 µg/ml至90 µg/ml、80 µg/ml、70 µg/ml、60 µg/ml、50 µg/ml、40 µg/ml、30 µg/ml、20 µg/ml、10 µg/ml、9 µg/ml、8 µg/ml、7 µg/ml、6 µg/ml、5 µg/ml、4 µg/ml、3 µg/ml、2 µg/ml、1 µg/ml、0.9 µg/ml、0.8 µg/ml、0.7 µg/ml、0.6 µg/ml、0.5 µg/ml、0.4 µg/ml、0.3 µg/ml、0.2 µg/ml或0.1 10µg/ml达至少1、2、2.5、3、4、4.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天。

在一个实施方案中，以某一剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述激动剂ICOS结合蛋白的中位数血浆浓度在第一剂后21天为10 µg/ml至1 µg/ml。在一个实施方案中，以某一剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述激动剂ICOS结合蛋白的中位数血浆浓度在第一剂后21天为10 µg/ml至0.1 µg/ml。

在一个实施方案中，以某一剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述激动剂ICOS结合蛋白的中位数血浆浓度在第一剂后21天为100 µg/ml至1 µg/ml。在一个实施方案中，以某一剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述激动剂ICOS结合蛋白的中位数血浆浓度在第一剂后21天为100 µg/ml至10 µg/ml。

在一个方面，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括以某一剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述人的ICOS受体饱和度或占用在第一剂后处于或高于约50％达至少7天。

在一个方面，提供了用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中以某一剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述人的ICOS受体饱和度或占用在第一剂后处于或高于约50％达至少7天。

在另一个方面，提供了激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中以某一剂量向人施用所述激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述人的ICOS受体饱和度或占用在第一剂后处于或高于约50％达至少7天。

在一个实施方案中，以某一剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中所述人的ICOS受体饱和度或占用在第一剂后处于或高于约50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%达至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天。

在一个方面，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括以外周CD4⁺或CD8⁺ T细胞受体占用在第一剂后处于或高于50％达至少7天的剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段。

在一个方面，提供了用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中以外周CD4⁺或CD8⁺ T细胞受体占用在第一剂后处于或高于50％达至少7天的剂量向人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段。

在另一个方面，提供了激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中以外周CD4⁺或CD8⁺ T细胞受体占用在第一剂后处于或高于50％达至少7天的剂量向人施用所述激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段。

峰值CD4⁺受体占用（RO）对应于激动剂ICOS结合蛋白或其抗原片段最大血浆浓度。峰值CD8⁺受体占用（RO）对应于激动剂ICOS结合蛋白或其抗原片段最大血浆浓度。

在一个实施方案中，以某一剂量施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中外周CD4⁺或CD8⁺ T细胞受体占用在第一剂后处于或高于约50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%达至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天。

在一个实施方案中，以某一剂量施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中外周CD4⁺或CD8⁺ T细胞受体占用在第一剂后处于或高于约60％达至少21天。在一个实施方案中，以某一剂量施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中外周CD4⁺或CD8⁺ T细胞受体占用在第一剂后处于或高于约70％达至少21天。在一个实施方案中，以某一剂量施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中外周CD4⁺或CD8⁺ T细胞受体占用在第一剂后处于或高于约80％达至少21天。在一个实施方案中，以某一剂量施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段，其中外周CD4⁺或CD8⁺ T细胞受体占用在第一剂后处于或高于约90％达至少21天。

在一个方面，提供了包含激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段的药物组合物，其中所述组合物提供了单剂后37 mg/mL×天至255 mg/mL×天的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合片段的曲线下面积值。在一个实施方案中，所述组合物进一步提供PD1拮抗剂。在一个实施方案中，所述组合物提供了单剂后62 mg/mL×天至220 mg/mL×天的ICOS结合蛋白或其抗原片段的AUC值。

在一个方面，提供了在有需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在另一个方面，提供了用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。在进一步的方面，提供了激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分在制备用于治疗癌症的药物中的用途。公开了药物试剂盒，其包括ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。

在一个方面，提供了在有需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述人施用激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂。在进一步的方面，提供了用于同时或序贯用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂。在另一个方面，提供了用于治疗癌症的ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，其中所述ICOS结合蛋白或其抗原结合部分与PD1拮抗剂同时或序贯施用。在一个方面，提供了激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将与PD1拮抗剂同时或序贯施用。在另一个方面，提供了药物试剂盒，其包括ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂。

在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含V_H结构域和/或V_L结构域，所述V_H结构域包含与SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，所述V_L结构域包含与SEQID NO：8所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，其中所述ICOS结合蛋白特异性结合人ICOS。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含一个或多个：SEQ ID NO：1所示的CDRH1；SEQ ID NO：2所示的CDRH2；SEQ ID NO：3所示的CDRH3；SEQ ID NO：4所示的CDRL1；SEQ IDNO：5所示的CDRL2和/或SEQ ID NO：6所示的CDRL3或每个CDR的直接等价物，其中所述直接等价物在所述CDR中具有不多于两个氨基酸取代。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3中的一个或多个，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ IDNO：5和SEQ ID NO：6中的一个或多个。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；和SEQ ID NO：3，且其中所述ICOS结合蛋白包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含VH结构域和VL结构域，所述VH结构域包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，所述VL结构域包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。在一个实施方案中，ICOS结合蛋白包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：34所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列。

在一个实施方案中，癌症是头颈部癌。在一个实施方案中，癌症是头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）。在一个实施方案中，癌症是复发/转移（R/M）HNSCC。在一个实施方案中，癌症是复发/难治（R/R）HNSCC。在一个实施方案中，癌症是HPV-阴性或HPV-阳性HNSCC。在一个实施方案中，癌症是局部晚期HNSCC。在一个实施方案中，癌症是在PD-L1 CPS（综合阳性分数（Combined Positive Score））阳性（CPS≥1）患者中的（R/M）HNSCC。综合阳性分数由FDA批准的测试确定。PD-L1 CPS是PD-L1染色细胞（肿瘤细胞、淋巴细胞、巨噬细胞）的数目除以活的肿瘤细胞的总数目，再乘以100。在一个实施方案中，使用PharmDx 22C3确定PD-L1 CPS。在一个实施方案中，癌症是经历了PD-1拮抗剂/PD-L1结合蛋白的或未进行过PD-1拮抗剂/PD-L1结合蛋白治疗的患者中的HNSCC。

在一个实施方案中，进一步与激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和/或PD1拮抗剂同时或序贯施用化学疗法。在一个实施方案中，进一步与激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂同时或序贯施用化学疗法。在一个实施方案中，化学疗法是基于铂的化学疗法。在一个实施方案中，化学疗法是基于铂的化学疗法和氟尿嘧啶。在一个实施方案中，基于铂的化学疗法是紫杉醇、多西他赛、顺铂、卡铂或其任何组合。在一个实施方案中，基于铂的化学疗法是氟尿嘧啶、顺铂、卡铂或其任何组合。在一个实施方案中，将化学疗法进一步与激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂同时或序贯施用于未进行过PD-1拮抗剂/PD-L1结合蛋白治疗的患者。

在一个实施方案中，激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分、PD1拮抗剂和化学疗法每3周施用达6个循环，且然后激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂每3周施用达35个循环。

在一个实施方案中，将激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分和PD1拮抗剂同时或序贯施用于PD-L1阳性患者。

在一个实施方案中，激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分以约0.08 mg至约240mg的剂量施用。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。

在另一个实施方案中，提供了用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分，其中所述ICOS结合蛋白或其抗原结合部分将以约0.08 mg至约240 mg的剂量施用。在一个实施方案中，以8 mg、24 mg或80 mg的剂量施用ICOS结合蛋白或其抗原结合部分。

在一个实施方案中，治疗是HNSCC的一线（first-line）或二线（second line）治疗。在一个实施方案中，治疗是复发/转移HNSCC的一线或二线治疗。在一个实施方案中，治疗是复发/转移（1L R/M）HNSCC的一线治疗。在一个实施方案中，治疗是在PD-L1 CPS（综合阳性分数）阳性（CPS≥1）患者中的1L R/M HNSCC的一线治疗。在一个实施方案中，治疗是复发/转移（2L R/M）HNSCC的二线治疗。

在一个实施方案中，治疗是未进行过PD-1/PD-L1治疗的HNSCC的一线、二线、三线、四线或五线治疗。在一个实施方案中，治疗是经历了PD-1/PD-L1的HNSCC的一线、二线、三线、四线或五线治疗。

在一些实施方案中，与治疗前水平（例如基线水平）相比，治疗导致增加的包括细胞毒性T细胞、辅助性T细胞和NK细胞的肿瘤浸润淋巴细胞，增加的T细胞，增加的粒酶B+细胞，减少的增殖肿瘤细胞和增加的活化T细胞中的一种或多种。活化T细胞可以通过更高的OX40和人白细胞抗原DR表达来观察。在一些实施方案中，与治疗前水平（例如基线水平）相比，治疗导致PD1和/或PD-L1的上调。

在一个实施方案中，人患有实体瘤。在一个实施方案中，实体瘤是晚期实体瘤。在一个实施方案中，癌症选自头颈部癌、头颈部的鳞状细胞癌（SCCHN或HNSCC）、胃癌、黑素瘤、肾细胞癌（RCC）、食道癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌和胰癌。在一个实施方案中，癌症选自：结肠直肠癌、宫颈癌、膀胱癌、尿道上皮癌、头颈部癌、黑素瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌、前列腺癌、食道癌和食道鳞状细胞癌。在一个方面，人患有下述一种或多种：SCCHN，结肠直肠癌（CRC），食道，宫颈，膀胱，乳，头颈部，卵巢，黑素瘤，肾细胞癌（RCC），EC鳞状细胞，非小细胞肺癌，间皮瘤和前列腺癌。在另一个方面，人患有液体肿瘤，例如弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）、多发性骨髓瘤、慢性成淋巴细胞性白血病（CLL）、滤泡性淋巴瘤、急性髓细胞样白血病和慢性髓细胞性白血病。在一个实施方案中，癌症是复发/转移头颈部的鳞状细胞癌（HNSCC）。在一个实施方案中，癌症是局部晚期HNSCC。在一个实施方案中，癌症是R/M HNSCC。在一个实施方案中，癌症是R/R HNSCC。在一个实施方案中，癌症是在PD-L1 CPS（综合阳性分数）阳性（CPS≥1）患者中的R/M HNSCC。在一个实施方案中，癌症是经历了PD-1拮抗剂/PD-L1结合蛋白的或未进行过PD-1拮抗剂/PD-L1结合蛋白治疗的患者中的HNSCC。

在一个实施方案中，癌症是头颈部癌。在一个实施方案中，癌症是HNSCC。鳞状细胞癌是由于称为鳞状细胞的特定细胞而引起的癌症。鳞状细胞存在于皮肤的外层中和黏膜中，所述黏膜是衬砌在体腔如呼吸道和肠的湿润组织。头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）在口、鼻和咽喉的黏膜中发展。HNSCC也称为SCCHN和头颈部的鳞状细胞癌。

HNSCC可以发生在口（口腔）、靠近口的咽喉中部（口咽）、鼻后面的空间（鼻腔和鼻旁窦）、靠近鼻腔的咽喉上部（鼻咽）、喉咙（喉）或靠近喉的咽喉下部（下咽）。取决于位置，癌症可能引起口和咽喉中异常的斑或开放性疮（溃疡）、口中异常的出血或疼痛、不消除的窦充血、咽喉痛、耳痛、吞咽时疼痛或吞咽困难、声音嘶哑、呼吸困难或增大的淋巴结。

HNSCC可以转移到身体的其他部分，例如淋巴结、肺或肝。

吸烟和饮酒是HNSCC发展的两个最重要的危险因子，且它们对危险的贡献是协同的。此外，人乳头瘤病毒（HPV），尤其是HPV-16，现已是非常确实的独立危险因子。患有HNSCC的患者具有相对差的预后。无论人乳头瘤病毒（HPV）状况如何，复发/转移（R/M）HNSCC都尤其具有挑战性，且目前，本领域中没有几种有效的治疗选择是可用的。与对于HPV-阳性HNSCC分别为9-18％和5-12％的比率相比，HPV-阴性HNSCC伴随着标准治疗（standard ofcare）后19-35％的局部复发率和14-22％的远端转移率。患有R/M疾病的患者的中数总存活在一线化学疗法背景中为10-13个月且在二线背景中为6个月。当前的标准治疗是具有或没有西妥昔单抗（cetuximab）的基于铂的双药化学疗法（doublet chemotherapy）。二线标准治疗选择包括西妥昔单抗、氨甲蝶呤和紫杉烷类。所有这些化疗剂均伴随着显著的副作用，并且仅10-13％的患者对治疗有反应。来自现有全身疗法的HNSCC消退是短暂的，且不显著增加延长寿命，而且几乎所有患者都死于其恶性肿瘤。

在一个实施方案中，癌症是复发/转移（R/M）HNSCC。在一个实施方案中，癌症是HPV-阴性或HPV-阳性HNSCC。在一个实施方案中，癌症是局部晚期HNSCC。在一个实施方案中，癌症是在PD-L1 CPS（综合阳性分数）阳性（CPS≥1）患者中的R/M HNSCC。在一个实施方案中，癌症是经历了PD-1拮抗剂/PD-L1结合蛋白的或未进行过PD-1拮抗剂/PD-L1结合蛋白治疗的患者中的HNSCC。

在一些实施方案中，癌症的治疗是癌症的一线治疗。在一个实施方案中，癌症的治疗是癌症的二线治疗。在一些实施方案中，治疗是癌症的三线治疗。在一些实施方案中，治疗是癌症的四线治疗。在一些实施方案中，治疗是癌症的五线治疗。在一些实施方案中，癌症的所述二线、三线、四线或五线治疗的先前治疗包括放射治疗、化学疗法、外科手术或放射化学疗法中的一种或多种。

在一个实施方案中，先前治疗包括用二萜类化合物，例如紫杉醇或多西他赛；长春花生物碱，例如长春碱、长春新碱或长春烯碱；铂配位化合物，例如顺铂或卡铂；氮芥，例如环磷酰胺、美法仑或苯丁酸氮芥；烷基磺酸盐，例如白消安；亚硝基脲，例如卡莫司汀；三氮烯，例如达卡巴嗪；放线菌素，例如放线菌素D；蒽环类抗生素（anthrocyclins），如柔红霉素或阿霉素；博来霉素；表鬼臼毒素，例如依托泊苷或替尼泊苷；抗代谢物抗肿瘤剂，例如氟尿嘧啶、氨甲蝶呤、阿糖胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤或吉西他滨；氨甲蝶呤；喜树碱，例如伊立替康或拓扑替康；利妥昔单抗（rituximab）；奥法木单抗（ofatumumab）；曲妥珠单抗（trastuzumab）；西妥昔单抗；贝沙罗汀（bexarotene）；索拉非尼（sorafenib）；erbB抑制剂，例如拉帕替尼（lapatinib）、厄洛替尼（erlotinib）或吉非替尼（gefitinib）；帕妥珠单抗（pertuzumab）；伊匹单抗；纳武单抗；FOLFOX；卡培他滨；FOLFIRI；贝伐珠单抗（bevacizumab）；阿特珠单抗（atezolizumab）；塞鲁单抗（selicrelumab）；奥妥珠单抗（obinotuzumab ）或其任何组合进行治疗。在一个实施方案中，癌症的所述二线治疗、三线、四线或五线治疗的先前治疗包括伊匹单抗和纳武单抗。在一个实施方案中，癌症的所述二线治疗、三线、四线或五线治疗的先前治疗包括FOLFOX、卡培他滨、FOLFIRI/贝伐珠单抗和阿特珠单抗/塞鲁单抗。在一个实施方案中，癌症的所述二线治疗、三线、四线或五线治疗的先前治疗包括卡铂/纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇（Nab-paclitaxel）。在一个实施方案中，癌症的所述二线治疗、三线、四线或五线治疗的先前治疗包括纳武单抗和电化学疗法。在一个实施方案中，癌症的所述二线治疗、三线、四线或五线治疗的先前治疗包括放射治疗、顺铂和卡铂/紫杉醇。

在一个实施方案中，治疗是头颈部癌或HNSCC的一线或二线治疗。在一个实施方案中，治疗是复发/转移HNSCC的一线或二线治疗。在一个实施方案中，治疗是复发/转移（1LR/M）HNSCC的一线治疗。在一个实施方案中，治疗是在PD-L1 CPS（综合阳性分数）阳性（CPS≥1）患者中的1L R/M HNSCC的一线治疗。在一个实施方案中，治疗是复发/转移（2L R/M）HNSCC的二线治疗。

在一个实施方案中，治疗是未进行过PD-1/PD-L1治疗的HNSCC的一线、二线、三线、四线或五线治疗。在一个实施方案中，治疗是经历了PD-1/PD-L1的HNSCC的一线、二线、三线、四线或五线治疗。

在一些实施方案中，与治疗前水平（例如基线水平）相比，治疗导致增加的包括细胞毒性T细胞、辅助性T细胞和NK细胞的肿瘤浸润淋巴细胞，增加的T细胞，增加的粒酶B+细胞，减少的增殖肿瘤细胞和增加的活化T细胞中的一种或多种。活化T细胞可以通过更高的OX40和人白细胞抗原DR表达来观察。在一些实施方案中，与治疗前水平（例如基线水平）相比，治疗导致PD1和/或PD-L1的上调。

本公开内容还涉及用于治疗或减轻选自下述的癌症的严重性的方法：脑（神经胶质瘤）、成胶质细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、乳、炎性乳癌、肾母细胞瘤、尤因氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠、头颈部、肾、肺、肝、黑素瘤、卵巢、胰、前列腺、肉瘤、骨肉瘤、骨的巨细胞瘤、甲状腺、成淋巴细胞性T-细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性T-细胞白血病、浆细胞瘤、成免疫细胞性大细胞白血病（immunoblastic large cell leukemia）、套细胞白血病、多发性骨髓瘤成巨核细胞性白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞型白血病、前髓细胞性白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、成淋巴细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、神经母细胞瘤、膀胱癌、尿道上皮癌、肺癌、外阴癌（vulval cancer）、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食道癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌（buccal cancer）、口癌、GIST（胃肠基质肿瘤）和睾丸癌。在一个实施方案中，癌症表现出微卫星不稳定性（MSI）。在一个实施方案中，癌症抑制高微卫星不稳定性（MSI-H）。

如本文所使用的所谓术语“治疗”及其语法变化形式指的是治疗性疗法。关于特定状况，治疗意指：通过将状况的一种或多种生物表现消除或降低到不可检测的水平达在缓和时间段期间没有额外治疗的情况下被认为是所述表现的缓和状态的时间段来（1）改善状况的一种或多种生物表现的状况或减轻其严重性，（2）与（a）导致或负责状况的生物级联中的一个或多个点或（b）状况的一种或多种生物表现相干扰，（3）减轻与状况或其治疗有关的一种或多种症状或病征、效应或副作用，（4）减缓状况的进展，即延长存活，或者状况的一种或多种生物表现的进展，和/或（5）治愈所述状况或状况的一种或多种生物表现。本领域技术人员将理解被认为是特定疾病或状况的缓和的持续时间。由此也预期了预防性疗法。技术人员将理解，“预防”不是绝对术语。在医学中，“预防”被理解为指药物的预防性施用，以显著减小状况或其生物表现的可能或严重性，或者延迟这种状况或其生物表现的发作。例如，当主体被认为处于发展癌症的高风险时，例如当主体具有强的癌症家族史或当主体已暴露于致癌剂时，预防性疗法是适当的。

如本文所使用的，术语“癌症”、“赘生物”、“恶性肿瘤”和“肿瘤”可互换使用，并且以单数或复数形式，指已经历使其对宿主生物为病态的恶性转化的细胞。通过非常确实的技术，特别是组织学检查，可以容易地将原发性癌细胞与非癌性细胞区别开。如本文所使用的，癌细胞的定义不仅包括原发性癌细胞，而且还包括衍生自癌细胞祖先的任何细胞。这包括转移的癌细胞，以及衍生自癌细胞的体外培养物和细胞系。当提及通常表现为实体瘤的癌症类型时，“临床可检测的”肿瘤是这样的肿瘤，其基于肿瘤块可检测；例如，通过诸如计算机X线断层摄影术（CT）扫描、磁共振成像（MRI）、X-射线、超声或在体检时的触诊的程序，和/或由于在可得自患者的样品中的一种或多种癌症特异性抗原的表达而可检测。肿瘤可以是造血（或血液、血液学或血液相关的）癌症，例如衍生自血细胞或免疫细胞的癌症，其可以被称为“液体肿瘤”。基于血液肿瘤的临床状况的具体实例包括白血病，例如慢性髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和急性淋巴细胞性白血病；浆细胞恶性肿瘤，例如多发性骨髓瘤、MGUS和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症；淋巴瘤，例如非何杰金氏淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤；等等。

癌症可以是其中存在异常数目的母细胞或不需要的细胞增殖或者被诊断为血液学癌症的任何癌症，包括淋巴样和髓样恶性肿瘤两者。髓样恶性肿瘤包括，但不限于，急性髓性（或髓细胞性或骨髓性粒细胞性或成髓细胞性）白血病（未分化或分化性）、急性前髓样（或前髓细胞性或前骨髓性粒细胞性或前成髓细胞性（promyeloblastic））白血病、急性骨髓单核细胞性（或成髓单核细胞性）白血病、急性单核细胞性（或成单核细胞性）白血病、红白血病和巨核细胞型（或成巨核细胞型）白血病。这些白血病可以统称为急性髓性（或髓细胞性或骨髓性粒细胞性）白血病（AML）。髓样恶性肿瘤还包括骨髓增生障碍（MPD），其包括，但不限于，慢性髓细胞性（或髓性）白血病（CML）、慢性骨髓单核细胞性白血病（CMML）、特发性血小板增多（或血小板增多症）和真性红细胞增多（PCV）。髓样恶性肿瘤还包括脊髓发育不良（或骨髓异常增生综合征或MDS），其可以被称为难治性贫血（RA）、伴过量胚细胞的难治性贫血（RAEB）以及伴转化中的过量胚细胞的难治性贫血（RAEBT）；以及伴有或不伴有特发性骨髓化生的骨髓纤维化（MFS）。

造血癌症还包括淋巴样恶性肿瘤，其可能影响淋巴结、脾、骨髓、外周血和/或结外部位（extranodal sites）。淋巴样癌症包括B-细胞恶性肿瘤，其包括，但不限于，B-细胞非何杰金氏淋巴瘤（B-NHLs）。B-NHLs可能是惰性的（或低度恶性的（low-grade））、中度恶性的（intermediate-grade）（或侵袭性的）或高度恶性的（high-grade）（非常侵袭性的）。惰性B细胞淋巴瘤包括滤泡性淋巴瘤（FL）；小淋巴细胞性淋巴瘤（SLL）；边缘区淋巴瘤（MZL），包括结节性MZL、结外MZL、脾MZL和伴有绒毛状淋巴细胞的脾MZL；淋巴浆细胞性淋巴瘤（lymphoplasmacytic lymphoma）（LPL）；和黏膜相关性淋巴样组织（MALT或结外边缘区）淋巴瘤。中度恶性的B-NHLs包括伴有或不伴有白血病累及的套细胞淋巴瘤（MCL）、弥漫性大细胞淋巴瘤（DLBCL）、滤泡性大细胞（或3级或3B级）淋巴瘤和原发性纵隔淋巴瘤（PML）。高度恶性的B-NHLs包括伯基特氏淋巴瘤（BL）、伯基特样淋巴瘤、小无裂细胞性淋巴瘤（small non-cleaved cell lymphoma）（SNCCL）和成淋巴细胞性淋巴瘤。其他B-NHLs包括免疫母细胞性淋巴瘤（或免疫细胞瘤）、原发性渗出性淋巴瘤、HIV相关（或AIDS相关）淋巴瘤和移植后淋巴增生病症（PTLD）或淋巴瘤。B-细胞恶性肿瘤还包括，但不限于，慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、幼淋巴细胞白血病（PLL）、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症（WM）、毛细胞性白血病（HCL）、大颗粒淋巴细胞（LGL）白血病、急性淋巴样（或淋巴细胞性或成淋巴细胞性）白血病和卡斯尔曼氏病。NHL还可以包括T-细胞非何杰金氏淋巴瘤（T-NHLs），其包括，但不限于非另外说明的（NOS）T-细胞非何杰金氏淋巴瘤、外周T-细胞淋巴瘤（PTCL）、间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）、血管免疫母细胞性淋巴样病症（angioimmunoblastic lymphoid disorder）（AILD）、鼻天然杀伤（NK）细胞/T-细胞淋巴瘤、γ/δ淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、蕈样真菌病和塞扎里综合征。

造血癌症还包括何杰金氏淋巴瘤（或疾病），包括典型性何杰金氏淋巴瘤、结节性硬化性何杰金氏淋巴瘤、混合细胞型何杰金氏淋巴瘤、淋巴细胞为主型（LP）何杰金氏淋巴瘤、结节性LP何杰金氏淋巴瘤和淋巴细胞消减型何杰金氏淋巴瘤。造血癌症还包括浆细胞疾病或癌症，例如多发性骨髓瘤（MM）包括郁结性MM、意义未明（或未知或不清楚）的单克隆丙种球蛋白病（MGUS）、浆细胞瘤（骨、髓外）、淋巴浆细胞性淋巴瘤（LPL）、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、浆细胞性白血病和原发性淀粉样变性（AL）。造血癌症还可以包括另外的造血细胞的其他癌症，所述另外的造血细胞包括多形核白细胞（或嗜中性粒细胞）、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、树突细胞、血小板、红细胞和天然杀伤细胞。在本文中称为“造血细胞组织”的包括造血细胞的组织包括骨髓；外周血；胸腺；以及周围淋巴组织，例如脾、淋巴结、与黏膜有关的淋巴组织（例如肠道相关性淋巴组织）、扁桃体、淋巴集结和阑尾，以及与其他黏膜有关的淋巴组织，例如，支气管衬里。

在一个实施方案中，本发明的方法进一步包括向所述人施用至少一种肿瘤剂或癌症辅药。本发明的方法也可以与癌症治疗的其他治疗方法一起采用。

一般，具有对抗待治疗的肿瘤如易感肿瘤的活性的任何抗肿瘤剂或癌症辅药都可以在本发明的癌症治疗中共施用。这种试剂的实例可以在V.T. Devita，T.S. Lawrence和S.A. Rosenberg（编辑）Cancer Principles and Practice of Oncology，第10版（2014年12月5日），Lippincott Williams & Wilkins Publishers中找到。

将注意的是，在其涉及剂量、治疗方案以及所述剂量和治疗方案的效果的范围内，治疗癌症的方法的实施方案也被看作用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分或激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分在制备用于治疗癌症的药物中的用途实施方案及其有相互关系的实施方案。还将注意的是，在其涉及剂量、治疗方案以及所述剂量和治疗方案的效果的范围内，治疗癌症的方法、用于治疗癌症的激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分或激动剂ICOS结合蛋白或其抗原结合部分在制备用于治疗癌症的药物中的用途的实施方案也被看作药物组合物、药物制剂或药物试剂盒的实施方案。

下述实施例仅意图用于举例说明，并不以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1

H2L5 IgG4PE是由于其强有力的结合、对人ICOS的激动剂活性和低/无耗尽作用（depleting effect）而被选择的人源化IgG4抗体。H2L5 IgG4PE的独特机理概况为研究单独及与派姆单抗联合靶向T细胞共刺激物的抗肿瘤潜力提供了机会。H2L5 IgG4PE包含如SEQ ID NOS：1-6中所示的CDR序列，以及分别如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8中所示的可变重链和可变轻链序列。

本文描述的是首次进入人体试验（first-time in human study），其评价了在选择的实体瘤中H2L5 IgG4PE单独地和与派姆单抗联合的安全性、药物代谢动力学（PK）、药物动力学（PD）和抗肿瘤活性。

研究由剂量递增和队列扩展（cohort expansion）阶段组成；队列扩展阶段正在几种肿瘤类型中进行。

研究目的如下：

主要的

• 确定作为单一疗法和与派姆单抗联合的H2L5 IgG4PE的安全性、可耐受性和最大耐受/施用的剂量。

次要的

• 确定一种或多种推荐的H2L5 IgG4PE剂量用于进一步探索。

• 评价初步的抗肿瘤活性；表征PK；评价免疫原性。

探索的

• 评价PD效应。

• 探索组织和血液中抗肿瘤活性、PK和生物标志之间的联系。

方法

研究是单独的（第1部分）和与派姆单抗联合的（第2部分）H2L5 IgG4PE的剂量递增（DE）和正在进行的扩展阶段研究。改良毒性概率区间（Modified toxicity probabilityinterval）报告在每个剂量水平（DL）入组≥3名患者的情况下的DE决策。每3周（Q3W）±200mg派姆单抗Q3W作为静脉内输注施用H2L5 IgG4PE；治疗继续最多到2年或直至进展或不可接受的毒性为止。患者必须患有转移或复发的侵袭性恶性肿瘤，可测量的疾病，在晚期背景中接受了≤5线的先前疗法，适当的器官功能，以及没有需要治疗的活动性自身免疫性疾病；PK/PD队列需要治疗前和第43天的治疗中（on-treatment）肿瘤活组织检查。主要目的是确定安全性、可耐受性和最大耐受的（MTD）H2L5 IgG4PE剂量。

患者-关键纳入标准

• 晚期/转移或复发侵袭性恶性肿瘤的组织学或细胞学资料。

• 在对于具体肿瘤类型的标准疗法后已进展的疾病，或对于所述疾病，已证明标准疗法无效、不耐受或被认为不适当，或者如果不存在进一步的标准疗法

• ≤5的对于晚期疾病的先前疗法线次，包括标准治疗和研究中疗法。

• 根据RECIST v1.1指南可测量的疾病；东部肿瘤协作组（Eastern CooperativeOncology Group）性能状态0-1；适当的器官功能。

• 同意经受治疗前和治疗中活组织检查，并患有适合于PK/PD剂量扩展队列中所要求的活组织检查的疾病。

患者-关键排除标准

• 30天或五个半衰期（以较短者为准）内的先前抗癌或研究中的疗法。

• ≥与先前的免疫治疗相关且导致治疗停止的3级毒性。

• 除在研究中的疾病外的侵袭性恶性肿瘤的病史，除非无疾病达≥2年。

• 中枢神经系统（CNS）转移；例外情况包括以前治疗的CNS转移，其无症状并且在第一剂研究治疗之前至少14天不需要类固醇。

• 在最近过去的2年内需要全身治疗的活动性自身免疫性疾病。

• 特发性肺纤维化、需要类固醇的肺炎、间质性肺病或机化性肺炎的病史。

研究设计在图1中示出

• 第1A部分中的对于前3个剂量水平的加速滴定设计；每个剂量水平入组1名患者。

• 改良毒性概率区间方法报告的第1A/2A部分中的后来剂量递增决策（每个剂量水平至少3位患者）。

• 0.001 mg/kg的起始剂量：基于临床前研究中观察到的最低预期生物效应预计的人剂量。

这是设计用于研究安全性、可耐受性、药理学、PK、初步临床活性，并确定H2L5IgG4PE的推荐剂量用于进一步探索的首次进入人体（FTIH）、开放标签（open-label）、多中心研究。

如图1中所举例说明的，研究以两个部分进行（第1部分H2L5 IgG4PE单一疗法和第2部分H2L5 IgG4PE联合治疗），由此每个部分都由剂量递增阶段继之以队列扩展阶段组成。

第1A部分剂量递增阶段评价对患有选择的复发和/或难治实体瘤的主体每三周一次（Q3W）静脉内施用的单一疗法H2L5 IgG4PE的递增基于体重的剂量水平。基于安全性和可耐受性，以及分子的PK/药物动力学特征，推荐的单一疗法剂量水平或或多种剂量水平可在扩展队列中进一步研究（第1B部分）。

当H2L5 IgG4PE的单一疗法剂量水平已被认为是安全的并且已显示一致的、剂量反应性药物动力学活性时，开始第2A部分的派姆单抗联合剂量递增阶段；低于所述剂量水平的两个剂量水平将变成与200 mg固定剂量的派姆单抗联合研究的起始剂量。

在患有选择的、复发和/或难治实体瘤的主体中研究了在第2A部分中评价的这些组合。

虽然第1B部分和第2B部分扩展队列可以以H2L5 IgG4PE基于重量的给药开始，但可以进行到固定给药的转变。

基于毒性和功效，执行了无缝设计以将剂量递增与剂量扩展进行组合（Pan H,Fang X, Liu P等人，A phase I/II seamless dose escalation/expansion withadaptive randomization scheme (SEARS). Clinical Trials. 2013; 0:1-11）。在第1部分和第2部分两者中，剂量扩展阶段可以在剂量递增阶段完成之前开始。剂量扩展中来自主体的所有可用的安全性和可耐受性数据均被并入剂量递增决策的作出中。起始剂量水平/剂量扩展的决策的根据将考虑以下分等级规则：

• 确立的安全性和可耐受性；

• 初步的PK /药物动力学特征（即，靶参与（target engagement）和功能效应例如受体占用和细胞因子释放的量度）和/或

• 初步抗肿瘤活性。

一旦一种或多种剂量水平通过了分等级规则，选择的一种或多种剂量就可以在指导委员会（Steering Committee）批准后进入扩展阶段用于进一步研究；可以在扩展阶段中研究备择的H2L5 IgG4PE时间表或药物定序（drug sequencing）。此外，在正在进行的单一疗法剂量递增阶段中的在研究的剂量水平可能包括来自收集到扩展阶段的主体的信息，例如安全性数据。如果合适的话，可以在扩展阶段中并入随机和/或无效规则，以基于安全性和抗肿瘤活性的评价来最优化剂量分配（dose allocation）。扩展队列的随机化方案的详情将在扩展队列起始之前记录下来；无效规则的详情将在临时性分析开始之前在RAP中记录下来（Pan H, Fang X, Liu P等人，A phase I/II seamless dose escalation/expansion with adaptive randomization scheme (SEARS). Clinical Trials. 2013;0:1-11）。

总研究将入组约500名被诊断患有实体瘤恶性肿瘤的主体。

• 在研究的剂量递增阶段中以及在药物代谢动力学（PK）/药物动力学（PD）扩展队列中，选择用于纳入的实体瘤类型包括膀胱/尿道上皮癌、宫颈癌、结肠直肠癌（CRC）、伴鳞状细胞组织学的食道癌、头颈部（HN）癌、黑素瘤、恶性胸膜间皮瘤（MPM）、非小细胞肺癌（NSCLC）和前列腺癌。

• 在研究的队列扩展阶段（第1B部分和第2B部分），已通过肿瘤组织学或具体特征（例如表现出高微卫星不稳定性（MSI-H），DNA错配修复（dMMR）过程的缺陷或病毒介导的病理学的肿瘤）定义了几个扩展队列；这些队列中的入组不限于上述表中的肿瘤类型/组织学（定义为与肿瘤类型无关（tumor agnostic））。

• 额外的扩展队列可能入组患有选自上述表或非方案确定的肿瘤类型/组织学的具体肿瘤类型的主体；选择的根据将是基于证据的，并通过对方案进行修改以定义队列。

如果来自扩展阶段的数据支持扩展的入组或研究额外的组合，则总研究规模可通过方案修改扩展超过500。

根据实体瘤的疗效评价标准（Response Evaluation Criteria In SolidTumors）（RECIST）v1.1和免疫相关的（ir）RECIST由研究人员进行疾病状态的评估。因为疾病进展而停止治疗的决策基于irRECIST；主要功效终点分析将使用irRECIST。扫描集中收集并存储，以便于中心审查（central review）的选择。

表2：研究治疗

H2L5 IgG4PE固定剂量原理

在第1A部分（单一疗法）和第2A部分（与派姆单抗联合）中，H2L5 IgG4PE以基于体重的给药来施用。假定80 kg的典型中位数重量，可以在具有化学疗法组合的扩展队列和安全性导入（run-in）阶段测试固定剂量。

治疗用单克隆抗体经常基于体型来给药，其归因于这降低药物暴露中主体间的变异性的概念。然而，PK参数的体重依赖并不总是解释观察到的单克隆抗体暴露中的变异性（Zhao X, Suryawanshi, S; Hruska, M. Assessment of nivolumab benefit-riskprofile of a 240-mg flat dose relative to a 3 mg/kg dosing regimen in patientwith advanced tumors. Annals of Oncology. 2017;28:2002-2008）。通过群体PK模造和模拟工作评价了在所述研究中基于体重的给药与固定给药比较的优点。由单一疗法剂量递增开发了初步的群体PK模型（数据最多到1 mg/kg剂量；n = 19名主体）。

在基于初步数据集中观察到的分布的模拟中，通过考虑体重分布来进行模拟。在体重的第5个百分位（40-47 kg），在中位数稳态AUC（0-）中有70-100％的增加；在当前的1期研究中，已以3 mg/kg的剂量方案评价了高于这些增加的H2L5 IgG4PE暴露。在体重的第95个百分位（107-118 kg），与中位数80 kg暴露相比，在中位数稳态AUC（0-）中有23-32％的降低，从而提供了在最低限度降低暴露的情况下足够的受体占用（RO）。对于基于体重的给药和固定给药之间的稳态Cmax和谷浓度预期类似的结果。

总的说来，这些初步的群体PK模拟表明，使用固定给药将导致与基于体重的给药相似的暴露范围。同样，固定给药提供了降低的给药错误、降低的药物损耗、缩短制备时间和改善施用容易程度的优点。因此，转换到基于80 kg参考体重的固定剂量是合理和适当的。

表3提供了使用80 kg重量的基于重量的H2L5 IgG4PE剂量水平的固定剂量当量。

表3 H2L5 IgG4PE固定剂量计算

结果

在DE阶段和PK/PD队列中，入组了98名患者：第1部分：DE中的22和PK/PD队列中的40；第2部分：DE中的36。大多数患者具有微卫星稳定的结肠直肠癌（26％）和≥2个基线靶病灶（57％）；在晚期背景中，37％接受了≥3的先前疗法线次，且31％接受了先前抗-PD-1/L1疗法。在第1部分（n = 62）中，22名患者（35％）具有至少一种治疗相关的不利事件（TR-AE）。最频繁的TR-AEs（≥3名患者）为疲劳（15％）、天冬氨酸转氨酶（AST）上升（5％）和腹泻（3％）；AST上升是最频繁的3/4级TR-AE（N = 2 [3％]）。在第2部分中，15名患者（42％）具有至少一种TR-AE；最频繁的TR-AEs是AST上升（8％）和发热（8％）；未在>1名患者中发生3/4级TR-AEs。在DE中发生了一种剂量限制性毒性（DLT）：在于3mg/kg的最高H2L5 IgG4PE DL治疗的第2部分患者中的3级肺炎，其导致两种药物的停止。在PK/PD队列中，1名患者中的肝酶升高（H2L5 IgG4PE 3mg/kg）是DLTs，并且是唯一的导致治疗停止的TR AEs。疾病进展是治疗停止的主要原因（92％）。观察到在0.01-3mg/kg DLs范围内的全身性H2L5 IgG4PE浓度中的近似与剂量呈比例的增加。在DLs≥0.3 mg/kg时，遍及给药间隔的ICOS受体占用为≥75％。在第1部分和第2部分中观察到了肿瘤浸润淋巴细胞的目标命中（on-target）PD效应和临床活性；包括在经历了PD-1/L1的患者中。

图2显示了按队列和剂量的患者处理。图3显示了患者和疾病特征。

图4显示了治疗相关的AEs（在≥3名患者中）。

治疗相关的安全性

• 在3 mg/kg H2L5 IgG4PE剂量水平报道的导致停止的治疗相关的剂量限制性毒性：

• 单一疗法剂量递增队列中的1名患者经历了丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、胆红素、γ-谷氨酰转肽酶、损伤的肝功能（严重）的3/4级上升以及1级淀粉酶和G3脂肪酶。

• 联合队列中的1名患者经历了3级肺炎。

• 单一疗法组中的严重不利事件（SAEs）：1名患者（3 mg/kg）具有损伤的肝功能（3级）。

• 被肝转移和需要置入支架的胆道阻塞的进展混淆。

• H2L5 IgG4PE/派姆单抗组中的SAEs：4名患者具有SAEs。

• 5级肺动脉高压（H2L5 IgG4PE 0.1 mg/kg/派姆单抗200 mg）：在患者离开研究治疗达2个月后发生；患者具有包括肝炎、胰腺炎和高铁血红蛋白血症（氨苯砜相关的）的合并症（co-morbidities）。

• 3级腹泻（H2L5 IgG4PE 0.3 mg/kg/派姆单抗200 mg）：用类固醇消退。

• 3级低血压（H2L5 IgG4PE 1 mg/kg/派姆单抗200 mg）：在研究治疗输注后发生；消退并且没有导致治疗停止。

• 非并发的3级肺炎和3级下呼吸道感染（H2L5 IgG4PE 3 mg/kg/派姆单抗200mg）：用类固醇消退的肺炎；下呼吸道感染可能是归因于肺炎的突发；用抗生素和类固醇消退。

图5A-5C显示了研究治疗的持续时间：个体患者数据。

图6A-6B显示了PK和受体占用。

图7-10显示了来自患者病例研究的结果。

患者1：H2L5 IgG4PE单一疗法（图7）

病史：

• 53岁男性；IIIc期结节性黑素瘤[BRAF/cKIT突变阴性]。

• 先前方案：伊匹单抗/纳武单抗〜2个月；纳武单抗〜1年，SD（稳定疾病）最佳应答。

• 疾病负荷（Disease Burden）：5个靶病灶（LN，肺，SubQ）：SoD（直径总和）= 225mm。多个非靶病灶。

研究治疗：

• H2L5 IgG4PE单一疗法至第48周；0.1 mg/kg x 3剂Q3W，然后1 mg/kg Q3W。

• H2L5 IgG4PE Q3W + 200 mg派姆单抗Q3W联合正在进行。

图7显示了来自基线（起始H2L5 IgG4PE单一疗法之前）和在显示肿瘤对治疗的反应的肺病灶和皮下病灶的研究治疗中（on-study treatment）评估间隔的CT图像。在肺病灶中有肿瘤消退，且在皮下病灶中有完全应答/消退，这是经久的。

当与在筛选时获得的肿瘤组织相比时，在43天治疗中（on-treatment）之后收集的肿瘤活组织检查显示

• 更大数目的T细胞，

• 表达粒酶-B的CD8 Tc细胞的增加，

• 表达PD1的T细胞的增加和

• 更大数目的增殖T细胞同时

• 更少的增殖肿瘤细胞。

患者2：H2L5 IgG4PE加派姆单抗联合治疗（图8）

病史：

• 53岁女性，诊断：IV期KRAS突变体，MSI-H CRC。

• 先前方案：FOLFOX；卡培他滨；FOLFIRI/贝伐珠单抗；阿特珠单抗/塞鲁单抗〜3个月，BoR（最佳总应答）：PD（进行性疾病）；抗-CEA ADC〜2个月，BoR：PD；RO695688/阿托珠单抗（obinutuzumab）〜2个月，BoR：PD。

研究治疗：

• H2L5 IgG4PE 1 mg/kg Q3W +派姆单抗200 mg Q3W正在进行。

图8显示了来自基线和在显示大的肝病灶的研究治疗中评估间隔的CT图像，所述大的肝病灶在第9周时大小增大，然后在后来的评估中随研究治疗而减少，从而代表了假性进展（pseudoprogression）。

患者3：PD变化-肿瘤浸润淋巴细胞头颈部鳞状细胞癌-H2L5 IgG4PE 0.3 mg/kgQ3W +派姆单抗200 mg Q3W

与治疗前样品相比，治疗后样品显示粒酶B+和PD-L1+细胞的增加。将在筛选时或治疗前的肿瘤组织与在第6周治疗中获得的新鲜肿瘤活组织检查进行比较。使用一组16种标记，通过称为MultiOmyx的多重免疫荧光平台评价了肿瘤免疫浸润或TIL中的变化。与所述患者的治疗前肿瘤组织相比，第6周肿瘤的TIL分析显示了粒酶B+ T细胞和PD-L1+细胞的增加。

结论

• 单独及与派姆单抗联合的H2L5 IgG4PE于0.001-3 mg/kg剂量范围在患有晚期实体瘤的患者中良好耐受。

• 未达到最大耐受剂量；最大施用的剂量为3 mg/kg H2L5 IgG4PE。

• 大多数AEs为1/2级，且不归因于研究治疗。

• 在最高剂量水平，在单一疗法（n = 62名患者）和联合（n = 36名患者）中，各自在1名患者中发生导致停止的AEs。

• H2L5 IgG4PE浓度的与剂量呈比例的增加。

• PK/PD分析显示了在≥0.3 mg/kg的H2L5 IgG4PE剂量水平遍及给药间隔的≥75％的总ICOS受体饱和度。

• 一系列剂量（≥0.1-1 mg/kg）已显示出生物和临床活性（包括在具有先前抗-PD-1/L1暴露的患者中）。正在扩展队列中进一步研究这些剂量，以确立推荐的H2L5 IgG4PE剂量。

• 初步的生物和临床数据支持非耗尽性ICOS激动剂作为临床靶的作用机理。

• 正在扩展队列中进一步研究超过0.1 mg/kg的剂量，以确立推荐的H2L5 IgG4PE剂量。

鳞状非小细胞肺癌（NSCLC）患者

图9显示了鳞状NSCLC患者的扫描，其显示对H2L5 IgG4PE（0.3 mg/kg Q3W）/派姆单抗（200 mg Q3W）联合治疗的应答。

• IV期肺鳞状细胞癌，LN PDL1 = 0％，TMB= 8 mt/MB（突变/兆碱基），ICOS-高（GSK LDT（实验室开发的测试））

• 注意：PD-L1借助Dako22C3；TMB借助FoundationOne

• Foundation One基因实验对象组：PIK3CA、TSC1、SOX2、BCL2L2、CARD11、MCL1、PRKCI、SPTA1、TERC、TP53

• 用卡铂/纳米颗粒白蛋白结合型紫杉醇9/17-2/18的先前治疗

• 对H2L5 IgG4PE +派姆单抗（Pembro）（63％）的部分应答（PR）

• 2/21/19周期17第1天

实施例2

实施例2描述了来自实施例1中所述研究的H2L5 IgG4PE的药物代谢动力学/药物动力学（PK/PD）暴露-应答表征。H2L5 IgG4PE是具有免疫刺激和抗肿瘤活性的针对诱导型共刺激受体（ICOS）的激动剂IgG4PE抗体。实施例1描述的研究是单独和联合研究H2L5IgG4PE的首次进入人体研究，包括一线复发/转移（1L R/M）HNSCC与派姆单抗联合。

方法

于每3周（Q3W）0.001至10 mg/kg的剂量评价H2L5 IgG4PE的安全性、PK、PD和初步抗肿瘤活性。对在给药前和研究中选择的时间点收集的血液样品进行对淋巴细胞和ICOS受体占用（RO）的PK和PD影响的评价。通过多重免疫荧光和基因表达平台，评价了在筛选时和第6周时的肿瘤活组织检查的肿瘤免疫浸润（TIL）的变化。

PK分析

• 使用所有合并的浓度-时间数据构建了初步的群体PK数据集

• 在整个过程中收集连续血浆样品；通过证实的ELISA测定对PK样品进行测定，并使用非线性混合效应对浓度-时间数据进行模造，如在NONMEM中所实施的。

药物动力学（PD）分析

• 在整个研究过程中连续进行流式细胞术以评价用H2L5 IgG4PE的ICOS受体占用（RO）。

• 对于PK/PD和扩展队列，在给药前和在第6周收集肿瘤组织，以评价总TIL、活化中的改变、增殖和基因表达变化。

• 定义为从群体PK模型得出的第6周给药前谷浓度的PK/PD分析的暴露量度。

• 使用Nanostring nCounter™平台进行TME中基因表达变化的评价。

• Multiomyx™多重免疫荧光用于表征TIL的免疫表型。

HNSCC暴露-应答分析

• 对已在第2A部分剂量递增或第2B部分HNSCC队列中接受研究药物的未进行过先前抗-PD 1/L1疗法治疗患有HNSCC的参与者进行了暴露-功效分析。

• 进行了探索性回归分析，以评价H2L5 IgG4PE暴露与肿瘤最长直径之和（SLD）中的改变之间的潜在联系。存活分析是过早的。

• 定义为从群体PK模型得出的第一剂量曲线下面积的暴露-应答分析的暴露量度。

• 研究人员按IRECIST评估了总应答率（ORR）和疾病控制率（DCR），通过分箱的（binned）暴露估算值进行总计，并使用传统的逻辑回归模型进行描述。

结果

H2L5 IgG4PE的初步PK处理显示低清除率、有限的中央分布容积（central volumeof distribution）和19天的平均全身半衰期，这与其他人源化mAbs的一致。在具有伴随的200 mg 派姆单抗的于0.3 mg/kg的1L R/M HNSCC扩展队列中观察到靶参与和肿瘤大小缩小的证据。剂量和浓度-RO分析提示≥0.1 mg/kg的H2L5 IgG4PE维持外周CD4+和CD8+ T细胞上的高RO（≥70％）。成对肿瘤活组织检查的定量TIL评价显示在用0.3mg/kg剂量治疗的主体中观察到的在暴露时肿瘤中潜在有利免疫微环境。来自肿瘤RNA的TIL和基因表达数据显示了选择的免疫活化标记中的非线性、剂量依赖性变化。临床暴露-应答评估揭示，在1LR/M HNSCC扩展队列中遍及暴露的基线至第9周靶病灶变化中无差异。同样，对≥2级严重性的AEs进行遍及队列的合并暴露-应答分析显示遍及暴露/剂量的相似安全性。群体PK模造提示固定剂量将暴露维持在确立的安全性范围内。

药物代谢动力学和靶参与

• H2L5 IgG4PE的PK和靶参与特征与先前的报道相似，具有〜0.27 L/天的群体清除率估计值和〜3.6 L的中央容积（central volume）估计值，以及体重对全身暴露的有限影响。

• H2L5 IgG4PE的血浆浓度在没有明显的派姆单抗相互作用的情况下以与剂量呈比例的方式增加（图10A），而在0.1 mg/kg或更高的H2L5 IgG4PE剂量的情况下ICOS RO维持在〜70％以上（图10B）。

• 在0.3 mg/kg和1.0 mg/kg的H2L5 IgG4PE剂量的情况下对于CD4⁺观察到RO中的最小差异（图10C），对于CD8⁺具有相似结果（数据未显示）。然而，对于<1.0 mg/kg的剂量，存在RO中的大变异性（图11）

暴露-应答表征

• 在H2L5 IgG4PE 0.3 mg/kg和200 mg派姆单抗的情况下在复发/再发的头颈部鳞状细胞癌（R/R HNSCC）扩展队列中观察到靶参与和肿瘤大小缩小的证据。

• 在HNSCC中观察到第9周时暴露（AUC）与未最后确定的最佳总应答（ORR）、DCR（疾病控制率）和SLD中的百分比变化之间的潜在关联。每个空心/阴影圆圈代表头颈部扩展队列中的患者。来自这三个回归分析的斜率估计值均不是统计学上显著的（p-值> 0.05；图12）。

MultiOmyx-TIL和基因表达数据的基于多重免疫荧光的评价以显示在H2L5 IgG4PE +/-派姆单抗的情况下在肿瘤中的药物动力学变化。

• 成对肿瘤活组织检查中TILs的定量评价证实TILs的研究中变化遵循非线性、暴露/剂量依赖性模式。

• 在C_谷时1000-10000 ng/ml的H2L5 IgG4PE暴露（其对应于〜0.3 mg/kg至1 mg/kg的剂量）的情况下，选择的免疫活化标记中的变化有利于更大的细胞毒性T细胞与调节T细胞比（图13）。

• 当与H2L5 IgG4PE 0.3 mg/kg和更高剂量的情况下的MultiOmyx™免疫荧光数据中的基线相比时，在治疗中活组织检查中检测到总TIL以及其他活化和增殖T细胞表型的非单调剂量依赖性变化（图14）

• 肿瘤中的基因表达变化显示出非线性剂量应答趋势，在≥0.1 mg/kg时具有最大增加，且在<1mg/kg时具有最大减少（数据未显示）

• 对于当与未经历疾病控制的主体相比时经历了疾病控制（DC）益处的处于0.3-1mg/kg剂量的H2L5 IgG4PE的主体，当与治疗前肿瘤样品相比时，在第6周治疗中活组织检查中，细胞毒性T细胞增殖（CD3⁺CD8⁺Ki67⁺）比起调节T细胞增殖（CD3⁺CD4⁺FOXP3⁺Ki67⁺）来的比率更高（图14B）。以类似的模式，对于当与未经历疾病控制的主体相比时经历了疾病控制（DC）益处的处于0.3-1 mg/kg剂量的H2L5 IgG4PE的主体，当与治疗前肿瘤样品相比时，在第6周治疗中活组织检查中，细胞毒性T细胞（CD3+CD8+）比起调节T细胞（CD3+CD4+Foxp3+）来的比率也更高（数据未显示）。

患者病例研究

患者4：H2L5 IgG4PE单一疗法

病史

诊断：

○ 初始诊断（Dx）：2013年3月，BRAF阴性，N/KRAS突变阳性Ib期浅表扩散性黑素瘤。

○ 具有转移的Dx：2013年1月

先前的方案：

○ 纳武单抗（晚期/转移，2017年8月-2018年6月）

○ 电化学疗法（2018年3月）

研究治疗：

○ 周期1第1天（C1D1）-2018年7月24日；1 mg/kg Q3W 的H2L5 IgG4PE单一疗法。

治疗后样品显示：

• 较高的TIL，包括细胞毒性、辅助性T细胞和NK细胞

• 更多的粒酶B+ T细胞和更少的增殖肿瘤细胞

• 如在更大的OX40和HLADR表达的情况下所观察到的活化的T细胞中的增加

• H2L5 IgG4PE处理时PD1和PD-L1的上调

患者病例研究

患者5：H2L5 IgG4PE单一疗法

病史

诊断

• 49岁女性，具有黏液表皮样组织学（2014年10月20日诊断）和转移（2016年7月诊断）的III期腮腺癌。

• 先前的方案：放射疗法（2014年12月至2015年1月）；阿霉素/环磷酰胺（2015年2月至2015年4月）；紫杉醇（辅药）（2015年5月至2016年5月）。

研究治疗：

• H2L5 IgG4PE单一疗法0.3 mg/kg Q3W；由于疾病进展，在第24周后停止。

• 在第27周交换为与派姆单抗200 mg Q3W联合的H2L5 IgG4PE 0.3 mg/kg Q3W；由于PD（疾病进展）而在第36周停止。

• 与其治疗前样品相比，使用多重免疫荧光对肿瘤的免疫表型分析显示出代表主体号的治疗中肿瘤活组织检查中TIL活化、细胞毒性功能和增殖的功能性标记中的增加。

治疗后样品显示：

• 更多的TIL，包括细胞毒性、辅助性T细胞和NK细胞

• 更多的粒酶B+ T细胞和更少的增殖肿瘤细胞

• 如在更大的OX40和HLADR表达的情况下所观察到的更多的活化的T细胞

• H2L5 IgG4PE处理时PD1和PD-L1的上调

结论

• H2L5 IgG4PE PK处理与其他人源化单克隆抗体一致，具有低清除率和有限的中央分布容积。H2L5 IgG4PE PK不受派姆单抗影响。

• 在用0.3-1.0 mg/kg剂量的H2L5 IgG4PE治疗的患有R/R HNSCC和黑素瘤的患者中显示了靶参与和肿瘤大小缩小的证据。

• 0.3-1.0 mg/kg的H2L5 IgG4PE剂量范围与良好的肿瘤微环境有关，如通过CD8:Treg比率的增加及其增殖变化所证实的。数据提供了可转化为临床益处的在这些剂量的ICOS受体的激动剂刺激的进一步药理学证据。

• 总的说来，当前的PK和非单调PD数据提供了在临床可耐受剂量的H2L5 IgG4PE靶参与和生物活性的证据，并支持在将来研究中H2L5 IgG4PE的继续探索，包括范围0.3-1.0 mg/kg或可比较的固定剂量范围。

实施例3

实施例3描述了分别在经历了PD-1/L1和未进行过PD1/L1治疗的患者中在HNSCC（头颈部鳞状细胞癌）中单独和与派姆单抗联合使用的H2L5 IgG4PE的实施例1中所述的研究的初步功效和安全性发现。

研究目的

• 研究目的和合格标准已在实施例1中进行了描述。

• 此处提供的分析的目的是：

○ 主要的：确定在患有HNSCC的患者中作为单一疗法和与派姆单抗联合的H2L5IgG4PE的安全性、可耐受性。

○ 次要的：通过iRECIST评价作为单一疗法和与派姆单抗联合的H2L5 IgG4PE的抗肿瘤活性。

• 探索的：已在单独的分析中评价了H2L5 IgG4PE单一疗法在血液和肿瘤中的PD效应，其包括，但不限于，受体占用、免疫表型分析、TIL中的变化和基因表达。

方法

研究设计

• 在HNSCC队列中，选择来自第1A和2A部分的推荐剂量用于在第1B和2B部分中的安全性、PK、PD活性和初步临床活性的进一步研究（联合扩展（CE））（图15）。

• 每9周进行疾病评估一直到第54周，然后每12周进行

• 评估总应答率（ORR）、疾病控制率（DCR）和无进展存活（PFS）。

结果

人口统计学

• 到2019年7月26日时为止，入组了单一疗法中17名经历了PD-1/L1的患者和联合HNSCC扩展队列（EC）中的34名未进行过PD-1/L1治疗的患者；分别有16名和34名患者对于功效分析是可评价的（可评价的群体包括所有接受≥1剂H2L5 IgG4PE且具有≥1的基线后疾病评估，或已进展、死亡或永久停止治疗的参与者）。

• 在单一疗法EC中，所有治疗的群体中（接受≥1剂H2L5 IgG4PE的患者）82％的患者在转移背景中接受了≥1的先前线次；在联合EC中，53％在转移背景中接受了≥1的先前线次。

表4. 患者人口统计学和疾病特征

功效

• 在单一疗法队列中的16名可评价的患者中，总应答率（ORR）为6％（95％CI：0.2，30.2），且定义为具有完全应答、部分应答或稳定疾病达≥9周的患者的百分比的疾病控制率（DCR））为31％（95％CI：11，58.7）（图16A）。在联合队列中，来自34名可评价的患者的ORR为24％（95％CI：10.7，41.2）（图16B），且DCR为65％（95％CI：46.5，80.3）。

• 联合队列中的应答是经久的，其中所有应答患者维持益处达≥6个月（中位数未达到（NR）；95％CI [4.2个月，NR]（图17B）。

• 联合队列中的中位数PFS为5.6个月（95％CI：2.4，7.4）（图18）。

• 对于联合队列，在分析时未达到中位数OS（95％CI：8.2，NR）（图19）；6个月时的OS 的Kaplan-Meier估计值为83％（95％CI：64％，93％）。

• 正在进行使用DAKO 22C3的PD-L1免疫组织化学测试（图21）。在具有已知的PD-L1数据的患者中，大多数反应者和具有稳定疾病的患者具有PD-L1状态1≤CPS<20（10/14患者具有CPS≥1和<20，且I患者具有CPS <1） 。

安全性

• 遍及单一疗法和联合群体中的所有研究队列患有HNSCC的患者中的治疗相关不利事件（图20）与以前报道的一致，并且单独以及与派姆单抗联合的H2L5 IgG4PE两者均良好耐受。

• 表5中描述了患有HNSCC的患者（所有研究队列）中的不利事件（AEs）和严重AEs（SAEs）。

表5. HNSCC队列中的AEs和SAEs

患者病例研究

H2L5 IgG4PE/派姆单抗联合治疗：HNSCC患者-61岁男性（图22）

病史：

诊断（Dx）：

○ 初始Dx：2017年11月，III期，HPV+口咽鳞状细胞癌

○ 具有转移的Dx：2017年12月

先前的方案：

○ 放射治疗（2018年1月至2月，进行性疾病[PD]）

○ 顺铂（辐射敏化剂，2018年1月）

○ 卡铂/紫杉醇（辐射敏化剂，2018年2月20日）

研究治疗：

○ C1D1：2018年8月6日；由于进行性疾病（PD），第30周后停止

○ 0.3 mg/kg Q3W的H2L5 IgG4PE+200 mg派姆单抗Q3W

治疗后样品显示：

• 更多的肿瘤浸润淋巴细胞，包括细胞毒性T细胞、辅助性T细胞和NK细胞。

• 更多的增殖T细胞、粒酶B+细胞和更少的增殖肿瘤细胞。

• 如在更大的OX40和人白细胞抗原DR表达的情况下所观察到的更多的活化的T细胞。

图22显示了来自基线（起始H2L5 IgG4PE/派姆单抗之前）和在显示第9周时如通过后来的评估所证实的经久的病灶应答的肺病灶的研究治疗中评估间隔的CT图像。

H2L5 IgG4PE单一疗法：HNSCC患者-64岁男性（图23）

病史：

诊断（Dx）：

• 初始Dx：2013年4月；Iva期HNSCC（口腔）

先前的方案：

• 顺铂/放射治疗（辅药，2013年7月至9月，完全应答）

• 卡铂（2016年12月至2017年3月；进行性疾病）→西妥昔单抗维持（2017年3月至5月；进行性疾病）

• 氨甲蝶呤（2017年6月至8月；进行性疾病）

• 纳武单抗（2017年10月至12月；进行性疾病）

研究治疗

• 周期1第1天（C1D1）：2018年1月15日

• 1 mg/kg Q3W的H2L5 IgG4PE单一疗法至第30周，然后从第36周至第51周接受H2L5 IgG4PE + 200 mg派姆单抗Q3W（交换）

• 图23显示了来自基线（起始H2L5 IgG4PE单一疗法之前）和在显示第9周时如通过后来的评估所证实的经久的病灶大小中接近50％的减少的肝病灶的研究治疗中评估间隔的CT图像。

结论

• H2L5 IgG4PE单一疗法以及与派姆单抗联合在患有以前治疗的未进行过PD-1/L1治疗的HNSCC的患者中显示出易控制的安全性概况。

• H2L5 IgG4PE已显示出在经历了PD-1/L1的HNSCC中的单剂活性和在未进行过PD-1/L1治疗的HNSCC中与派姆单抗联合的活性两者；与具有稳定疾病的那些和具有CR/PR的那些相比，具有进行性疾病的患者中的中位数PD-L1表达较低。

• 临床转化工作支持HNSCC中作为单一疗法和与派姆单抗联合的H2L5 IgG4PE的继续探索。

序列表

<110> GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited

<120> 给药

<130> 04012.0466-01304

<150> US 62/748,595, US 62/807,897, US 62/837,385, US 62/895,229, US 62/902,444

<151> 2018-10-22, 2019-02-20, 2019-04-23, 2019-09-03, 2019-09-19

<160> 35

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> CDRH1

<400> 1

Asp Tyr Ala Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> CDRH2

<400> 2

Leu Ile Ser Ile Tyr Ser Asp His Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> CDRH3

<400> 3

Asn Asn Tyr Gly Asn Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> CDRL1

<400> 4

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> CDRL2

<400> 5

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> CDRL3

<400> 6

Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 7

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 人源化重链（VH）可变区（H2）

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Ser Ile Tyr Ser Asp His Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Asn Asn Tyr Gly Asn Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 人源化轻链（VL）可变区（L5）

<400> 8

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 168

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 9

Met Lys Ser Gly Leu Trp Tyr Phe Phe Leu Phe Cys Leu Arg Ile Lys

1 5 10 15

Val Leu Thr Gly Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asn Tyr Glu Met Phe Ile

20 25 30

Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile Leu Cys Lys Tyr Pro Asp Ile Val

35 40 45

Gln Gln Phe Lys Met Gln Leu Leu Lys Gly Gly Gln Ile Leu Cys Asp

50 55 60

Leu Thr Lys Thr Lys Gly Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu

65 70 75 80

Lys Phe Cys His Ser Gln Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu

85 90 95

Tyr Asn Leu Asp His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn Leu Ser

100 105 110

Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Lys Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu

115 120 125

His Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Phe Trp Leu Pro

130 135 140

Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu

145 150 155 160

Ile Cys Trp Leu Thr Lys Lys Met

165

<210> 10

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 10

Met Lys Ser Gly Leu Trp Tyr Phe Phe Leu Phe Cys Leu Arg Ile Lys

1 5 10 15

Val Leu Thr Gly Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asn Tyr Glu Met Phe Ile

20 25 30

Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile Leu Cys Lys Tyr Pro Asp Ile Val

35 40 45

Gln Gln Phe Lys Met Gln Leu Leu Lys Gly Gly Gln Ile Leu Cys Asp

50 55 60

Leu Thr Lys Thr Lys Gly Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu

65 70 75 80

Lys Phe Cys His Ser Gln Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu

85 90 95

Tyr Asn Leu Asp His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn Leu Ser

100 105 110

Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Lys Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu

115 120 125

His Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Phe Trp Leu Pro

130 135 140

Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu

145 150 155 160

Ile Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro

165 170 175

Asn Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser

180 185 190

Arg Leu Thr Asp Val Thr Leu

195

<210> 11

<211> 288

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 11

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly

165 170 175

Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys

180 185 190

Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro

195 200 205

Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly

210 215 220

Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro

225 230 235 240

Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly

245 250 255

Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg

260 265 270

Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 12

<211> 290

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 12

Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu

1 5 10 15

Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr

20 25 30

Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu

35 40 45

Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile

50 55 60

Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser

65 70 75 80

Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn

85 90 95

Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr

100 105 110

Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val

115 120 125

Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val

130 135 140

Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr

145 150 155 160

Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser

165 170 175

Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn

180 185 190

Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr

195 200 205

Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu

210 215 220

Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His

225 230 235 240

Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr

245 250 255

Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys

260 265 270

Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu

275 280 285

Glu Thr

290

<210> 13

<211> 273

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 13

Met Ile Phe Leu Leu Leu Met Leu Ser Leu Glu Leu Gln Leu His Gln

1 5 10 15

Ile Ala Ala Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile

20 25 30

Glu His Gly Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser

35 40 45

His Val Asn Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn

50 55 60

Asp Thr Ser Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu

65 70 75 80

Pro Leu Gly Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp

85 90 95

Glu Gly Gln Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr

100 105 110

Lys Tyr Leu Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr

115 120 125

His Ile Leu Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln

130 135 140

Ala Thr Gly Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val

145 150 155 160

Pro Ala Asn Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val

165 170 175

Thr Ser Val Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys

180 185 190

Val Phe Trp Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp

195 200 205

Leu Gln Ser Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Trp Leu Leu His

210 215 220

Ile Phe Ile Pro Phe Cys Ile Ile Ala Phe Ile Phe Ile Ala Thr Val

225 230 235 240

Ile Ala Leu Arg Lys Gln Leu Cys Gln Lys Leu Tyr Ser Ser Lys Asp

245 250 255

Thr Thr Lys Arg Pro Val Thr Thr Thr Lys Arg Glu Val Asn Ser Ala

260 265 270

Ile

<210> 14

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 37A10S713 VH CDR1

<400> 14

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asp

1 5 10

<210> 15

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 37A10S713 VH CDR2

<400> 15

Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 16

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 37A10S713 VH CDR3

<400> 16

Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser

1 5

<210> 17

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 37A10S713 VL CDR1

<400> 17

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly Ser Phe Asn Tyr Leu Thr

1 5 10 15

<210> 18

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 37A10S713 VL CDR2

<400> 18

Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr

1 5

<210> 19

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 37A10S713 VL CDR3

<400> 19

His His His Tyr Asn Ala Pro Pro Thr

1 5

<210> 20

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 37A10S713重链可变区

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser

1 5 10 15

Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp

20 25 30

Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val Ser

35 40 45

Asn Ile Asp Glu Asp Gly Ser Ile Thr Glu Tyr Ser Pro Phe Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr

85 90 95

Arg Trp Gly Arg Phe Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 21

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 37A10S713轻链可变区

<400> 21

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Gly

20 25 30

Ser Phe Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Phe Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His His His Tyr

85 90 95

Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105 110

<210> 22

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> ICOS.33 IgG1f S267E重链可变结构域

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Phe Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Val Ile Asp Thr Lys Ser Phe Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ser Asp

50 55 60

Leu Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ala Thr Ile Ala Val Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 23

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> ICOS.33 IgG1f S267E轻链可变结构域

<400> 23

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Asn Leu Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Arg Thr

85 90 95

Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 24

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> STIM003重链可变结构域

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Val Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Asp Thr Asp Tyr Ser Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Phe Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr His Val Pro Phe Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 25

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> STIM003轻链可变结构域

<400> 25

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Arg Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Asp Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Asp Met Ser Pro

85 90 95

Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 26

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0重链可变结构域

<400> 26

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro His Ser Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Tyr Tyr Tyr Asp Thr Ser Gly Tyr Tyr His Asp Ala Phe

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 27

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0 VH CDR1

<400> 27

Gly Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 28

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0 VH CDR2

<400> 28

Trp Ile Asn Pro His Ser Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 29

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0 VH CDR3

<400> 29

Thr Tyr Tyr Tyr Asp Thr Ser Gly Tyr Tyr His Asp Ala Phe Asp Val

1 5 10 15

<210> 30

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0轻链可变结构域

<400> 30

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Leu

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 31

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0 VL CDR1

<400> 31

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Leu Leu Ala

1 5 10

<210> 32

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0 VL CDR2

<400> 32

Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 33

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> XENP23104 [ICOS]_H0.66_L0 VL CDR3

<400> 33

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp Thr

1 5

<210> 34

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 人源化重链（H2L5 IgG4PE）

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Ser Ile Tyr Ser Asp His Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Asn Asn Tyr Gly Asn Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 35

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 人源化轻链（H2L5 IgG4PE）

<400> 35

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210