一种复配农药制剂中丙硫菌唑的检测方法
阅读说明：本技术 一种复配农药制剂中丙硫菌唑的检测方法 (Method for detecting prothioconazole in compound pesticide preparation ) 是由 宋薇 付仁敬 于 2021-01-08 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种复配农药制剂中丙硫菌唑的检测方法。基于丙硫菌唑分子特性以及在酸性条件下抑制丙硫菌唑与百菌清组分发生反应,从而能准确检测出丙硫菌唑质量分数。本发明在检测复配农药制剂中丙硫菌唑质量分数的过程中,操作简单,检测专一性好,灵敏度高,响应速度快,结果灵敏可靠,能够实现实时在线的快速和特异性检测。本发明在农药检测分析领域具有良好的应用前景和潜在应用价值。(The invention discloses a method for detecting prothioconazole in a compound pesticide preparation. Based on the molecular characteristics of prothioconazole and the inhibition of the reaction of prothioconazole and chlorothalonil components under acidic conditions, the mass fraction of prothioconazole can be accurately detected. In the process of detecting the mass fraction of the prothioconazole in the compound pesticide preparation, the method is simple to operate, has the advantages of good detection specificity, high sensitivity, high response speed and sensitive and reliable result, and can realize real-time online rapid and specific detection. The invention has good application prospect and potential application value in the field of pesticide detection and analysis.)
技术领域
本发明涉及农药质量检测技术领域，具体涉及一种丙硫菌唑的检测方法。
背景技术
丙硫菌唑是拜耳公司研制的一种新型广谱三唑硫酮类杀菌剂，主要用于防治谷类、麦类豆类作物等众多病害，丙硫菌唑毒性低，无致畸，致突变型，对胚胎无毒性，对人和环境安全。其作用机理是抑制真菌中甾醇的前体-羊毛甾醇或2,4-亚甲基二氢羊毛甾14位上的脱甲基化作用。
丙硫菌唑主要用于防治禾谷类作物如小麦、大麦、油菜、花生、水稻和豆类作物等众多病害。几乎对所有麦类病害都有很好的防治效果，如小麦和大麦的白粉病、纹枯病、枯萎病、叶斑病、锈病、菌核病、网斑病、云纹病等。还能防治油莱和花生的土传病害，如菌核病，以及主要叶面病害，如灰霉病、黑斑病、褐斑病、黑胫病、菌核病和锈病等。使用剂量通常为200g（a.i.）/hm2 ，在此剂量下，活性优于或等于常规杀菌剂如氟环唑、戊唑醇、嘧菌环胺等。
为了预防抗性的发生，适应特殊的作物与防治不同的病害之需要，拜耳公司正在开发并登记丙硫菌唑单剂以及与不同作用机理药剂的混合制剂，除可与杀菌剂氟嘧菌酯混配外，还可与戊唑醇、肟菌酯、螺环菌胺等进行复配。
目前检测丙硫菌唑质量分数的传统方法主要有高效液相色谱法，液相串联质谱法等，上述方法在检测丙硫菌唑单组分制剂的过程中，检测灵敏度高，选择性好，结果准确可靠，但在检测丙硫菌唑与百菌清复配制剂的过程中，发现两种组分互相干扰，因此开发一种简单、快速、灵敏、可靠的检测方法对复配农药制剂中丙硫菌唑的质量分数检测尤为重要。
发明内容
针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种丙硫菌唑的检测方法，解决现有方法无法实现农药复配制剂中丙硫菌唑质量分数检测的问题。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种复配农药制剂中丙硫菌唑的检测方法，包括以下步骤：
1.方法提要
试样用乙腈+冰乙酸混合溶液（取1000mL烧杯，使用500mL量筒量取500mL乙腈倒入烧杯中，再用100mL量筒量取80mL冰乙酸，倒入烧杯中，搅拌，混匀；该溶液以下简称乙腈+冰乙酸（500mL乙腈+80mL冰乙酸）溶液）溶解，以乙腈+水为流动相，以磷酸调pH，使用C18填料的不锈钢柱和可变波长紫外检测器，在波长254nm下对试样中的丙硫菌唑、百菌清进行高效液相色谱分离和测定。
2.仪器
高效液相色谱仪：具有紫外可变波长检测器；色谱数据处理机或工作站；色谱柱：250mm×4.6mm（i.d.）不锈钢柱，内装C18填充物，粒径5µm（或具同等效果的色谱柱）；过滤器：滤膜孔径约0.45µm；微量进行器：50µL；定量进样管：5µL；超声波清洗器。
3.液相色谱操作条件
流动相：ψ（乙腈：水）=90：10，pH=3；流量：0.8mL/min；柱温：室温±2℃；检测波长：254nm；进样体积：5µL；保留时间：百菌清约4.5min，丙硫菌唑约4.7min；
上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点对给定操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。
4.测定步骤
4.1标样溶液的配制
准确称取丙硫菌唑、百菌清标样0.02g（准确至0.00001g），置于100mL棕色容量瓶中，用乙腈+冰乙酸（500mL乙腈+80mL冰乙酸）溶液溶解并定容，摇匀，过滤备用。
4.2试样溶液的配制
准确称取含丙硫菌唑、百菌清试样0.02g（准确至0.00001g）的试样，置于100mL棕色容量瓶中，用乙腈+冰乙酸（500mL乙腈+80mL冰乙酸）溶液溶解并定容，摇匀，过滤备用。
4.3测定
在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液。直至相邻两针标样峰面积相对变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
4.4计算
将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中丙硫菌唑、百菌清峰面积分别进行平均。丙硫菌唑、百菌清的质量分数X1（%），按式（1）计算：
A2•m1•P
X1= ———————…………………………………（1）
A1•m2
式中：
A1—标样溶液中丙硫菌唑、百菌清峰面积的平均值；
A2—试样溶液中丙硫菌唑、百菌清峰面积的平均值；
m1—丙硫菌唑、百菌清标样质量，g；
m2—试样质量，g；
P—标样中丙硫菌唑、百菌清的质量分数，%。
5.5允许差
两次平行测定结果之相对偏差，应不大于1.5%。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明提出了基于百菌清和丙硫菌唑复配的农药制剂中来检测待测物溶液中丙硫菌唑的质量分数。本检测方法发明中的丙硫菌唑在254nm处有最大吸收峰，而样品配置过程中加入的冰醋酸可有效抑制百菌清与丙硫菌唑的反应，避免了其他组分对于丙硫菌唑的影响，抗干扰能力强，且结果灵敏可靠，操作简单，检测专一性、稳定性好，从而利用外标法可准确计算出检测出样品中丙硫菌唑的质量分数，可以用于农药复配制剂中丙硫菌唑组分质量分数的检测，本发明在检测分析领域具有良好的应用前景和潜在的应用价值。
附图说明
图1. 丙硫菌唑峰面积随冰乙酸浓度变化曲线图
注：图1横坐标为混合溶液中添加冰乙酸的数量（mL）；纵坐标为试样中丙硫菌唑组分的峰面积数值。
图2. 丙硫菌唑、百菌清、嘧菌酯标样高效液相色谱图
图3. 丙硫菌唑、百菌清、嘧菌酯试样高效液相色谱图
图4. 丙硫菌唑方法确认特异性标样峰纯度谱图
图5. 丙硫菌唑方法确认特异性样品峰纯度谱图
注：图2和图3中1-嘧菌酯标样峰、2-百菌清标样峰、3-丙硫菌唑标样峰。
具体实施方式
实施例一
1）精密称取丙硫菌唑+百菌清+试样0.1g（精确至0.0001g）10份, 置于100mL棕色容量瓶中，分别使用10种不同冰乙酸浓度的乙腈：冰乙酸溶液溶解并定容，摇匀，过滤备用。
混合溶液制法：（取1000mL烧杯10个，使用500mL量筒量取十份500mL乙腈分别倒入10个烧杯中，再用100mL量筒分别量取冰乙酸10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL分别倒入10个烧杯中，搅拌，混匀制成10份不同冰乙酸浓度的混合溶液）
2）液相色谱操作条件
流动相：ψ（乙腈：水）=90：10，pH=3；
流量：0.8mL/min；
柱温：室温±2℃；
检测波长：254nm；
进样体积：5µL；
在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液。直至相邻两针标样峰面积相对变化小于1.5%时，收集色谱图中丙硫菌唑组分峰的峰面积，然后以乙腈：冰乙酸溶液中的冰乙酸添加量为横坐标，试样中丙硫菌唑组分峰的峰面积为纵坐标，绘制曲线图，如图1所示。
3）试样溶解液中冰乙酸的浓度主要作用是抑制丙硫菌唑和百菌清在液态分散体系中的相互反应，从图1的曲线图中可知，当冰乙酸添加量至乙腈：冰乙酸（500mL乙腈+80mL冰乙酸）时，试样中丙硫菌唑组分峰面积不再增加，说明该配比浓度下的混合溶液中冰乙酸已经达到完全抑制丙硫菌唑与百菌清相互反应，因此优选乙腈：冰乙酸（500mL乙腈+80mL冰乙酸）的配比浓度是抑制丙硫菌唑与百菌清相互反应的最佳浓度。
实施例二
1）准确称取丙硫菌唑、百菌清、嘧菌酯标样20mg（准确至0.00001g），置于100mL棕色容量瓶中，用乙腈+冰乙酸（500mL乙腈+80mL冰乙酸）溶解并定容，摇匀，过滤备用。
2）准确称取含丙硫菌唑+百菌清+嘧菌酯农药复配制剂（5%+45%+5.7%）试样0.4g（准确至0.0001g）的试样，置于100mL棕色容量瓶中，用乙腈+冰乙酸（500mL乙腈+80mL冰乙酸）溶解并定容，摇匀，过滤备用。
3）色谱条件：
流动相：ψ（乙腈：水）=90：10，pH=3；
流量：0.8mL/min；
柱温：室温±2℃；
检测波长：254nm；
进样体积：5µL；
4）在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液。直至相邻两针标样峰面积相对变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
5）计算
将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中丙硫菌唑、百菌清峰面积分别进行平均。丙硫菌唑、百菌清的质量分数X 1 （%），按式（1）计算：
A 2 ·m 1 ·P
X 1 = ——————— ………………………………（1）
A 1 ·m 2
A 1 —标样溶液中丙硫菌唑、百菌清峰面积的平均值；
A 2 —试样溶液中丙硫菌唑、百菌清峰面积的平均值；
m 1 —丙硫菌唑、百菌清标样质量，g；
m 2 —试样质量，g；
P—标样中丙硫菌唑、百菌清的质量分数，%。
经计算：该样品中丙硫菌唑含量为：5.3%；百菌清含量为5.7%；与初始投料量一致，证明该检测方法检测结果准确有效。色谱图见附图2-3
实施例三
丙硫菌唑检测方法的特异性
1）采用实施例二中的检测条件，使用安捷伦1260-Ⅱ的DAD检测器将单检测波长调整为波长扫描范围（190-400）nm进行3D谱图扫描，通过工作站计算的到丙硫菌唑标样峰匹配值为1000，样品峰匹配值为1000，目标峰匹配阈值为980.00，说明该目标峰未包含其他杂质共洗脱物。有效成分含量测定方法特异性谱图中标样及样品峰纯度谱图见附图4-5。
2）注：根据DAD检测器数据采集及处理原理，峰匹配根据每个峰的信噪比自动计算其相应的阈值，会在每个峰上升阶段和下降阶段以及顶点取光谱，进行拟合，一般看到最终的计算阈值是相同5个光谱在计算出的阈值限值内的一组平均阈值。该阈值基于每个光谱的吸光度高度和数据文件开始处的一组噪声光谱。峰匹配：是在计算出的阈值限值内的记录光谱中的那些光谱的平均纯度值，峰匹配值是通过计算整个光谱和平均光谱在选定的4峰光谱得出。因此峰匹配值大于匹配阈值，则认为该目标峰为纯的色谱峰。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
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