具有hdac抑制活性的苯胺类化合物、制备方法、组合物及应用
阅读说明：本技术 具有hdac抑制活性的苯胺类化合物、制备方法、组合物及应用 (Aniline compounds with HDAC (HDAC) inhibitory activity, preparation method, composition and application ) 是由 刘兰祥 王永广 苏小庭 戴信敏 于 2021-07-07 设计创作，主要内容包括：本发明涉及具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物、制备方法、组合物及应用,属于化学药物技术领域。所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物具有如式Ι所示的结构：其中,R-1代表H、取代或不取代的苯基、取代或不取代的芳杂环基；R-2代表H、F、Cl、CN、CONH-2、OCH-3、OCH-2CH-3；X代表CH、N。本发明所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物作为HDAC抑制剂用于治疗肿瘤,副作用较小。本发明所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物的合成方法,合成反应过程中,副产物少,收率高,具有极大的应用价值。(The invention relates to an aniline compound with HDAC (HDAC) inhibitory activity, a preparation method, a composition and application thereof, belonging to the technical field of chemical drugs. The aniline compound with HDAC inhibition activity has a structure shown as a formula I： Wherein R is 1 Represents H, substituted or unsubstituted phenyl, substituted or unsubstituted aromatic heterocyclic group; r 2 Represents H, F, Cl, CN, CONH 2 、OCH 3 、OCH 2 CH 3 (ii) a X represents CH and N. The aniline compound with HDAC inhibitory activity is used as an HDAC inhibitor for treating tumors, and has small side effect. The synthesis method of the aniline compound with HDAC inhibitory activity has the advantages of few byproducts and high yield in the synthesis reaction process, and has great application value.)
技术领域
本发明涉及具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物、制备方法、组合物及应用，属于化学药物
技术领域
。背景技术
组蛋白去乙酰化酶(HDAC)是重要研究的表观遗传学靶点之一，分为Zn2+依耐性和NAD+依耐性，人体内组蛋白去乙酰化酶和组蛋白乙酰基转移酶(HAT)协作以维持正常的组蛋白乙酰化水平。其中，组蛋白去乙酰化酶通过参与移除组蛋白N-乙酰化赖氨酸的乙酰基，使染色质变得紧密，抑制转录发生。在肿瘤细胞中，组蛋白去乙酰化酶过度表达，使得组蛋白过度去乙酰化，抑制细胞周期抑制因子p21的表达，降低了肿瘤抑制因子p53的稳定性，促进了血管生成的HIF-1(缺氧诱导因子)和VEGF(血管内皮生长因子)表达水平的升高。
组蛋白去乙酰化酶抑制剂已成为肿瘤靶向治疗的研究新热点，因此，发现一种结构新颖、活性高的组蛋白去乙酰化酶抑制剂用于癌症靶向治疗具有重要意义。
发明内容
本发明的研究者发现结构式I所示的化合物具有提高免疫系统能力而增强抗肿瘤活性的作用。因此，本发明的目的是提供一种具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物、制备方法、组合物及应用，式I所代表的化合物及其各种衍生物具有抗肿瘤药理活性，具体技术方案如下：
所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物具有如式Ι所示的结构：
其中，R1代表H、取代或不取代的苯基、取代或不取代的芳杂环基；
R2代表H、F、Cl、CN、CONH2、OCH3、OCH2CH3；
X代表CH、N。
所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物选自下述式1-24中的任一化合物，结构式如下：
一种组合物，包括：如权利要求1所述的具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂。
所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物或其药学上可接受的盐作为HDAC抑制剂在制备治疗或预防肿瘤的药物中的应用，所述HDAC为组蛋白去乙酰化酶。
作为上述技术方案的改进，所述肿瘤选自皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、脑癌、直肠癌、食管癌、舌癌、肾癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑色素瘤、星型细胞癌、脑膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒细胞白血病、成人T细胞白血病淋巴瘤、肝细胞癌、支气管癌、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤、精原细胞瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、纤维肉瘤中的任一种。
所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、中间体VII的合成：
化合物IX与亚甲基化试剂在碱的作用下于反应溶剂中进行亚甲基化反应，得到中间体VII；其中，反应温度为-5～30℃；亚甲基化试剂选自甲基三苯基溴化膦、甲基三苯基氯化膦中的至少一种；碱选自氢化钠、叔丁醇钾(英文简称t-BuOk)中的至少一种；反应溶剂选自二氧六环、四氢呋喃中的至少一种。
步骤二、中间体VI的合成：
化合物VIII与亚甲基化试剂在碱的作用下于反应溶剂中进行反应，得到中间体VI；其中，反应温度为-5～30℃；亚甲基化试剂选自乙氧甲酰基甲基三苯基溴化膦、乙氧甲酰基甲基三苯基氯化膦中的至少一种；碱选自正丁基锂、氢化钠、叔丁醇钾中的至少一种；反应溶剂选自二氧六环、四氢呋喃中的至少一种。
步骤三、中间体V的合成：
中间体VII与中间体VI在催化剂、配体、碱的作用下于反应溶剂中发生heck反应，得到中间体V；其中，反应温度为80～100℃；催化剂为双(三苯基膦)二氯化钯(II)、四(三苯基膦)钯、双(二亚芐基丙酮)钯、醋酸钯中的至少一种；配体为三(邻甲基苯基)磷、三苯基膦、三丁基膦、2-双环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯、2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯中的至少一种，碱为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾、磷酸钾、碳酸氢钠中的至少一种；反应溶剂为N,N-二甲基甲酰胺(英文简称DMF)、乙腈、甲苯、N-甲基吡咯烷酮中的至少一种。
步骤四、中间体IV的合成：
中间体V在碱的作用下于反应溶剂中进行反应，得到中间体IV；其中，反应温度为20～60℃；碱为氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、碳酸钾中的至少一种；反应溶剂为甲醇/水、乙醇/水中的至少一种。
步骤五、中间体III的合成：
中间体IV与化合物X在缩合剂、碱的作用下于反应溶剂中进行反应，得到中间体III；其中，反应温度为20～120℃；碱选自三乙胺、N,N-二异丙基乙胺(英文简称DIPEA)中的至少一种；缩合剂选自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(英文简称EDCI)与1-羟基苯并三唑(英文简称HOBt)的混合溶液、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯中的至少一种；反应溶剂选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基苯胺中的至少一种。
步骤六、中间体II的合成：
中间体III在酸的作用下于反应溶剂中进行反应，得到中间体II；其中，反应温度为20～60℃；酸选自三氟乙酸(英文简称TFA)、盐酸、醋酸中的至少一种；反应溶剂选自二氯甲烷、二氧六环中的至少一种。
步骤七、化合物I的合成：
中间体II与氨水在缩合剂的作用下于反应溶剂中进行反应，得到化合物I；其中，反应温度为20～50℃；缩合剂选自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐与1-羟基苯并三唑的混合溶液、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(英文简称EDCI)与N-羟基琥珀酰亚胺(英文简称NHS)的混合溶液、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐与N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐的混合溶液、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯中的至少一种；反应溶剂选自聚丁二酸丁二醇酯、水、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基苯胺中的至少一种。
本发明的有益效果：
1)、本发明所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物、药学上可接受的盐以及含有这些化合物作为活性成分的药物组合物作为HDAC抑制剂用于治疗肿瘤，副作用较小；可以通过向需要此种治疗或预防的患者给予治疗有效量的一种或者多种本发明所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物达到治疗的目的。
2)、本发明所述具有HDAC抑制活性的苯胺类化合物的合成方法，在合成反应过程中，副产物少，收率高，具有极大的应用价值。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
如式1所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-氟苯基)氨基)-3-氧丙基-1-烯-1-基)吡啶-2-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅶ-1的合成
将甲基三苯基溴化膦(35.7g，0.1mol)、叔丁醇钾(12.34g，0.11mol)溶于四氢呋喃(350mL)中，降温至0℃，滴加3-甲酰基苯甲酸叔丁酯(化合物Ⅸ-1，10.31g，0.05mol)的四氢呋喃溶液(150mL)，滴加完毕后升温至25℃，保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(100mL)淬灭反应，分液，取有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/2)得到类白色固体(中间体Ⅶ-1)6.86g，收率67.2％。其中，中间体Ⅶ-1的结构式如式Ⅶ-1所示，其他化合物以此类推。
第二步：中间体Ⅵ-1的合成
将乙氧甲酰基甲基三苯基溴化膦(42.9g，0.1mol)、NaH(4.4g，0.11mol)溶于四氢呋喃(400mL)中，降温至0～5℃，滴加2-溴-5-醛基吡啶(化合物Ⅷ-1，18.6g，0.1mol)的四氢呋喃溶液(200mL)，滴加完毕后升至25℃，保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(100mL)淬灭反应，分液，取有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/1)得到油状物(中间体Ⅵ-1)20.0g，收率78.1％。
第三步：中间体V-1的合成
将中间体Ⅶ-1(6.8g，0.03mol)和中间体Ⅵ-1(8.54g，0.03mol)溶于乙腈(300mL)中，加入四三苯基膦钯(3.47g，3.0mmol)、三(邻甲基苯基)磷(1.83g，3.0mmol)以及三乙胺(10mL)，N2保护，加热至80～85℃搅拌反应12小时，反应完毕后用乙酸乙酯(300mL×2)提取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物经柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)分离得到类白色固体(中间体V-1)7.59g，收率为66.7％。
第四步：中间体IV-1的合成
将中间体V-1(7.50g，0.02mol)、氢氧化锂一水合物(8.4g，0.2mol)溶于甲醇/水(80/20mL)中，室温搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后，加入稀盐酸调pH至5～6，减压浓缩除去甲醇，残余物加水(100mL)析出类白色固体，过滤、干燥，得到类白色固体(中间体IV-1)7.0g，收率为99.9％。
第五步：中间体Ⅲ-1的合成
将中间体IV-1(7.0g，0.02mol)、(2-氨基-4-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.52g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-1)6.72g，收率为60.0％。
第六步：中间体II-1的合成
将中间体Ⅲ-1(5.60g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-1)3.20g，收率为79.32％。
第七步：化合物1的合成
将中间体II-1(3.2g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化，得到白色固体(化合物1)1.20g，收率为37.8％，ESI(+)m/z＝403.1。
实施例2
如式2所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-氟苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅸ-2(3-苯甲酰苯甲酸叔丁酯)的合成：
将3-苯甲酰苯甲酸(22.6g，0.1mol)溶于SOCl2(100mL)，加热回流反应2小时，减压浓缩，残余物滴加到叔丁醇(20mL)的吡啶(50mL)溶液中，室温反应12小时，减压浓缩，残余物柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/2)得到红棕色油状物3-苯甲酰苯甲酸叔丁酯(中间体Ⅸ-2)12.3g，收率为43.6％。
第二步：中间体Ⅶ-2的合成
将甲基三苯基溴化膦(35.7g，0.1mol)、叔丁醇钾(12.34g，0.11mol)溶于四氢呋喃(350mL)中，降温至0～5℃，滴加3-苯甲酰苯甲酸叔丁酯(化合物Ⅸ-2，14.12g，0.05mol)的四氢呋喃溶液(150mL)，滴加完毕后升温至25℃，保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(100mL)淬灭反应，分液，取有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/2)得到类白色固体(中间体Ⅶ-2)11.92g，收率85.0％。
第三步：中间体Ⅵ-2的合成
将乙氧甲酰基甲基三苯基溴化膦(42.9g，0.1mol)、NaH(4.4g，0.11mol)溶于四氢呋喃(400mL)中，降温至0～5℃，滴加5-溴吡嗪-2-甲醛(化合物Ⅷ-2，18.7g，0.1mol)的四氢呋喃溶液(200mL)，滴加完毕后升至25℃，保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(100mL)淬灭反应，分液，取有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/1)得到油状物(中间体Ⅵ-2)20.0g，收率78.1％。
第四步：中间体V-2的合成
将中间体Ⅶ-2(8.41g，0.03mol)和中间体Ⅵ-2(7.71g，0.03mol)溶于乙腈(300mL)中，加入四三苯基膦钯(3.47g，3.0mmol)、三(邻甲基苯基)磷(1.83g，3.0mmol)以及三乙胺(10mL)，N2保护，加热至80～85℃搅拌反应12小时，反应完毕后用乙酸乙酯(300mL×2)提取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物经柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)分离得到类白色固体(中间体V-2)9.18g，收率为67.0％。
第五步：中间体IV-2的合成
将中间体V-2(9.13g，0.02mol)、氢氧化锂一水合物(8.4g，0.2mol)溶于甲醇/水(80/20mL)中，室温搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后，加入稀盐酸调pH至5～6，减压浓缩除去甲醇，残余物加水(100mL)析出类白色固体，过滤、干燥，得到类白色固体(中间体IV-2)8.55g，收率为99.8％。
第六步：中间体Ⅲ-2的合成
将中间体IV-2(8.57g，0.02mol)、(2-氨基-4-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.52g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-2)9.19g，收率为72.2％。
第七步：中间体II-2的合成
将中间体Ⅲ-2(4.80g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-2)3.75g，收率为78.0％。
第八步：化合物2的合成
将中间体II-2(3.79g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物2)0.80g，收率为21.2％，ESI(+)m/z＝480.2。
实施例3
如式3所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡啶-2-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应步骤如下：
第一步：中间体Ⅲ-3的合成
将中间体IV-1(7.0g，0.02mol)、(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.17g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-3)8.50g，收率为78.5％。
第二步：中间体Ⅱ-3的合成
将中间体Ⅲ-3(5.41g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅱ-3)3.30g，收率为85.5％。
第三步：化合物3的合成
将中间体Ⅱ-3(3.04g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物3)0.55g，收率为18.1％，ESI(+)m/z＝385.2。
本实施例的合成反应式如下：
实施例4
如式4所示的化合物：3-((Z)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-氟苯基)氨基)-3-氧代丙烷-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-1-(吡啶-3-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体X-4的合成
向含有3-溴吡啶(1.58g，0.01mol)的四氢呋喃50mL溶液，滴加异丙基氯化镁的四氢呋喃溶液(1.5eq，0.015mol)，过程控温0～5℃，滴毕，升温至15℃搅拌1小时，加入3-甲酰基苯甲酸叔丁酯(2.06g，0.01mol)15℃搅拌1小时，反应结束后，加入饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭反应，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，减压浓缩，柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)洗脱，浓缩得白色固体(中间体X-4)1.80g，收率为60.3％。
第二步：中间体Ⅸ-4的合成
将中间体X-4(1.5g，5.2mmol)加入到二氯甲烷(20mL)，室温条件下加入Dess-Martin试剂(1.2eq，6.24mmol)，室温搅拌过夜，反应结束后，加入饱和氯化钠溶液(10mL)淬灭反应，二氯甲烷(100mL×3)萃取，减压浓缩，柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝1/1)洗脱，浓缩得白色固体(中间体Ⅸ-4)1.25g，收率为81.0％。
第三步：中间体Ⅶ-4的合成
将甲基三苯基溴化膦(35.7g，0.1mol)、叔丁醇钾(12.34g，0.11mol)溶于四氢呋喃(350mL)中，降温至0～5℃，滴加中间体Ⅸ-4(14.17g，0.05mol)的四氢呋喃溶液(150mL)，滴加完毕后升至25℃，保温反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(100mL)淬灭反应，分液，取有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/2)得到类白色固体(中间体Ⅶ-4)11.90g，收率84.6％。
第四步：中间体Ⅵ-2的合成
合成方法参照实施例2的第三步。
第五步：中间体V-4的合成
将中间体Ⅶ-4(8.44g，0.03mol)和中间体Ⅵ-2(7.71g，0.03mol)溶于乙腈(300mL)中，加入四三苯基膦钯(3.47g，3.0mmol)、三(邻甲基苯基)磷(1.83g，3.0mmol)以及三乙胺(10mL)，N2保护，加热至80～85℃搅拌反应12小时，反应完毕后用乙酸乙酯(300mL×2)提取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物经柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)分离得到类白色固体(中间体V-4)10.09g，收率为73.50％。
第六步：中间体IV-4的合成
将中间体V-4(9.15g，0.02mol)、氢氧化锂一水合物(8.4g，0.2mol)溶于甲醇/水(80/20mL)中，室温搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后，加入稀盐酸调pH至5～6，减压浓缩除去甲醇，残余物加水(100mL)析出类白色固体，过滤、干燥，得到类白色固体(中间体IV-4)8.76g，收率为98.0％。
第七步：中间体Ⅲ-4的合成
将中间体IV-4(8.59g，0.02mol)、(2-氨基-4-氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.52g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-4)10.02g，收率为78.6％。
第八步：中间体II-4的合成
将中间体Ⅲ-4(6.37g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-4)3.88g，收率为80.5％。
第九步：化合物4的合成
将中间体II-4(3.80g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物4)1.10g，收率为28.98％，ESI(+)m/z＝481.2。
实施例5
如式5所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡啶-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体V-5的合成
将中间体Ⅶ-2(8.41g，0.03mol)和中间体Ⅵ-1(7.68g，0.03mol)溶于乙腈(300mL)中，加入四三苯基膦钯(3.47g，3.0mmol)、三(邻甲基苯基)磷(1.83g，3.0mmol)以及三乙胺(10mL)，N2保护，加热80～85℃搅拌反应12小时，反应完毕后用乙酸乙酯(300mL×2)提取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物经柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)分离得到类白色固体(中间体V-5)10.14g，收率为74.20％。
第二步：中间体IV-5的合成
将中间体V-5(9.11g，0.02mol)、氢氧化锂一水合物(8.4g，0.2mol)溶于甲醇/水(80/20mL)中，室温搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后，加入稀盐酸调pH至5～6，减压浓缩除去甲醇，残余物加水(100mL)析出类白色固体，过滤、干燥，得到类白色固体(中间体IV-5)8.38g，收率为98.0％。
第四步：中间体Ⅲ-5的合成
将中间体IV-5(8.55g，0.02mol)、(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.16g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-5)9.49g，收率为76.8％。
第五步：中间体II-5的合成
将中间体Ⅲ-5(6.18g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-5)3.94g，收率为85.4％。
第六步：化合物5的合成
将中间体II-5(3.65g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应完成，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物5)320mg，收率为9.62％，ESI(+)m/z＝461.2。
实施例6
如式6所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-6的合成
将中间体IV-2(8.57g，0.02mol)、(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.16g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-6)9.38g，收率为75.8％。
第二步：中间体II-6的合成
将中间体Ⅲ-6(4.63g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-6)4.09g，收率为85.4％。
第三步：化合物6的合成
将中间体II-6(3.65g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物6)0.124g，收率为3.40％，ESI(+)m/z＝462.2。
实施例7
如式7所示的化合物：3-((Z)-2-(5-((E)-3-((2-氨基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-1-(吡啶-3-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应步骤如下：
第一步：中间体Ⅲ-7的合成
将中间体IV-4(8.59g，0.02mol)、(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.16g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-7)10.31g，收率为83.2％。
第二步：中间体II-7的合成
将中间体Ⅲ-7(6.20g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-7)5.13g，收率为90.3％。
第三步：化合物7的合成
将中间体II-7(3.66g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物7)315mg，收率为8.62％，ESI(+)m/z＝463.2。
本实施例的合成反应式如下：
实施例8
如式8所示的化合物：3-((Z)-2-(5-((E)-3-((2-氨基苯基)氨基)-3-氧代丙基-1-烯-1-基)吡啶-2-基)-1-(吡啶-3-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体V-8的合成
将化合物Ⅶ-4(8.44g，0.03mol)和Ⅵ-1(7.68g，0.03mol)溶于乙腈(300mL)中，加入四三苯基膦钯(3.47g，3.0mmol)、三(邻甲基苯基)磷(1.83g，3.0mmol)以及三乙胺(10mL)，N2保护，加热至80～85℃搅拌反应12小时，反应完毕后，用乙酸乙酯(300mL×2)提取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物经柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)分离得到类白色固体(中间体V-8)10.30g，收率为75.20％。
第二步：中间体IV-8的合成
将中间体V-8(9.13g，0.02mol)、氢氧化锂一水合物(8.4g，0.2mol)溶于甲醇/水(80/20mL)中，室温搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后，然后加入稀盐酸调pH至5～6，减压浓缩除去甲醇，残余物加水(100mL)析出类白色固体，过滤、干燥，得到类白色固体(中间体IV-8)8.40g，收率为98.0％。
第三步：中间体Ⅲ-8的合成
将中间体IV-8(8.57g，0.02mol)、(2-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.16g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-8)10.59g，收率为85.6％。
第四步：中间体II-8的合成
将中间体Ⅲ-8(6.19g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-8)3.70g，收率为80.0％。
第五步：化合物8的合成
将中间体II-8(3.65g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物8)562mg，收率为15.41％，ESI(+)m/z＝462.2。
实施例9
如式9所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-氯苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应步骤如下：
第一步：中间体V-9的合成
将化合物Ⅶ-1(8.41g，0.03mol)和Ⅵ-2(7.71g，0.03mol)溶于乙腈(300mL)中，加入四三苯基膦钯(3.47g，3.0mmol)、三(邻甲基苯基)磷(1.83g，3.0mmol)以及三乙胺(10mL)，N2保护，加热至80～85℃搅拌反应12小时，反应完毕后用乙酸乙酯(300mL×2)提取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物经柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)分离得到类白色固体(中间体V-9)8.94g，收率为78.30％。
第二步：中间体IV-9的合成
将中间体V-9(7.61g，0.02mol)、氢氧化锂一水合物(8.4g，0.2mol)溶于甲醇/水(80/20mL)中，室温搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后，加入稀盐酸调pH至5～6，减压浓缩除去甲醇，残余物加水(100mL)析出类白色固体，过滤、干燥，得到类白色固体(中间体IV-9)8.23g，收率为97.8％。
第三步：中间体Ⅲ-9的合成
将中间体IV-9(8.42g，0.02mol)、(2-氨基4-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.85g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-9)9.73g，收率为84.3％。
第四步：中间体II-9的合成
将中间体Ⅲ-9(5.77g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-9)3.28g，收率为78.0％。
第五步：化合物9的合成
将中间体II-9(3.32g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物9)1.14g，收率为34.37％，ESI(+)m/z＝420.1。
本实施例的合成反应式如下：
实施例10
如式10所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-氯苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应步骤如下：
第一步：中间体Ⅲ-10的合成
将中间体IV-2(8.57g，0.02mol)、(2-氨基4-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.85g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-10)11.18g，收率为85.6％。
第二步：中间体II-10的合成
将中间体Ⅲ-10(6.53g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-10)3.80g，收率为76.5％。
第三步：化合物10的合成
将中间体II-10(3.93g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物10)1.24g，收率为31.65％，ESI(+)m/z＝496.2。
本实施例的合成反应式如下：
实施例11
如式11所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-氰基苯基)氨基)-3-氧代丙基-1-烯-1-基)吡啶-2-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-11的合成
将中间体IV-1(7.03g，0.02mol)、(2-氨基4-氰基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.67g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-11)9.62g，收率为84.9％。
第二步：中间体II-11的合成
将中间体Ⅲ-11(5.67g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-11)3.18g，收率为78.8％。
第三步：化合物11的合成
将中间体II-11(3.85g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物11)0.85g，收率为26.33％，ESI(+)m/z＝410.2。
实施例12
如式12所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-氰基苯基)氨基)-3-氧代丙基-1-烯-1-基)吡啶-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-12的合成
将中间体IV-5(8.55g，0.02mol)、(2-氨基4-氰基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.67g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-12)10.75g，收率为83.6％。
第二步：中间体II-12的合成
将中间体Ⅲ-12(6.42g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-12)4.16g，收率为85.6％。
第三步：化合物12的合成
将中间体II-12(3.84g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物12)0.26g，收率为6.78％，ESI(+)m/z＝486.2。
实施例13
如式13所示的化合物：4-氨基-3-((E)-3-(6-((E)-3-氨基甲酰基苯乙烯基)吡啶-3-基)丙烯酰胺)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-13的合成
将中间体IV-1(7.03g，0.02mol)、(2-氨基-4-氨基甲酰基苯基)氨基甲酸叔丁酯(5.03g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-13)10.44g，收率为89.3％。
第二步：中间体II-13的合成
将中间体Ⅲ-13(5.85g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-13)3.59g，收率为83.8％。
第三步：化合物13的合成
将中间体II-13(3.38g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应完成，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物13)1.06g，收率为31.4％，ESI(+)m/z＝428.2。
实施例14
如式14所示的化合物：4-氨基-3-((E)-3-(6-((E)-2-(3-氨基甲酰基苯基)-2-苯基乙烯基)吡啶-3-基)丙烯酰胺)苯甲酰胺；其合成反应步骤如下：
第一步：中间体Ⅲ-14的合成
将中间体IV-5(8.55g，0.02mol)、(2-氨基-4-氨基甲酰基苯基)氨基甲酸叔丁酯(5.03g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-14)9.73g，收率为73.6％。
第二步：中间体II-14的合成
将中间体Ⅲ-14(6.60g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-14)4.27g，收率为84.6％。
第三步：化合物14的合成
将中间体II-14(3.99g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物14)0.89g，收率为22.4％，ESI(+)m/z＝504.2。
本实施例的合成反应式如下：
实施例15
如式15所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡啶-2-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-15的合成
将中间体IV-1(7.03g，0.02mol)、(2-氨基-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.77g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-15)9.98g，收率为87.3％。
第二步：中间体II-15的合成
将中间体Ⅲ-15(5.71g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-15)3.42g，收率为82.3％。
第三步：化合物15的合成
将中间体II-15(3.28g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物15)1.23g，收率为37.53％，ESI(+)m/z＝415.2。
实施例16
如式16所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡啶-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-16的合成
将中间体IV-5(8.55g，0.02mol)、(2-氨基-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.77g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-16)9.66g，收率为74.6％。
第二步：中间体II-16的合成
将中间体Ⅲ-16(6.48g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-16)4.20g，收率为85.4％。
第三步：化合物16的合成
将中间体II-16(3.88g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物16)0.95g，收率为24.51％，ESI(+)m/z＝491.2。
实施例17
如式17所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-乙氧基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡啶-2-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-17的合成
将中间体IV-1(7.03g，0.02mol)、(2-氨基-4-乙氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(5.05g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-17)10.19g，收率为87.0％。
第二步：中间体II-17的合成
将中间体Ⅲ-17(5.86g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-17)3.58g，收率为83.3％。
第三步：化合物17的合成
将中间体II-17(3.39g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物17)1.21g，收率为35.71％，ESI(+)m/z＝429.2。
实施例18
如式18所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-乙氧基苯基)氨基)-3-氧代丙基-1-烯-1-基)吡啶-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应步骤如下：
第一步：中间体Ⅲ-18的合成
将中间体IV-5(8.55g，0.02mol)、(2-氨基-4-乙氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(5.05g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-18)10.40g，收率为78.6％。
第二步：中间体II-18的合成
将中间体Ⅲ-18(6.61g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-18)4.16g，收率为82.3％。
第三步：化合物18的合成
将中间体II-18(3.99g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物18)1.53g，收率为38.37％，ESI(+)m/z＝505.2。本实施例的合成反应式如下：
实施例19
如式19所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-氰基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-19的合成
将中间体IV-9(7.05g，0.02mol)、(2-氨基4-氰基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.67g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-19)9.66g，收率为85.1％。
第二步：中间体II-19的合成
将中间体Ⅲ-19(5.68g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-19)3.20g，收率为77.8％。
第三步：化合物19的合成
将中间体II-19(3.25g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物19)1.01g，收率为31.10％，ESI(+)m/z＝411.2。
实施例20
如式20所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-氰基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-20的合成
将中间体IV-2(8.57g，0.02mol)、(2-氨基4-氰基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.67g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-20)10.44g，收率为81.1％。
第二步：中间体II-20的合成
将中间体Ⅲ-20(6.44g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-20)3.69g，收率为75.6％。
第三步：化合物20的合成：
将中间体II-20(3.85g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物20)0.87g，收率为22.62％，ESI(+)m/z＝487.2。
实施例21
如式21所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-21的合成
将中间体IV-9(7.05g，0.02mol)、(2-氨基4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.77g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-21)9.82g，收率为85.7％。
第二步：中间体II-21的合成
将中间体Ⅲ-21(5.73g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-21)3.19g，收率为76.5％。
第三步：化合物21的合成
将中间体II-21(3.29g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物21)0.98g，收率为29.80％，ESI(+)m/z＝416.2。
实施例22
如式22所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应步骤如下：
第一步：中间体Ⅲ-22的合成
将中间体IV-2(8.57g，0.02mol)、(2-氨基4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.77g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-22)11.17g，收率为86.1％。
第二步：中间体II-22的合成
将中间体Ⅲ-22(6.49g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-22)3.62g，收率为73.4％。
第三步：化合物22的合成
将中间体II-22(3.89g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物22)1.21g，收率为31.13％，ESI(+)m/z＝492.2。本实施例的合成反应式如下：
实施例23
如式23所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-乙氧基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-23的合成
将中间体IV-9(7.05g，0.02mol)、(2-氨基4-乙氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(5.05g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-23)9.82g，收率为83.7％。
第二步：中间体II-23的合成
将中间体Ⅲ-23(5.87g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-23)3.45g，收率为80.2％。
第三步：化合物23的合成
将中间体II-23(3.40g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物23)0.89g，收率为26.20％，ESI(+)m/z＝430.2。
实施例24
如式24所示的化合物：3-((E)-2-(5-((E)-3-((2-氨基-5-乙氧基苯基)氨基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吡嗪-2-基)-1-苯基乙烯基)苯甲酰胺；其合成反应式如下：
第一步：中间体Ⅲ-24的合成
将中间体IV-2(8.57g，0.02mol)、(2-氨基4-乙氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(5.05g，0.02mol)、DIPEA(5.17g，0.04mol)溶于DMF(30mL)中，室温下加入EDCI(4.22g，0.022mol)和HOBt(2.97g，0.022mol)，搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(150mL×2)提取，合并有机层，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离得到类白色固体(中间体Ⅲ-24)11.57g，收率为87.3％。
第二步：中间体II-24的合成
将中间体Ⅲ-24(6.62g，0.01mol)溶于三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)中，室温下搅拌反应2小时，TLC监测反应，反应完毕后减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)分离得到类白色固体(中间体II-24)3.59g，收率为70.8％。
第三步：化合物24的合成
将中间体II-24(4.00g，7.9mmol)溶于DMF(10mL)，分别加入EDCI(1.67g，8.7mmol)和NHS(1.00g，8.7mmol)室温反应2小时，加入氨水(1.0mL)，继续反应，TLC监测反应，反应完成后，经柱层析分离纯化制备得到白色固体(化合物24)1.26g，收率为31.37％，ESI(+)m/z＝509.2。
实施例25
HDAC体外活性评价试验
将含有乙酰化赖氨酸侧链的底物在HDAC的作用下发生去乙酰化作用，在乙酰化检测试剂诱导下，测定其在405nm的吸光度值，以空白为对照组(不加HDAC及待测化合物)，通过测定对照组与待测化合物组的405nm吸光度，计算得化合物ICso，具体操作如下：
1、将Hela细胞提取物(含有HDAC1和HDAC2)与缓冲液(Buffer)按照1:2进行稀释；
2、用Buffer将待测化合物稀释成5X，即用Buffer将待测化合物5倍5倍的稀释；
3、用Buffer将含有乙酰化赖氨酸侧链的底物稀释成50倍；
4、用预冷的Buffer将去乙酰化检测试剂稀释20倍，然后用此溶液将TSA稀释100倍备用。于96孔板中，每孔分别加入15μ稀释后的酶和待测化合物，37℃孵育5min后加入25uL的底物(空白孔不加酶及化合物)，将96孔板置于37℃中孵育30min，然后每孔加入50uL稀释后的底物，继续孵育，30min后，用酶标仪测定其在405nm的吸光度值，通过测定空白组和待测化合物组(实施例1-24中对应的化合物1-24)的405nm的吸光度值，计算得到化合物的IC50，具体结果数据见下表。
A<50nM，50nM≤B≤500nM，C>500nM
实施例
IC<sub>50</sub>(HDAC)
实施例
IC<sub>50</sub>(HDAC)
化合物1
A
化合物13
B
化合物2
B
化合物14
B
化合物3
B
化合物15
C
化合物4
C
化合物16
A
化合物5
B
化合物17
B
化合物6
C
化合物18
A
化合物7
A
化合物19
B
化合物8
B
化合物20
A
化合物9
A
化合物21
B
化合物10
C
化合物22
A
化合物11
B
化合物23
B
化合物12
B
化合物24
C
从上表可以看出，化合物1、化合物7、化合物9、化合物16、化合物18、化合物20和化合物22对HDAC的抑制能力最强。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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