奶粉中脂肪酸检测方法
阅读说明：本技术 奶粉中脂肪酸检测方法 (Method for detecting fatty acid in milk powder ) 是由 蔡德玲 黄晶 蔡勤仁 彭碧宁 曾川 吕梦莎 林加燕 赵乃漫 于 2020-12-14 设计创作，主要内容包括：本发明提供了奶粉中脂肪酸检测方法,包括步骤如下：步骤1：准确称取奶粉,并加入甲苯及含5-15％酰基化试剂的醇溶液；步骤2：振荡混合,并在80±1℃下反应2h；步骤3：加入碳酸盐溶液,并离心,采集上清液；步骤4：取上清液进行色谱分析,确定上清液中脂肪酸酯含量,计算奶粉中脂肪酸检测方法。现有奶粉中脂肪酸检测过程繁琐,且要求严格,导致效率低下。本发明通过对脂肪酸进行酯化,并色谱分析,获得溶液中脂肪酸含量,从而可以快速有效的采集脂肪酸总量,进而检测奶粉中脂肪酸的含量。(The invention provides a method for detecting fatty acid in milk powder, which comprises the following steps: step 1: accurately weighing milk powder, and adding toluene and an alcoholic solution containing 5-15% of an acylation agent; step 2: shaking and mixing, and reacting for 2h at 80 +/-1 ℃; and step 3: adding carbonate solution, centrifuging and collecting supernatant; and 4, step 4: and (4) taking the supernatant for chromatographic analysis, determining the content of fatty acid ester in the supernatant, and calculating the fatty acid detection method in the milk powder. The fatty acid detection process in the existing milk powder is complicated and strict in requirements, so that the efficiency is low. According to the invention, the fatty acid content in the solution is obtained by esterifying the fatty acid and carrying out chromatographic analysis, so that the total fatty acid amount can be rapidly and effectively collected, and the content of the fatty acid in the milk powder can be further detected.)
技术领域
本发明涉及食品中脂肪酸检测方法，特别是涉及奶粉中脂肪酸检测方法。
背景技术
奶粉做为牛奶的替代品，是婴儿成长过程中的重要食物，因此奶粉中的营养成份是否均衡是衡量奶粉品质的重要指标，而脂肪做为人体的重要营养物质，在奶粉中主要以脂肪酸的形式存在，对于婴儿是必不可少的营养成份，为确定奶粉品质，需要长期对各个品牌、种类、生产批次的奶粉中脂肪酸进行跟踪检测，因此奶粉中脂肪酸检测过程需要进行多次，而现有奶粉中脂肪酸检测过程繁琐，且要求严格，导致效率低下。
发明内容
本发明提供了奶粉中脂肪酸检测方法，以实现快速检测奶粉中脂肪酸含量。
本发明提供了奶粉中脂肪酸检测方法，包括步骤如下：
步骤1：准确称取奶粉，并加入甲苯及含5-15％酰基化试剂的醇溶液；
步骤2：振荡混合，并在80±1℃下反应2h；
步骤3：加入碳酸盐溶液，并离心，采集上清液；
步骤4：取上清液进行色谱分析，确定上清液中脂肪酸酯含量，计算奶粉中脂肪酸检测方法。
进一步地，所述色谱分析的条件为：
进样口温度：250℃；检测器温度：270℃；柱温升温程序：开始温度130℃保持1min，以6.5℃/min上升到170℃，以2.75℃/min上升到215℃，保持10min；载气：高纯N2。
更进一步地，所述色谱分析的条件还包括进样方式：按照分流比25∶1分流进样；恒压模式：29.885psi；尾吹气：60mL/min；进样量：1.0μL。
更进一步地，所述色谱分析的条件还包括色谱柱：BPX70。
更进一步地，所述色谱柱尺寸为60m×0.25mm×0.25μm。
进一步地，所述步骤3具体为：冷却溶液至室温，并转移至离心管中，并使用碳酸盐溶液清洗溶液的反应设备2-4次，混匀、高速离心，采集上清液。
进一步地，所述奶粉质量与甲苯体积比为0.1g/mL，所述甲苯与酰基化试剂的醇溶液体积比为5：5-10。
进一步地，所述酰基化试剂的醇溶液为含10％烷基酰卤化物的甲醇溶液。
更进一步地，所述碳酸盐溶液与甲苯的体积比为5-10：5。
进一步地，所述步骤1、步骤2均在平行反应管中进行。
本发明相对于现有技术，通过对脂肪酸进行酯化，并色谱分析，获得溶液中脂肪酸含量，从而可以快速有效的采集脂肪酸总量，进而检测奶粉中脂肪酸的含量。
附图说明
图1为本发明实施例脂肪酸色谱图；
图2为本发明实施例1ARA回收率标准曲线图；
图3为本发明实施例1EPA回收率标准曲线图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。
本发明实施例1-4所采用平行反应器为平行合成反应仪MJN12-25ML。
实施例1
准确称取0.500g乳粉(精确至0.1mg)样品于平行反应器中，加入5.0ml甲苯。向试样中加入6.0mL 10％乙酰氯甲醇溶液，打开平行反应器的冷却水，不冲氮气等惰性气体，振荡混合后放于平行蒸发仪上80±1℃下反应2h，冷却后取出，将反应后的样液转移至50ml离心管中，分别用3.0mL饱和碳酸钠溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液，混匀，高速离心后，取上清液进行测定。
实施例2
准确称取0.500g乳粉(精确至0.1mg)样品于平行反应器中，加入5.0ml甲苯。向试样中加入6.0mL 10％乙酰氯甲醇溶液，打开平行反应器的冷却水，冲氮气，振荡混合后放于平行蒸发仪上80±1℃下反应2h，冷却后取出，将反应后的样液转移至50ml离心管中，分别用3.0mL饱和碳酸钠溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液，混匀，高速离心后，取上清液进行测定。
实施例3
准确称取0.500g乳粉(精确至0.1mg)样品于平行反应器中，加入5.0ml甲苯。向试样中加入6.0mL 15％乙酰氯甲醇溶液，打开平行反应器的冷却水，不冲氮，振荡混合后放于平行蒸发仪上80±1℃下反应2h，冷却后取出，将反应后的样液转移至50ml离心管中，分别用3.0mL饱和碳酸钠溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液，混匀，高速离心后，取上清液进行测定。
实施例4
准确称取0.500g乳粉(精确至0.1mg)样品于平行反应器中，加入5.0ml甲苯。向试样中加入6.0mL 5％乙酰氯甲醇溶液，打开平行反应器的冷却水，不冲氮，振荡混合后放于平行蒸发仪上80±1℃下反应2h，冷却后取出，将反应后的样液转移至50ml离心管中，分别用3.0mL饱和碳酸钠溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液，混匀，高速离心后，取上清液进行测定。
对照例1
准确称取0.5g乳粉(精确至0.1mg)样品于15mL干燥螺口玻璃管中,加入5.0mL甲苯。向试样中加入6.0mL 10％乙酰氯甲醇溶液，旋紧螺旋盖。振荡混合后于80±1℃水浴中放置2h，期间每隔20min取出振摇1次，水浴后取出冷却至室温取出冷却至室温，将反应后的样液转移至50ml离心管中，分别用3.0mL碳酸钠溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液，混匀，高速离心后，取上清液进行测定。
对照例2
准确称取0.5g乳粉(精确至0.1mg)样品于15mL干燥螺口玻璃管中,加入5.0mL甲苯。向试样中加入6.0mL 10％乙酰氯甲醇溶液，充氮气后，旋紧螺旋盖。振荡混合后于80±1℃水浴中放置2h，期间每隔20min取出振摇1次，水浴后取出冷却至室温取出冷却至室温，将反应后的样液转移至50ml离心管中，分别用3.0mL碳酸钠溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液，混匀，高速离心后，取上清液进行测定。
本发明实施例1-4及对照例1-2的色谱条件如下：
色谱柱：BPX70(60m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：250℃；检测器温度：270℃；柱温升温程序：开始温度130℃保持1min，以6.5℃/min上升到170℃，以2.75℃/min上升到215℃保持10min；载气：高纯N2(纯度≥99.999％)；进样方式：分流进样(分流比25∶1)；恒压模式：29.885psi；尾吹气：60mL/min；进样量：1.0μL。在此条件下37种脂肪酸混标色谱图如图1所示，仅在25分钟内即可将37种脂肪酸完全分离。
为测试本发明实施例1的回收效率，采用添加ARA标样的方式测试本发明实施例1的回收率，ARA回收率标准曲线如图2所示，回收率见下表。
第一种奶粉(喜宝3段)的ARA在加标量为60～120mg/L下其回收率99.00％～118.28％，变异系数0.016～0.081；第二种奶粉(配方羊奶)的ARA在加标量为80-～150mg/L下其回收率为94.25％～106.12％，变异系数0.026～0.063，稳定性好。
为测试本发明实施例1的回收效率，采用添加EPA标样的方式测试本发明实施例1的回收率，EPA回收率标准曲线如图3所示，回收率见下表。
如图3所示，EPA标准溶液浓度分别为15、30、50、100、250、500mg/L，EPA标准曲线为y＝0.4269x+0.9455，R＝0.9982，线性关系良好。第一种奶粉(喜宝3段)的EPA在加标量为15～60mg/L下其回收率91.11％～120.27％，变异系数0.042～0.102；第二种奶粉(配方羊奶)的EPA在加标量为15-～60mg/L下其回收率为101.45％～121.33％，变异系数0.031～0.069。
实施例1、实施例2所测得喜宝1段奶粉中脂肪酸含量对比如下表所示。
实施例1、实施例2两方法在同一实验环境下完成，所用试剂相同，每份样品3个平行。在喜宝1段奶粉脂肪酸检测中，两种方法所测得AA误差为7.08％，DHA误差为9.65％，亚麻酸误差为4.79％，α-亚油酸误差为2.03％；不充氮所测得整体的变异系数在0.0128～0.0572之间，充氮时所测得整体数据的变异系数介于0.0524～0.0749。
实施例1、实施例2所测得喜宝3段奶粉中脂肪酸含量对比如下表所示。
在喜宝3段奶粉脂肪酸检测中，实施例1、实施例2两种方法所测得AA误差为3.56％，DHA误差为4.47％，亚麻酸误差为4.20％，α-亚油酸误差为3.40％；不充氮所测得整体的变异系数在0.0293～0.0434之间，充氮时所测得整体数据的变异系数介于0.0318～0.0448；此外，本发明实施例1不充氮时所测得数据更稳定，差距较小；且两方法误差小于10％，符合检测对误差的要求。
而采用上述对比实验条件，按照对照例1、对照例2的实验条件分别对喜宝1段奶粉、喜宝3段奶粉进行脂肪酸测试，结果显示对照例1、对照例2对喜宝1段奶粉、喜宝3段奶粉中DHA误差均超过10％，最大可达12.31％(喜宝1段奶粉测试结果)，对喜宝1段奶粉、喜宝3段奶粉中ARA误差均超过9％，最大可达10.47％(喜宝1段奶粉测试结果)。
因此，本发明实施例与对照例相比，用平行反应器代替普通水浴，避免每隔20分振摇，解放了人力；且不充氮气等惰性气体亦可有良好的回收率和精密度，在不影响检测精度的同时，减少操作步骤，提高检测效率。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解，技术人员阅读本申请说明书后依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换，但这些修改或变更均未脱离本发明申请待批权利要求保护范围之内。
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