盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法
阅读说明：本技术 盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法 (Method for detecting related substances in dexmedetomidine hydrochloride raw material or preparation ) 是由 汤文星 贺珊珊 张现涛 何盛江 谭斌 吴沛桃 于 2020-12-24 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法,包括以下步骤：采用高效液相色谱法进行检测,流动相由流动相A和流动相B组成,所述流动相A为pH值为7.3～7.7的磷酸盐缓冲液,所述流动相B为乙腈,所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为8mmol/L～12mmol/L；采用梯度流动相洗脱。采用该流动相体系配合合适的梯度洗脱条件,可检测出盐酸右美托咪定原料或者制剂制备过程中带入的起始原料、中间体、副反应产物以及盐酸右美托咪定降解产物中的13个相关杂质,使杂质得到更好的分离,提高检测结果的准确性。(The invention discloses a method for detecting related substances in dexmedetomidine hydrochloride raw materials or preparations, which comprises the following steps: detecting by adopting a high performance liquid chromatography, wherein a mobile phase consists of a mobile phase A and a mobile phase B, the mobile phase A is a phosphate buffer solution with the pH value of 7.3-7.7, the mobile phase B is acetonitrile, and the concentration of phosphate in the phosphate buffer solution is 8-12 mmol/L; gradient mobile phase elution is used. By adopting the mobile phase system and matching with proper gradient elution conditions, 13 related impurities in dexmedetomidine hydrochloride raw materials or initial raw materials, intermediates, side reaction products and dexmedetomidine hydrochloride degradation products brought in the preparation process of the preparation can be detected, so that the impurities are better separated, and the accuracy of the detection result is improved.)
技术领域
本发明涉及药物分析技术的技术领域，特别是一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法。
背景技术
盐酸右美托咪定是一种新型高选择性α2-肾上腺素受体激动剂，其是美托咪定的右旋异构体，与美托咪定相比，本品对中枢α2-肾上腺素受体激动的选择性更强，且半衰期短，用量小。右美托咪定具有镇静、抗焦虑的作用，临床上适用于重症监护治疗期间开始插管和使用呼吸机病人的镇静，此外还有镇痛，抗交感抑制围术期的应激反应，可减少麻醉药物的用量，维持血流动力学的平稳。盐酸右美托咪定注射液是由Orion Pharma(芬兰)公司和Abott(美国)公司合作研制开发，于2000年3月在美国首次上市，2004年1月在日本上市，2009年中国上市。临床上主要用于重症监护治疗期间开始插管和使用呼吸机病人的镇静。国内外应用多年来的临床经验表明，盐酸右美托咪定注射液有强效的镇静作用，特别是对重症病人有心理和生理上独特的协同作用，临床效果良好。
有关物质是在药物合成生产过程中带入的起始原料、中间体、副反应产物和降解产物等，对有关物质进行检测可以对药物的质量和安全性进行控制。
目前，仅美国药典第43版(USP43)收载了盐酸右美托咪定原料标准，相关制剂还未有药典收载。其有关物质方法如下：采用Merck Lichrospher 100RP-18(4mm×12.5cm，5μm)色谱柱，以0.89g/L的二水合磷酸氢二钠(用配制量90％的水溶解二水合磷酸氢二钠，用16g/L的二水合磷酸二氢钠调节pH至7.0，后用水稀释至刻度)-甲醇(40:60)为流动相；波长为220nm，流速为每分钟1.0ml。由于合成工艺路线不同，USP43收载的有关物质方法并不适用，实践表明，该方法专属性差，不能将盐酸右美托咪定的杂质有效分离，并不能满足盐酸右美托咪定有关物质的检测。
盐酸右美托咪定有关物质检测也有相关专利和文献的报道，经对比，多是流动相的组成和洗脱程序不同。总结存在以下问题，或是流动相配制复杂、或是梯度洗脱时间较长，效率低，或是灵敏度低，或是色谱柱耐受性差等缺陷。
发明内容
基于此，提供了一种检出能力强、专属性强、灵敏度高的盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法。
一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法，以下步骤：
采用高效液相色谱法进行检测，流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为pH值为7.3～7.7的磷酸盐缓冲液，所述流动相B为乙腈，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为8mmol/L～12mmol/L；采用梯度流动相洗脱，以流动相体积为100％计，流动相的梯度设置如下：
其中，所述有关物质为盐酸右美托咪定原料或者制剂制备过程中带入的起始原料、中间体、副反应产物以及盐酸右美托咪定降解产物。
在其中一些实施例中，所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种；优选的，所述磷酸盐选自二水合磷酸氢二钠。
在其中一些实施例中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
在其中一些实施例中，所述色谱柱为Agilent Eclipse plus C18，4.6×150mm，3.5μm。
在其中一些实施例中，检测波长为215nm～225nm，柱温为25℃～35℃。
在其中一些实施例中，所述流动相进行洗脱的流速为0.8mL/min～1.2mL/min。
在其中一些实施例中，梯度混合器和进样器之间安装有捕集小柱。
在其中一些实施例中，所述制剂为盐酸右美托咪定注射液。
在其中一些实施例中，样品溶解溶剂为水。
在其中一些实施例中，包括将盐酸右美托咪定原料配制为的浓度为0.1mg/ml的样品水溶液的步骤。
在其中一些实施例中，所述有关物质包括以下物质中的至少一种：
在本发明中，以8mmol/L～12mmol/L磷酸盐缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，缓冲盐浓度低，避免在线混合过程中出现微量结晶析出的问题，导致对检测结果的干扰以及设备磨损；且本流动相体系压力低，可有效地保护色谱柱和仪器。本发明的流动相体系配合合适的洗脱条件可同时检测出盐酸右美托咪定原料及制剂中的13个相关杂质，分离度好、灵敏度高。
本发明可以将目前盐酸右美托咪定合成路线工艺中可能产生的杂质有效检出，同时也能检出USP43所列杂质。采用本发明的检测方法能够将盐酸右美托咪定在强制降解条件下的产生的降解物质得到很好的分离。洗脱时间快，效率高，且色谱图优良。本发明的检测方法可同时检测盐酸右美托咪定原料和注射液，方便杂质谱的比对。本发明的检测方法可用于盐酸右美托咪定原料和注射液的质量控制，为该类品种的质量控制和提升起到良好的推动作用。
附图说明
图1是采用背景技术中USP43有关物质检测方法检测USP43所列5个杂质的色谱图；
图2是采用背景技术中USP43有关物质检测方法检测合成工艺路线推测的杂质色谱图；
图3是采用本发明一实施例的检测方法的USP43所列杂质和本品合成工艺路线中可能的共13个杂质的色谱图；
图4是采用本发明一实施例的检测方法的原料供试品色谱图；
图5是采用本发明一实施例的检测方法的空白溶剂-水色谱图；
图6是采用本发明一实施例检测方法的原料供试品色谱图；
图7是采用本发明一实施例检测方法的空白溶剂-水色谱图；
图8是采用本发明一实施例检测方法的灵敏度溶液色谱图；
图9是采用本发明一实施例检测方法的原料氧化破坏供试品色谱图；
图10是采用本发明一实施例检测方法的注射液供试品色谱图；
图11是采用本发明一实施例检测方法的注射液空白辅料色谱图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明实施例提供一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法。其中，所述有关物质为盐酸右美托咪定原料或者制剂制备过程中带入的起始原料、中间体、副反应产物以及盐酸右美托咪定降解产物。
盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法，包括以下步骤：
采用高效液相色谱法进行检测，流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为pH值为7.3～7.7的磷酸盐缓冲液，所述流动相B为乙腈，所述磷酸盐缓冲液中磷酸盐的浓度为8mmol/L～12mmol/L；采用梯度流动相洗脱。
在本发明中，以8mmol/L～12mmol/L磷酸盐缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，缓冲盐浓度低，避免在线混合过程中出现微量结晶析出的问题，导致对检测结果的干扰以及设备磨损；且本流动相体系压力低，可有效地保护色谱柱和仪器。本发明的流动相体系配合合适的洗脱条件可同时检测出盐酸右美托咪定原料及制剂中的13个相关杂质，分离度好、灵敏度高。
本发明可以将目前盐酸右美托咪定合成路线工艺中可能产生的杂质有效检出，同时也能检出USP43所列杂质。采用本发明的检测方法能够将盐酸右美托咪定在强制降解条件下的产生的降解物质得到很好的分离。洗脱时间快，效率高，且色谱图优良。本发明的检测方法可同时检测盐酸右美托咪定原料和制剂，方便杂质谱的比对。
本发明的检测方法可用于盐酸右美托咪定原料和注射液的质量控制，为该类品种的质量控制和提升起到良好的推动作用。
以流动相体积为100％计，流动相的梯度设置如下：
采用本发明的方法能够检测出的有关物质包括以下杂质：USP43所列杂质A、B、C、D和E。另根据合成工艺路线分析可能的杂质：C、D、E、F、G、H、I和J。其化学名和结构式如下：
在一些实施方式中，梯度洗脱条件为：
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
75-85
15-25
20
55-65
35-45
30
30-40
60-70
35
30-40
60-70
35.01
75-85
15-25
45
75-85
75-85
采用上述方案的有益效果是上述乙腈-磷酸盐流动相体积比，洗脱程序，可使盐酸右美托咪定13个相关杂质更好的分离，提高检测结果的准确性。
优选的，乙腈-磷酸盐缓冲液的初始体积比为20:80。优选的，用磷酸调节磷酸盐缓冲液pH值至7.3～7.7，优先pH值为7.5。所述乙腈-磷酸盐流动相初始比例采用上述的体积比，且调节至上述pH值范围，杂质间能够具有更好的分离效果。
在一些具体实施方式中，梯度洗脱条件为：
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
80
20
20
60
40
30
35
65
35
35
65
35.01
80
80
45
80
20
在进行盐酸右美托咪定原料中杂质的检测时，样品溶液的制备方法为：
取盐酸右美托咪定原料适量，加水溶解并定量稀释为溶液。
本发明方法可用于检测盐酸右美托咪定注射液的品质的优良，例如关于存储和保质期的问题，可通过判别随着存储时间的延长，盐酸右美托咪定注射液中盐酸右美托咪定的降解率及降解产物杂质，与该注射液所用的盐酸右美托咪定原料中的杂质进行对比判断。注射液相对于原料中的杂质越多，可能降解程度越高。例如新鲜盐酸右美托咪定注射液的出厂质量问题，可通过判断新鲜盐酸右美托咪定注射液中的杂质组分和含量进行判断。
由于盐酸右美托咪定注射液的浓度为0.1mg/ml(以右美托咪定计)，为满足制剂检测浓度的需要，原料检测浓度与制剂浓度一致。采用上述进一步方案的有益效果是原料配合制剂的浓度，检测方法统一，方便操作及杂质谱的比对。
在一实施例中，样品水溶液中每lml中约含右美托咪定0.1mg。
在一些实施方式中，还包括对对照品溶液采用与样品溶液同样的方法进行检测。对照品溶液的制备方法可以为：取上述的样品溶液适量，加水稀释。例如可稀释为每lml中约含右美托咪定0.1μg的溶液。
在一些实施方式中，所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠中的一种；优选的，所述磷酸盐选自二水合磷酸氢二钠。
盐酸右美托咪定多以注射液的制剂形式存在，在一些实施方式中，本发明检测的制剂可以为盐酸右美托咪定注射液。当然，如果有其他制剂，例如乳液、膏剂等形式也可以采用本发明的方法进行检测，但可能需要增加在其制剂基础上，检测前将盐酸右美托咪定及相关物质从制剂中溶出得到水溶液的步骤。
在一些实施方式中，样品溶解溶剂为水。
在一些实施方式中，流动相A为pH调节剂调至pH为2.5～4.0的磷酸盐缓冲液。优选的，所述pH调节剂为磷酸。
在一些实施方式中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
在一些具体实施方式中，所述色谱柱为Agilent Eclipse plus C18，4.6×150mm，3.5μm。采用该具体型号的色谱柱对于盐酸右美托咪定及其杂质的灵敏度更高，杂质分离效果更好。
在一些实施方式中，检测波长为215nm～220nm，优选为220nm。
在一些实施方式中，柱温为25℃～35℃，优选为30℃。
在一些实施方式中，所述流动相进行洗脱的流速为0.8mL/min～1.2mL/min。优选为1mL/min。
在一些实施方式中，色谱条件下进样体积为45ul～55ul，优选为50ul。
采用上述方案的有益效果是上述波长为盐酸右美托咪定的最大吸收波长，能够更好检测杂质，上述柱温和流速，能够更好的提供检测环境；为配合注射液检测，上述进样体积能够达到更高的灵敏度。
在一些实施方式中，梯度混合器和进样器之间安装有捕集小柱。安装捕集小柱于梯度混合器和进样器之间，可以对仪器和流动相进行二次净化，去除鬼峰，使色谱图基线平稳，得到更好的杂质分离色谱图，同时消除梯度峰，降低其对杂质检测的干扰，提供更准确的检测结果。并且起到保护作用，延长色谱柱和仪器的寿命。在一具体实施例中，该捕集小柱可选用Ghost-Buster Column，4.6mm×50mm。
实施例1
采用背景技术中USP43有关物质检测方法，将USP43所列5个杂质定位溶液和根据合成工艺路线可能产生的杂质、杂质混合溶液，分别进样检测。采用Merck Lichrospher100RP-18(4mm×12.5cm，5μm)色谱柱，以0.89g/L的二水合磷酸氢二钠(用配制量90％的水溶解二水合磷酸氢二钠，用16g/L的二水合磷酸二氢钠调节pH至7.0，后用水稀释至刻度)-甲醇(40:60)为流动相；波长为220nm；柱温30℃，流速为每分钟1.0ml。
检测结果见表1，图谱见附图1和图2。
表1
图1和表1可知，USP43所列5个杂质中，杂质D和杂质E分离度不佳；图2可知，根据合成工艺路线推测可能产生的杂质中，杂质C与主成分无分离度，且杂质E和F在该条件下较难洗脱。表明该方法不适用盐酸右美托咪定有关物质的检测。
实施例2
采用本发明的检测方法，将USP43所列5个杂质定位溶液和根据合成工艺路线可能产生的杂质、杂质混合溶液，分别进样检测。仪器与条件：岛津LC-20AT UV液相色谱系统，色谱柱：Agilent Eclipse plus C18(4.6×150mm，3.5μm)；检测波长为220nm；柱温为30℃；流速为1.0ml/min；以10mmol/L的二水合磷酸氢二钠为流动相A，乙腈为流动相B，按下表2进行梯度洗脱：
表2
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
80
20
20
60
40
30
35
65
35
35
65
35.01
80
80
45
80
20
结果见表3和附图3。
表3
由表3和图3可知，13个杂质之间，杂质和主成分之间分离度良好，右美托咪定保留时间18.3min，与其相邻的杂质H的分离度可达到3.3，符合检测要求。因而，本发明的检测方法可用于盐酸右美托咪定有关物质的检测。
实施例3
仪器与条件：岛津LC-20AT UV液相色谱系统，色谱柱：Agilent Eclipse plus C18(4.6×150mm，3.5μm)；检测波长为220nm；以10mmol/L的二水合磷酸氢二钠为流动相A，乙腈为流动相B，柱温30℃；流速为1.0ml/min，按下表4进行梯度洗脱：
表4
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
80
20
20
60
40
30
35
65
35
35
65
35.01
80
80
45
80
20
试验样品：取原料适量，加水溶解并稀释制成含右美托咪定0.1mg/ml的溶液，作为原料供试品溶液；精密量取该溶液和空白溶剂各50ul，注入液相色谱仪。结果见图4和图5。
图4和图5可知，在流动相于25-35min变化梯度时，基线不稳，出现很多梯度峰，且经多次试验发现，梯度峰大小高低不一致，偶会影响杂质(保留时间约为26min)的检出，不利于检测结果的准确性。
图4的峰结果如下：
实施例4
仪器与条件：岛津LC-20AT UV液相色谱系统，色谱柱：Agilent Eclipse plus C18(4.6×150mm，3.5μm)；检测波长为220nm；以10mmol/L的二水合磷酸氢二钠为流动相A，乙腈为流动相B，柱温30℃；流速为1.0ml/min，在梯度混合器和进样器之间安装捕集小柱，选用Ghost-Buster Column，4.6mm×50mm，按下表5进行梯度洗脱：
表5
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
80
20
20
60
40
30
35
65
35
35
65
35.01
80
80
45
80
20
取原料适量，加水溶解并稀释制成含右美托咪定0.1mg/ml的溶液，作为原料供试品溶液；取盐酸右美托咪定对照品适量，加水溶解稀释制成每1ml约右美托咪定0.007μg/ml的溶液，作为灵敏度溶液，精密量取上述溶液和空白溶剂各50μl，注入液相色谱仪。结果见图6-8。
与图4(未加捕集小柱)相比，图6基线平稳，在25-35min之间没有梯度峰，更加有利于杂质的检测。图8为灵敏度溶液色谱图，其S/N约为10，即该方法的定量限相当于供试品检测浓度的0.007％，远低于未知杂质的限度0.10％，当杂质高于0.007％时，即可被定量检测；本发明的检测方法灵敏度符合检测要求。
图8的峰结果如下：
实施例5
仪器与条件：岛津LC-20AT UV液相色谱系统，色谱柱：Agilent Eclipse plus C18(4.6×150mm，3.5μm)；检测波长为220nm；以10mmol/L的二水合磷酸氢二钠为流动相A，乙腈为流动相B，柱温30℃；流速为1.0ml/min，在梯度混合器和进样器之间安装捕集小柱，选用Ghost-Buster Column，4.6mm×50mm，按下表6进行梯度洗脱：
表6
试验样品：取原料适量，加30％过氧化氢溶液2ml，室温放置8h，加水溶解并稀释制成含右美托咪定0.1mg/ml的溶液。精密量取该溶液50ul，注入液相色谱仪，结果见图9。
由图9可知，本品在氧化条件下，较不稳定，有少量降解杂质，但主峰与相邻杂质及杂质峰间的分离度良好，主峰的纯度符合要求，该发明的检测方法可有效检测盐酸右美托咪定的降解产物。表明该方法专属性良好。
实施例6
仪器与条件：岛津LC-20AT UV液相色谱系统，色谱柱：Agilent Eclipse plus C18(4.6×150mm，3.5μm)；检测波长为220nm；以10mmol/L的二水合磷酸氢二钠为流动相A，乙腈为流动相B，柱温30℃；流速为1.0ml/min，在梯度混合器和进样器之间安装捕集小柱，选用Ghost-Buster Column，4.6mm×50mm，按下表7进行梯度洗脱：
表7
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
80
20
20
60
40
30
35
65
35
35
65
35.01
80
80
45
80
20
取注射液和空白辅料，精密量取上述溶液各50ul，注入液相色谱仪。结果见图10和图11。
图10和11可知，空白辅料未出峰，不干扰注射液的检测。本发明的检测方法可用于盐酸右美托咪定注射液的有关物质检测，图6和图10分别为原料和注射液有关物质检测图谱，检测方法一致，操作简便，利于杂质谱的比对。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
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