一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法
阅读说明：本技术 一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法 (Chiral chromatographic separation analysis method of dihydroquercetin enantiomer ) 是由 毛志平 许文业 郭栋 梁绍武 王子杏 于 2021-01-25 设计创作，主要内容包括：本发明公开的一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法,所述分离分析方法包括如下步骤：所述分离分析方法包括如下步骤：将二氢槲皮素样品溶解在乙醇中,采用手性色谱柱,以正己烷、三氟乙酸和低级醇为流动相,采用手性固定相进行液相色谱分离分析。本发明属于手性色谱分离技术领域,具体是一种涂覆型和键合型多糖衍生物手性固定相材料上,结合所述的流动相,能够发现消旋二氢槲皮素对映体实现了良好的手性分离,分析分离速度快,可对消旋二氢槲皮素进行分析检测离放入分离分析方法。(The invention discloses a chiral chromatographic separation and analysis method of dihydroquercetin enantiomer, which comprises the following steps: the separation and analysis method comprises the following steps: dissolving a dihydroquercetin sample in ethanol, and performing liquid chromatography separation and analysis by using a chiral chromatographic column and a chiral stationary phase by using n-hexane, trifluoroacetic acid and lower alcohol as mobile phases. The invention belongs to the technical field of chiral chromatographic separation, and particularly relates to a coating type and bonding type polysaccharide derivative chiral stationary phase material, which is combined with a mobile phase, can find that racemic dihydroquercetin enantiomer realizes good chiral separation, has high analysis and separation speed, and can perform analysis detection on racemic dihydroquercetin and put into a separation and analysis method.)
技术领域
本发明属于手性色谱分离技术领域，尤其涉及一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法。
背景技术
随着立体化学的发展，手性药物的立体选择性研究备受关注。具有相同物理化学性质的手性异构体在生物体内可能表现出截然不同的吸收、代谢、药理作用、致畸、致癌、致突变和内分泌干扰活性等性质。例如有些手性药物分子两种对映体的药效，存在极大的差异，甚至完全相反。很典型的例子如酞胺哌啶酮的两个异构体只有(R)-对映体具有镇静作用，而(S)-对映体是一种强力致畸剂，会导致胎儿畸形。再如左氧氟沙星的抗菌活性是右氧氟沙星的8～12倍，对多数肠杆菌科细菌有效，抗菌谱广、抗菌作用强，而右氧氟沙星几乎没有抗菌活性。据统计，现有药物中有60％具有手性活性。在美国医药药物名词词典所列出的2050种药物中，大约有一般药物分子至少包含一个以上手性中心，大约有400多种药物以外消旋体或对映异构化形式服用。所以，美国食品药品管理局规定，今后凡发展具有不对称中心的手性药物，必须对其对映体的药代动力学做出明确说明。因此获得单一对映异构体对药物研发显得至关重要，手性化合物对映体分离和制备一直以来也受到研究者的广泛关注
二氢槲皮素(dihydroquercetin，DHQ)，是一种二氢黄酮类化合物，其化学名为3，5，7-三羟基-2-(3，4-二羟基苯基)苯并二氢吡喃-4-酮。在自然界中分布很广泛，如花旗松、落叶松、樟子松等都含有丰富的DHQ。DHQ是一种应用广泛的生物活性剂，与其他的黄酮类化合物一样，在人体中具有多种生物活性，包括抗氧化、清除自由基、保护心肌细胞、抗病毒、抗发炎、血管舒张和抗菌等作用。目前，二氢槲皮素作为医药主辅原料而能广泛的应用于药品，保健食品，功能食品业中，具有很高的开发价值和应用前景。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法，在本发明公开的涂覆型和键合型多糖衍生物手性固定相材料上，结合所述的流动相，能够发现消旋二氢槲皮素对映体实现了良好的手性分离，分析分离速度快，可对消旋二氢槲皮素进行分析检测。
本发明采用的技术方案如下：一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法，所述分离分析方法包括如下步骤：将二氢槲皮素样品溶解在乙醇中，采用手性色谱柱，以正己烷、三氟乙酸和低级醇为流动相，采用手性固定相进行液相色谱分离分析。
进一步地，所述所述手性固定相为涂覆三(4-甲基苯甲酸酯)纤维素、涂覆三(3，5-二甲基苯氨基甲酰化)淀粉、涂覆三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)纤维素或键合三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)纤维素中的一种。
进一步地，所述流动相为正己烷、三氟乙酸和低级醇的混合溶液。
进一步地，所述流动相中正己烷、三氟乙酸和低级醇的体积比为70～90：0.1～0.3：30～10。
进一步地，所述低级醇为乙醇或异丙醇。
进一步地，所述三氟乙酸的体积百分数0.1％～0.3％。
进一步地，所述流动相中正己烷、三氟乙酸和低级醇的体积比为80：0.1：20。
进一步地，所述流动相为1.0mL/min，进样体积为10μL，柱温25℃，紫外检测波长为290mm。
采用上述结构后，本发明有益效果如下：在本发明公开的涂覆型和键合型多糖衍生物手性固定相材料上，结合所述的流动相，能够发现消旋二氢槲皮素对映体实现了良好的手性分离。在优选的条件下，消旋二氢槲皮素对映体间的分离度达到7.73。本发明开发的手性分离法需要在正相流动相条件下完成，分析分离速度快，可对消旋二氢槲皮素进行分析检测。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。
图1为本发明一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法实施例1得到的二氢槲皮素对映体的HPLC图谱；
图2为本发明一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法实施例2得到的二氢槲皮素对映体的HPLC图谱；
图3为本发明一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法实施例3得到的二氢槲皮素对映体的HPLC图谱；
图4为本发明一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法实施例4得到的二氢槲皮素对映体的HPLC图谱；
图5为本发明一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法实施例5得到的二氢槲皮素对映体的HPLC图谱；
图6为本发明一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法实施例6得到的二氢槲皮素对映体的HPLC图谱；
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
如图1-6所示，一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法，它包括以下步骤：将二氢槲皮素在乙醇溶解，采用直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相进行手性分离。
其中，所述流动相由正己烷、三氟乙酸和乙醇组成，正己烷和乙醇的体积比为80∶20，并添加总体积0.1％三氟乙酸；使用时，色谱条件中流动相的流速为1.0mL/min，进样体积为10μL，紫外检测波长为290nm。在上述色谱条件下，二氢槲皮素对映体间的分离度为7.73。
实施例1
一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法如下：
(1)仪器与条件：高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪
色谱柱：规格为250×4.6mm；柱内填充广州研创生物技术发展有限公司生产的纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)手性固定相，即Y2。
流动相：正己烷：三氟乙酸：乙醇＝80:0.1：20(V/V/V)
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
进样体积：10μL
检测波长：290mm
(2)实施
将二氢槲皮素(纯度为99％)用乙醇配制成0.5mg/mL溶液，在安捷伦1200系列高效液相色谱仪上，采用Y2色谱柱(250×4.6mm)、流动相为正己烷：三氟乙酸：乙醇＝80：0.1：20(V/V/V)、流速为1mL/min，柱温为25℃、检测波长为290mm的条件下对上述样品进行色谱分离。
实例2
一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法如下：
(1)仪器与条件：高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪
色谱柱：规格为250×4.6mm；柱内填充广州研创生物技术发展有限公司生产的直链淀粉(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相，即Y3。
流动相：正己烷：三氟乙酸：乙醇＝80:0.1：20(V/V/V)
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
进样体积：10μL
检测波长：290mm
(2)实施
将二氢槲皮素(纯度为99％)用乙醇配制成0.5mg/mL溶液，在安捷伦1200系列高效液相色谱仪上，采用Y3色谱柱(250×4.6mm)、流动相为己烷：三氟乙酸：乙醇＝80：0.1：20(V/V/V)、流速为1mL/min，柱温为25℃、检测波长为290mm的条件下对上述样品进行色谱分离。
实例3
一种二氢槲皮素映体的手性色谱分离分析方法如下：
(1)仪器与条件：高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪
色谱柱：规格为250×4.6mm；柱内填充广州研创生物技术发展有限公司生产的纤维素-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相，即Y5。
流动相：正己烷：三氟乙酸：乙醇＝80:0.1：20(V/V/V)
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
进样体积：10μL
检测波长：290mm
(2)实施
将二氢槲皮素(纯度为99％)用乙醇配制成0.5mg/mL溶液，在安捷伦1200系列高效液相色谱仪上，采用Y5色谱柱(250×4.6mm)、流动相为正己烷：三氟乙酸：乙醇＝80：0.1：20(V/V/V)、流速为1mL/min，柱温为25℃、检测波长为290mm的条件下对上述样品进行色谱分离。
实例4
一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法如下：
(1)仪器与条件：高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪
色谱柱：规格为250×4.6mm；柱内填充广州研创生物技术发展有限公司生产的纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)手性固定相，即R-C。
流动相：正己烷：三氟乙酸：乙醇＝80:0.1：20(V/V/V)
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
进样体积：10μL
检测波长：290mm
(2)实施
将二氢槲皮素(纯度为99％)用乙醇配制成0.5mg/mL溶液，在安捷伦1200系列高效液相色谱仪上，采用R-C色谱柱(250×4.6mm)、流动相为正己烷：三氟乙酸：乙醇＝80：0.1：20(V/V/V)、流速为1mL/min，柱温为25℃、检测波长为290mm的条件下对上述样品进行色谱分离。
实例5
一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法如下：
(1)仪器与条件：
高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪
色谱柱：规格为250×4.6mm；柱内填充广州研创生物技术发展有限公司生产的Y3(直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相，即Y3。
流动相：正己烷：三氟乙酸：异丙醇＝70：0.2：30(V/V/V)
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
进样体积：10μL
检测波长：290mm
(2)实施
将二氢槲皮素(纯度为99％)用乙醇配制成0.5mg/mL溶液，在安捷伦1200系列高效液相色谱仪上，采用Y2色谱柱(250×4.6mm)、流动相为正己烷：三氟乙酸：异丙醇＝70：0.2：30(V/V/V)、流速为1mL/min，柱温为25℃、检测波长为290mm的条件下对上述样品进行色谱分离。
实例6
一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法如下：
(1)仪器与条件：
高效液相色谱仪：安捷伦1200系列液相色谱仪
色谱柱：规格为250×4.6mm；柱内填充广州研创生物技术发展有限公司生产的纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)手性固定相，即Y2。
流动相：正己烷：三氟乙酸：异丙醇＝90:0.3：100(V/V/V)
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
进样体积：10μL
检测波长：290mm
(2)实施
将二氢槲皮素(纯度为99％)用乙醇配制成0.5mg/mL溶液，在安捷伦1200系列高效液相色谱仪上，采用Y2色谱柱(250×4.6mm)、流动相为正己烷：三氟乙酸：乙醇＝90：0.3：10(V/V/V)、流速为1mL/min，柱温为25℃、检测波长为290mm的条件下对上述样品进行色谱分离。
测试结果如下：
实施例1
实施例2
实施例3
实施例4
实施例5
实施例6
表1：
例
分离度
实施例1
2.18
实施例2
7.73
实施例3
5.56
实施例4
2.08
实施例5
6.60
实施例6
3.24
以上为实例1～6的二氢槲皮素对映体的HPLC图谱和结果汇总。在四种手性固定相下，二氢槲皮素均可实现完全分离。且二氢槲皮素在正己烷-三氟乙酸-乙醇＝80:0.1:20时分离度最高，达到7.73。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。总而言之如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本发明创造宗旨的情况下，不经创造性的设计出与该技术方案相似的结构方式及实施例，均应属于本发明的保护范围。
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