一种化妆品中玻色因的液相检测方法
阅读说明：本技术 一种化妆品中玻色因的液相检测方法 (Liquid phase detection method for vitronectin in cosmetics ) 是由 王甜甜 饶亮明 李兴德 于 2020-12-28 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种化妆品中玻色因的液相检测方法,属于化妆品检测领域。该检测方法为HPLC-示差折光检测法,HPLC的色谱条件为：色谱柱采用氨基柱,流动相为75～85％的乙腈,等度洗脱,检测器为示差折光检测器,进样量为5～12μL。该方法的样品前处理简单、检测灵敏度高,线性范围宽,能够实现对各种化妆品中玻色因的含量进行有效检测。(The invention provides a liquid phase detection method of a vitronectin in cosmetics, belonging to the field of cosmetic detection. The detection method is an HPLC-differential refraction detection method, and the chromatographic conditions of the HPLC are as follows: the chromatographic column adopts an amino column, the mobile phase is 75-85% of acetonitrile, isocratic elution is carried out, the detector is a differential refraction detector, and the sample injection amount is 5-12 mu L. The method has the advantages of simple sample pretreatment, high detection sensitivity and wide linear range, and can realize effective detection of the content of the vitreous chromogen in various cosmetics.)
技术领域
本发明涉及化妆品检测领域，尤其涉及化妆品中玻色因的液相检测方法。
背景技术
玻色因(Pro-Xylane)，又名羟丙基四氢吡喃三醇，是一种生物活性物质，能促进糖胺聚糖(GAG)的产生，进而促进蛋白聚糖的产生，同时，玻色因在这个过程中，还能通过GAG促进合成一些细胞因子和胶原蛋白再生，从而使玻色因具有对抗皮肤老化、脱水等症状，使肌肤变得紧致、有弹性。另外，还有一些实验证明，玻色因能够促进成纤维细胞生长因子(FGF，类似EGF)的再生，能够有效修复受损肌肤。因此，玻色因被广泛应用于化妆品领域，主要应用于抗皱等高端护肤品产品上。
目前，市面上有多种化妆品，均声称其含有玻色因，但鲜少能明确标示出玻色因的含量。而即便有产品标示出相关浓度，也仅是其所含活性物质的浓度，而非纯的玻色因的浓度，比如欧莱雅旗下产品赫莲娜，其活性物质的浓度一般是30％，但其实际所含玻色因的浓度未公布。因此，如何快速而有效的检测各种护肤品中玻色因的实际含量，对于相关产品的质量控制具有非常重要的意义，而现有的检测方法难以实现对化妆品中玻色因含量的有效检测。
鉴于此，本申请提出一种玻色因的检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种化妆品中玻色因的液相检测方法，该方法的样品前处理简单、检测灵敏度高，线性范围宽，能够实现对各种化妆品中玻色因的含量进行有效检测。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种化妆品中玻色因的液相检测方法，所述方法为HPLC-示差折光检测法，所述HPLC的色谱条件为：色谱柱采用氨基柱，流动相为75～85％的乙腈，等度洗脱，检测器为示差折光检测器，进样量为5～12μL；
检测步骤包括：
A.制备标准工作曲线：准确称取玻色因标准物质，用超纯水配制成25～50mg/ml的标准贮备液，再成倍稀释成一系列不同浓度的玻色因溶液，采用所述HPLC的色谱条件检测后，以响应峰面积对浓度积分得到标准曲线；
B.样品制备：用三氯甲烷分散待测样品后，加入超纯水涡旋萃取后，8000～15000rmp/min离心8～15min，取上清液过滤，滤液供检测；
C.样品检测：采用所述HPLC的色谱条件检测待测样品后，得到所述待测样品中所含玻色因的响应峰面积，代入到所述标准曲线中进行计算，得到所述待测样品中所含玻色因的浓度。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述制备标准工作曲线步骤中，一系列玻色因溶液的浓度分别为：5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述HPLC的色谱条件中，柱温为65～72℃。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述HPLC的色谱条件中，流速为0.5～1mL/min。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述样品制备步骤中，采用0.45μm水相滤膜对所述上清液进行过滤。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，采用所述制备标准工作曲线的方法，得到的标准曲线为y＝0.7273x，相关系数为0.996，线性范围为5～25mg/mL。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，采用所述HPLC-示差折光检测法，检出限为0.2g/100g。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，所述氨基柱为Shodex Asahipak NH2P-504E。
本发明的效果如下：
本发明提供的这种化妆品中玻色因的液相检测方法，采用HPLC-示差折光检测法，专属性强，灵敏度高，准确度好，线性范围宽，且样品的前处理过程简单快捷，能够实现对各种化妆品中玻色因的含量进行有效检测，有助于各类以玻色因为主要活性成分的化妆品的产品质控。
附图说明
图1为本发明实施例1中标准对照品的液相色谱图；
图2为本发明实施例1中的标准曲线；
图3为本发明实施例1中1号待测样品的液相色谱图；
图4为本发明实施例1中2号待测样品的液相色谱图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
本实施例提供一种化妆品中玻色因的液相检测方法，其包括：
(1)制备标准曲线：
准确称取玻色因标准物质50mg，用超纯水配制成50mg/ml的标准贮备液，再成倍稀释至5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL，采用HPLC-示差折光检测法进行检测后，得到如图1所示的色谱图，其中保留时间在5.4min处的色谱峰为玻色因，以响应峰面积对浓度积分得到如图2所示的标准曲线：y＝0.7273x，相关系数为0.9963；
其中，HPLC的色谱条件为：色谱柱采用Shodex Asahipak NH2P-50 4E，流动相为80％的乙腈，等度洗脱，检测器为示差折光检测器，进样量为10μL，柱温为68℃，流速为0.8mL/min；
(2)样品制备：
以某公司市售的无痕抗皱霜为1号待测样品。
称取1g待测样品，加入5ml三氯甲烷分散后，加入5ml超纯水涡旋萃取，10000rmp/min离心10min，取上清液，用0.45μm水相滤膜过滤，得到1号待测样品供试液。
(3)样品检测：
采用上述步骤(1)中的述HPLC的色谱条件检测1号待测样品供试液，得到如图3所示的色谱图，将该色谱图中玻色因的响应峰面积，代入到所述标准曲线y＝0.7273x中进行计算，得到待测样品中所含玻色因的浓度为59mg/g。
实施例2
本实施例提供一种化妆品中玻色因的液相检测方法，其包括：
(2)制备标准曲线：
准确称取玻色因标准物质50mg，用超纯水配制成50mg/ml的标准贮备液，再成倍稀释至5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL，采用HPLC-示差折光检测法进行检测后，以响应峰面积对浓度积分得到标准曲线：y＝0.7273x，相关系数为0.9963；
其中，HPLC的色谱条件为：色谱柱采用Shodex Asahipak NH2P-50 4E，流动相为75％的乙腈，等度洗脱，检测器为示差折光检测器，进样量为5μL，柱温为72℃，流速为0.5mL/min；
(2)样品制备：
以通过化学合成方法得到的玻色因原料为2号待测样品，其中所含成分为玻色因和水。将其用0.45μm水相滤膜过滤，得到2号待测样品供试液。
(3)样品检测：
采用上述步骤(1)中的述HPLC的色谱条件检测2号待测样品供试液，得到如图4所示的色谱图，将该色谱图中玻色因的响应峰面积，代入到所述标准曲线y＝0.7273x中进行计算，得到待测样品中所含玻色因的浓度为48.05％。
下面通过实验对本发明提供的玻色因的液相检测方法进行方法学考察，结果如下：
1.重复性考察:
取同一批采用化学合成方法得到的玻色因原料作为样品，配制供试品溶液，以实施例1中提供的检测方法进行多次测定，计算结果如表1所示：
表1.重复性试验结果
结果表明：实施例1提供的玻色因的液相检测方法重复性良好。
2.精密度考察
取标准样品溶液，采用实施例1中提供的检测方法，连续进样6次，每次进样量为10μL，测得各次的峰面积，结果如表2所示：
表2.精密度试验结果
结果表明：实施例1提供的玻色因的液相检测方法精密度良好。
3.中间精密度考察：
由两名分析人员采用实施例1中提供的检测方法，测定同一产品(MODE BELLE岁月无痕抗皱霜)中玻色因的含量，每人测定两次，取平均值，结果如表3所示：
表3.中间精密度考察结果
结果表明：两名分析人员测定同一产品中玻色因含量的结果接近，说明实施例1提供的玻色因的液相检测方法的中间精密度良好。
4.回收率考察：
采用加标回收法，考察实施例1中提供的检测方法的回收率，结果如表4所示：
表4.回收率考察结果
结果表明，实施例1中提供的检测方法的回收率高，准确度高，说明该方法的可靠性强。
5.灵敏度考察：
采用逐级稀释的方法，以不同浓度的标准玻色因溶液进行分析，在信噪比为3的情况下，测得玻色因的最低检测浓度为0.2g/100g。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
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