一种三丁酸甘油酯含量的测定方法
阅读说明：本技术 一种三丁酸甘油酯含量的测定方法 (Method for measuring content of tributyrin ) 是由 尹玉秀 李宜鹏 邬本成 王计伟 于 2020-12-17 设计创作，主要内容包括：本发明属于物质含量测定技术领域。本发明提供了一种三丁酸甘油酯含量的测定方法,包括如下步骤：将三丁酸甘油酯标准品和有机溶剂混合,得到标准工作液；采用气相色谱仪对标准工作液进行检测,根据外标法得到标准曲线方程；将三丁酸甘油酯粉末样品和有机溶剂混合后经过超声、过滤处理,得到样品待测液；采用气相色谱仪对样品待测液进行检测,根据标准曲线方程和测定的峰面积得到样品待测液中三丁酸甘油酯含量。本发明的测定方法具有操作简便、重复性好、精确等优点；三丁酸甘油酯的回收率在98.8～100.2％之间。(The invention belongs to the technical field of substance content determination. The invention provides a method for measuring the content of tributyrin, which comprises the following steps: mixing a tributyrin standard substance and an organic solvent to obtain a standard working solution; detecting the standard working solution by using a gas chromatograph, and obtaining a standard curve equation according to an external standard method; mixing a tributyrin powder sample and an organic solvent, and then carrying out ultrasonic treatment and filtration treatment to obtain a sample to-be-detected liquid; and detecting the sample solution to be detected by adopting a gas chromatograph, and obtaining the content of the tributyrin in the sample solution to be detected according to a standard curve equation and the determined peak area. The determination method has the advantages of simple and convenient operation, good repeatability, accuracy and the like; the recovery rate of the tributyrin is 98.8-100.2%.)
技术领域
本发明涉及物质含量测定技术领域,尤其涉及一种三丁酸甘油酯含量的测定方法。
背景技术
研究表明，三丁酸甘油酯能够调节动物肠道结构及功能，修复肠黏膜损伤，促进小肠绒毛生长，实现防治仔猪断奶后消化紊乱和腹泻的效果。三丁酸甘油酯在畜禽养殖中具有提高饲料消化率，减少饲料便、水便发生率，提高畜禽的增重和饲料的利用率的功效。
随着饲料行业全面禁抗，三丁酸甘油酯产品因其独特的功能性，在饲料行业具有广泛应用。三丁酸甘油酯产品从根本上替代饲料中的抗生素，消除抗生素在饲料中的残留，从而生产优质无公害的动物饲料产品。三丁酸甘油酯的含量决定了三丁酸甘油酯产品的功效性，是评价该产品的最关键指标。
目前尚无国家标准、行业标准等检测方法对三丁酸甘油酯的含量进行测定。因此，对相关产品中三丁酸甘油酯的含量进行准确测定具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足提供一种精确分析、操作简便的三丁酸甘油酯含量的测定方法，实现对三丁酸甘油酯含量的精确测定。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种三丁酸甘油酯含量的测定方法，包括如下步骤：
1)将三丁酸甘油酯标准品和有机溶剂混合，得到标准工作液；
2)采用气相色谱仪对标准工作液进行检测，根据外标法得到标准曲线方程；
3)将三丁酸甘油酯粉末样品和有机溶剂混合后经过超声、过滤处理，得到样品待测液；
4)采用气相色谱仪对样品待测液进行检测，根据标准曲线方程和测定的峰面积得到样品待测液中三丁酸甘油酯含量。
作为优选，步骤1)所述标准工作液的浓度为0.098～0.147g/100mL；所述三丁酸甘油酯标准品的纯度≥98％。
作为优选，所述标准工作液含有5个浓度，所述标准工作液的浓度分别为0.0098～0.0147g/100mL、0.0294～0.0441g/100mL、0.049～0.0735g/100mL、0.0686～0.1029g/100mL和0.098～0.147g/100mL。
作为优选，步骤1)和步骤3)所述有机溶剂为丙酮或正己烷。
作为优选，步骤2)和步骤4)所述检测的过程中，色谱柱为wonda CAP WAX毛细管色谱柱；检测器为氢火焰离子化检测器；进样量为0.8～1.2μL。
作为优选，步骤2)和步骤4)所述检测的过程中，程序温度从90～110℃升温至220～240℃，升温至220～240℃的升温速率为15～25℃/min；进样口温度为250～270℃，检测器温度为270～290℃。
作为优选，步骤2)和步骤4)所述检测的过程中，氮气流速为8.5～9.5mL/min，氢气流速为35～45mL/min；空气流速为350～450mL/min；分流比为18～22:1。
作为优选，步骤2)所述标准曲线方程为y＝716.0864x-11051.6839，R2＝0.9999；其中，x为三丁酸甘油酯标准液的浓度，y为测定的峰面积。
作为优选，步骤3)所述过滤处理采用微孔滤膜。
作为优选，步骤4)中，根据标准曲线方程和测定的峰面积得到样品待测液中三丁酸甘油酯浓度后，再由三丁酸甘油酯浓度得到样品中三丁酸甘油酯含量。
本发明的有益效果包括以下几点：
1)本发明的测定方法具有操作简便、重复性好、精确等优点。
2)本发明的测定方法重复性良好，在相同的条件下进行多次重复测定，其中两次平行测定结果的相对偏差均不大于5％。
附图说明
图1为实施例1的三丁酸甘油酯的标准曲线图；
图2为实施例1的浓度为112.612ug/mL的标准工作液的色谱图；
图3为实施例1的浓度为337.835ug/mL的标准工作液的色谱图；
图4为实施例1的浓度为563.059ug/mL的标准工作液的色谱图；
图5为实施例1的浓度为788.283ug/mL的标准工作液的色谱图；
图6为实施例1的浓度为1126.118ug/mL的标准工作液的色谱图；
图7为实施例1的三丁酸甘油酯粉末样品的色谱图；
图8为实施例2的三丁酸甘油酯粉末样品的色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种三丁酸甘油酯含量的测定方法，包括如下步骤：
1)将三丁酸甘油酯标准品和有机溶剂混合，得到标准工作液；
2)采用气相色谱仪对标准工作液进行检测，根据外标法得到标准曲线方程；
3)将三丁酸甘油酯粉末样品和有机溶剂混合后经过超声、过滤处理，得到样品待测液；
4)采用气相色谱仪对样品待测液进行检测，根据标准曲线方程和测定的峰面积得到样品待测液中三丁酸甘油酯含量。
本发明所述三丁酸甘油酯标准品的纯度优选≥98％；所述标准贮备液的浓度A＝三丁酸甘油酯标准品质量m×三丁酸甘油酯标准品的纯度/100V×106；其中，A的单位为μg/mL，m的单位为g，V的单位为mL。
本发明步骤1)所述标准工作液的浓度优选为0.098～0.147g/100mL；所述标准工作液优选含有5个浓度，所述标准工作液的浓度分别优选为0.0098～0.0147g/100mL、0.0294～0.0441g/100mL、0.049～0.0735g/100mL、0.0686～0.1029g/100mL和0.098～0.147g/100mL；进一步优选为0.0112612g/100mL、0.0337835g/100mL、0.0563059g/100mL、0.0788283g/100mL和0.1126118g/100mL。
本发明所述三丁酸甘油酯标准品和有机溶剂混合后优选制备成标准贮备液，对贮备液用有机溶剂进行稀释得到上述前四个标准工作液；所述标准贮备液的浓度优选为0.098～0.147g/100mL；所述标准贮备液进行稀释得到标准工作液时，标准贮备液与有机溶剂的体积比分别优选为1:9、3:7、5:5和7:3。
本发明步骤1)和步骤3)所述有机溶剂优选为丙酮或正己烷，所述丙酮或正己烷优选为色谱纯。
本发明步骤2)和步骤4)所述检测的过程中，色谱柱优选为wonda CAP WAX毛细管色谱柱；色谱柱型号优选为30m×0.25mm×0.25um；检测器优选为氢火焰离子化检测器；进样量优选为0.8～1.2μL，进一步优选为1μL。
本发明步骤2)和步骤4)所述检测的过程中，程序温度优选从90～110℃升温至220～240℃，进一步优选从100℃升温至230℃；所述程序温度为90～110℃时，优选保温1～3min，进一步优选2min；所述程序温度为220～240℃时，优选保温8～12min，进一步优选10min；升温至220～240℃的升温速率优选为15～25℃/min，进一步优选为18～22℃/min，更优选为20℃/min；进样口温度优选为250～270℃，进一步优选为255～265℃；更优选为260℃；检测器温度优选为270～290℃，进一步优选为275～285℃，更优选为280℃。
本发明步骤2)和步骤4)所述检测的过程中，氮气流速优选为8.5～9.5mL/min，进一步优选为9.0mL/min；氢气流速优选为35～45mL/min，进一步优选为40mL/min；空气流速优选为350～450mL/min，进一步优选为380～420mL/min，更优选为400mL/min；分流比优选为18～22:1，进一步优选为20:1。
本发明步骤2)所述标准曲线方程优选为y＝716.0864x-11051.6839，R2＝0.9999；其中，x为三丁酸甘油酯标准液的浓度，y为测定的峰面积。
本发明步骤3)所述超声处理的时间优选为25～35min，进一步优选为30min；所述过滤处理优选采用微孔滤膜，所述微孔滤膜的孔径优选0.4～0.5μm，进一步优选0.45μm。
本发明步骤3)所述混合优选将三丁酸甘油酯粉末样品用少量有机溶剂溶解均匀；所述超声处理后过滤处理前优选采用有机溶剂对上述溶液进行定容、摇匀、静置处理；所述静置处理的时间优选为8～12min，进一步优选为10min。
本发明步骤4)中，优选根据标准曲线方程和测定的峰面积得到样品待测液中三丁酸甘油酯浓度后，再由三丁酸甘油酯浓度得到样品中三丁酸甘油酯含量；所述由样品待测液中三丁酸甘油酯浓度得到样品中三丁酸甘油酯含量的公式为三丁酸甘油酯含量X(％)＝样品待测液中三丁酸甘油酯浓度A×定容体积V/质量m/104；其中，A的单位为μg/mL，V的单位为mL，m的单位为g。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将0.11491g纯度为98％的三丁酸甘油酯标准品放入100mL容量瓶中，用正己烷充分溶解后，稀释至刻度，充分摇匀，得到浓度为1126.118μg/mL的标准贮备液。分别取0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、1mL标准贮备液，在0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、1mL标准贮备液中分别加入0.9mL、0.7mL、0.5mL、0.3mL、0mL正己烷进行稀释，得到浓度分别为112.612ug/mL、337.835ug/mL、563.059ug/mL、788.283ug/mL和1126.118ug/mL的标准工作液。
将上述不同浓度的标准工作液注入气相色谱仪进行测试，色谱柱为wonda CAPWAX毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25um)，检测器为FID检测器，程序温度在100℃初温下保持2min，然后以20℃/min的速率升温至230℃，保持10min；进样口温度为260℃，检测器温度为280℃。氮气流速为9.0mL/min，氢气流速为40mL/min，空气流速为400mL/min，分流比为20:1，进样量为1μL。浓度为112.612ug/mL、337.835ug/mL、563.059ug/mL、788.283ug/mL和1126.118ug/mL的标准工作液测得的峰面积分别为71803、229098、392166、550880和797429。
根据三丁酸甘油酯标准工作液的浓度及其对应的峰面积进行回归分析，得到标准曲线方程：y＝716.0864x-11051.6839，R2＝0.9999；其中，x为三丁酸甘油酯标准液的浓度，y为测定的峰面积。
将0.1228g纯度为98％的三丁酸甘油酯粉末样品先用少量正己烷溶解并转移于100mL的容量瓶中，经过超声30min后，再用正己烷定容至刻度，摇匀，静置10min，用0.45μm微孔滤膜过滤后，得到样品待测液。将样品待测液注入上述气相色谱仪，利用上述气相色谱仪对样品待测液进行检测，得到样品待测液的峰面积为259180。将测得的峰面积259180代入标准曲线方程，得到样品待测液的三丁酸甘油酯浓度为377.373μg/mL，由三丁酸甘油酯的含量和浓度公式得到三丁酸甘油酯含量为30.731％。
三丁酸甘油酯标准曲线图如图1所示，浓度为112.612ug/mL的标准工作液的色谱图如图2所示，浓度为337.835ug/mL的标准工作液的色谱图如图3所示，浓度为563.059ug/mL的标准工作液的色谱图如图4所示，浓度为788.283ug/mL的标准工作液的色谱图如图5所示，浓度为1126.118ug/mL的标准工作液的色谱图如图6所示，实施例1的三丁酸甘油酯粉末样品的色谱图如图7所示。
实施例2
三丁酸甘油酯粉末样品的质量为0.1324g，用丙酮溶解并定容，其余条件与实施例1均相同。由气相色谱仪测得的峰面积为278169，将278169代入标准曲线方程得到样品待测液的三丁酸甘油酯浓度为403.891μg/mL。由三丁酸甘油酯的含量和浓度公式得到三丁酸甘油酯含量为30.505％。
实施例2的三丁酸甘油酯粉末样品的色谱图如图8所示。
实施例3
根据实施例1的方法对同一个三丁酸甘油酯粉末样品进行多次重复测试，结果如表1所示。
表1重复性试验结果(n＝7)
由表1可知，对同一个三丁酸甘油酯粉末样品重复测定7次，RSD＝1.71％，结果表明本发明的方法重复性好。
对比例1
配制浓度为100μg/mL、50μg/mL、33μg/mL、25μg/mL和20μg/mL的标准工作液，浓度为400μg/mL的三丁酸甘油酯样品待测液，其他条件与步骤1)均相同。对浓度为400μg/mL的样品待测液重复测试7次，测定其三丁酸甘油酯含量。
对比例1测试7次的相对标准偏差RSD＝3.5％。
实施例4
在三份质量(m)均为0.1163g、含量均为30.62％的三丁酸甘油酯样品中添加不同质量(m’)三丁酸甘油酯标准品，按实施例1中的方法进行样品处理及测试，计算三丁酸甘油酯的平均回收率，结果如表2所示。
表2回收率实验(n＝3)
由表2可知，在质量均为0.1163g、三丁酸甘油酯含量均为30.62％的三丁酸甘油酯样品中分别添加0.02002g、0.04003g、0.06005g三丁酸甘油酯标准品，加正己烷分别定容至100mL后进行测试，得到峰面积。通过标准曲线方程计算得到三丁酸甘油酯浓度，并且通过三丁酸甘油酯浓度计算得到加标测定含量。峰面积、三丁酸甘油酯浓度和加标测定含量如表2所示。
加标理论含量(％)＝(样品含量×m+m’×98％)/(m+m’)×100，回收率(％)＝加标测定含量/加标理论含量×100；利用上述公式分别计算序号1、2、3的加标理论含量和回收率。结果表明，三丁酸甘油酯回收率在98.8～100.2％之间，测定结果准确可靠。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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