一种阿加曲班杂质g的制备方法
阅读说明：本技术 一种阿加曲班杂质g的制备方法 (Preparation method of argatroban impurity G ) 是由 宋更申 陈艾夫 刘兆国 于 2020-12-25 设计创作，主要内容包括：本发明属于医药化合物的合成领域,具体涉及一种阿加曲班杂质G的制备方法,包括阿加曲班盐在精氨酸酶和锰离子的催化作用下进行水解得到阿加曲班杂质G盐的步骤。本发明所述合成方法成功制备得到了纯度＞98％的阿加曲班杂质G,且路线合理,操作方法简单易行,收率高,纯度高。(The invention belongs to the field of synthesis of medical compounds, and particularly relates to a preparation method of argatroban impurity G. The synthesis method successfully prepares the argatroban impurity G with the purity of more than 98 percent, and has the advantages of reasonable route, simple and easy operation method, high yield and high purity.)
技术领域
本发明属于医药化合物的合成领域，具体涉及一种阿加曲班杂质G的制备方法。
背景技术
阿加曲班是一种新型抗凝血酶活性物质，为静脉注射剂，已在多国上市，临床应用前景良好。研究表明，阿加曲班在合成和贮存过程中，易产生分解产物阿加曲班杂质G【(2R,4R)-4-甲基-1-[N-[(3-甲基-1,2,3,4-四氢-8-喹啉基)磺酰]-L-鸟氨酰]-2-哌啶甲酸】，其结构式如下：
分子式：C22H34N4O5S
分子量：466.60
CAS号：188659-43-0
阿加曲班杂质G为降解杂质和工艺杂质，为保证产品质量，需要对杂质G进行定性定量检测，因此，需要获得该杂质的对照品。
专利(CN201410254533.2)公开了阿加曲班杂质G的合成，其方法为使用强碱高温破坏水解阿加曲班，将其分子结构中的胍基水解成末端伯氨基，使用的强碱为氢氧化钡、氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾水溶液，温度为60～100℃。经过实验，该条件下水解程度较低且杂质较多，由于阿加曲班结构中有多个可水解基团(酰胺基、胍基、磺酰胺基，且胍基水解会产生脲中间态)，分离难度较大，导致产品收率及纯化效率极低，增加杂质制备的难度。
发明内容
针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种阿加曲班杂质G的制备方法，包括阿加曲班盐在精氨酸酶和锰离子的催化作用下进行水解的步骤。
本发明发现，阿加曲班在水中溶解性较差，成阿加曲班盐后水溶解性较好，在精氨酸酶和锰离子存在的条件下可高效地发生水解反应生成阿加曲班杂质G盐，上述水解反应副反应少，产生的杂质少，后期的纯化分离步骤简单，处理后可获得大量高纯度的阿加曲班杂质G。
优选的，所述精氨酸酶为固定化精氨酸酶。固定化精氨酸酶方便过滤后循环使用，更适用于工业化的大规模生产。
优选的，所述阿加曲班盐为阿加曲班盐酸盐。一般生产的过程中，通过向阿加曲班中添加盐酸反应生成阿加曲班盐酸盐。与其他盐相比，阿加曲班盐酸盐的后处理更容易，其他盐的后处理如硫酸盐等相对困难。
优选的，通过向阿加曲班溶液中添加酸至体系的pH为7～8制备得到阿加曲班盐。
优选的，以所述阿加曲班盐中的阿加曲班计，与所述精氨酸酶的质量比为1：0.1～0.25。在上述用量下精氨酸酶可更理想地发挥催化作用。
优选的，以所述阿加曲班盐中的阿加曲班计，与所述锰离子的质量比为1：0.01～0.02。在上述用量下锰离子可更理想地发挥催化作用
优选的，水解反应的温度为20～40℃。
进一步优选的，水解反应的温度为35～40℃。
更进一步优选的，水解反应的温度为34～36℃
优选的，通过薄层色谱显色来监测反应的终点。具体的，用薄层色谱对所述反应液进行展开，若无显色反应，说明反应已完毕。
优选的，薄层色谱显色过程中采用的展开剂为二氯甲烷和甲醇的体积比为1:4.8～5.2的混合液。
优选的，还包括向所述阿加曲班杂质G盐添加碳酸铵或碳酸氢铵脱盐制备阿加曲班杂质G的步骤。
作为优选的操作方式，将反应得到的阿加曲班杂质G盐通过包括如下步骤的方法进行脱盐处理：
1)将水解反应后得到的反应液浓缩至干，用水复溶，活性炭脱色，过滤去除活性炭后向滤液中加入无水乙醇，至阿加曲班杂质G盐析出；
2)用水将所述阿加曲班杂质G盐溶解，加入碳酸铵，至无气泡产生，加入乙酸乙酯对溶液中的阿加曲班杂质G进行萃取，挥干乙酸乙酯，得阿加曲班杂质G。
作为优选的操作方式，包括如下步骤：
阿加曲班盐酸盐在精氨酸酶和锰离子的催化作用下进行水解得到阿加曲班杂质G盐；所述阿加曲班与精氨酸酶的质量比为1：0.48～0.52所述阿加曲班与锰离子的质量比为1：0.014～0.016，反应的温度为34～36℃。
本发明具有如下有益效果：
本发明所述合成方法成功制备得到了高纯度的阿加曲班杂质G，理想情况下其纯度＞98％，且合成路线合理，操作方法简单易行，收率高，纯度高。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例提供一种阿加曲班杂质G的制备，其具体步骤如下：
1)于1L三口反应瓶中加入20g阿加曲班，加入3.5ml盐酸(12mol/L)，水100ml室温搅拌至溶清，得阿加曲班盐酸盐水溶液；反应液中加入固定化精氨酸酶4g，0.31g四水合氯化锰，35℃水浴加热，搅拌速率150rpm搅拌，反应12小时；
取样薄层色谱法监控反应，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝1:5，至阿加曲班原料点不再显色，结束反应；
2)过滤反应液，滤液在60℃，-0.09MPa减压浓缩至干，得类白色固体；加入纯化水40g，搅拌溶解浓缩产物，加入活性炭2g，脱色30分钟，过滤，滤液滴加无水乙醇80g，析出白色粉末，降至0℃析晶2h，过滤得阿加曲班杂质G盐酸盐；
3)将阿加曲班杂质G盐酸盐用40g水溶解，加入碳酸铵4g，产生大量气泡，搅拌至无气泡生成，测pH值为中性，加入乙酸乙酯40ml*3次萃取，合并有机相，用饱和食盐水60ml洗涤有机相，取无水硫酸钠20g对所述在机相干燥30分钟，过滤，滤液浓缩干，加入石油醚100ml打浆，过滤，50℃鼓风干燥，得类白色粉末阿加曲班杂质G，称重13.15g，收率71.66％，纯度(HPLC)98.65％。产物检定：MS(m/z)，理论值466.2266，实测值467.2279[M+H]+。
实施例2
本实施例提供一种阿加曲班杂质G的制备，其具体步骤如下：
1)于1L三口反应瓶中加入20g阿加曲班，加入7ml盐酸(12mol/L)，水100ml室温搅拌至溶清，得阿加曲班盐酸盐水溶液；反应液中加入固定化精氨酸酶2g，0.31g四水合氯化锰，35℃水浴加热，搅拌速率150rpm搅拌，反应18小时；
取样薄层色谱法监控反应，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝1:5，至阿加曲班原料点不再显色，结束反应；
2)过滤反应液，滤液60℃，-0.09MPa减压浓缩至干，得类白色固体；加入纯化水40g，搅拌溶解浓缩产物，加入活性炭2g，脱色30分钟，过滤，滤液滴加无水乙醇80g，析出白色粉末，降至0℃析晶2h，过滤得阿加曲班杂质G盐酸盐；
3)阿加曲班杂质G盐酸盐用40g水溶解，加入碳酸铵4g，产生大量气泡，搅拌至无气泡生成，测pH值为中性，加入乙酸乙酯40ml*3次萃取，合并有机相，饱和食盐水60ml洗涤有机相，无水硫酸钠20g干燥30分钟，过滤，滤液浓缩干，加入石油醚100ml打浆，过滤，50℃鼓风干燥，得类白色粉末阿加曲班杂质G，称重8.46g，收率46.10％，纯度(HPLC)95.66％。产物检定：MS(m/z)，理论值466.2258，实测值467.2279[M+H]+。
实施例3
本实施例提供一种阿加曲班杂质G的制备，其具体步骤如下：
1)于1L三口反应瓶中加入20g阿加曲班，加入3.5ml盐酸(12mol/L)，水100ml室温搅拌至溶清，得阿加曲班盐酸盐水溶液；反应液中加入固定化精氨酸酶4g，0.25g四水合氯化锰，40℃水浴加热，搅拌速率150rpm搅拌，反应12小时；取样薄层色谱法监控反应，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝1:5，阿加曲班原料点消失，结束反应；
2)过滤反应液，滤液60℃，-0.09MPa减压浓缩至干，得类白色固体；加入纯化水40g，搅拌溶解浓缩产物，加入活性炭2g，脱色30分钟，过滤，滤液滴加无水乙醇80g，析出白色粉末，降至0℃析晶2h，过滤得阿加曲班杂质G盐酸盐；
3)阿加曲班杂质G盐酸盐用40g水溶解，加入碳酸铵4g，产生大量气泡，搅拌至无气泡生成，测pH值为中性，加入乙酸乙酯40ml*3次萃取，合并有机相，饱和食盐水60ml洗涤有机相，无水硫酸钠20g干燥30分钟，过滤，滤液浓缩干，加入石油醚100ml打浆，过滤，50℃鼓风干燥，得类白色粉末阿加曲班杂质G，称重11.84g，收率64.52％，纯度(HPLC)97.77％。产物检定：MS(m/z)，理论值466.2257，实测值467.2279[M+H]+。
实施例4
本实施例提供一种阿加曲班杂质G的制备，其具体步骤如下：
1)于1L三口反应瓶中加入20g阿加曲班，加入6ml盐酸(12mol/L)，水100ml室温搅拌至溶清，得阿加曲班盐酸盐水溶液；反应液中加入固定化精氨酸酶3g，0.40g四水合氯化锰，20℃水浴加热，搅拌速率150rpm搅拌，反应8小时；取样薄层色谱法监控反应，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝1:5，阿加曲班原料点消失，结束反应；
2)过滤反应液，滤液60℃，-0.09MPa减压浓缩至干，得类白色固体；加入纯化水40g，搅拌溶解浓缩产物，加入活性炭2g，脱色30分钟，过滤，滤液滴加无水乙醇80g，析出白色粉末，降至0℃析晶2h，过滤得阿加曲班杂质G盐酸盐；
3)阿加曲班杂质G盐酸盐用40g水溶解，加入碳酸铵4g，产生大量气泡，搅拌至无气泡生成，测pH值为中性，加入乙酸乙酯40ml*3次萃取，合并有机相，饱和食盐水60ml洗涤，无水硫酸钠20g干燥30分钟，过滤，滤液浓缩干，加入石油醚100ml打浆，过滤，50℃鼓风干燥，得类白色粉末阿加曲班杂质G，称重10.43g，收率56.84％，纯度(HPLC)98.01％。产物检定：MS(m/z)，理论值466.2270，实测值467.2279[M+H]+。
对比例
CN105273045A公开了一种由阿加曲班经过强碱水解共1步反应得到有关物质B(即杂质G)的方法。其中实施例三、四、五以氢氧化钙、氢氧化钡、氢氧化钾、氢氧化钠水溶液，回流破坏阿加曲班，得到阿加曲班杂质G。该实施例以阿加曲班计，阿加曲班杂质G的收率为9.8％～14.5％，纯度为88.7％～93.6％。
比较可知，本发明所述阿加曲班杂质G的合成方法收率、纯度显著高于对比例。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
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