一种高效液相色谱法检测萘普生钠软胶囊中有关物质的方法
阅读说明：本技术 一种高效液相色谱法检测萘普生钠软胶囊中有关物质的方法 (Method for detecting related substances in naproxen sodium soft capsule by high performance liquid chromatography ) 是由 林娟 张宇 李柏园 李琳 沈福星 于 2020-11-26 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种高效液相色谱法检测萘普生钠软胶囊中有关物质的方法,所述方法利用高效液相色谱法对萘普生钠软胶囊样品溶液进行检测；所述流动相为：流动相A：pH为5.0的醋酸铵溶液；流动相B：乙腈；所述稀释剂为：水：乙腈,水与乙腈的比例为60:40；所述空白溶液为稀释剂；所述高效液相色谱法检测中采用梯度法。(The invention discloses a method for detecting related substances in a naproxen sodium soft capsule by using a high performance liquid chromatography, wherein the method is used for detecting a naproxen sodium soft capsule sample solution by using the high performance liquid chromatography; the mobile phase is as follows: mobile phase A: ammonium acetate solution at pH 5.0; mobile phase B: acetonitrile; the diluent is as follows: water: acetonitrile, wherein the ratio of water to acetonitrile is 60: 40; the blank solution is a diluent; the high performance liquid chromatography detection adopts a gradient method.)
技术领域
本发明属于药品质量检测技术领域，具体涉及一种高效液相色谱法检测萘普生钠软胶囊中有关物质的方法。
背景技术
萘普生钠，英文名:Naprofen Sodium，化学式:C14H13NaO3，分子量： 252.24，结构式：萘普生钠为非甾体抗炎药，适用于缓解各种轻度至中等度的疼痛，如拔牙及其他手术后的疼痛、原发性痛经及头痛等，也适用于类风湿关节炎、骨关节炎、强直性脊柱炎、幼年型关节滑囊炎及急性痛风性关节炎，对于关节炎的疼痛、肿胀及活动受限均有缓解症状的作用。
萘普生钠原料在生产过程中会产生工艺杂质A,杂质K，杂质L，杂质E，杂质F，杂质O，杂质L，杂质N，杂质M，杂质I，同时杂质A，K，L也是降解杂质。萘普生钠软胶囊成品会产生降解杂质萘普生甘油酯、萘普生 PEG600酯、萘普生山梨醇和山梨糖醇酯、萘普生丙烯酯。经过检索，现没有发现一个能同时检测萘普生钠软胶囊中这7种杂质和分离14种杂质的文献报道。萘普生钠软胶囊，属解热消炎镇痛药。因此，建立一套科学有效的、能同时测定14种杂质的分析方法，对于更广泛、更有效的控制产品质量，具有重要的应用价值。
现需开发一种方法能够简单、快速、准确地检测出萘普生钠软胶囊中的有关物质，且各峰间能够被有效地分离。
发明内容
本发明的目的在于利用高效液相色谱法对萘普生钠软胶囊样品进行检测，提供一种检测萘普生钠软胶囊中杂质的方法，本发明所提出的萘普生钠软胶囊样品中有关物质的检测方法，操作简单，成本低，能够快速、准确地检测出萘普生钠软胶囊样品中14种有关物质，各杂质之间能够有效分离；且本方法检测的杂质包含了萘普生钠原料药以及萘普生钠片中杂质，本发明方法同时可以适用萘普生钠以及其制剂有关物质检测，能更广泛、更有效的控制产品质量。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种高效液相色谱法检测萘普生钠软胶囊中有关物质的方法，所述方法利用高效液相色谱法对萘普生钠软胶囊样品溶液进行检测；所述流动相为：流动相A：pH为5.0的醋酸铵溶液；流动相B：乙腈；所述稀释剂为：水、乙腈，水与乙腈的比例为60:40；所述空白溶液为稀释剂；所述高效液相色谱法检测中采用梯度法，梯度表如下：
时间(min)
流动相A(V％)
流动相B(V％)
0
75
25
5
75
25
13
70
30
24
65
35
50
46
54
51
75
25
56
75
25
进一步的，所述流动相A的制备方法为称取0.77g醋酸铵溶解到1000ml 水中，用0.2μm滤膜过滤，然后用冰醋酸调pH至5.0，超声脱气制得。
进一步的，所述高效液相色谱法中的杂质对照溶液的浓度为0.88μ g/mL，其制备方法为：(1)精密称取44mg萘普生钠对照品于100mL的容量瓶中，加60mL稀释剂超声至溶解，用所述稀释剂稀释至刻度，摇匀得到浓度为440μg/mL的杂质对照储备溶液；(2)精密移取10.0mL(1)中的对照储备溶液于100mL的容量瓶中，用所述稀释剂稀释至刻度并摇匀，从摇匀后的溶液中精密移取2.0mL溶液于100mL的容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度并摇匀，即得到浓度为0.88μg/mL的杂质对照溶液。
进一步的，所述高效液相色谱法中的样品溶液的浓度为440μg/mL，其制备方法为：(1)准确称量20粒萘普生钠软胶囊的总重，并计算平均重量，取5粒萘普生钠软胶囊称重，投入250mL容量瓶，加入150mL所述稀释剂，置65度水浴并振摇20分钟，在机械振荡仪中振摇15分钟，取出冷却到室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，得到浓度为4400μg/mL的样品储备溶液；(2)精密移取5.0mL样品储备溶液于50mL的容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度并摇匀，用0.22μm的滤膜过滤，弃去4mL的初滤液，取澄清续滤液作为样品溶液，得到浓度为440μg/mL的样品溶液。
进一步的，所述高效液相色谱法中的杂质鉴别溶液的浓度为0.88μ g/mL，其制备方法为：精密称取4.4mg杂质A，杂质K，和杂质L于50mL 的容量瓶中，加30mL稀释剂超声至溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，精密移取1.0mL上述溶液于100mL的容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度并摇匀即得浓度为0.88μg/mL的杂质鉴别溶液。
进一步的，所述高效液相色谱仪色谱条件为：色谱柱：X-Terra RP 18， 3.5μm，柱温37-43℃，检测器为紫外吸收检测器，流速0.8-1.2mL/min，检测波长236nm，进样体积10μL。
进一步的，所述高效液相色谱仪色谱条件为：色谱柱：X-Terra RP 18， 3.5μm，柱温38-42℃，检测器为紫外吸收检测器，流速0.8-1.2mL/min，检测波长236nm，进样体积10μL。
进一步的，所述高效液相色谱仪色谱条件为：色谱柱：X-Terra RP 18， 3.5μm，柱温40℃，检测器为紫外吸收检测器，流速1.0mL/min，检测波长236nm，进样体积10μL。
由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
(1)本发明所提出的萘普生钠软胶囊样品中有关物质的检测方法，操作简单，成本低，能够快速、准确地检测出萘普生钠软胶囊样品中14种有关物质，各杂质之间能够有效分离；
(2)本方法所检测的杂质包含了萘普生钠原料药以及萘普生钠片中杂质，本发明可以适用萘普生钠以及萘普生钠片有关物质检测，能更广泛、更有效的控制产品质量；
(3)本发明的方法各杂质RSD均小于5.0％，精密度良好；
(4)本发明的方法具有好的重现性；
(5)本发明的专属性强，准确度高，耐受性好，仪器灵敏度高。
附图说明
图1是本发明的空白溶液色谱图；
图2是本发明的杂质对照溶液(标准溶液)色谱图；
图3是本发明的样品溶液(供试品溶液)色谱图；
图4是本发明的加杂质色谱图；
图5是本发明的普生钠线性图；
图6是本发明的杂质A线性图；
图7是本发明的杂质L线性图；
图8是本发明的杂质K线性图；
图9是本发明的萘普生甘油酯线性图。
具体实施方式
为了使发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明所检测的杂质化学结构式如表1所示。
表1
具体实施例中高效液相色谱法采用如下色谱条件：
色谱柱：X-Terra RP 18,3.5μm,4.6×150mm or等同，柱温：40± 2℃，检测器：UV(紫外吸收检测器)，流速：1.0mL/min，波长：236nm，进样体积：10μL，运行时间：56min，洗针：延长，洗针液：30％甲醇。
流动相包括流动相A和流动相B，具体制备为：流动相A：称取0.77g 醋酸铵到1000ml水中溶解，用0.2μm滤膜过滤，然后用冰醋酸调pH至5.0，超声脱气得到流动相A；流动相B：乙腈。
所述高效液相色谱法检测中采用梯度法，梯度表如下：
时间(min)
流动相A(V％)
流动相B(V％)
0
75
25
5
75
25
13
70
30
24
65
35
50
46
54
51
75
25
56
75
25
溶液配制如下：
稀释剂：水：乙腈(600:400)。
空白溶液：稀释剂。
杂质对照储备溶液(440μg/mL)：精密称取44mg萘普生钠对照品于 100mL的容量瓶中，加60mL稀释剂超声至溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。
杂质对照溶液(0.88μg/mL)：精密移取10.0mL对照储备溶液于100mL 的容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，精密移取2.0mL上述溶液于100mL 的容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。
杂质鉴别溶液(0.88μg/mL)：精密称取4.4mg杂质A，杂质K，和杂质L于50mL的容量瓶中，加30mL稀释剂超声至溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，精密移取1.0mL上述溶液于100mL的容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。
样品储备溶液(4400μg/mL)：准确称量20粒胶囊的总重，并计算平均重量。取5粒软胶囊称重，投入250mL容量瓶，加入150mL稀释剂，置65 度水浴并振摇20分钟，在机械振荡仪中振摇15分钟。取出，冷却到室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。
样品溶液(440μg/mL)：精密移取5.0mL样品储备溶液于50mL的容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。用0.22μm的滤膜过滤，弃去4mL的初滤液，取澄清续滤液作为样品溶液。
本发明中高效液相色谱法的进样顺序采用如下顺序：
(1)进流动相，平衡液相系统直到基线稳定；
(2)进至少一针空白溶液和连续6针杂质对照溶液；
(3)每个样品溶液进一针，最多每12个样品溶液或供试品运行不超过4个小时(以时间短的为准)引入一针标准溶液。
(4)必要时，至少进1针空白溶液清除残留。
(5)在整个进样的最后，进至少1针空白溶液再回一针杂质对照溶液，确保所有杂质对照溶液的系统适应性符合要求。
实施例1:系统适应性试验
进样前的系统适应性，计算工作对照溶液第一针理论塔板数，应不少于3000，计算工作对照溶液第一针拖尾因子，不大于2.0，萘普生钠前6 针工作对照溶液的RSD不大于5.0％。
空白溶液在萘普生保留时间处无任何干扰峰。空白溶液色谱图见图1，
良好的系统适应性，稀释剂不干扰主峰，主峰理论塔板数：22857，主峰拖尾因子1.0，杂质对照品溶液主峰面积的RSD为0.9％。
进样后的系统适应性所有杂质对照溶液的RSD不大于5.0％。
杂质对照溶液(标准溶液)色谱图见图2；
样品溶液(供试品溶液)色谱图见图3；
加杂质色谱图见图4。
实施例2:良好的专属性
下表显示主峰及各杂质峰的保留时间及相对保留时间，可以看出主峰和各杂质峰之间互不干扰，杂质之间能有效分离。
名称
保留时间
相对保留时间
杂质A
4.792
0.38
杂质I
6.519
0.52
杂质O
7.444
0.59
萘普生山梨醇和山梨糖醇酯
8.801
0.70
萘普生钠
12.572
-
萘普生甘油酯1
14.706
1.17
萘普生甘油酯2
15.726
1.25
杂质K
16.918
1.35
杂质L
25.003
1.99
萘普生丙烯乙酯
27.132
2.16
PEG600酯
28.08～31.08
2.23～2.47
杂质M
33.710
2.68
杂质E
37.260
2.96
杂质F
43.260
3.44
杂质N
46.923
3.73
表2
实施例3：强降解试验
强降解试验：a.任何强降解试验中产生的杂质峰均不干扰主峰。b.主峰峰纯度阈值大于对照品及降解样品的峰纯度角。
样品
回收率％
纯度角
纯度阈值
对照
-
-
-
光照
96.1
0.344
1.363
高温
100.2
0.316
1.324
氧化
91.1
0.330
1.371
碱
104.3
0.241
1.336
酸
99.0
0.314
1.341
表3
实施例4：线性和范围
成分
标准曲线方程
R
萘普生钠
Y＝116049.7679x+194.2069
R＝1.0000
杂质A
Y＝111311.6433x-521.0616
R＝1.0000
杂质L
Y＝74475.2585x-289.8192
R＝0.9999
杂质K
Y＝100188.4567x+104.1250，
R＝1.0000
萘普生甘油酯
Y＝93878.3468x+626.3477
R＝1.0000
表4
结论：在LOQ-200％浓度范围，峰面积与浓度呈良好的线性关系。
实施例5：方法精密度
样品溶液重复进样6次，各杂质RSD均小于5.0％，结果显示方法精密度良好。
实施例6：中间精密度
不同的人，不同的天，采用不同的色谱柱和不同批号的试剂制备6份样品溶液，进样，各杂质RSD均小于5.0％,且各杂质之间二者差异均不超过 0.1％，结果显示，重现性良好。
实施例7：溶液稳定性
考察对照品溶液和样品溶液的稳定性，结果显示对照品溶液和样品溶液在96小时内稳定。
实施例8：耐用性
通过改变流速1.0±0.2ml/min，柱温40±3℃，流动相pH 5.0±0.2，有机相起始比例25±2％，测定样品溶液，与正常条件下所测溶液的结果进行比较，回收率的绝对差值均在10％以内，结果显示方法的耐受性良好。
实施例9：检测限和定量限
考察主峰的检测限和定量限，结果显示，检测限浓度相当于0.006％水平，信噪比S/N不小于3,定量限浓度相当于0.02％水平，信噪比S/N不小于10,％RSD均小于5.0％，结果显示仪器的灵敏度良好。
实施例10：滤膜过滤试验
考察滤膜过滤对样品有无干扰，结果显示，用滤膜过滤不同体积的样品与用离心机处理的样品溶液的回收率相近，均在95.0％-105.0％之间，表明滤膜过滤对样品无干扰。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。