小儿清热宣肺贴膏中栀子苷和苦杏仁苷的同时测定方法
阅读说明：本技术 小儿清热宣肺贴膏中栀子苷和苦杏仁苷的同时测定方法 (Method for simultaneously measuring geniposide and amygdalin in children heat-clearing lung-ventilating plaster ) 是由 王保安 李兴科 于 2020-12-01 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种同时测定小儿清热宣肺贴膏中栀子苷和苦杏仁苷的方法。所公开的方法包括：将待测小儿清热宣肺贴膏用甲醇超声浸泡、过滤,所得滤液为待测样；以对照样的液相色谱测定结果为参照,采用液相色谱测定所述待测样中栀子苷和苦杏仁苷的含量,对照样为合理浓度的栀子苷和苦杏仁苷甲醇溶液；测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶、检测波长为207nm、柱温25℃±1、流动相为流动相A和流动相B的混合液,流动相A为乙腈或甲醇,流动相B为磷酸溶液或甲酸溶液。本发明采用合适条件对不同化合物的吸附能力不同以达到对小儿宣清热肺贴膏中两种有效成分栀子苷和苦杏仁苷的分离,实现一次测定完成两种有效成分的定性和定量分析。(The invention discloses a method for simultaneously measuring geniposide and amygdalin in a plaster for clearing heat and ventilating lung of children. The disclosed method comprises: ultrasonically soaking the heat-clearing lung-ventilating plaster for the child to be tested by using methanol, and filtering to obtain filtrate as a sample to be tested; taking the liquid chromatography measurement result of a reference sample as a reference, and measuring the contents of the geniposide and the amygdalin in the sample to be measured by adopting liquid chromatography, wherein the reference sample is a methanol solution of the geniposide and the amygdalin with reasonable concentrations; the measurement conditions were: the filler is octadecylsilane chemically bonded silica, the detection wavelength is 207nm, the column temperature is 25 +/-1 ℃, the mobile phase is a mixed solution of a mobile phase A and a mobile phase B, the mobile phase A is acetonitrile or methanol, and the mobile phase B is a phosphoric acid solution or a formic acid solution. The invention adopts different adsorption capacities to different compounds under proper conditions to separate the jasminoidin and the amygdalin which are two effective components in the plaster for dispersing and clearing heat in children, and realizes one-time determination to finish qualitative and quantitative analysis of the two effective components.)
技术领域
本发明涉及小儿清热宣肺贴膏中有效成分测定方法，具体涉及一种采用HPLC法同时测定小儿清热宣肺贴膏中两种有效成分栀子苷和苦杏仁苷的方法。
背景技术
小儿清热宣肺贴膏是一种常用的儿科用药，用于缓解小儿急性支气管炎所致的咳嗽、咯痰，或伴鼻塞流涕、低热等症状。该药处方由生栀子、苦杏仁、红花、桃仁四味药材组成。大量研究表明生栀子中的栀子苷和苦杏仁中苦杏仁苷是其中具有代表性的两种有效成分。
目前主要采用薄层色谱法对两种有效成分进行定性检测；或采用HPLC法对两种有效成分中的一种进行定性和定量检测。这两种方法都无法同时对两种有效成分进行定性和定量分析，没有较好的控制小儿清热宣肺贴膏的产品质量。
发明内容
针对现有技术的缺陷或不足，本发明的目的在于一种同时测定小儿清热宣肺贴膏中栀子苷和苦杏仁苷的方法。
为此本发明提供的同时测定小儿清热宣肺贴膏中栀子苷和苦杏仁苷的方法包括：
样品提取：将待测小儿清热宣肺贴膏用甲醇超声浸泡、过滤，所得滤液为待测样；
以对照样的液相色谱测定结果为参照，采用液相色谱测定所述待测样中栀子苷和苦杏仁苷的含量，所述对照样为合理浓度的栀子苷和苦杏仁苷甲醇溶液；所述液相色谱测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶、检测波长为207nm、柱温25℃±1、流动相为流动相A和流动相B的混合液，所述流动相A为乙腈或甲醇，所述流动相B为质量浓度0.1～0.5％磷酸溶液或质量浓度0.5～1.0％的甲酸溶液。其中柱温优选25℃。
进一步，所述流动相A与流动相B混合体积比为(7～15)﹕(85～93)。
进一步，所述对照样的合理浓度为：栀子苷16μg/ml；苦杏仁苷20μg/ml。
进一步，所述样品提取包括：药品除去盖衬，裁剪、称定、剪碎得碎样；之后用定量甲醇超声浸泡碎样合理时间；接着称定后用甲醇补充至浸泡前重量；然后混匀、过滤，取适量滤液用甲醇稀释得待测样。
与现有技术相比，本发明采用合适条件对不同化合物的吸附能力不同以达到对小儿宣清热肺贴膏中两种有效成分栀子苷和苦杏仁苷的分离，实现一次测定完成两种有效成分的定性和定量分析。该测定方法可以很好控制“小儿清热宣肺贴膏”药品的质量，达到成本与收益比最大化。
附图说明
图1是实施例1的小儿清热宣肺贴膏中两种有效成分完全分离的液相色谱图，横坐标为时间，单位：min。
具体实施方式
除非另有说明，本文中的术语根据本领技术人员的常规认识理解。
在本发明构思及目的基础上，本发明方法中的流动相A和流动相B的体积比、对照样的合理浓度、药品的初次称定量、浸泡时甲醇的用量、滤液取样量以及稀释浓度可根据具体的药品采取本领域常规的实验方法进行确定。
为了确保公开充分，下面结合具体附图和实施方式进行详细描述，本说明中描述的实施例仅用于解释本发明，并非用来限定本发明。
以下实施例中所用栀子苷和苦杏仁苷分别购自成都普思生物技术有限公司提供，批号分别为115810-12-3、115810-13-4，纯度均大于98％。待测小儿清热宣肺贴膏(供试品)为陕西摩美得气血和制药有限公司产品(批号20190501)。
实施例1：
该实施例采用HPLC法同时测定小儿清热宣肺贴膏中两种有效成分栀子苷和苦杏仁苷含量：
精密称取栀子苷对照品16.2mg和苦杏仁苷对照品20.4mg置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，再精密吸取0.5ml，0.8ml，1.0ml，1.2ml，1.5ml分别置10ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀；
供试品处理：取本品，除去盖衬，裁成直径6cm，精密称定，剪碎，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量浓度0.1％磷酸溶液为流动相B，流动相A与流动相B按7：93混合过滤后作为流动相；检测波长为207nm；柱温：25℃；理论板数按栀子苷峰和苦杏仁苷峰计算都应不低于3000；
记录对照品的色谱图，以浓度对峰面积进行线性回归，栀子苷的回归方程为y＝2E+06x+1416.1，R2＝1.0，苦杏仁苷的回归方程为y＝2E+06x+60.9，R2＝1.0；该结果说明栀子苷在0.1021μg～0.3062μg，苦杏仁苷在0.0811μg～0.2433μg进样量范围内，进样量与峰面积值呈良好的线性关系；
供试品结果如图1所示。
实施例2：
该实施例与实施例1不同的是：
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以质量浓度0.1％磷酸溶液为流动相B，流动相A与流动相B按15：85混合过滤后作为流动相；检测波长为207nm；柱温：25℃；理论板数按栀子苷峰和苦杏仁苷峰计算都应不低于3000。
实施例3：
该实施例与实施例1不同的是：
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量浓度0.5％甲酸溶液为流动相B，流动相A与流动相B按8：92混合过滤后作为流动相；检测波长为207nm；柱温：25℃；理论板数按栀子苷峰和苦杏仁苷峰计算都应不低于3000。
实施例4：
该实施例与实施例1不同的是：
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以质量浓度0.5％甲酸溶液为流动相B，流动相A与流动相B按15：85混合过滤后作为流动相；检测波长为207nm；柱温：25℃；理论板数按栀子苷峰和苦杏仁苷峰计算都应不低于3000。
实施例5：
该实施例与实施例1不同的是：
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量浓度0.3％磷酸溶液为流动相B，流动相A与流动相B按8：92混合过滤后作为流动相；检测波长为207nm；柱温：25℃；理论板数按栀子苷峰和苦杏仁苷峰计算都应不低于3000。
实施例6：
该实施例与实施例1不同的是：
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以质量浓度0.5％磷酸溶液为流动相B，流动相A与流动相B按12：88混合过滤后作为流动相；检测波长为207nm；柱温：25℃；理论板数按栀子苷峰和苦杏仁苷峰计算都应不低于3000。
实施例7：
该实施例与实施例1不同的是：
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以质量浓度0.8％甲酸溶液为流动相B，流动相A与流动相B按9：91混合过滤后作为流动相；检测波长为207nm；柱温：25℃；理论板数按栀子苷峰和苦杏仁苷峰计算都应不低于3000。
实施例8：
该实施例与实施例1不同的是：
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以质量浓度1.0％磷酸溶液为流动相B，流动相A与流动相B按10：90混合过滤后作为流动相；检测波长为207nm；柱温：25℃；理论板数按栀子苷峰和苦杏仁苷峰计算都应不低于3000。
实施例9：
取栀子苷对照品、苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含栀子苷16μg，苦杏仁苷20μg的混合溶液作为对照品溶液；
取待测药品，除去盖衬，裁成直径6cm，精密称定，剪碎，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
按小儿宣肺贴膏制备工艺制备缺生栀子和苦杏仁的阴性样品，取2片照供试品溶液制备方法值得阴性对照溶液；
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液、阴性对照溶液各10μl注入液相色谱仪，按照实施例1所述方法测定。
结果显示供试品溶液HPLC图谱中栀子苷色谱峰的保留时间约为31.213min，苦杏仁苷色谱峰的保留时间为21.394min(参考图1)，栀子苷色谱峰和苦杏仁苷色谱峰与相邻色谱峰之间分离良好；栀子苷色谱峰和苦杏仁苷色谱峰的峰形良好；阴性对照溶液色谱中，在与栀子苷色谱峰和苦杏仁苷色谱峰相对应的位置上未见色谱峰，阴性对照无干扰。因此，本品采用HPLC法同时测定小儿宣肺贴膏中两种有效成分栀子苷和苦杏仁苷的方法可行。
实施例10：
精密吸取实施例9中对照品溶液10μl注入液相色谱仪，连续进样6次,记录色谱图。
表1进样精密度试验数据
表1所示结果说明，色谱条件栀子苷峰面积RSD为0.72％，苦杏仁苷峰面积RSD为1.05％，试验进样精密度符合规定。
实施例11：
精密吸取实施例9中供试品溶液10μl注入液相色谱仪，每隔2小时进样10μl，共测定7次，即分别于0、2、4、6、8、10、12小时进样测定，以峰面积计算相对标准偏差，考察供试品溶液的稳定性。
表2溶液稳定性试验数据
表2所示结果说明：栀子苷7次测定峰面积平均值为402065.1，RSD为0.82％；苦杏仁苷7次测定峰面积平均值为384047.0，RSD为0.94％；说明供试品溶液在12小时内稳定性良好。
实施例12：
取已知含量的药品，除去盖衬，裁成直径2.42cm，精密称定，剪碎，置具塞锥形瓶中，共取9份，分别精密加入甲醇100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中；
按每3份为一组，分别按所称取样品中栀子苷和苦杏仁苷含量的80％、100％、120％，精密加入混合对照品，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，并按上述色谱条件测试，照下式计算回收率，结果见表3和表4。结果平均回收率为99.52％，RSD为1.74％。
回收率(％)＝测得量—样品中含量÷加入量×100。
表3栀子苷回收率试验数据
表4苦杏仁苷回收率试验数据
表3和4结果表明，药品按上述制备方法处理，并按上述色谱条件测定，回收率高，说明本发明的检测方法准确可靠。
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