Igfbp-2的肝素结合域在治疗代谢紊乱中的作用
阅读说明：本技术 Igfbp-2的肝素结合域在治疗代谢紊乱中的作用 (Role of heparin-binding domain of IGFBP-2 in treatment of metabolic disorders ) 是由 D·克莱蒙斯 T·德拉勒 S·米拉诺 T·阿布里巴 于 2019-05-23 设计创作，主要内容包括：本技术通常涉及化合物,特别是涉及用于调节代谢紊乱的肽,其包含胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的肝素结合域(HBD)。本技术通常还涉及此类化合物在预防和/或治疗代谢紊乱的方法中的用途以及在用于此类用途的组合物和制剂中的用途。(The present technology relates generally to compounds, and in particular to peptides comprising the Heparin Binding Domain (HBD) of insulin-like growth factor binding protein-2 (IGFBP-2) for use in the regulation of metabolic disorders. The present technology also relates generally to the use of such compounds in methods of preventing and/or treating metabolic disorders and in compositions and formulations for such use.)
具体实施方式
给出以下实施例以便说明本技术的各种实施方案的实践。它们无意于限制或定义该技术的整个范围。应当理解，该技术不限于本文描述和示出的特定实施例，而是包括落入如所附实施例所限定的本公开范围内的所有修改和变化。
实施例1：HBD1肽改善体内葡萄糖耐量
在适应实验室条件7天后，九周大的雄性B6.V-Lepob/J.小鼠(Charles River)皮下注射3mg/kg媒介物(vehicle)(NaCl 0.9％)或如SEQ ID NO:73(C18:0-HLGLEEPKK)中列出的肽(每组n＝5只动物)，每天2次，注射15天。在第15天，给禁食(过夜)的小鼠腹膜内注射1g/kg的葡萄糖。葡萄糖注射后45分钟记录血浆血糖(以mmol/L表示)。结果显示在图1中。结果显示，施用HBD1肽降低了IP葡萄糖耐量试验的血浆葡萄糖水平，从而表明HBD1肽在血糖控制中的作用。这些结果支持将HBD1肽用于治疗与葡萄糖不耐受或胰岛素抵抗相关的临床病症，例如但不限于2型糖尿病、瘦素缺乏症、瘦素受体缺乏症和极端胰岛素抵抗综合症。
实施例2：HBD1肽对瘦素缺乏症小鼠的葡萄糖耐量的影响
为了进一步评估HBD1肽对葡萄糖和胰岛素代谢的影响，在每日两次施用HBD肽、连续28天后，在葡萄糖遥测肥胖ob/ob小鼠中评估基础血糖和对腹膜内葡萄糖耐量测试(IPGTT)的葡萄糖反应。葡萄糖遥测装置(HD-XG，数据科学国际)的植入根据已知方案进行。
在每日两次给药之间，以8小时±1小时的间隔，每日给药两次一定剂量的如SEQID NO:73的HBD肽片段(C18:0-HLGLEEPKK)。对24只V-Lepob/J(Ob/Ob)雄性小鼠(TheJackson Laboratory,Farmington,CT USA)皮下注射vehicle(NaCl 0.9％)(对照组)或以1mg/kg和3mg/kg的肽皮下给药(测试组)(每组n＝5-8只动物)每天两次，共28天。给药的第一天被指定为第一天。使用无菌注射器进行小块注射，并将针头插入皮下，轮流使用2-4个注射部位。在第一次注射之前修剪注射区域的动物毛发，然后在治疗期间根据需要进行修剪。给药体积为5mL/kg/次。使用最新体重计算个体剂量。在第27天，在正常进食条件下评估16小时平均血糖水平。在第28天，给禁食(4小时)的小鼠腹膜内注射1g/kg的葡萄糖。注射葡萄糖后，每分钟记录一次血浆葡萄糖曲线(以mg/dL表示)直至3小时。
腹膜内葡萄糖耐量测试(IPGTT)-在IGPTT日的早晨(第28天)，用vehicle或HBD片段治疗禁食2小时的动物。给药后2小时±15分钟施用葡萄糖溶液(vehicle或如SEQ ID NO:73所示肽(C18:0-HLGLEEPKK)，监测从禁食前10分钟(禁食状态)至葡萄糖激发后3小时的血糖。葡萄糖激发后4小时重新施用食物，食物重新施用后2小时进行当天的第二次处理(HBD片段或vehicle)。
显示在图2和图3A-3B中的结果表明，在葡萄糖遥测的ob/ob小鼠中，HBD1片段SEQID NO:73以剂量依赖的方式改善了葡萄糖不耐受，该小鼠是瘦素缺乏症导致胰岛素抵抗和葡萄糖耐受不良的小鼠模型。图2显示，在施用4周后，测试肽降低了空腹血糖水平和IPGTT后的葡萄糖波动。在3mg/kg的剂量下观察到显著效果。图3A-3B还显示了对葡萄糖控制的积极作用，因为测试肽能够显著降低这些在基线时表现出严重高血糖的小鼠的16小时平均血糖水平。
实施例3：HBD1肽对体外脂肪细胞摄取葡萄糖的影响
为了进一步测试HBD1肽对葡萄糖代谢的影响，检测了HBD1肽增加培养的、完全分化的3T3-LI脂肪细胞的葡萄糖摄取的能力。3T3-LI细胞是一种小鼠成纤维细胞系，在特定条件下培养时会分化为脂肪细胞。
使用以下方案实现3T3-LI细胞向脂肪细胞的分化。将3T3-L1细胞接种在24孔板中，并在3T3-L1维持培养基(含10％胎牛血清，4mM L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠的DMEM)中培养直至细胞100％汇合。然后向细胞中加入3T3-L1维持培养基，再培养48小时。为了开始分化为脂肪细胞，将培养基更换为分化培养基1(含有10％胎牛血清，4mM L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠，0.5mM IBMX，0.25mM地塞米松1mg/ml胰岛素的DMEM)，并继续培养2天。然后将培养基换成分化培养基2(含有10％胎牛血清，4mM L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠，1mg/ml胰岛素的DMEM)，并继续培养2天。然后将培养基换成脂肪细胞维持培养基(含有10％胎牛血清，4mML-谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠的DMEM)，并继续培养7天。在此期间，培养基每隔一天更换一次。现在完全分化的脂肪细胞用于葡萄糖摄取实验(从分化开始的第11天)。待测试的HBD1肽的储备溶液是通过在无菌条件下在层流柜中用0.9％NaCl溶液稀释至1mg/ml的浓度(基于净肽含量)来制备的。通过轻轻倒置将溶液均质化。从储备溶液中制备测试溶液，将剩余的储备溶液等分并保存在-20℃下，无需重复进行冻融循环即可使用。
使用以下方案进行葡萄糖摄取实验。在开始实验之前，先加入100ml克雷布斯林格碳酸氢盐缓冲液(Krebs Ringer bicarbonate buffer，KRBB)(25mM Hepes pH 7.4、118mMNaCl，5mM NaHCO3、4.7mM KCl，1.2mM KH2PO4、1.2mM MgSO4、2.5mM CaCl2、0.2％BSA-使用0.2-M过滤器过滤)和100ml孵育培养基(含有4mM L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠，1％青霉素-链霉素，0.2％BSA的DMEM-使用0.2M-过滤器过滤)预热至37℃，将500毫升KRBB在冰上冷却。在预热的孵育培养基和预热的KRBB中将测试化合物的储备溶液稀释至终浓度为3μ浓度为化。预先在无菌0.9％NaCl中按1:1000稀释的胰岛素(阳性对照)在10ml的培养基和缓冲液中进一步稀释至终浓度为1nM。使用细尖小心地从细胞中除去所有痕量培养基。将包含检测化合物或vehicle的1ml孵育培养基添加到适当的孔中。此时未添加胰岛素。将该板在37℃孵育24小时。孵育期结束后，从孔中取出培养基，并用300孵育含有适当测试物质或vehicle的预热KRBB洗涤适当孔中的细胞。然后从适当的孔的细胞中除去洗涤缓冲液，并用270除去的预热KRBB替代，其中包含测试物质、vehicle或胰岛素，并在37℃下继续孵育20分钟。在孵育期间，如下制备10x 2-脱氧葡萄糖的混合物：985μ8KRBB，10μl10 mM 2-脱氧葡萄糖，5μ氧[3H]-2-脱氧葡萄糖(1mCi/ml)。在20分钟的孵育期结束时，将30的孵的10×2-脱氧葡萄糖混合物添加到所有孔中，并在37℃下再孵育10分钟。从孔中除去缓冲溶液，并用1ml冰冷的KRBB将细胞洗涤3次。向所有孔中添加100μ0的0.5N NaOH，并在室温下孵育30分钟。将50μ0所得细胞裂解物转移至白色96孔板。向所有孔中加入200μ0Microscint 20，盖上盖玻片，在室温下振摇30分钟。通过闪烁计数确定每个孔的[3H]-2-脱氧葡萄糖含量的定量。
所述测定中测试了以下HBD1肽：SEQ ID NO:1(KHHLGLEEPKKLR)，SEQ ID NO:10(HLGLEEPKK)，SEQ ID NO:16(HHLGLEEPKK)和SEQ ID NO:73(C18:0-HLGLEEPKK)，以确定对3T3-LI脂肪细胞摄取葡萄糖的影响。HBD1肽孵育分化的3T3-LI脂肪细胞后摄取葡萄糖的结果如图4所示。总而言之，所有测试的HBD1肽均刺激3T3-LI脂肪细胞摄取葡萄糖的增加。
实施例4：证明HBD1肽在体外对骨骼肌细胞摄取葡萄糖的作用，并证明HBD1肽利用与IGFBP2相同的受体和机制来增加葡萄糖摄取
先前的研究表明，胰岛素样生长因子2(IGFBP2)通过细胞表面受体，受体型蛋白酪氨酸磷酸酶-β(RPTPβ)来激活Akt和AMPK途径，从而增加葡萄糖的摄取(Assefa etal.2017)。进行以下研究以确定HBD1肽是否利用相同的受体和转导途径来增加葡萄糖摄取。使用培养的、完全分化的C2C12小鼠骨骼肌肌管进行研究。通过在24孔板中使用含25mM葡萄糖和10％胎牛血清的DMEM将C2C12细胞培养至汇合密度来制备细胞。此时，将培养基更换为分化培养基(含25mM葡萄糖和2％马血清的DMEM)培养6天，每三天更换一次培养基。将各种处理物在无血清培养基中稀释，并在用无血清培养基洗涤细胞后，将其加入细胞中，并孵育2小时或其他时间，具体取决于处理方法。在孵育期结束时，除去培养基并加入含有相同处理的1.0ml无葡萄糖克雷布斯林格碳酸氢盐缓冲液(pH 7.4)，并继续孵育10分钟。在10分钟的孵育期结束时，将3H-2-脱氧葡萄糖(0.5mCi/孔)(比活度＝8Ci/mmole)直接添加到所有孔中，并继续孵育10分钟。然后用冰冷的磷酸盐缓冲盐水冲洗孔3次，用0.5N NaOH提取细胞，并通过闪烁计数定量细胞裂解液的3H-2-脱氧葡萄糖含量。
除了使用6孔板外，以相同的方式制备细胞以用于信号研究。在分化培养基中孵育6天后，将细胞用无血清培养基洗涤。然后将各种处理添加到含有0.1％BSA的无血清培养基中。加入HBD1肽并孵育8小时。当利用IGF-1时，在加入IGF-1后孵育15分钟。孵育后，将细胞在RIPA缓冲液中裂解并超声处理。离心细胞裂解物，并通过使用10％凝胶的SDS PAGE分析上清液中的Akt或AMPK，然后用适当的抗体进行免疫印迹。
当测试通过完全分化的C2C12小鼠骨骼肌肌管增加葡萄糖摄取的能力时，与vehicle治疗的对照相比，HBD1肽SEQ ID NO:73(C18:0-HLGLEEPKK)以剂量依赖性和时间依赖性的方式均刺激了葡萄糖摄取增加(图5A-5B)。此外，添加与胰岛素结合的HBD1肽SEQ IDNO:73(C18：0-HLGLEEPKK)产生了葡萄糖摄取的累积增加(图5C)。
为了检测由HBD1肽利用的细胞内转导途径，在用HBD1肽SEQ ID NO:73(C18:0-HLGLEEPKK)处理后，通过SDS PAGE分离细胞裂解物蛋白，并用抗Akt pS473抗体进行免疫印迹。观察到，HBD1肽SEQ ID NO:73(C18：0-HLGLEEPKK)诱导了磷酸化的Akt的剂量相关性增加(图6)。磷酸化Akt的检测通过抗纤连蛋白抗体(FN3)的处理而被完全废除，该抗体已被证明可以阻止与RPTPβ受体的相互作用，并且先前已被证明可以阻断IGFBP2与RPTPβ的相互作用(Shen et al.2012)。
为了进一步检测由HBD1肽利用的细胞内转导途径，在用HBD1肽SEQ ID NO:73(C18:0-HLGLEEPKK)处理后，通过SDS PAGE分离细胞裂解物蛋白，并用抗pAMPK T172进行免疫印迹。观察到用HBD1肽SEQ ID NO:73(C18:0-HLGLEEPKK)的处理导致磷酸化AMPK的剂量依赖性增加(图7)。通过使用抗纤连蛋白抗体(FN3)或与化合物C(一种AMPK活化的特异性抑制剂)的处理完全消除了磷酸化AMPK的检测，前者已被证明可以阻止与RPTPβ受体的相互作用，并且先前已被证明可以阻断IGFBP2与RPTPβ的相互作用(Shen et al.2012)，后者也已被证明能阻断IGFBP2刺激培养的脂肪细胞摄取葡萄糖(Assefa et al.2017)。
在单独的实验中，再次证明了用HBD1肽SEQ ID NO:73(C18:0-HLGLEEPKK)进行治疗可增加完全分化的小鼠骨骼肌肌管对葡萄糖的摄取，以及与胰岛素的加和作用(图8)。为了与观察到的细胞内转导途径的影响保持一致，可使用抗纤连蛋白抗体(FN3)或化合物C(AMPK活化的特异性抑制剂)进行治疗，前者已被证明能阻止与RPTPβ受体的相互作用，并且先前已被证明可阻断IGFBP2与RPTPβ的相互作用(Shen et al.2012)，后者也已被证明能阻断IGFBP2刺激的培养脂肪细胞摄取葡萄糖(Assefa et al.2017)，完全消除了HBD1肽SEQID NO:73(C18:0-HLGLEEPKK)增加葡萄糖摄取的能力，无论是单独使用还是与胰岛素共同使用。
总体而言，本文呈现的数据建立了HBD1、HBD1片段及其类似物在调节葡萄糖代谢、胰岛素代谢以及瘦素代谢中的潜力。HBD1对成骨细胞分化和葡萄糖摄取的作用机制相似，因为它们共享相同的受体(RPTPβ)和相同的细胞内途径(Akt)。因此可以预见，在成骨细胞分化中显示出效力的HBD1类似物(根据先前在例如WO 2018/145006中报道的成骨细胞分化测定)也将对葡萄糖代谢有效。
应当理解，在本说明书中报告的数据仅是为了说明本公开而给出的，并且不被视为构成对其的限制。
尽管已经结合本公开的特定实施例描述了本公开，但是应该理解，本公开能够进行进一步的修改，并且本申请一般旨在覆盖本公开的任何变化、使用或修改，这些变化、使用或修改通常遵循本公开的原理，并且包括与本公开的偏离，这些偏离属于本公开所属技术领域内的已知或惯例，并且可以应用于上文阐述的基本特征，并且在所附权利要求书的范围内。
通过引用合并
在本说明书中引用的所有参考文献及其参考文献，通过引用其整体并入本文，以在适当的情况下用于教导附加的或替代的细节、特征和/或技术背景。
等价替代
尽管已经参考特定实施例具体示出和描述了本公开，但是应当理解，上述公开的和附加特征和功能的变化或其替代可以预期地组合到许多其他不同的系统或应用中。而且，本领域技术人员可以随后做出其中各种目前无法预料或无法预料的替代、修改、变化或改进，这些也意在被以下实施例所涵盖。
参考文献
-WO 005/014635；
-U.S.Pat.No.9,220,746；
-PCT/US2018/16869
-Xi G.et al.The Heparin-Binding Domains of IGFBP-2Mediate ItsInhibitory Effect on Preadipocyte Differentiation and Fat Development in MaleMice.Endocrinology,154(11):4146–4157(2013).
-Poster 0268by Xi et al.presented at the Annual Meeting of theAmerican Society for Bone and Mineral Research(ASBMR)in Atlanta on September16-19,2016.A unique peptide containing the heparin binding domain of IGFBP-2increases bone mass in ovariectomized(OVX)rats.
-Wheatcroft SB,Kearney MT,Shah AM,Ezzat VA,Miell JR,Modo M,WilliamsSC,Cawthorn WP,Medina-Gomez G,Vidal-Puig A,Sethi JK,Crossey PA.IGF-bindingprotein-2protects against the development of obesity and insulinresistance.Diabetes.2007；56(2):285–294.
-DeMambro VE,Clemmons DR,Horton LG,et al.Gender-specific changes inbone turnover and skeletal architecture in igfbp-2-nullmice.Endocrinology.2008；149(5):2051–2061.
-Hedbacker K,Birsoy K,Wysocki RW,et al.Antidiabetic effects ofIGFBP2,a leptin-regulated gene.Cell Metab.2010；11(1):11–22.
-Xi,G.et al.(2014)IGFBP-2directly stimulates osteoblastdifferentiation.J.Bone Miner.Res.20,2427–2438
-Kawai M,Breggia AC,DeMambro VE,et al.The heparin binding domain ofIGFBP-2has insulin-like growth factor binding-independent biologic activityin the growing skeleton.J Biol Chem.2011；286(16):14670–80.
-Shen X,Xi G,Maile LA,et al.Insulin-like growth factor(IGF)bindingprotein 2functions coordinately with receptor protein tyrosine phosphatase Band the IGF-I receptor to regulate IGF-I-stimulated signaling.Mol CellBiol.2012；32(20):4116-30.
-Assefa B,Mahmoud AM,Pfeiffer AFH,et al.Insulin-Like Growth Factor(IGF)BindingProtein-2,Independently of IGF-1,Induces GLUT-4 Translocation andGlucose Uptake in 3T3-L1 Adipocytes.Oxid Med Cell Longev.2017；2017:3035184.
SEQUENCE LISTING
<110> 阿莫利特制药公司
<120> IGFBP-2的肝素结合域在治疗代谢紊乱中的作用
<130> P20116213WP
<150> US 62/676,087
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 39
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Asp Lys
1 5
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 40
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Phe
1 5
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 41
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Ile
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 42
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Pro
1 5
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 43
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Ser
1 5
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 44
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Asp
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 45
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Ile Lys
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 46
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Val Lys
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 47
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Gln Lys
1 5
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 48
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Thr Lys
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 49
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Glu Lys
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 50
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys His
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 51
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Arg
1 5
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 52
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Leu
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 53
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Met
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 54
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Trp
1 5
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 55
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Val
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 56
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Gln
1 5
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 57
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Asn
1 5
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 58
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Tyr
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 59
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Thr
1 5
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 60
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Glu
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 61
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Ser Pro
1 5
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 62
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Ser Ser
1 5
<210> 63
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 聚乙二醇化
<400> 63
Lys His His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys Leu Arg
1 5 10
<210> 64
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> 聚乙二醇化
<400> 64
Lys His His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys Leu Arg
1 5 10
<210> 65
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 聚乙二醇化
<400> 65
His His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5 10
<210> 66
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> 聚乙二醇化
<400> 66
His His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5 10
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 聚乙二醇化
<400> 67
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 与C16:0酰化
<400> 68
His His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5 10
<210> 69
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 与C18:0酰化
<400> 69
His His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5 10
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 与C20:0酰化
<400> 70
His His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5 10
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 与C14:0酰化
<400> 71
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 与C16:0酰化
<400> 72
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 与C18:0酰化
<400> 73
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 与C20:0酰化
<400> 74
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 与C16:0二酰化
<400> 75
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> 与C16:0酰化
<400> 76
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 77
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(9)
<223> 环肽
<400> 77
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 78
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> 与C16:0酰化
<400> 78
Lys His His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys Leu Arg
1 5 10
<210> 79
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 79
Gly Leu Glu Glu Pro Leu
1 5
<210> 80
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 80
Gly Leu Glu Glu Pro Arg
1 5
<210> 81
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 81
Gly Leu Asp Glu Pro Lys
1 5
<210> 82
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 82
Gly Leu Glu Asp Pro Lys
1 5
<210> 83
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 83
Gly Gly Glu Glu Pro Lys
1 5
<210> 84
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 84
Gly Val Glu Glu Pro Lys
1 5
<210> 85
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 85
Gly Ile Glu Glu Pro Lys
1 5
<210> 86
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 86
Val Leu Glu Glu Pro Lys
1 5
<210> 87
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 87
Leu Leu Glu Glu Pro Lys
1 5
<210> 88
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 88
Ile Leu Glu Glu Pro Lys
1 5
<210> 89
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 89
Lys Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 90
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 90
His Val Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 91
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 91
His Leu Pro Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 92
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 92
His Leu Gly Ile Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 93
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 93
Asn Leu Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 94
His Thr Gly Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 95
His Leu Lys Leu Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 96
His Leu Gly Ser Glu Glu Pro Lys Lys
1 5
<210> 97
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 97
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Tyr Lys
1 5
<210> 98
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 98
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Gln Lys
1 5
<210> 99
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 99
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Asn Lys
1 5
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 100
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Ser Phe
1 5
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 101
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Ser Val
1 5
<210> 102
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 102
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Leu Met
1 5
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 103
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Leu Tyr
1 5
<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 104
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Leu Asn
1 5
<210> 105
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 105
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Leu Gln
1 5
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 106
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Phe Val
1 5
<210> 107
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 107
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Phe Gln
1 5
<210> 108
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 108
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Phe Asn
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 109
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Val Met
1 5
<210> 110
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 110
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Val Asn
1 5
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 111
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Met Lys
1 5
<210> 112
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 112
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro Arg
1 5
<210> 113
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成的
<400> 113
His Leu Gly Leu Glu Glu Pro His
1 5
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