雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法
阅读说明：本技术 雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法 (High performance liquid chromatography analysis method for nitrosamines in ranitidine drugs ) 是由 史加桂 孙征宇 卫耿虎 于 2020-10-14 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法,包括如下步骤：(1)样品处理；(2)样品溶液配制；(3)对照溶液配制；(4)色谱分析。本发明通过对雷尼替丁类药物进行干燥、研磨处理及密封条件下低温配置、测试前过滤等工艺条件的设置,一方面确保了N-二甲基亚硝胺测试结果的稳定、准确；另一方面极大地降低了样品对色谱系统的污染,减少了后期的使用维护,节约维护成本；在上述样品处理的基础上,使用常规的高效液相色谱仪就可以进行试验分析,且准确度高,结果的重现性好,不需要大额资金的投入,节约成本,适合工业化生产应用,市场前景广阔。(The invention discloses a high performance liquid chromatography analysis method of nitrosamine substances in ranitidine drugs, which comprises the following steps: (1) processing a sample; (2) preparing a sample solution; (3) preparing a control solution; (4) and (4) performing chromatographic analysis. According to the invention, the Ranitidine drug is dried and ground, and the process conditions of low-temperature configuration under a sealed condition, filtration before testing and the like are set, so that on one hand, the stability and accuracy of the test result of the N-dimethylnitrosamine are ensured; on the other hand, the pollution of the sample to a chromatographic system is greatly reduced, the later use and maintenance are reduced, and the maintenance cost is saved; on the basis of the sample treatment, the conventional high performance liquid chromatograph can be used for experimental analysis, the accuracy is high, the reproducibility of results is good, the investment of large amount of funds is not needed, the cost is saved, and the method is suitable for industrial production and application and has wide market prospect.)
技术领域
本发明涉及药品检测技术领域，特别是涉及一种雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法。
背景技术
雷尼替丁类药物中自发现含有一定量的亚硝胺类物质，如N-二甲基亚硝胺（NDMA）后，美国的FDA和中国食品药品检验研究院针对该物质制定了多种液质法进行检测，这些测定方法无一例外全部要求使用三重四极杆的质谱仪，对仪器的灵敏度要求非常高，一般实验室都不具备相应条件的检测设备，且该类仪器使用要求高，维护难度大，不适合大多的企业或科研单位对该类物质进行日常定量分析的需要。亚硝胺类物质（NDMA）在现有检测方法中基本都会有共轭洗脱的现象，实验中的条件比较苛刻，非常难以做到数据重现及准确测定其含量。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法，能够解决现有技术存在的上述问题。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种N-二甲基亚硝胺的高效液相色谱分析方法，包括如下步骤：
（1）样品处理：将盐酸雷尼替丁干燥，并研磨成粉；
（2）样品溶液配制：精密称量步骤（1）中研磨后的盐酸雷尼替丁粉，加入精密量取的溶剂后密封，再在低温条件下混合成样品溶液，定容密封放置；
（3）对照溶液配制：精密称取对照品，用水配置成対照液；
（4）色谱分析：利用色谱柱对样品溶液和对照溶液分别进行色谱分析。
在本发明一个较佳实施例中，在所述色谱分析工序前还包括过滤工艺，采用针式过滤器对密封放置的样品溶液进行过滤。
在本发明一个较佳实施例中，所述针式过滤器的过滤膜为亲水聚四氟乙烯膜。
在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（2），所述溶剂为二氯甲烷；样品溶液的浓度为0.5g/ml。
在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（2），所述混合条件为：温度（低于15°C），超声或振荡，5-10min。
在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（3），所述溶剂为二氯甲烷；所述对照溶液的浓度为1ppm。
在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（4），所述色谱柱的规格为：Agilent C18，4.6mm×150mm，3.5μm。
在本发明一个较佳实施例中，所述步骤（4）中，所述色谱分析的条件为：
检测波长：230nm（改成能够检测到NDMA的波长范围）；
流动相流速：0.8ml/min；
洗脱方式：梯度洗脱；
柱温：35℃；
溶液进样量：20μL；
环境温度：小于15℃。
在本发明一个较佳实施例中，所述流动相包括流动相A和流动相B；其中，所述流动相A中，磷酸盐缓冲液和乙腈的混合体积比为98:2；所述流动相B中，磷酸盐缓冲液和乙腈的混合体积比为78:22。
在本发明一个较佳实施例中，所述梯度洗脱的工艺条件为：
在第0～15min，所述流动相A的体积由100％递减为0％，所述流动相B的体积由0％递增为100％；
在第15～23min，所述流动相A的体积为0％，所述流动相B的体积为100％；
在第23～24min，所述流动相A的体积由0％递增为100％，所述流动相B由100％递减为0％；
在第24～30min，所述流动相A的体积为100％，所述流动相B为0％。
本发明的有益效果是：本发明一种雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法，通过对雷尼替丁类药物进行干燥、研磨处理及密封条件下低温配置、测试前过滤等工艺条件的设置，一方面确保了N-二甲基亚硝胺测试结果的稳定、准确；另一方面极大地降低了样品对色谱系统的污染，减少了后期的使用维护，节约维护成本；在上述样品处理的基础上，使用常规的高效液相色谱仪就可以进行试验分析，且准确度高，结果的重现性好，不需要大额资金的投入，节约成本，适合工业化生产应用，市场前景广阔。
附图说明
图1是本发明雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法测试得到的色图谱。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
请参阅图1，本发明实施例包括：
实施例1
本发明揭示了一种雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法，以盐酸雷尼替丁药物为样品，测试其中N-二甲基亚硝胺（NDMA）的含量为例，
包括如下步骤：
（1）样品处理：取盐酸雷尼替丁原料药约1g，干燥，然后在干燥的研钵中将其研磨成粉，研磨过程中保持干燥，防止吸湿。由于盐酸雷尼替丁具有极易吸湿的特点，因此，先干燥处理，再在干燥的条件下研磨成分，可以使其中包含的N-二甲基亚硝胺更好地溶解到稀释液中；
（2）样品溶液配制：研磨后立即精密称量研磨好的盐酸雷尼替丁粉0.5g加入到10ml具塞容器中，确保粉料不残留在容器壁上，然后精密加入5ml二氯甲烷后密封，在低温条件下超声分散或振荡处理5-10min，配置成浓度为0.5g/ml的样品溶液，定容密封放置；其中，精密称量和密封保存处理保证了定容量的准确性，有助于提高测量精度；低温条件下进行超声分散或振荡处理，保证了样品中的N-二甲基亚硝胺不再受到外部环境温度影响而产生量的改变，也有助于提高测量精度；
（3）对照溶液配制：精密称取N-二甲基亚硝胺对照品，用去离子水稀释成浓度为1ppm的溶液作为対照液；
（4）色谱分析：先将上述密封放置的样品溶液用过滤膜为亲水聚四氟乙烯膜的针式过滤器进行过滤，将滤液保存在样品瓶中，再利用色谱柱对样品溶液和对照溶液分别进行色谱分析；其中，过滤的作用是去除大量的盐酸雷尼替丁，使其不会残留在色谱柱中；
所述色谱柱为采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其规格为：Agilent C18，4.6mm×150mm，3.5μm；该型号的色谱柱可以避免盐酸雷尼替丁样品出现共轭洗脱现象；
所述色谱分析的条件为：
检测波长：230nm，在此波长下，N-二甲基亚硝胺的吸收峰最大；
流动相流速：0.8ml/min，此流速下可以保证N-二甲基亚硝胺与相邻杂质峰的分离度高；
柱温：35℃，此温度下盐酸雷尼替丁可以在色谱柱中的洗脱度高；
环境温度：小于15℃，保证样品中的N-二甲基亚硝胺不会受到外部温度的影响而产生量的改变；
溶液进样量：20μL，此进样量可以保证N-二甲基亚硝胺的色谱峰正常且足够达到一定检测限；
流动相：包括流动相A和流动相B；其中，所述流动相A中，磷酸盐缓冲液和乙腈的混合体积比为98:2；所述流动相B中，磷酸盐缓冲液和乙腈的混合体积比为78:22；其中，磷酸盐缓冲液的制备方法为：取磷酸6.8ml置于900ml水中，加入质量浓度为50%的氢氧化钠溶液8.6ml，加水至2000ml，用磷酸或质量浓度为50%的氢氧化钠溶液调节pH值至7.10±0.05；
流动相的洗脱方式为梯度洗脱，具体如下：
在第0～15min，所述流动相A的体积由100％递减为0％，所述流动相B的体积由0％递增为100％；
在第15～23min，所述流动相A的体积为0％，所述流动相B的体积为100％；
在第23～24min，所述流动相A的体积由0％递增为100％，所述流动相B由100％递减为0％；
在第24～30min，所述流动相A的体积为100％，所述流动相B为0％。
分析结果如下：
（1）专属性
溶剂空白无干扰；样品中的其他杂质峰对NDMA的检查应无干扰。
（2）灵敏度
信噪比为28.9。
（3）重复性
NDMA对照品溶液连续进样6次的峰面积的RSD 为3.46%，重复性好。
（4）回收率
本方法回收率为94.1%。
测试所得的谱图如附图1所示，图中，4.298分钟处的峰为NDMA峰，18.710分钟处的峰为盐酸雷尼替丁药物替丁峰，其他为其他杂质峰。
本发明一种雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法，具有如下优点：
1、使用常规的高效液相色谱仪就可以进行试验分析，且准确度高，结果的重现性好，不需要大额资金的投入，节约成本；
2、通过对样品干燥、研磨处理及密封条件下低温配置、测试前过滤等工艺条件的设置，一方面确保了N-二甲基亚硝胺测试结果的稳定、准确；另一方面极大地降低了样品对色谱系统的污染，减少了后期的使用维护，节约维护成本；
3、通过色谱柱的选择使用，有效避免了共轭洗脱的现象；
4、实验条件简便，过程较短，实施操作方便，非常适合生产控制使用，有助于工业化应用。
在本发明的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下”、“左”、“右”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，或者是该发明产品使用时惯常摆放的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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