阅读说明：本技术 包含Fab I抑制剂的口服给药的药物组合物及制备其的方法 (Orally administered pharmaceutical compositions comprising Fab I inhibitors and methods of making the same ) 是由 曹在平 曹重明 于 2019-05-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及包含Fab I抑制剂的口服给药的药物组合物,并且涉及制备其的方法。本发明可以有效地应用于对抗生素等具有抗药性的细菌感染。更具体地,本发明可以通过提高溶解和洗脱速率而更快速地发挥疗效。此外,本发明可以通过调节粒径来改善制剂的混合均匀性和含量均匀性。(The present invention relates to orally administered pharmaceutical compositions comprising Fab I inhibitors, and to methods of making the same. The present invention can be effectively applied to bacterial infections having resistance to antibiotics and the like. More specifically, the present invention can exert therapeutic effects more rapidly by increasing the dissolution and elution rates. In addition, the present invention can improve the mixing uniformity and content uniformity of the preparation by adjusting the particle size.)

具体实施方式

，根据本发明的组合物可以通过下述方式以成品形式提供：所述方式为另外添加赋形剂和增溶剂以使其完全溶解，喷雾干燥以制备粉末，并且然后将所产生的粉末填充到硬胶囊中。

例如，赋形剂包括水溶性聚合物，例如糊精、聚糊精、葡聚糖、果胶和果胶衍生物、藻酸盐、淀粉、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯、羟乙基甲基纤维素、瓜尔胶、刺槐豆胶、黄蓍胶、角叉菜胶、金合欢胶、阿拉伯胶、结冷胶、黄原胶、明胶、酪蛋白、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯乙醛二乙酰胺乙酸酯、聚甲基丙烯酸丁酯、(2-二甲基氨基乙基)甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚乙二醇、聚氧化乙烯、卡波姆等。赋形剂的更具体示例包括聚乙烯吡咯烷酮。赋形剂可以基于组合物的总重量以按重量计10％至60％的量存在，例如以按重量计30％至55％的量存在，例如以按重量计40％至50％的量存在。

例如，增溶剂包括但不限于多元醇、表面活性剂等，例如丙二醇、聚乙二醇、二丙二醇、二甘醇、二甘醇单乙醚、甘油、吐温80、克列莫佛、卡必醇等。更具体地，增溶剂包括吐温80。增溶剂可以基于组合物的总重量以按重量计0.5％至20％，1％至10％，例如2％至5％的量存在。

根据一个实施方式，式1的化合物、其盐、或它们的组合可以基于组合物的总重量以按重量计10％至60％，比如30％至55％，比如40％至50％的量存在。

根据具体实施方式，根据本发明的组合物可以通过添加赋形剂、崩解剂和润滑剂以形成湿颗粒并将湿颗粒合并、干燥、筛分和混合而以片剂的形式提供。

例如，可以用于湿制粒的溶剂可以包括选自由水、甲醇、乙醇和二氯甲烷组成的组中的至少一者。具体地，可以用于湿制粒的溶剂可以包括乙醇或乙醇水溶液，但不限于此。

例如，赋形剂可以包括微晶纤维素、硅化微晶纤维素、甘露醇、乳糖、二氧化硅等，但不限于此。

例如，崩解剂可以包括交联羧甲基纤维素钠、淀粉等，但不限于此。

例如，润滑剂可以包括玉米淀粉、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、聚乙二醇、月桂基硫酸钠等，但不限于此。

根据一个实施方式，在本发明的片剂形式的制备中，组合物还可以包含粘合剂，但不限于此，例如包括明胶、淀粉、葡萄糖、聚维酮、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等。

根据一个实施方式，本发明可以提供口服给药的片剂，该片剂包含：作为赋形剂的微晶纤维素、D-甘露醇等，该赋形剂可以单独使用或者两者或更多者组合使用；作为崩解剂的交联羧甲基纤维素钠等；以及作为润滑剂的硬脂酸镁等。

作为具体示例，根据本发明的片剂包括：基于100重量份数的式1的化合物、其盐、或它们的组合的10至1000重量份数(比如100至300重量份数)的赋形剂、1至30重量份数(比如10至20重量份数)的崩解剂、0.1至20重量份数(比如5至15重量份数)的粘合剂以及0.1至10重量份数(比如3至5重量份数)的润滑剂。

根据一个实施方式，药学上可接受的溶剂可以用于溶解式1的化合物或其盐，并且药学上可接受的溶剂可以包括含有pH为1至3(例如pH 1.2)的酸的水溶液、水、甲醇、乙醇、二氯甲烷等，但不限于此。

根据一个实施方式，本发明可以用于治疗诸如MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)的革兰氏阳性细菌感染或其引起的各种感染性疾病。革兰氏阳性细菌例如包括：葡萄球菌(Staphylococcus)，比如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)；以及链球菌(Streptococcus)比如肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia)、热原性链球菌(Streptococcus pyrogenes)、C/F/G群链球菌(group C/F/G Streptococci)和绿藻群链球菌(viridans group Streptococci)。

根据一个实施方式，本发明的组合物还可以包含药学上可接受的和生理上合适的添加剂。

例如，可以使用任何一种作为添加剂，只要其是药学上可接受的并且通常用于每种制剂中即可，比如填充剂、增量剂、粘合剂、崩解剂、助流剂、防腐剂、缓冲剂、包衣剂、甜味剂、增溶剂、悬浮剂、着色剂、水溶性添加剂、赋形剂、载体、填充剂、润滑剂、干燥剂等。例如，添加剂可以基于组合物的总重量以按重量计5％至90％的量存在，例如以按重量计40％至90％的量存在。

根据本发明的药理学或药物组合物可以通过本领域技术人员已知的标准方法制备成适合施用于人(包括婴儿、儿童、成人和动物)的任何形式。

在下文中，为了使本领域技术人员能够容易地实施本发明，将对本发明的实施方式详细地进行描述。然而，本发明可以以许多不同的形式实施，并且不应当被解释为限于本文所阐述的实施方式。

制备示例1：式1的化合物的制备

为了制备式1的化合物，将0.9mol的4-苄氧基-1H-吡啶酮加入10L二甲基甲酰胺(DMF)中，然后在搅拌下向其中加入0.9mol叔丁醇钾。将其在搅拌下温热至55℃持续30分钟。缓慢加入0.9mol的2-甲基-3-硝基苄基氯并反应，同时混合持续另外的2小时。反应完成之后，加入4L纯化水，加热至60℃，在旋转蒸发器(R-220，BUCHI)中干燥。加入14L二甲基氯以溶解干燥的产物，并加入7L蒸馏水进行层分离。取上清液之后，向其中加入0.7kg硫酸镁和活性炭中的每一者并搅拌1小时，通过硅藻土过滤，并使用旋转蒸发器干燥(产率：60％)。

将约2kg所产生的干燥的产物溶解在乙醇中后，加入100g六水合氯化铁、600g活性炭和10kg一水合肼以冷却反应溶液。此后，将其过滤以获得白色沉淀物，将该白色沉淀物在真空烘箱中在40℃下干燥过夜以产生1-(3-氨基-2-甲基苄基)-4-(2-噻吩-2-基-乙氧基)-1H-吡啶-2-酮。产率为85％。

为了除去合成过程中产生的相关物质，可以根据需要进行纯化。纯化如下进行：将2kg合成原料溶解于30L二氯甲烷中，然后加入纯化水进行层分离。取有机层后，加入0.7kg硫酸钠，另外向其中加入0.7kg活性炭，并且搅拌1小时，过滤并在减小的压力下浓缩以除去二氯甲烷。此外，加入10L乙酸乙酯以溶解，浓缩，并且通过加入20L己烷而重结晶，然后在40℃下干燥。纯化操作可以根据需要重复。

制备示例2：式1的化合物的盐的制备

式1的化合物在蒸馏水中的溶解度非常低，为2μg/mL，由于给药于身体后溶解度低而导致生物利用度降低。另外，通过喷雾干燥来制备可以用于制备药物组合物的聚合物分散颗粒的方法不仅非常复杂，而且具有在制造过程中原料损失相对较大的缺点。为了改善这些问题，制备了式1的化合物的盐。

将根据制备示例1的6g的式1的化合物(分子量340.45)加入到100mL的溶剂二氯甲烷中，然后在室温下搅拌30分钟以使其完全溶解(0.176M)。当酸性物质是液体时，以其原样使用，并且当酸性物质是固体时，其溶解在水中使用。缓慢添加酸性物质，同时以100rpm的速度搅拌溶解在溶剂中的式1的化合物的溶液。酸性物质的种类和根据添加的酸性物质的性质在表1中示出。

[表1]

从使用表1所示的各种类型的酸性物质形成盐的结果来看，添加盐酸和硫酸立即产生沉淀。然而，在硫酸的情况下，沉淀物的颜色随时间逐渐变成棕色。另外，其他酸性物质保持其相分离状态或液体形式，如表中所示的那样。当产生沉淀物时，将沉淀物过滤，用二氯甲烷稀释，并且再次过滤以除去可能残留的任何酸性物质。重复这些过程两次之后，将获得的沉淀物在预热至40℃的真空烘箱中干燥12小时。产率为95％-98％，并且将干燥的产物粉碎以测量溶解度。在液相或相分离的情况下，使用旋转蒸发器(Tokyo Rikakai Co.，Ltd./Eyela laboratory蒸发器N-1000)干燥的样品。测量所获得的每个样品的溶解度。结果在表1中示出。磷酸盐在中性水中的水溶性比游离碱高出452倍，并且硫酸盐和盐酸盐的水溶性提高330倍以上。另外，柠檬酸盐和酒石酸盐的溶解度提高了150倍以上，抗坏血酸盐和富马酸盐的溶解度分别提高了约40倍和约100倍，最终醋酸盐和EDTA盐的溶解度提高了约20倍。综合考虑易制性，干燥后的性质和溶解度，可以将盐酸盐应用于式1的化合物的盐制备。

示例1：胶囊的制备

式1的化合物在水中具有非常低的溶解度。已知溶解度越低，生物利用度越低。为了克服这个问题，通过制备基于聚合物的固体分散颗粒并将其填充到胶囊中来制备成品形式。更具体地，首先，将约80g的1-(3-氨基-2-甲基苄基)-4-(2-噻吩-2-基-乙氧基)-1H-吡啶-2-酮、其盐、或它们的混合物溶于1.6L二氯甲烷中，然后加入80g亲水性聚合物聚乙烯吡咯烷酮和3.26g增溶剂吐温80，接着在室温下搅拌30分钟以使它们完全溶解。进行喷雾干燥工艺(GEA/Niro SDMICRO^TM)以形成颗粒。喷雾干燥工艺如下表2所示那样进行，收集颗粒，并且然后使用预热至40℃的真空烘箱干燥过夜以除去可能残留的二氯甲烷。将制备的粉末填充到硬明胶胶囊中以制备胶囊。

[表2]

设置参数

示例2：含有盐的片剂的制备。

制备含有根据制备示例2的式1的化合物的盐的片剂。首先，以每片剂为基础，向式1的化合物的42.4％(w/w)的盐酸盐、27.1％(w/w)的微晶纤维素、20.3％(w/w)的D-甘露醇、3.4％(w/w)的交联羧甲基纤维素钠、以及1.4％(w/w)的Aerosil(富田制药(TomitaPharmaceuticals)(日本)，)的混合物中缓慢加入具有溶解在乙醇(10％(w/v))中的羟丙基纤维素的60μL粘合剂溶液以形成颗粒，并且然后在预热至60℃的热空气干燥器中干燥3小时至4小时。干燥的产物的水分含量设定为3％以下。将干燥后的颗粒用18目筛进行筛分。加入作为崩解剂的2％(w/w)交联羧甲基纤维素钠和作为润滑剂的1.4％(w/w)硬脂酸镁之后，进行混合和压片以制备片剂。

示例3：含有纳米颗粒的片剂的制备

为了提高根据制备示例1的式1的化合物的水溶性，将式1的化合物的粒径设定为纳米级，从而增加了原料的表面积以提高溶解度。为此，将1g式1的化合物在10mL二甲基亚砜(DMSO)中搅拌并完全溶解以制备透明溶液。在70℃下将0.5g泊洛沙姆407溶解在20mL肉豆蔻醇中之后，向其中缓慢加入式1的化合物的溶液，并且通过使用均化器(-WerkeGmbH&Co.kg,T25 digital LR)以15,000rpm的速度混合5分钟来乳化。乳化过程的温度为80℃。在乳化过程之后，将其在室温下储存一定时间段以快速降低温度，并且使用tory Hills T65三辊研磨机将所产生的固体粉碎至约290nm的平均粒径。将制备的粉碎材料置于超临界萃取系统(ILSHIN高压釜/SC-CO2萃取系统)中，同时注入二氧化碳。此时，将反应器中的压力保持在约70atm以除去肉豆蔻醇和二甲亚砜，并且仅保留固体颗粒。所获得的固体的重量为1.48g，并且产率为98.7％。通过zeta电位测量系统(ELS-2000Z,OtsukaElectronics Korea Co.,Ltd.)测量所获得的固体的粒径。结果，平均粒径为318nm，结果在图1和表3中示出。

表3

向含有作为主要组分的如上所述制备的式1的化合物的45.5％(w/w)纳米颗粒、22.7％(w/w)微晶纤维素、22.7％(w/w)D-甘露醇、3.0％(w/w)交联羧甲基纤维素钠和1.4％(w/w)Aerosil(富田制药(日本)，)的混合物中缓慢加入具有溶解在乙醇(10％(w/v))中的羟丙基甲基纤维素(HPMC)的60μL粘合剂溶液以形成颗粒，并且然后在预热至60℃的热空气干燥器中干燥3小时至4小时。干燥的产物的水分含量设定为3％或更低。将干燥后的颗粒用18目筛筛分。加入作为崩解剂的1.8％(w/w)交联羧甲基纤维素钠和作为润滑剂的1.2％(w/w)硬脂酸镁之后，进行混合和压片以制备片剂。

示例4至示例8：片剂的制备

为了解决由于盐引入中的原料、聚合物分散颗粒、和纳米尺寸颗粒的损失而可能发生的生产率和经济效益的降低，将作为原料的式1的化合物用气流粉碎机(Komachine,Micro Jet Mill)粉碎，并且通过改变原料的粒径(D₉₀)值来制备，如表4所示。向具有不同粒径的式1的化合物中加入24.0％(w/w)微晶纤维素(MCC)、21.7％(w/w)甘露醇(D-甘露醇)和0.8％(w/w)交联羧甲基纤维素钠，将其过筛以除去可能包含的团块，并且然后将它们均匀混合。在混合之后，加入具有溶解在乙醇(6％(w/v))中的羟丙基甲基纤维素的150μL粘合剂溶液以形成颗粒，并且进行干燥直至水分含量为2％或更低。过筛之后，以每片剂为基础，加入作为润滑剂的0.8％(w/w)硬脂酸镁，混合并经受压片以制备片剂。

[表4]

	D<sub>90</sub>(μm)
		示例4	10.1
示例5	25.6
		示例6	60.1
示例7	124.3
		示例8	253.1

实验示例1：对MRSA菌株的抑制的评估

为了验证式1的化合物对抗生素抗药性菌株的抑制作用，通过利用从每个患者分离的金黄色葡萄球菌表型对式1的化合物进行处理来评价药物敏感性。在抗生素开发的体外测试中，最重要的结果可以是MIC₉₀(抑制总细菌群体的90％生长所需的最小抑制浓度)。表5示出了对于在Hershey医院的Peter C.Appelbaum博士(由于其在全世界抗感染领域中的权威而被认可)的实验室中分离的约100种甲氧西林敏感菌株和约100种目前在社会上有问题的MRSA菌株，使用目前市场上作为对照药物的代表性药物进行的MIC₉₀测试的结果。

[表5]

如表5所示，发现MIC₉₀值为0.25μg/mL，而与敏感菌株和非敏感菌株，即，MRSA菌株无关，这表明与对照药物相比具有两倍至几十倍的优异结果。特别地，这些菌株包括对万古霉素具有抗药性的万古霉素中间金黄色葡萄球菌(VISA)菌株和作为超级细菌的万古霉素抗药性金黄色葡萄球菌(VRSA)菌株(万古霉素MIC>64μg/mL)。从这些结果可以看出，与常规药物比如万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、阿莫西林-克拉维酸、达托霉素等相比，式1的化合物可以用作由细菌感染引起的疾病或病症的有效治疗剂。具体地，尽管不限于此，但其可以有效地用作与包括泌尿道、呼吸道、皮肤组织感染、败血症等的疾病相关的细菌感染的治疗剂。

实验示例2：式1的化合物的溶解度的分析

在制备式1的化合物的盐之前，分析式1的化合物以确定在各种溶剂中的溶解度。首先，将式1的化合物在如表5所示的药学上可接受的溶剂中过饱和，并且在暗室中在室温下搅拌12小时。首先将其离心以取上清液，并且然后再次用0.25μm PVDF过滤器过滤以除去残留在溶液中的不溶性物质。将滤液用甲醇稀释，并且然后进行HPLC分析以定量溶解度。结果在表6中示出。另外，HPLC分析条件如下。

按照韩国药典通用测试方法的液相色谱方法(HPLC)，在以下条件下测试各20μL的测试溶液和标准溶液，并且测定各溶液中主要成分的峰面积。

操作条件及计算

[操作条件]

检测器：UV分光光度计(测量波长286nm)

柱：Aegispak C18-L(4.6mm×250mm，5μm)柱

柱温：25℃

流动相：乙腈：水＝3:2

流量：1.0mL/min

[计算]

A_T：测试溶液中主要成分的峰面积

A_S：标准溶液中主要成分的峰面积

D_T：测试溶液的稀释因子

D_S：标准溶液的稀释因子

P：标准溶液中主要成分的纯度(％)

[表6]

如表6所示，发现溶解度随着式1的化合物的pH降低而增加。例如，其在水(中性)中具有2.5μg/mL的低溶解度，但在pH 1.2的强酸性条件下具有约0.9mg/mL的溶解度。在乙醇、甲醇和甘油中的溶解度非常低，即，低于10mg/mL，而在二氯甲烷和DMSO中的溶解度高，即，高于50mg/ml。然而，预期DMSO由于其从高沸点的低挥发性而难以干燥，因此判断其不适用于盐生产。因此，在盐生产方法中，可以使用例如具有高挥发性和相对高溶解度的二氯甲烷。

实验示例3：胶囊稳定性分析

验证了示例1的胶囊根据储存条件的稳定性。储存条件为长期条件和加速条件，具体地，长期条件和加速条件分别地为温度为25±2℃且湿度为60±5％，和温度为40±2℃且湿度为75±5％。结果在表7中示出。

[表7]

如表7所示，发现在长期储存条件下至少12个月和在加速条件下6个月的溶出度、含量和相关物质符合标准。考虑到这一点，产物的保质期可以确定为例如24个月。

实验示例4：含有式1的化合物的盐酸盐的片剂的稳定性分析

验证了示例2的片剂根据储存条件的稳定性。储存条件为长期条件和加速条件，并且以溶出度、含量及相关物质为测试项目进行评估。长期储存条件和加速储存条件分别地为温度为25±2℃且湿度为60±5％，和温度为40±2℃且湿度为75±5％。结果在表8中示出。

[表8]

如表8所示，在两种条件下的所有测试项目中，结果值显示稳定性保持在设定范围内，并且每个项目在6个月内没有观察到显著变化。由此可以看出，含有式1的化合物的盐酸盐的片剂具有优异的物理和化学稳定性。

实验示例5：含有纳米颗粒的片剂的稳定性分析

验证了含有示例3的纳米颗粒的片剂根据储存条件的稳定性。储存条件为长期条件和加速条件，并且以溶出度、含量及相关物质为测试项目进行评估。长期储存条件和加速储存条件分别地为温度为25±2℃且湿度为60±5％，和温度为40±2℃且湿度为75±5％。结果在表9中示出。

[表9]

如表9所示，在两种条件下，在所有测试项目中在6个月内均未观察到显著变化。由此可以看出，含有式1的化合物的片剂具有优异的稳定性。

实验示例6：溶解度和溶出度测试

分别验证了式1的化合物及其盐以及在制备示例1、制备示例2、示例1和示例3中用式1的化合物制备的聚合物分散颗粒和纳米颗粒的粉末在蒸馏水中的溶解度。首先，将过量的每种物质加入蒸馏水中并在室温下混合12小时。静置2小时取上清液后，用具有0.25μm孔隙的过滤器过滤。将其再次在甲醇中稀释后，进行HPLC分析。HPLC条件与实验示例2的溶解度测试中的分析条件相同。结果在表10中示出。

[表10]

项目	水溶性(μg/mL)	pH
			制备示例1	2.5	6.8
制备示例2	927	2.1
			示例1	154	6.7
示例3	168	6.9

如表10所示，发现与游离碱相比，在盐引入、聚合物分散颗粒和纳米颗粒的情况下，溶解度得到改善。

另外，将如上所述的根据制备示例1的式1的化合物、根据制备示例2的式1的化合物的盐酸盐、根据示例1的聚合物分散颗粒粉末、和根据示例3的纳米颗粒粉末中的每一者填充到明胶硬胶囊中。然后，通过韩国药典通用测试方法的溶出度测试方法2(桨法(paddlemethod))在蒸馏水中进行溶出度测试。结果如图2所示。用HPLC对实验期间获得的样品进行分析，以定量每个时间段的药物含量。HPLC条件如下。

[溶出度测试条件]

-测试方法：韩国药典溶出度测试方法2(桨法)

-测试溶液：蒸馏水

-测试温度：37±0.5℃

-旋转速度：50rpm

根据韩国药典通用测试方法的液相色谱法(HPLC)，在以下条件下对各溶液的主要成分的峰面积进行测定。

操作条件及计算

[操作条件]

操作条件和计算方程与实验示例2的溶解度测试中使用的含量测试相同。如图2所示，发现与制备示例1相比，当应用制备示例2(盐)、示例1(聚合物分散颗粒)和示例2(纳米颗粒)的技术时，在水中的溶解模式被显著改善。

实验示例7：根据粒径分析溶解模式

在根据示例4至示例8的片剂的溶出度测试之前，进行剂型均匀性的测试。在剂型均匀性的测试中，制备每个示例中的10个样品，并且定量每个样品的每片剂含量。剂型均匀性的接受值根据韩国药典通用测试方法的含量均匀性测试来确定。通常，接受值与剂型均匀性成反比。示例4至示例8的接受值在表11中示出。

[表11]

示例	剂型均匀性(平均值：％)
		示例4	2.5
示例5	2.8
		示例6	4.8
示例7	5.7
		示例8	6.8

如表11所示，接受值倾向于随着使用的原料的粒径的增加而增加。也就是说，随着粒径增加，剂型的均匀性降低。特别地，当粒径分布(D₉₀)为约50μm时，剂型均匀性的接受值迅速增加，这被认为代表剂型均匀性的降低。

为了根据原料的粒径确定溶解速率的差异，根据韩国药典的通用测试方法的溶出度测试方法2(桨法)进行实验。使用900mL蒸馏水和pH 1.2水溶液作为溶解介质，在50rpm的旋转速度和37±0.5℃的温度下进行实验。使用蒸馏水作为溶出介质的结果在图3中示出，并且使用pH 1.2水溶液作为溶出介质的结果在图4中示出。

以规则的时间间隔取出溶解介质，通过0.45μm过滤器过滤，然后进行HPLC分析以评价溶解程度。HPLC分析条件与实验示例6中使用的溶出度测试方法相同。如图3和图4所示，随着原料粒径的减小，在蒸馏水和pH 1.2溶解介质中的溶解速率提高。特别地，示例4在蒸馏水中显示出与应用制备示例2(盐引入)、示例1(聚合物分散颗粒)和示例2(纳米颗粒)的技术的情况下类似的溶解速率。

另外，每个样品的溶解速率的差异也逐渐减小。具体地，在示例4和示例5的情况下，溶出度测试的偏差在1％至3％内，而在示例6至示例8的情况下，其显示出3％至10％。由上可知，发现的是，随着粒径越细，剂量单位的均匀性提高、溶解速率提高并且溶解偏差降低。因此，预期当口服给药时显示出更快且更一致的身体吸收模式，从而预期确保快速且恒定的治疗效果。

实验示例8：根据示例4的片剂的稳定性分析

在将根据示例4的片剂储存在塑料瓶中之后，观察在25±2℃和60±5％RH的长期条件和40±2℃和75±5％RH的加速条件下产物的物理和化学性质是否显著变化。结果在表12中示出。

[表12]

如表12所示，在长期条件和加速条件下，在所有测试项目中在6个月内没有观察到显著变化。由此可以看出片剂具有稳定性。在示例5至示例8中，预期它们在相同条件下在物理和化学上是非常稳定的，尽管结果未示出。

实验示例9：在小鼠模型中的药代动力学和药效学分析

对于式1的化合物，使用小鼠感染模型进行药代动力学/药效学实验。为此，用金黄色葡萄球菌ATCC 29213(MSSA，标准菌株)和13B-382(MRSA，临床菌株)进行实验。使用Mueller-Hinton肉汤或阳离子调节的Mueller-Hinton肉汤作为培养基。对于敏感性测试(最小抑制浓度(MIC))，使用式1的化合物。

对于无菌(不含特定病原体，SPF)雌性，6周龄(23g～27g)ICR小鼠(Orient BioInc，Gapyeong，Korea)，根据动物保护法和实验动物法，在动物实验伦理委员会的许可下，按照规定和程序进行实验。皮下注射环磷酰胺(Bexter，Frankfurt，Germany)以诱导中性粒细胞减少(<100/mm³)。在实验之前，将测试菌株在Muller Hinton II肉汤中在37℃下孵育24小时以获得10⁸CFU/mL的浓度。然后，将它们用生理盐水稀释。将0.1mL溶液接种到小鼠的大腿中(接种量1.0×10⁵CFU/mL)。2小时后，开始口服式1的化合物。每3小时、6小时、12小时和24小时以7.5mg/kg/天至240mg/kg/天的剂量施用药物。

给药24小时之后，将小鼠用二氧化碳气体安乐死以分离其大腿，置于生理盐水中，并且用匀浆器(Kinematica)精细切割。将其稀释10倍，涂布在Muller HintonII肉汤上，在37℃下孵育24小时。计数并记录活细胞数。结果表示为log10CFU/大腿，并且实验室中活细胞数的测量极限为1×10²CFU/大腿。

根据抗微生物剂剂量和给药方式，评价T/MIC作为确定抗生素的效果以及抗微生物作用和药代动力学结果的指标。T/MIC值表示血清水平超过MIC的剂量间隔的百分比。结果在图5中示出。如图5所示，发现随着T/MIC值的增加，根除细菌的效果迅速增加。当T/MIC值为约20％或更高时，超过99.9％的细菌被根除。另外，发现当AUC_0-24h/MIC和C_max/MIC的值增加时，根除细菌比如MRSA菌株的效果也迅速增加。

如图5所示，可以看出式1的化合物的金黄色葡萄球菌ATCC 29213和13B-382的MIC值为0.25μg/mL，而与菌株无关。该值低于苯唑西林(0.25μg/mL和16μg/mL)和万古霉素(0.5μg/mL和1μg/mL)的值。

实验示例10：在比格犬模型中的药代动力学评价

对于根据示例4和示例8的制剂，进行比格犬(n＝5)的药代动力学评价。在药代动力学测试之前，在施用测试物质之前，以30g/头/天饲喂比格犬约30分钟，并且在非禁食下施用测试物质。剂量为约5mg/kg，并且在每个体0分钟、10分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时和24小时的9个时间点从颈静脉获得血液样品。在处理血样之后，确定血浆中药物的浓度以获得如图6所示的药代动力学曲线。

在片剂制造中使用的原料的粒径极大地影响了药代动力学曲线。如图6所示，AUC_0-24h和C_max值倾向于随着粒径减小而增加。另外，血浆中的抗生素浓度高于MIC(T>MIC)的时间期间也倾向于随着粒径更小而增加。基于根据实验示例9的结果，可以看出AUC_0-24h、C_max值和血浆中抗生素浓度高于MIC的时间期间的变化对抗生素的抗菌效果具有很大影响。随着AUC_0-24h、C_max值和MIC值的三个指标增加，抗微生物活性显著增加。

如上所述，可以看出本发明可以有效地应用于治疗多药物抗药性的细菌感染。

以上描述仅为对本发明的技术思想的说明，本发明所属技术领域的普通技术人员可以在不脱离本发明的本质特征的情况下做出各种修改和变化。另外，本发明所公开的各实施方式并不是对本发明的技术思想的限定，而是为了解释技术思想，并且本发明的技术思想的范围并不受这些实施方式的限制。本发明的保护范围应当以所附权利要求书来解释，并且在与其等同的范围内的所有技术思想均应当被解释为包括在本发明的范围内。