双氢青蒿素在制备治疗硬皮病的药物中的用途
阅读说明：本技术 双氢青蒿素在制备治疗硬皮病的药物中的用途 (Application of dihydroartemisinin in preparation of medicine for treating scleroderma ) 是由 严青然 李�瑞 吕良敬 殷瀚林 于 2020-09-03 设计创作，主要内容包括：本发明提供了双氢青蒿素在制备治疗硬皮病的药物中的用途。通过实验证明,全身应用双氢青蒿素(Dihydroartemisinin)可以减少真皮胶原聚集,减轻皮肤纤维化,有效治疗硬皮病。(The invention provides application of dihydroartemisinin in preparation of a medicine for treating scleroderma. Experiments prove that the systemic application of Dihydroartemisinin (dihydroartemesinin) can reduce dermal collagen aggregation, relieve skin fibrosis and effectively treat scleroderma.)
技术领域
本发明属于生物医学领域，涉及一种治疗硬皮病的药物，具体来说是双氢青蒿素在制备治疗硬皮病的药物中的用途。
背景技术
硬皮病是一组以皮肤局部或弥漫性纤维化为特征的自身免疫疾病，部分类型可合并多脏器纤维化，导致患者死亡，其发病起因尚不明确。其中局灶型通常称为硬斑病，系统型一般指系统性硬化症。纤维化是临床难题，目前尚缺乏有效治疗手段。双氢青蒿素是青蒿素的衍生物，相比青蒿素，它具有高效、极低毒性等优点，最初因为其强大的抗疟效果，而被全世界广泛研究和应用。现在研究发现，双氢青蒿素还具有参与细胞氧化应激、DNA损伤修复、线粒体稳态和调节免疫等作用，其治疗一种免疫疾病——系统性红斑狼疮的有效性，目前正在临床研究中。虽然硬皮也是一种免疫相关疾病，但目前并没有报道双氢青蒿素能发挥对硬皮病的治疗作用。
发明内容
本发明的目的在于提供双氢青蒿素在制备治疗硬皮病的药物中的用途，所述的这种用途要解决了现有技术中的药物对于治疗硬皮病效果不佳的技术问题。
本发明提供了双氢青蒿素在制备治疗硬皮病的药物中的用途。
本发明和已有技术相比，其技术效果是积极和明显的。通过实验证明，全身应用双氢青蒿素（Dihydroartemisinin）可以减少真皮胶原聚集，减轻皮肤纤维化，有效治疗硬皮病。
附图说明
图1：显示全身给药双氢青蒿素，可有效减轻博来霉素诱导的皮肤纤维化。
图2：显示双氢青蒿素显著抑制胶原相关基因（a-SMA、Fibronectin、Col1a1）的转录，且时间和浓度依赖的降低胶原蛋白（collagen 1）的产生。
图3：显示双氢青蒿素（DHA）处理12h后，细胞内红色荧光点较对照组增加，表示双氢青蒿素诱导的成纤维细胞自噬流畅通。
图4：A图显示雷帕霉素诱导自噬，胶原蛋白产生减少，说明诱导自噬可以发挥抗纤维化作用；B图显示Baf.A1抑制自噬后，双氢青蒿素的抗纤维化作用被部分挽救。
具体实施方式
下述实施例实验采用的双氢青蒿素（Dihydroartemisinin）为商业产品，目录号:HY-N0176，购买自美国MCE(MedChemExpress)公司。所使用的mRFP-GFP-LC3荧光标记腺病毒购买自汉恒生物科技有限公司。所使用的雷帕霉素（AY-22989）和Baf.A1（HY-100558）均购买自美国MCE(MedChemExpress)公司。
实施例1：
本发明分组如下：雄性C57小鼠24只，随机分配到4组：CTRL、Bleo、Bleo+25mg/kg DHA、Bleo+50mg/kg DHA，除CTRL（对照组）以外，其余三组小鼠皮下注射博来霉素以造成皮肤纤维化模型，并在造模三周后，分别给予两个治疗组小鼠25mg/kg和50mg/kg双氢青蒿素，给药途径为灌胃，给药持续3周。其中双氢青蒿素溶解于10%DMSO的生理盐水中，非治疗组小鼠给予该溶剂灌胃。
结果如图1，A图展示不同组小鼠皮肤组织的代表性图片；B图展示不同组小鼠皮肤真皮厚度的统计分析，可见双氢青蒿素治疗组小鼠皮肤厚度显著薄于博来霉素诱导组。
组织Masson染色和真皮厚度测量结果显示，治疗组小鼠真皮厚度相比博来霉素组显著减小，双氢青蒿素可以有效治疗博来霉素诱导的小鼠硬皮病表现。
实施例2：
成纤维细胞过度激活并产生大量胶原，是系统性硬化患者纤维化的主要原因。为了检验双氢青蒿素是否能够抑制成纤维细胞胶原产生，我们在体外使用双氢青蒿素处理健康人和系统性硬化患者的原代成纤维细胞，使用qPCR和western blot试验检测胶原基因转录和蛋白产生。试验结果见图2，双氢青蒿素显著抑制胶原相关基因（a-SMA、Fibronectin、Col1a1）的转录，且时间和浓度依赖的降低胶原蛋白（collagen 1）的产生。
图2A：25μM双氢青蒿素处理人原代成纤维细胞24h，可见胶原产生相关的基因（a-SMA、Fibronectin、Col1a1）转录水平显著降低；图2B：双氢青蒿素刺激不同的浓度和时间，collagen1（胶原蛋白1）成下降趋势，显示双氢青蒿素在体外可以减少成纤维细胞胶原产生。同时我们发现p-mTOR和p-AKT呈下降趋势，且LC3B（自噬标记）的I型向II型转化增加。因此，DHA可以通过诱导成纤维细胞自噬，减少胶原产生。
实施例3：
为了验证双氢青蒿素是否确实可以诱导成纤维细胞发生自噬，我们使用mRFP-GFP-LC3荧光标记腺病毒感染人原代成纤维细胞，随后使用双氢青蒿素处理12个小时。之后使用荧光显微镜观察细胞荧光，判断自噬流是否畅通。结果如图3所示，双氢青蒿素（DHA）处理12h后，细胞内红色荧光点较对照组增加，表示双氢青蒿素诱导的成纤维细胞自噬流畅通。
图3：mRFP-GFP-LC3腺病毒转染成纤维细胞，并使用TGFβ1诱导成纤维细胞激活，使用DHA处理激活和未激活的成纤维细胞。红色和绿色都用于标记自噬小体，当自噬小体和自噬溶酶体结合时，绿色荧光淬灭，只保留红色荧光，说明自噬流畅通。如图所示，DHA处理组的成纤维细胞，相比较DMSO处理组，红色荧光点显著增加，表示DHA诱导的成纤维细胞自噬流畅通。
实施例4：
为了验证诱导自噬是否可以减少成纤维细胞胶原产生，我们使用雷帕霉素（Rapamycin）诱导成纤维细胞自噬，并使用western blot检测胶原（collagen 1）产生。结果显示，雷帕霉素诱导成纤维细胞发生自噬，胶原蛋白产生减少（图4 A）。为了检测抑制自噬是否能阻断双氢青蒿素的减少胶原产生作用，我们使用Baf.A1（自噬阻断剂）阻断双氢青蒿素诱导的自噬，之后使用western blot检测胶原（collagen 1）产生情况。结果显示（图4B），自噬被阻断之后，双氢青蒿素减少成纤维细胞胶原产生的作用被部分挽救，说明双氢青蒿素诱导的自噬是其抗纤维化作用所必须的。