一种肿瘤细胞培养信息分析方法
阅读说明：本技术 一种肿瘤细胞培养信息分析方法 (Tumor cell culture information analysis method ) 是由 刘译远 劉瑞宸 拉斯洛谢克利 于 2020-06-02 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种肿瘤细胞培养信息分析方法,包括以下步骤：肿瘤细胞培养、药理培养、细胞膜磷脂提取、细胞膜磷脂甲酯化、气相技术分析、信息对比。将血管内皮细胞接种于培养容器的渗透支持膜上形成血管内皮细胞层；起始细胞放置于渗透支持膜血管内皮细胞层上方并形成半固态凝胶状的混合体,在对一类、二类及三类培养过程中,对样品中添加抗肿瘤药物,培养后收集培养容器的细胞液,对其进行细胞计数,根据培养容器的细胞数量可检测出细胞迁移能力的强弱。(The invention discloses a tumor cell culture information analysis method, which comprises the following steps: tumor cell culture, pharmacological culture, cell membrane phospholipid extraction, cell membrane phospholipid methyl esterification, gas phase technical analysis and information comparison. Inoculating the vascular endothelial cells on the permeable support membrane of the culture container to form a vascular endothelial cell layer; the method comprises the steps of placing initial cells above an infiltration supporting membrane vascular endothelial cell layer to form a semi-solid gelatinous mixture, adding an anti-tumor drug into a sample in the processes of culturing a first type, a second type and a third type, collecting cell sap of a culture container after culturing, counting cells, and detecting the migration capacity of the cells according to the cell number of the culture container.)
技术领域
本发明属于细胞培养领域，更具体地说，尤其涉及一种肿瘤细胞培养信息分析方法。
背景技术
恶性肿瘤已经成为严重威胁人类生命健康的主要疾病之一，具有高发病率和高致死率的特点，肿瘤的发生日益影响经济发展和人们的健康。因此，采取有效的防治肿瘤的方法，遏制恶性肿瘤的发展势头迫在眉睫。
很多疾病包括肿瘤都伴有膜磷脂代谢的变化，细胞膜磷脂的变化会影响细胞膜的理化性质，进而影响各种膜蛋白的生物学功能。研究细胞膜磷脂的变化不仅有助于阐明这些疾病及肿瘤的发病机理，而且有助于疾病的诊断和治疗。由于细胞膜磷脂周转速率极快，随细胞死亡而迅速降解并且不同肿瘤细胞的脂肪酸的结构与种类不尽相同。由于检测技术的限制，膜脂分析多限于对整体脂类总量的分析鉴定，由于不同脂肪酸色谱峰的重叠，对不同肿瘤细胞磷脂组成差异的研究较困难。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种肿瘤细胞培养信息分析方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种肿瘤细胞培养信息分析方法，包括如下步骤：
S1、肿瘤细胞培养，提供肿瘤细胞作为起始细胞，肿瘤细胞来自相同对象的相同肿瘤组织，将肿瘤细胞放入到培养基中进行培养，将培养样品分为一类、二类及三类，作为后续的信息对比；
S2、药理培养，首先将血管内皮细胞接种于培养容器的渗透支持膜上形成血管内皮细胞层；起始细胞放置于渗透支持膜血管内皮细胞层上方并形成半固态凝胶状的混合体，在对一类、二类及三类培养过程中，对样品中添加抗肿瘤药物，培养后收集培养容器的细胞液，对其进行细胞计数，根据培养容器的细胞数量可检测出细胞迁移能力的强弱；
S3、细胞膜磷脂提取，在肿瘤细胞培养完成之后，将培养基去除，取出肿瘤细胞液，对肿瘤细胞细胞膜磷脂的提取，将收集的细胞悬浮于PBS中，将细胞悬浮液于超声波细胞粉碎机中于冰浴条件下破膜30分钟，取一定体积的破膜液于甲醇与氯仿的混合液中，震荡摇匀，室温静置，离心取下相；
S4、细胞膜磷脂甲酯化，向细胞膜磷脂提取液中加入氢氧化钾-甲醇溶液，进行甲酯化，得到甲酯化的脂肪酸，再加入盐酸，振摇，静置，加入适量的无水硫酸钠干燥，取下层清液待测；
S5、气相技术分析，将步骤3中提取的清液进行气相分析，对一类、二类及三类样品制作图谱；
S6、信息对比，对细胞特征信息、细胞特征差异进行对比，得出分析结果。
优选的，所述S1中培养基由10％的无细胞腹水、3％的胎牛血清、1％的双抗，其余为DMEM培养基组成。
优选的，所述S3中在震荡摇匀时，在离心管中富集磁珠，2-8℃条件下，旋转结合20-40min；再将离心管放置磁体上3min，将上清液移除，得到磁珠悬浮液。
优选的，所述S2中的渗透支持膜采用有机材料制成。
优选的，所述S1中样品的一类、二类及三类分别对应肿瘤细胞的早期细胞、中期细胞及晚期细胞。
优选的，所述S6中的细胞特征差异包括：单个或多个基因甲基化水平的差异、单个或多个基因组区域甲基化水平的差异。
优选的，所述S3中在去除培养基，洗涤细胞沉淀后加入细胞消化液，当***收缩变圆但上皮细胞还未收缩时，轻拍敲打培养瓶使***脱离，去除***。
优选的，所述S2中在培养过程中，培养温度设置为36.5℃。
本发明的技术效果和优点：
1、将血管内皮细胞接种于培养容器的渗透支持膜上形成血管内皮细胞层；起始细胞放置于渗透支持膜血管内皮细胞层上方并形成半固态凝胶状的混合体，在对一类、二类及三类培养过程中，对样品中添加抗肿瘤药物，培养后收集培养容器的细胞液，对其进行细胞计数，根据培养容器的细胞数量可检测出细胞迁移能力的强弱；
2、将培养样品分为一类、二类及三类，作为后续的信息对比，一类、二类及三类分别对应肿瘤细胞的早期细胞、中期细胞及晚期细胞，便于对不同阶段的肿瘤细胞进行培养对比。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
S1、肿瘤细胞培养，提供肿瘤细胞作为起始细胞，肿瘤细胞来自相同对象的相同肿瘤组织，将肿瘤细胞放入到培养基中进行培养，将培养样品分为一类、二类及三类，作为后续的信息对比；
S2、药理培养，首先将血管内皮细胞接种于培养容器的渗透支持膜上形成血管内皮细胞层；起始细胞放置于渗透支持膜血管内皮细胞层上方并形成半固态凝胶状的混合体，在对一类、二类及三类培养过程中，对样品中添加抗肿瘤药物，培养后收集培养容器的细胞液，对其进行细胞计数，根据培养容器的细胞数量可检测出细胞迁移能力的强弱；
S3、细胞膜磷脂提取，在肿瘤细胞培养完成之后，将培养基去除，取出肿瘤细胞液，对肿瘤细胞细胞膜磷脂的提取，将收集的细胞悬浮于PBS中，将细胞悬浮液于超声波细胞粉碎机中于冰浴条件下破膜30分钟，取一定体积的破膜液于甲醇与氯仿的混合液中，震荡摇匀，室温静置，离心取下相；
S4、细胞膜磷脂甲酯化，向细胞膜磷脂提取液中加入氢氧化钾-甲醇溶液，进行甲酯化，得到甲酯化的脂肪酸，再加入盐酸，振摇，静置，加入适量的无水硫酸钠干燥，取下层清液待测；
S5、气相技术分析，将步骤3中提取的清液进行气相分析，对一类、二类及三类样品制作图谱；
S6、信息对比，对细胞特征信息、细胞特征差异进行对比，得出分析结果。
实施例2
一种肿瘤细胞培养信息分析方法，包括如下步骤：
步骤1、肿瘤细胞培养，提供肿瘤细胞作为起始细胞，肿瘤细胞来自相同对象的相同肿瘤组织，将肿瘤细胞放入到培养基中进行培养，将培养样品分为一类、二类及三类，作为后续的信息对比，一类、二类及三类分别对应肿瘤细胞的早期细胞、中期细胞及晚期细胞，培养基由10％的无细胞腹水、3％的胎牛血清、1％的双抗，其余为DMEM培养基组成；
步骤2、药理培养，首先将血管内皮细胞接种于培养容器的渗透支持膜上形成血管内皮细胞层；渗透支持膜采用有机材料制成，起始细胞放置于渗透支持膜血管内皮细胞层上方并形成半固态凝胶状的混合体，在对一类、二类及三类培养过程中，对样品中添加抗肿瘤药物，培养后收集培养容器的细胞液，对其进行细胞计数，根据培养容器的细胞数量可检测出细胞迁移能力的强弱，在培养过程中，培养温度设置为36.5℃；
步骤3、细胞膜磷脂提取，在肿瘤细胞培养完成之后，将培养基去除，在震荡摇匀时，在离心管中富集磁珠，2-8℃条件下，旋转结合20-40min；再将离心管放置磁体上3min，将上清液移除，得到磁珠悬浮液，取出肿瘤细胞液，对肿瘤细胞细胞膜磷脂的提取，将收集的细胞悬浮于PB步骤中，将细胞悬浮液于超声波细胞粉碎机中于冰浴条件下破膜30分钟，取一定体积的破膜液于甲醇与氯仿的混合液中，震荡摇匀，室温静置，离心取下相，在去除培养基，洗涤细胞沉淀后加入细胞消化液，当***收缩变圆但上皮细胞还未收缩时，轻拍敲打培养瓶使***脱离，去除***；
步骤4、细胞膜磷脂甲酯化，向细胞膜磷脂提取液中加入氢氧化钾-甲醇溶液，进行甲酯化，得到甲酯化的脂肪酸，再加入盐酸，振摇，静置，加入适量的无水硫酸钠干燥，取下层清液待测；
步骤5、气相步骤技术分析，将步骤3中提取的清液进行气相分析，对一类、二类及三类样品制作图谱；
步骤6、信息对比，对细胞特征信息、细胞特征差异进行对比，得出分析结果，细胞特征差异包括：单个或多个基因甲基化水平的差异、单个或多个基因组区域甲基化水平的差异。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。