阅读说明：本技术 胡椒碱在制备sEH抑制剂中的应用 (Application of piperine in preparation of sEH inhibitor ) 是由 刘中博 毕开顺 于 2019-03-01 设计创作，主要内容包括：本发明涉及中药化学和分子生物学技术领域,公开了胡椒碱在制备sEH抑制剂中的应用,所述胡椒碱用式(I)所示,酶动力学活性测试及药效团结果显示：胡椒碱具有较好的抑制sEH活性作用。此化合物毒副作用小,水溶性好。基于可溶性环氧化物水解酶的作用原理,本化合物有预防和治疗消化性溃疡等消化道疾病的功效,可用于制备sEH抑制剂。<Image he="373" wi="700" file="DDA0001982872800000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention relates to the technical field of traditional Chinese medicine chemistry and molecular biology, and discloses an application of piperine in preparation of an sEH inhibitor, wherein the piperine is shown in a formula (I), and an enzyme kinetic activity test and a pharmacodynamic group result show that: piperine has good effect of inhibiting sEH activity. The compound has small toxic and side effects and good water solubility. Based on the action principle of soluble epoxide hydrolase, the compound has the effects of preventing and treating digestive tract diseases such as peptic ulcer and the like, and can be used for preparing sEH inhibitors.)

胡椒碱在制备sEH抑制剂中的应用

技术领域

本发明涉及中药化学和分子生物学技术领域，具体涉及从胡椒中分离得到的胡椒碱在制备sEH抑制剂中的应用。

背景技术

目前，消化性溃疡(Peptic ulcer disease，PUD)这一消化道疾病在我国已成为普遍的公共卫生问题。消化性溃疡是一种常见的多发性疾病，全球范围内发病率约4％(NajmW I.Peptic ulcer disease[J].Primary Care Clinics in Office Practice,2011,38(3):383-394.)，可发生于不同年龄，十二指肠溃疡多见于青少年，胃溃疡多见于中老年人(陈灏珠,林果为等.实用内科学[M].上海:复旦大学出版社,2010:1981.)。数据统计，2015年全球约有8740万人被确诊患上此病，并导致267500人死亡(Collaborators G 2MM.Global,regional,and national levels of maternal mortality,1990-2015:asystematic analysis for the Global Burden of Disease Study

2015[J].Lancet,2016,388(10053):1775-1812.)。虽然与其他疾病相比，PUD死亡率并不高，但会给患者的生活和劳动带来极大的不便，且任何治疗方案都不可能做到100％的根除(调查协作组.中国消化性溃疡治疗现状调查报告[J].中华消化杂志,2007,27(2).)。研究显示，慢性溃疡若不及时治疗，溃疡边缘粘膜上皮因受长期刺激，逐渐发展为不典型增生以致发生癌变。尽管消化道疾病在诊治方面已有可观的研究成果，但发现此类疾病新的治疗途径和药物依旧是当下研究的一大热点。

可溶性环氧化合物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)是在自然界之中的哺乳动物体内起到不可替代作用的一种酶，其特点是对脂质环氧脂肪酸有着很高的选择性。研究表明，sEH在哺乳动物体内主要存在于肝脏，肾脏，肠道，大脑和脉管系统之中。环氧二十碳三烯酸(EETs)是花生四烯酸的生物活性代谢产物，sEH可作为哺乳动物体内的一种高效催化剂催化EETs使其代谢失活，使之转化为与反应物相对应的二羟基二十碳三烯酸(DHETs)。具有强大的生物活性的EETs能够参与多种生理功能发生的过程，其在哺乳动物的机体内能够起到舒张血管、降低血压等功能，并在炎症性肠病、慢性消化性溃疡、败血症等许多疾病中发挥抗炎作用。

在此原理上，通过抑制sEH酶活性，提高机体内EETs水平和活性的方式就可以缓解和治疗消化性溃疡、慢性胃炎等多种消化道疾病。正因为此，寻找潜在的有效的sEH抑制剂作为药品，用于治疗高血压、疼痛、炎症性疾病等已成为研究的一大热点。我国中南大学的许丹焰、中国科学院上海药物研究所的龙亚秋教授就正在将研究的重心转向sEH抑制剂的研究与开发。而国外企业如Merck公司先后开发了四类sEH抑制剂，辉瑞和日本住友制药也在这一领域有所进展。现今，寻找新型有效的sEH抑制剂无疑成为消化道疾病和消炎镇痛新药研发的一个重要方向。

胡椒是我国传统中药，药用历史悠久。其始载于《新修本草》“胡椒生西戎，形如鼠李子，调食用之，味甚辛辣。”胡椒味辛，性热，归胃、大肠经，具有温中下气、消痰解毒的功效。现代医学研究表明，胡椒可用于治疗消化不良、咳嗽、支气管炎、腹痛腹泻等症状。胡椒碱是从胡椒中提取出的化合物，也是其主要的活性成分。胡椒碱在生物医药方面具有抗氧化、镇静抗惊厥、降血脂、抗抑郁、抗肿瘤以及对胃肠疾病较好的抗炎作用。近年来胡椒碱的生物活性和药理作用被广泛研究，但其中大多是通过免疫学角度进行的对消化道疾病及各类炎症的研究，至今尚未有其作为可溶性环氧化合物水解酶抑制剂的研究和报道。

发明内容

本发明的目的是提供胡椒碱在制备sEH抑制剂中的应用。

本发明的技术方案概述如下：

胡椒碱在制备sEH抑制剂中的应用，所述胡椒碱用式(I)所示，

所述的sEH抑制剂胡椒碱可以治疗消化性溃疡。

本发明的优点：酶动力学活性测试及药效团结果显示胡椒碱具有较好的抑制sEH活性作用。此化合物毒副作用小，水溶性好，基于可溶性环氧化物水解酶的作用原理，本化合物有预防和治疗消化性溃疡等消化道疾病的功效，可用于制备sEH抑制剂。

胡椒碱可以与药学上可接受的载体制备成药物组合物从而发挥sEH抑制剂的作用。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

胡椒碱对sEH的抑制活性测试:

胡椒碱(纯度≥98％)购于D-chem(上海旭硕生物科技有限公司)

特异性底物(3-苯基-氧基)-乙酸氰基-(6-甲氧基-萘-2-基)甲酯即PHOME(密歇根州安阿伯开曼化工公司)本身无荧光,但在sEH的作用下水解生成产物6-甲氧基-2-萘醛(6-methoxy-2-naphthaldehyde),后者能在330nm光波激发下发出波长为465nm的荧光。检测到的荧光信号强弱与sEH的抑制作用强弱成反比。根据以上原理,利用反应速率法测定sEH的酶活性。在反应曲线上选取初始阶段最接近直线的一段,即可计算其反应初速度Vmax(标示酶活性水平)。求出各样品处理后酶的Vmax,然后与正常对照进行比较,计算出各样品的百分抑制率。动力学监测模式连续读取各时间点的荧光信号强度值,代表产物的生成量,按照酶反应速率法,其产物的生成速率可以反映酶的活力。

将胡椒碱溶解于二甲基亚砜，终浓度为0.1、1、10、100.0μM。在96孔板上加PHOME用sEH在37℃水解所有化合物，然后在465nm处检测到荧光信号。以探针底物群(不含评价化合物)作为对照。以TPPU(一种可溶性环氧化酶抑制剂)作为对照药物。

利用双倒数作图法和Dixon技术对胡椒碱的sEH酶进行动力学分析。本试验在阳性和阴性的对照试验中，在1-30μM的PHOME浓度范围内进行了试验。

从蛋白数据库(PDB)下载可溶性环氧化物水解酶(sEH)及其同源配体的x射线晶体结构(http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do,PDB ID:4OCZ)。胡椒碱的3D结构由Discovery Studio 3.5(美国加利福尼亚州圣地亚哥Biovia公司)构建并最小化。随后，使用Discovery Studio 3.5z中的CDOCKER协议进行受体和配体的对接。化合物胡椒碱可以很好地对接到sEH的催化位点空腔中。但该化合物与蛋白质残基间未形成氢键。该化合物与残基His524之间形成了一种π键相互作用，是sEH环氧水解酶结构域中Asp 335-Asp 496-His524(天冬氨酸335-天冬氨酸496-组氨酸524)催化三元结构域中的一部分。

经测定的试验结果如下：

表1.胡椒碱对sEH的抑制作用；

表2.胡椒碱对sEH的动力学参数；

表3.胡椒碱与sEH的相互作用信息。

表1.胡椒碱对sEH的抑制作用

表2.胡椒碱对sEH的动力学参数

表3.胡椒碱与sEH的相互作用信息

活性测试结果显示该化合物抑制sEH活性。