具体实施方式

本发明的描述涉及用于治疗情感障碍，如(例如)情绪病症的制剂，其包含有效量的一种或多于一种大麻素受体激动剂(CB受体激动剂)，如(例如)大麻素和有效量的一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂，如(例如)一种或多于一种单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制剂的组合。

不希望受理论束缚，据信一种或多于一种CB受体激动剂(如(例如)将不会引起精神活性副作用的大麻素，如(例如)大麻二醇(CBD))与一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂，如(例如)MAGL抑制剂(例如，JZL184或KML2)的组合可以为患有情感障碍的受试者提供改善的治疗结果。具体地，在具有苯二氮或大麻耐受性问题的受试者中和/或在不想使用完整大麻植物产品或其粗/标准提取物的受试者中。

据信当与包含丝氨酸水解酶抑制剂(如(例如)MAGL抑制剂)，但不包含一种或多于一种CB受体激动剂以及一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂的制剂相比时，由于一种或多于一种CB受体激动剂与一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂的组合，可以降低非精神活性CB受体激动剂(例如，大麻素，如大麻二醇)的抗焦虑作用所需的治疗剂量。因此，本文所描述的制剂可以帮助减轻和避免与一种CB受体激动剂，如大麻素的使用期间所观察到的耐受性和依赖性有关的问题，并且还可以用作苯二氮，如地西泮的替换。

还据信化合物的组合可以协同作用，即显示出大于加合作用的作用。具体地，一种或多于一种CB受体激动剂与一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂的组合可以协同行动，即显示出大于加合作用的作用。

此外，据信一种或多于一种CB受体激动剂和一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂可以降低可以开给患者的CB受体激动剂和丝氨酸水解酶抑制剂的剂量，借此降低成本并提高治疗性抗焦虑产品的边际利润。

CB受体激动剂和丝氨酸水解酶抑制剂的治疗剂量可以减轻苯二氮的有害副作用。不希望受理论束缚，据信CB受体激动剂和丝氨酸水解酶抑制剂之间的协同作用导致CB受体激动剂的有效剂量降低。此外，CB受体激动剂，如(例如)大麻二醇，如CBD具有可以减轻精神活性及其它有害副作用，例如，GABA(A)调节剂药物，如苯二氮的那些副作用的生物活性(例如，所描述的抗-癫痫、抗-抑郁作用、对由THC所引起的对记忆的影响的缓解、食欲调节)。另外，本文所描述的制剂避免了吸烟的副作用。

通过使用具有与一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂结合的一种或多于一种CB受体激动剂的制剂，有可能准确控制每种生物活性分子在制剂中的剂量。相反，当使用大麻提取物时，这种控制可能是不可能的，其中可能不能避免使用含有精神活性分子的完整大麻产品的副作用。

CB受体激动剂

术语“大麻素受体激动剂”或者“CB受体激动剂”是指作用于一种或多于一种CB受体，如(例如)1型大麻素受体(CB₁)或者2型大麻素受体(CB₂)，或者可以另外与内源性大麻素系统或其它大麻素-结合蛋白，如(例如)瞬时受体电位阳离子通道(例如，TRPV1、TRPV2、TRPA1、TRPM8)、GPR(例如，GPR55、GPR18、GPR119)受体、血清素受体(例如，5-HT1A)、内源性大麻素转运蛋白和再摄取蛋白、α3甘氨酸受体、腺苷酸A1受体或α2肾上腺素能受体相互作用或调节它们的物质、组合物、化合物或分子。

可以通过3组主要的配体激活大麻素受体，内源性大麻素(通过哺乳动物身体产生)、植物大麻素(phytocannabinoid)或植物大麻素(plant cannabinoids)(通过植物，例如，大麻植物产生)和合成大麻素(人工或合成产生)。CB受体激动剂可以是作用于CB₁的物质、组合物、化合物或分子。在另一实例中，CB受体激动剂可以是作用于CB₂的物质、组合物、化合物或分子。

如本文所描述的制剂可以包含约1mg至约1000mg或者它们之间的任意量的有效量的一种或多于一种CB受体激动剂。例如，一种或多于一种CB受体激动剂的有效量可以是1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg，或者它们之间的任意量。一种或多于一种CB受体激动剂可以(例如)是大麻素、大麻二醇(CBD)，或CBD衍生物，或CBD前体，或CBD类似物。

此外，一种或多于一种CB受体激动剂的有效剂量可以包含约0.05mg/kg至约150mg/kg或者它们之间的任意量。例如，一种或多于一种CB受体激动剂的有效剂量可以是0.05mg/kg、0.06mg/kg、0.07mg/kg、0.08km/kg、0.09mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8km/kg、0.9mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg或者它们之间的任意量。

大麻素

在一个实例中，CB受体激动剂可以是一种或多于一种大麻素或者大麻素衍生物或类似物。例如，大麻素可以是植物大麻素。例如，大麻素可以提取和/或纯化自大麻植物。

术语“大麻植物”涵盖了野生型大麻(Cannabis sativa)及其变种，包括天然含有不同的量的各种大麻素的奇摩大麻(cannabis chemovars)(以化学组成为特征的变种)，以及大麻印度亚种(Cannabis sativa subspecies indica)，包括变种var.indica和var.kafiristanica、印度大麻(Cannabis indica)以及由遗传杂交、自杂交或其杂交体所引起的植物。此外，大麻植株包括(例如)大麻(Cannabis sativa)、印度大麻(Cannabisindica)或莠草大麻(Cannabis ruderalis)种。因此，术语“大麻植物材料”将理解为涵盖了来源于不论品种的一种或多种大麻植物的植物材料。为了避免疑问，在此声明“大麻植物材料”包括草本植物大麻和干燥的大麻生物质。

例如，可以使用来源于具有相对高CBD(如CBDA和/或CBD)含量的大麻植物的大麻植物材料。例如，可以使用CBDA/CBD含量>总大麻素含量的90％的大麻品种(奇摩大麻(chemovars))。具体地，可以(例如)从高CBD株，如(例如)Charlotte's Web或阿维德克尔(Avidekal)提取或纯化植物大麻素。

植物大麻素的非限制性实例包括大麻二醇(CBD)或CBD衍生物、异常CBD、大麻萜酚(CBG)、大麻环萜酚(CBC)、大麻环醇(CBL)、次大麻酚(也称为cannabivarol或CBV)、四氢次大麻酚(THCV，THV)、次大麻二酚(CBDV)、次大麻色酚(CBCV)、次大麻萜酚(CBGV)、大麻萜酚一甲基醚(CBGM)。在一个非限制性实例中，大麻素可以是从一种或多种高CBD株，如(例如)Charlotte's Web或阿维德克尔(Avidekal)提取和纯化的大麻二醇(CBD)。

在另一实例中，大麻素可以是合成大麻素(也称为合成大麻(syntheticcannabis)(合成大麻(synthetic marijuana))或者合成大麻素受体激动剂)，例如，但不限于大麻环己醇(CP 47,497)、JWH-018、JWH-073或HU-210、表焙儿茶素、表儿茶精、醉椒素(Kavain)、醉椒素(Yangonin)、N-花生四烯酰多巴胺、大麻二醇(CBD)、大麻酚(CBN)、HU-210、11-羟基-Δ9-四氢大麻酚(11-OH-THC)、屈大麻酚或左南曲朵(CP50,556-1)。

如本文所描述的制剂可以包含约1mg至约1000mg或者它们之间的任意量的有效量的一种或多于一种大麻素。例如，一种或多于一种大麻素的有效量可以是1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg，或者它们之间的任意量。一种或多于一种大麻素可以(例如)是大麻二醇(CBD)、或CBD衍生物、或CBD前体、或CBD类似物。在一个实例中，本文所描述的制剂可以因此包含约1mg至约1000mg或者它们之间的任意量的有效量的CBD或CBD衍生物。例如，CBD或CBD衍生物的有效量可以是1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg，或者它们之间的任意量。

此外，一种或多于一种大麻素的有效剂量可以包含约0.05mg/kg至约150mg/kg或者它们之间的任意量。例如，一种或多于一种大麻素的有效剂量可以是0.05mg/kg、0.06mg/kg、0.07mg/kg、0.08km/kg、0.09mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8km/kg、0.9mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg或者它们之间的任意量。一种或多于一种大麻素可以(例如)是大麻二醇(CBD)、或CBD衍生物、或CBD前体、或CBD类似物。

纯化/提取

从植物材料开始，制备处于基本纯的形式的来自植物的大麻素的方法在本领域中是已知的。例如，作为参考并入本文的WO 02/064109[8]描述了从大麻植物材料获得完整提取物的一般方法。WO 02/32420公开了从植物材料制备(例如)Δ⁹-THC的方法[9]。它利用CO₂提取和乙醇沉淀以获得含有Δ⁹-THC和CBD以及少量(例如)单萜、倍半萜烯、烃、生物碱、黄酮和叶绿素的“初级提取物”。然后，通过催化反应将CBD转化为Δ⁹-THC。ODCCP麻醉品公报(ODCCPBulletin on Narcotics)[10]公开了使用制备级气相色谱法分离CBD、THC和CBN的方法。另一期ODCCP麻醉品公报[11]描述了使用石油醚和甲醇的多溶剂提取法。Smith andVaughan在Journal of Pharmacy and Pharmacology[12]中公开了多种溶剂作为溶解大麻素的提取媒介物的使用。作为参考并入本文的US 7700368[13]描述了通过使用溶剂提取、色谱法和重结晶步骤的组合，制备大麻草药的大麻素和大麻素酸成分的纯化形式的纯化方法，大麻素酸成分包括大麻素酸Δ9THCA和CBDA、相对应的游离大麻素Δ9THC与CBD以及少量大麻素。此外，作为参考并入本文的WO 2004026802[14]描述了从植物材料制备大麻二醇的方法。通过在溶剂中溶解提取物以形成溶液，从该溶液除去不溶性材料并从溶液蒸发溶剂以获得基本纯的大麻二醇，从植物材料的含有大麻二醇的提取物获得了来自植物材料的基本纯的大麻二醇(CBD)。此外，在Waters Application Notes中描述了大麻二醇的纯化实例[15]。

优选地使用来源于具有相对高CBD(如CBDA和/或CBD)含量的大麻植物的大麻植物材料。例如，通过使用标准选择育种技术，可以开发具有高CBD含量的大麻品种，例如，可以(例如)具有>90％的总大麻素含量的CBDA/CBD含量的品种，例如，Charlotte's Web或阿维德克尔(Avidekal)。

如果将从中制备CBD的植物材料含有大量大麻素酸CBDA，则可以对植物材料进行脱羧步骤以将CBDA转化为游离大麻素CBD。这可以在含有CBD的植物提取物的制备之前进行或者可以构成这种提取方法的一部分。

大麻素，如(例如)，大麻二醇(CBD)的“基本纯的”的制备的定义为色谱纯度为95％或以上，更优选地96％或以上，更优选地97％或以上，更优选地98％或以上，更优选地99％或以上并且最优选地99.5％或以上的制备，如通过HPLC UV谱图的面积归一化所确定的。

丝氨酸水解酶抑制剂

丝氨酸水解酶(SH)是哺乳动物中最大且最多样的酶类之一。它们在几乎所有生理学过程中都起着基本作用，并且通过药物靶向以治疗疾病，如(例如)压力、焦虑、情绪病症和神经退行性病症。存在～240种人丝氨酸水解酶，其可以分为两个大小接近相等的亚组——丝氨酸蛋白酶(～125个成员)和“代谢性”丝氨酸水解酶(～115个成员)[16]。多种丝氨酸水解酶已成为具有治疗潜能的酶并且是大量抑制剂发现项目的焦点。已证明通过共价机制起作用的化合物在选择性抑制丝氨酸水解酶方面是特别有效的。

术语“丝氨酸水解酶酶抑制剂”、“丝氨酸水解酶抑制剂”、“水解酶抑制剂”或“SH抑制剂”表示抑制、阻断、降低属于丝氨酸水解酶超家族的酶的活性或使其失活的物质、组合物、化合物或分子。丝氨酸水解酶可以含有对大部分丝氨酸水解酶常见的经典GXSXG共有序列。丝胺酸水解酶中的催化三联体可以包含Ser122、His269和Asp239。丝氨酸水解酶抑制剂的非限制性实例为乙酰胆碱酯酶(ACHE)抑制剂：利凡斯的明、多奈哌齐、加兰他敏、他克林；二肽基肽酶-4(DPP4)抑制剂：西他列汀、沙格列汀、利拉利汀、维达列汀、阿格列汀；胰/胃脂肪酶抑制剂：奥利司他；凝血抑制剂：达比加群(Dabigatran)、阿加曲班；因子Xa抑制剂：利伐沙班；血栓形成人嗜中性白细胞弹性蛋白酶抑制剂：西维来司他钠(Sivelestat)；脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)抑制剂：OL-135、URB597、PF-04457845；成纤维细胞激活蛋白(FAP)/二肽基肽酶抑制剂：PT-100；内皮脂肪酶(LIPG)抑制剂：磺酰基呋喃脲1；磷脂酶A2(PLA2G7)抑制剂：达拉帕地(Darapladib)；脯氨酰羧肽酶(PRCP)抑制剂：化合物80；脯氨酰内肽酶(PREP)抑制剂：S17092、JTP-4819；甘油三酯水解酶(TGH)抑制剂：GR148672X；芳基乙酰胺脱乙酰酶-样蛋白1(AADACL1)抑制剂：AS115、JW480；α/β-水解酶(ABHD6)抑制剂：WWL123；α/β-水解酶(ABHD11)抑制剂：AA44-2、WWL222；酰基肽水解酶(APEH)抑制剂：AA74-1；单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制剂：JZL184；血小板活化因子乙酰水解酶-2(PAFAH2)抑制剂：AA39-2；蛋白甲基酯酶-1(PME-1)ABL127；等等。

丝氨酸水解酶抑制剂的非限制性实例为单酰基甘油脂肪酶(MAGL)的抑制剂。因此，丝氨酸水解酶抑制剂可以(例如)是一种或多于一种MAGL抑制剂。

如本文所描述的制剂可以包含约1mg至约1000mg或者它们之间的任意量的有效量的一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂。例如，一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂的有效量可以是1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg，或者它们之间的任意量。一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂可以(例如)是MAGL抑制剂，如(例如)JZL184、JZL184衍生物、KML29或KML29衍生物。

此外，一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂的有效剂量可以包含约1mg/kg至约150mg/kg或者它们之间的任意量。例如，一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂的有效剂量可以是1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg或者它们之间的任意量。一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂可以(例如)是MAGL抑制剂，如(例如)JZL184、JZL184衍生物、KML29或KML29衍生物。

单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制剂

单酰基甘油脂肪酶(MAGL)，也称为MAG脂肪酶、MAGL、MAGL酶、MGL或MGLL，是属于α/β-水解酶家族的酶。它们在内源性大麻素2-花生四烯酰甘油(2-AG)的水解中是重要的。在人类中，通过MGLL基因编码MAGL。MAGL是丝氨酸水解酶超家族的33-kDa膜-结合成员并且含有对大部分丝氨酸水解酶常见的经典GXSXG共有序列。MAGL是通过将2-AG水解为甘油和花生四烯酸(AA)的2-AG的主要降解酶。

术语“单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制剂”、“单酰基甘油脂肪酶抑制剂”、“MAGL抑制剂”、“MAGL酶抑制剂”、“MAGL抑制剂化合物”、“MAGL的抑制剂”、“MAGL活性抑制剂”或“MAGL拮抗剂”表示抑制、阻断、降低MAGL酶的活性或者使其失活的物质、组合物、化合物或分子。MAGL抑制物质、组合物、化合物或分子可以结合至任何以下元素：编码MAGL酶的基因、基因的转录因子、基因的任何表达产物，例如，但不限于此，MAGL酶的信使RNA，并且降低或抑制它所结合的分子的表达和活性，和/或其胞内信号转导，借此导致MAGL酶活性的完全或部分抑制。MAGL抑制剂包括防碍MAGL的表达、修饰、调控或激活的化合物或者下调MAGL的一种或多种正常生物活性(例如，其丝氨酸水解酶活性)的化合物。具体地，一种或多于一种MAGL抑制剂可以阻断或抑制MAGL的酶促活性。例如，MAGL抑制剂可以靶向位于MAGL催化位点附近的亲核半胱氨酸残基(Cys201、Cys208和Cys242)或者MAGL抑制剂可以靶向MAGL的亲核Ser122残基。

如本文所使用的，术语“抑制”是指丝氨酸水解酶，例如，MAGL酶的活性的降低或抑制，或者丝氨酸水解酶催化的反应的生物活性或过程的基线活性的显著降低。丝氨酸水解酶，如(例如)MAGL的抑制可以是不可逆的或者丝氨酸水解酶，如(例如)MAGL的抑制可以是可逆的，因此一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂可以是不可逆的丝氨酸水解酶抑制剂或者一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂可以是可逆的丝氨酸水解酶抑制剂。

还抑制其它脑丝氨酸水解酶(例如，FAAH)的MAGL拮抗剂化合物可以防碍通过那些其它酶所介导的多种生物学功能。MAGL的这些非选择性抑制剂可能具有不希望的副作用。因此，选择性抑制MAGL酶的分子在当前应用中是优选的。一种或多于一种MAGL抑制剂可以特异性抑制MAGL酶活力，同时不会对其它脑丝氨酸水解酶(例如，FAAH)造成显著影响。因此，一种或多于一种MAGL抑制剂可以是选择性MAGL抑制剂。

一种或多于一种MAGL抑制剂可以选自由下列所组成的列表(但不限于此)：MAGL酶的拮抗剂(优选地化学品)、MAGL酶的沉默RNA或特异性抗体(优选地，抗体是单克隆的)。

MAGL酶活性的化学抑制剂的实例为(但不限于此)马来酰亚胺-基MAGL抑制剂(N-乙基马来酰亚胺(NEM)、N-花生四烯酸马来酰亚胺(NAM)、1-联苯基-4-基甲基马来酰亚胺)；天然化合物，如MAGL抑制剂(扁蒴藤素和大戟甾醇)；二硫化物-基MAGL抑制剂(双硫仑及相关类似物)；异噻唑啉酮-基MAGL抑制剂(辛基异噻唑酮)；氨基甲酸酯-基MAGL抑制剂(URB602(104)和URB602类似物、4-双丙烯甲醇类似物JZL184、4-芳氧基苄基-基类似物JZL195、JZL184、JZL195、KML29、JW642、[2,4-二硝基苯基-4-二苯甲基哌嗪-1-二硫代甲酸酯](CK16)、2,4-二硝基苯基-4-(4-叔丁基苄基)哌嗪-1-二硫代甲酸酯(CK37)和MJN110)；脲-基MAGL抑制剂(AM6701、SAR629、ML30、JJKK-048、JZL184的1,2,4-三唑类似物)；其它MAGL抑制剂(OMDM169)、MAGL酶的沉默RNA和特异性抗体。

一种或多于一种MAGL抑制剂可以是(例如)JZL184或KML29。JZL184(4-硝基苯基-4-[双(1,3-苯并二茂-5-基)(羟基)甲基]哌啶-1-羧酸酯)是MAGL的不可逆抑制剂。KML29([4-(8-氯-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]环庚[1,2-b]吡啶-11-基亚基)-1-哌啶基](1H-1,2,4-三唑-1-基)甲酮)是MAGL的选择性可逆抑制剂。

如本文所描述的制剂可以包含约1mg至约1000mg或者它们之间的任意量的有效量的一种或多于一种MAGL抑制剂。例如，一种或多于一种MAGL抑制剂的有效量可以是1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg，或者它们之间的任意量。一种或多于一种MAGL抑制剂可以(例如)是JZL184或JZL184衍生物和KML29或KML29衍生物。

在一个实例中，本文所描述的制剂可以因此包含约1mg至约1000mg或者它们之间的任意量的有效量的JZL184或JZL184衍生物。例如，JZL184或JZL184衍生物的有效量可以是1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg，或者它们之间的任意量。

在一个实例中，本文所描述的制剂可以因此包含约1mg至约1000mg或者它们之间的任意量的有效量的KML29或者KML29或它们的衍生物。例如，KML29或者KML29或它们的衍生物的有效量可以是1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg，或者它们之间的任意量。

此外，一种或多于一种MAGL抑制剂的有效剂量可以包含约1mg/kg至约100mg/kg或者它们之间的任意量。例如，一种或多于一种MAGL抑制剂的有效剂量可以是1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg，或者它们之间的任意量。一种或多于一种MAGL抑制剂可以(例如)是JZL184或JZL184衍生物和KML29或KML29衍生物。

本发明的化合物的术语“有效量”或“治疗有效量”是指将引起受试者的生物或医学反应，例如，酶或蛋白活性的减小或抑制或者改善症状、减轻病况、减缓或延迟疾病发展或者预防疾病等的本发明的化合物的量。在一个非限制性实施方式中，术语“有效量”或“治疗有效量”是指当施用于细胞或组织或非细胞生物材料或媒介物时，对于至少部分降低或抑制MAGL、ABHD6或ABHD 12的活性；或者至少部分降低或抑制MAGL、ABHD6或ABHD 12的表达有效的本发明的制剂内的化合物的量。在另一非限制性实施方式中，术语“有效量”或“治疗有效量”是指当向受试者施用时，对于至少部分减轻、抑制、防止和/或改善情感障碍有效的本发明的制剂内的化合物的量。

情感障碍

本文所描述的制剂可以用于治疗“情感障碍”。术语“情感障碍”是指具有症状，包括(但不限于)抑郁、焦虑和/或精神异常的任何类型的情绪病症。这些病症的特征在于多种症状，其包括(但不限于)对工作、学习、睡眠、进食和享受一次愉快活动的能力的干扰。抑郁的其它症状可以包括持续悲伤、焦虑或“空虚”情绪、绝望感、悲观、罪恶感、无价值或无助感、对曾乐于从事的兴趣与活动(包括性生活)失去兴趣或愉悦、活力降低、疲劳和“怠工”感、不安、兴奋、难以专注、记忆或作决定、睡眠障碍，如失眠、凌晨清醒或睡过头、食欲不振和/或体重减轻或暴食和体重增加、死亡或自杀的想法和/或自杀企图，以及对治疗无反应的持续性身体症状，如头痛、消化病症与慢性疼痛。

在一个实例中，本文所描述的制剂可以用于治疗焦虑。焦虑的非限制性实例可以包括焦虑症、恐惧症、恐慌症、惊恐发作、强迫症、创伤后应激障碍(PTSD)、分离性焦虑障碍、情境性焦虑障碍、压力或它们的组合。

协同作用

不希望受理论束缚，据信当一种或多于一种CB受体激动剂和一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂组合时，实现了协同作用。

因此，一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂(例如，MAGL抑制剂，如JZL184或KML29)可以与一种或多于一种CB受体激动剂(例如，大麻素)组合施用，从而使用与试剂单独或独自施用时相比，每种试剂更低的剂量治疗焦虑，因此当与单独施用时将显示出的每种试剂的副作用相比时，降低了CB受体激动剂和/或丝氨酸水解酶抑制剂的副作用。因此，可以通过施用一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂(如(例如)MAGL抑制剂)以及一种或多种CB受体激动剂(如(例如)大麻素)获得协同结果。

此外，可以降低一种或多于一种CB受体激动剂(如(例如)大麻素)或者一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂(如(例如)MAGL抑制剂)的治疗剂量，借此提高产品的成本效率/利润。此外，由于它具有抗抑郁作用、抗-癫痫作用，一种或多于一种CB受体激动剂可以减轻GABA(A)调节剂，如苯二氮的副作用，并且可以减轻如THC的其它药物对记忆的负面作用。

“协同作用”表示两种或更多种试剂的组合，例如，一种或多于一种CB受体激动剂(如(例如)大麻素)和一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂(如(例如)MAGL抑制剂)的组合获得了<1.0的复合指数(CI)。使用CompuSyn软件，通过Chou-Talalay复合指数法确定了药物组合的CI[17,18]。如果CI<1，则可以认为药物组合具有协同作用，如果CI>1，则可以认为具有拮抗作用，并且如果CI＝1，则可以认为具有加合作用。

因此，制剂可以包含一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂(SHI)和一种或多于一种CB受体激动剂(CB)的协同组合。例如，可以提供一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂(SHI)和一种或多于一种CB受体激动剂(CB)的有效剂量的以下组合：

*“x”的值是如表中所指明的，与CB受体激动剂(CB)剂量(mg/kg)结合的丝氨酸水解酶抑制剂(SHI)剂量(mg/kg)的组合。一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂(SHI)可以是MAGL抑制剂，如(例如)JZL184、JZL184衍生物、KML29或KML29衍生物。一种或多于一种CB受体激动剂(CB)可以是一种或多于一种大麻素，例如，大麻酚(CBD)。

例如，可以提供一种或多于一种丝氨酸水解酶抑制剂(SHI)和一种或多于一种CB受体激动剂(CB)的有效剂量的以下组合：CBD(0.1mg/kg)+KML29(3mg/kg)，CBD(1mg/kg)+KML29(30mg/kg)，CBD(0.1mg/kg)+JZL184(3mg/kg)和CBD(0.1mg/kg)+JZL184(3mg/kg)。

药物组合物

另一方面，本发明公开涉及包含本文所描述的制剂的药物组合物。药物组合物包含生理学可用的表面活性剂、载体、稀释剂、赋形剂、平滑剂、悬浮剂、成膜物质和包衣助剂或它们的组合；和本文所公开的化合物或组合。用于治疗性使用的可用的载体或稀释剂在药物领域是熟知的并且描述于(例如)Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.(1990)，以上文献以其全部内容作为参考并入本文[19]。可以在药物组合物中提供防腐剂、稳定剂、染料、甜味剂、香料、调味剂等。例如，可以作为防腐剂添加苯甲酸钠、抗坏血酸和p-羟基苯甲酸的酯。另外，可以使用抗氧化剂和助悬剂。在多个实施方式中，醇、酯、硫酸化脂肪醇等可以用作表面活性剂；蔗糖、葡萄糖、乳糖、淀粉、结晶纤维素、甘露糖醇、轻质无水硅酸盐、铝酸镁、甲基硅酸铝酸镁、合成硅酸铝、碳酸钙、碳酸氢钠、磷酸氢钙、羧甲基纤维素钙等可以用作赋形剂；硬脂酸镁、滑石、硬化油等可以用作平滑剂；椰子油、橄榄油、芝麻油、花生油、大豆可以用作悬浮剂或润滑剂；作为碳水化合物，如纤维素或糖的衍生物的苯二甲酸醋酸纤维素或者作为聚乙烯的衍生物的乙酸甲酯-甲基丙烯酸酯共聚物可以用作悬浮剂；并且增塑剂，如酯邻苯二甲酸酯等可以用作悬浮剂。

术语“药物组合物”是指本文所公开的化合物、制剂或化合物的组合与其它化学成分，如稀释剂或载体的混合物。药物组合物有利于化合物或制剂向生物的施用。在本领域中存在多种施用化合物或制剂的技术，其包括(但不限于)口服、注射、气溶胶、肠胃外和局部施用。还可以通过将化合物或制剂与无机或有机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、p-甲苯磺酸、水杨酸等反应获得药物组合物。

术语“载体”定义了有利于化合物或制剂向细胞或组织中掺入的化合物。例如，二甲基亚砜(DMSO)是常用的载体，因为它有利于多种有机化合物向生物细胞或组织的吸收。

术语“稀释剂”定义了在水中稀释的化合物，其将溶解所关心的化合物并且稳定化合物的生物活性形式。在本领域中，将溶于缓冲溶液中的盐用作稀释剂。一种常用的缓冲溶液是磷酸盐缓冲盐水，因为它模拟了人血液的盐条件。由于缓冲盐可以以低浓度控制溶液的pH，因此缓冲稀释剂很少改变化合物或制剂的生物活性。

术语“生理学可接受的”定义了不终止化合物的生物活性和性质的载体或稀释剂。

本文所描述的药物组合物可以施用于人患者本身，或者以其中它们与适合的载体或赋形剂混合的药物组合物施用。本发明申请的化合物的制剂和施用技术可见于“Remington's Pharmaceutical Sciences”,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,第18版,1990[19]。

适合的施用途径可以(例如)包括口服、直肠、经粘膜、舌下、透皮、局部或肠施用；肠胃外递送，包括肌内、皮下、静脉内、髓内注射以及鞘内、直接心室内、腹膜内、鼻内或眼球内注射。为了延长和/或以预定速率定时、脉冲式施用，还可以以缓释或控释剂量形式施用化合物或制剂，包括积存注射、渗透泵、丸剂、透皮(包括电转运)贴片等。

可以以本身已知的方式，例如，通过常规混合、溶解、造粒、糖锭-制备、磨粉、乳化、包封、包埋或压片法生产本发明的药物组合物。

因此，可以使用一种或多种生理学可接受的载体，以常规方式配制用于根据本发明的用途的药物组合物，生理学可接受的载体包含有利于将活性化合物加工成可以药物使用的制剂的赋形剂和助剂。正确的配制取决于所选择的施用途径。可以使用适合的和本领域；例如，以上Remington's Pharmaceutical Sciences[19]中所理解的任何熟知的技术、载体和赋形剂。

可以以常规形式作为液体溶液或混悬液、在注射前适合于液体中的溶液或混悬液的固体形式或者作为乳液制备注射剂。适合的赋形剂是(例如)水、盐水、葡萄糖、甘露糖醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸钠、半胱氨酸盐酸盐等。另外，如果需要，可注射用药物组合物可以含有少量无毒助剂物质，如润湿剂、pH缓冲剂等。生理学相容的缓冲剂包括(但不限于)汉克溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液。如果需要，可以使用吸收增强制剂(例如，脂质体)。

对于经粘膜施用，可以在制剂中使用对于要渗透的障碍适合的渗透剂。

用于肠胃外施用，例如，通过弹丸注射或连续输注的药物制剂包括活性化合物以水溶性形式的水溶液。另外，可以根据情况将活性化合物的混悬液制备成油性注射混悬液。适合的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油剂，如芝麻油，或者其它有机油剂，如大豆、葡萄柚或杏仁油，或者合成脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。水性注射混悬液可以含有提高混悬液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，混悬液还可以含有提高化合物溶解度以使得能够制备高浓度溶液的适合的稳定剂或试剂。用于注射的制剂可以以具有添加的防腐剂的单位剂量形式存在(例如)于安瓿瓶中或者多剂量容器中。组合物可以采取油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳液的这些形式，并且可以含有配制试剂，如混悬、稳定和/或分散剂。作为另外一种选择，活性成分在使用之前可以处于用适合的媒介物，例如，无菌无热原水复原的粉末形式。

对于口服施用，可以通过将活性化合物与在本领域中熟知的药物可用的载体合并来容易地配制化合物。这些载体使得本发明的化合物能够配制为用于要治疗的患者口服摄入的片剂、丸剂、糖衣锭、胶囊剂、液体、凝胶剂、糖浆、浆液、混悬液等。可以通过将活性化合物与固体赋形剂合并，任选地研磨所得混合物，并且如果需要，在添加适合的助剂后，加工颗粒混合物以获得片剂或糖衣锭核来获得用于口服使用的药物制剂。具体地，适合的赋形剂为填充剂，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，如(例如)玉米淀粉、麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基-纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以添加崩解剂，如交联的聚乙烯基吡咯烷酮、琼脂或者海藻酸或其盐，如海藻酸钠。糖衣锭核提供有适合的涂层。为此目的，可以使用浓缩的糖溶液，其可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯基吡咯烷酮、卡巴浦尔凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或色素添加至片剂或糖衣锭涂层以用于鉴定或表征活性化合物剂量的不同组合。为此目的，可以使用浓缩的糖溶液，其可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯基吡咯烷酮、卡巴浦尔凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或色素添加至片剂或糖衣锭涂层以用于鉴定或表征活性化合物剂量的不同组合。

可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入配合式胶囊剂以及由明胶和增塑剂，如甘油或山梨糖醇制成的软密封胶囊剂。推入配合式胶囊剂可以含有与填充剂，如乳糖、粘结剂，如淀粉和/或润滑剂，如滑石或硬脂酸镁以及任选地稳定剂混合的活性成分。在软胶囊剂中，活性化合物可以溶解或混悬在适合的液体，如脂肪油剂、液体石蜡或液体聚乙二醇中。另外，可以加入稳定剂。用于口服施用的所有制剂应处于适合于这些施用的剂量。

对于口腔施用，组合物可以采取以常规方式配制的片剂或糖锭的形式。

对于通过吸入的施用，可以通过使用适合的抛射剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合的气体，将用于根据本发明的用途的化合物从加压包装或喷雾器中以呈现气溶胶喷雾的形式方便地递送。在加压气溶胶的情况下，可以通过提供阀门以递送计量的量来确定剂量单位。可以配制含有化合物和适合的粉末基材，如乳糖或淀粉的粉末混合物的用于在吸入器或吹入器中使用的(例如)明胶胶囊剂和药盒(cartridges)。

如本文所描述的制剂或药物制剂可以用于治疗受试者中的焦虑。因此，本发明公开还提供了通过向对其有需要的受试者施用如本文所描述的制剂或药物制剂治疗焦虑的方法。

焦虑可以包括广泛性焦虑症、恐惧症、恐慌症、惊恐发作、强迫症、创伤后应激障碍(PTSD)、分离性焦虑障碍、情境性焦虑障碍、压力或其组合。

治疗可以包括延长治疗期。例如，治疗期可以是至少21天。此外，治疗期可以是至少28天，35天，42天或者它们之间的任意时间。此外，延长治疗期可以是至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月。

治疗可以包括持久治疗期。例如，治疗期可以小于21天。例如，治疗期可以在约1至约21天之间或者是它们之间的任意天数。例如，治疗期可以是1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、12天、15天、18天、21天或者它们之间的任意时间段。

制剂可以向受试者口服、皮内、鼻内、肌内、腹膜内、静脉内或皮下施用。更具体地，由此所描述的制剂可以经粘膜或口服施用。经粘膜表面可以是经舌下、口腔、鼻、眼、阴道和/或直肠粘膜。

制剂还可以以具有药物稳定剂/添加剂的适当的气溶胶、液体、凝胶或片剂/固体药物载体递送。

实施例

根据以下实施例，本发明的这些及其它目标和特征将变得显而易见。如所描述的，以下实施例不意欲视为对本发明范围的限制。

技术人员将容易地理解可以对本文所提供的实施例和指示做出多种改变。例如，可以改变CBD的纯化和制剂。

大麻二醇(CBD)的提取和纯化

通过使用科学领域中已知的超临界流体提取法和色谱技术的组合，从高CBD大麻株提取和纯化大麻素(CBD)至纯度大于95％。还可以使用科学领域中已知的化学合成技术合成CBD。

从富含CBD(12.5％w/w，以干重计)的大麻素株收获干燥的大麻芽。用溶剂提取干燥的芽，从而获得了100-300克/公斤提取物/干燥的芽的提取物。将所得提取物通过色谱柱以从提取物中分离出CBD。将所收集的富含CBD的部分(>75％CBD w/w)在高压柱色谱法中进一步分离以收集纯的CBD(纯度>99.5％)。

提取方法的实例包括使用1)有机溶剂(甲苯和三甲基戊烷)、低分子量氯化烃(氯仿和二氯甲烷)和/或低分子量醇(乙醇)或者2)使用或不使用有机溶剂调节剂的超临界流体(CO2)[20]。

在Waters Application Notes中描述了大麻二醇的纯化实例[15]。简要地，将500-mg提取物部分在10mL甲醇中超声处理30分钟并使用磁力搅拌器以300rpm混合。在注射前，通过玻璃纤维过滤样品以除去任何碎片。使用Waters Prep 150LC系统进行制备色谱分离。使用具有半制备TaperSlit流通池的2489UV/可见光检测器检测CBD。进样体积为320μL。使用Waters部分收集器III(Waters Fraction Collector III)收集馏分。将所收集的馏分混合并蒸发溶剂以获得纯CBD。方法包括适当的色谱系统(Prep 150LC)、柱温(环境温度)、流速(30.0mL/min)、流动相(流动相-A：水和流动相B-甲醇)、梯度(2.5分钟，85％至100％B，在100％B保持2分钟)、柱(Sunfire C18 OBD^TMPrep,5μm,19×100mm)和检测系统(UV，228nm)。

使用配备有PDA检测器的UPLC系统进行分析色谱分离。方法包括适当的色谱系统(Waters ACQUITY UPLC H-Class)、柱(ACQUITY UPLC BEH C18，175μm，2.1×50mm)、柱温(50℃)、流速(1.0mL/min)，流动相(流动相A-0.1％的甲酸水溶液和流动相B-0.1％的甲酸乙腈溶液)、梯度(2.5分钟，60％至73％B)和检测系统(UV，228nm)。

纯化的CBD的UPLC-确定的纯度为99.5％。

临床前研究

小鼠中的剂量-反应研究

使用瑞士小白鼠评价了CBD、KML29和JZL184在旷场实验中对移动活动的影响。

选择了总计88只雄性瑞士小白鼠(～30-45g；7-9周大)并记录体重。根据组分配，用各个处理反复向动物施用7天(n＝8)。测试当天(第8天)，在适应实验室条件前1h，将动物带回实验室。使小鼠对场地习惯30min的一段时间。习惯后立即腹膜内施用各个处理(媒介物(10mL/kg)或地西泮(1mg/kg)或CBD(1、10和100mg/kg)或KML29(3、10和30mg/kg)或JZL184(3、10和30mg/kg))。在将处理动物置于旷场中后，追踪小鼠移动距离60min。通过使用Graph pad prism软件包(7.0版)，通过学生氏t-检验或双因子重复测量ANOVA，然后Bonferroni事后检验分析所获得的数据，并将小于0.05的p-值认为是显著的。

结果表明当与媒介物-处理的小鼠组相比时，1mg/kg i.p.的地西泮显著降低了移动力。当与媒介物-处理的小鼠组相比时，100mg/kg i.p.的CBD显著降低了移动力。当与媒介物-处理的小鼠组相比时，30mg/kg的KML29降低了移动力并且获得了显著性。JZL184以剂量-依赖性方式降低了移动力，但是影响未达到统计显著性(图1)。

制剂的抗焦虑作用

使用瑞士小白鼠并与地西泮相比，评价了CBD、KML29和JZL184在旷场实验中对移动活动的影响。

选择了总计48只雄性瑞士小白鼠(～30-45g；7-9周大)并记录体重。在适应实验室条件前1h，将动物带回实验室。旷场为通过具有相同尺寸的黑色塑料壁所包围的51×51×51cm的黑色场地。根据组分配，向动物反复施用各个腹膜内处理7天(n＝8)。测试当天(第8天)，使小鼠对场地习惯30min的一段时间。习惯后立即向动物施用各个处理(媒介物(10mL/kg)或地西泮(1mg/kg)；CBD，0.1mg/kg，i.p.+KML29，3mg/kg，i.p.；CBD，1mg/kg，i.p.+KML29，30mg/kg，i.p.；CBD，0.1mg/kg，i.p.+JZL184，3mg/kg，i.p.；CBD，1mg/kg，i.p.+JZL184，30mg/kg，i.p.)。在剂量施用后，将动物置于旷场中并使用Videomot软件追踪小鼠移动距离60min。在3天的时间段内进行实验，每天施用一次(在一天中对来自每个组的2或3只动物进行实验)。所有制剂均为施用/测试当前新鲜制备的。通过使用GraphPad prism软件包(7.02版)，通过学生氏t-检验或双因子重复测量ANOVA，然后Bonferroni事后检验分析所获得的数据，并将小于0.05的p-值认为是显著的。

制剂的制备：用足够体积的5％的N-甲基-2-吡咯烷酮(pharmasolve)和95％的30％w/v卡布迪索(captisol)溶解地西泮以获得0.10mg/mL的浓度并预期以10mL/kg剂量体积用于1mg/kg剂量的腹膜内施用。将CBD溶于计算体积的DMSO以获得20mg/mL的浓度(储液)。通过用1∶1:18比值的乙醇：Alkamuls EL-620：盐水稀释储液以制备0.01mg/mL和0.10mg/mL的浓度。将KML29溶于计算体积的DMSO以获得50mg/mL的浓度(储液)。通过用1:1:18比值的乙醇：Alkamuls EL-620：盐水稀释储液以制备0.30mg/mL和3.00mg/mL的浓度。将JZL184溶于计算体积的DMSO以获得50mg/mL的浓度(储液)。通过用1:1:18比值的乙醇：Alkamuls EL-620：盐水稀释储液以制备0.30mg/mL和3.00mg/mL的浓度。

结果表明当与媒介物处理相比时，1mg/kg i.p.的地西泮显著降低了小鼠的移动力。当与CBD共施用时，与媒介物-处理组相比，3和30mg/kg，i.p.的KML29显著降低了小鼠的移动力。当与CBD，1mg/kg，i.p.组合施用时，30mg/kg，i.p.的JZL184以剂量-依赖性方式显著降低了小鼠的移动力。J与CBD，0.1mg/kg，i.p.组合的3mg/kg，i.p.的ZL184相对降低了移动力，然而，与媒介物组相比，它未达到显著性(图2)。

毒性研究——KML29和JZL184制剂

实验1：本研究的目标在于确定在瑞士小鼠中7-天重复腹膜内施用后CBD和JZL184的组合的毒性。表1-9列出了实验数据。将48只年轻、健康的瑞士小鼠(6-8周大；30.92至34.65g(雄性)和23.82至26.45g(雌性))分成四组；每组包括6只雄性和6只雌性。通过腹膜内施用，分别以0.1+3(第II组，LD)，0.5+15(第III组，MD)和1.0+30mg/kg(第IV组，HD)对小鼠剂量施用CBD和JZL184的组合7天。通过用1:1:18比值的乙醇、Alkamuls-620和盐水(0.9％NaCl)稀释CBD和JZL184的储液每天制备剂量制剂。分别以20mg/mL和50mg/mL在DMSO中制备CBD和JZL184的储液。同时进行的媒介物对照组(第I组)按相当的方案以10mL/kg接受媒介物。毒性评价基于死亡率、临床观察和体重、临床和解剖学病变。在整个实验期间对小鼠观察死亡率和临床病征；每天测量体重。处死当天，从所有存活的小鼠采集用于血液学、临床化学的血液样品和尿液以用于多种参数的分析。对所有最终存活的小鼠进行肉眼检查。收集组织并处理以用于显微镜检查。

结果表明CBD和JZL184的组合对高至最高测试剂量是良好耐受的并且在任何处理组中未观察到药物-相关的死亡率(表1)。在整个实验期间，对于高至最高测试剂量，未观察到药物-相关的临床病征。在整个处理持续期间内，在小鼠中，在任何剂量水平下，对体重或体重增加无药物-相关不利影响(表2)。认为雌性中所注意到的偶然统计学显著变化是偶然发生的。在任何剂量水平，在任一种性别中，对血液学、临床化学和尿液分析终点无药物-相关影响。由于它们可忽略的幅度、偶发性、缺少剂量-反应模式和/或与期望值的关系，认为血液学和临床化学参数终点之间的所有统计学显著或明显差异不是药物相关的。所测试的临床参数(血液学、临床化学和尿液分析)包括WBC、RBC、HB、HCT、MCV、MCH、MCHC、网织红细胞、白细胞分类计数和PLT、葡萄糖、总蛋白、白蛋白、球蛋白、A/G比、胆固醇、甘油三酯、HDL、LDL、BUN；钠、钾和氯化物。在任何剂量水平，在任一种性别中，对尿分析参数无药物-相关影响(表3，表4，表5)。在尿量和比重中发现了偶然差异，由于它们的偶发性和这些终点的固有变化性，认为这些差异不具有毒理学意义。所测试的尿分析参数包括蛋白(mg/dL)、颜色、透明度、葡萄糖(mg/dL)、胆红素、酮(mg/dL)、比重、血液、pH、尿胆素原(EU/dL)和亚硝酸盐；白细胞(表6)。

在最终尸体解剖时，不存在药物-相关的器官重量变化。总体病理学发现包括在任一性别的MD和HD动物的腹膜腔中白色沉积的出现。在任一种性别中，在任何剂量下，在任何所观察的器官中均不存在药物相关的显微发现。在一些HD组动物中，注意到可能是药物对腹膜的局部作用的极轻的腹膜炎。由于缺乏剂量依赖性以及对与测试物种中的背景发现类似的发现的识别，所有其它显微发现均被视为是自发的/偶然的(表7)。

结果显示在小鼠中以0.1+3，0.5+15和1.0+30mg/kg/天的水平连续7天腹膜内施用CBD和JZL184的组合，CBD和JZL184的组合在高至1.0mg/kg CBD+30mg/kg JZL184是良好耐受的，并且可以认为无可观察的影响水平(NOEL)是0.1mg/kg CBD+3.0mg/kg JZL184，并且可以认为无可观察的不利影响水平(NOAEL)是0.5mg/kg CBD+15mg/kg JZL184(表8，表9)。

实验2：本研究的目标在于确定在瑞士小鼠中7-天重复腹膜内施用后CBD和KML29的组合的毒性。表10-21列出了实验数据。将48只年轻、健康的瑞士小鼠(6-8周大；31.07至34.92g(雄性)和23.31至28.07g(雌性))分成四组；每组包括6只雄性和6只雌性。通过腹膜内施用，分别以0.1+3(第II组，LD)，0.5+15(第III组，MD)和1.0+30mg/kg(第IV组，HD)对小鼠剂量施用CBD和KML29的组合7天。通过用1:1:18比值的乙醇、Alkamuls-620和盐水(0.9％NaCl)稀释CBD和KML29的储液每天制备剂量制剂。分别以20mg/mL和50mg/mL在DMSO中制备CBD和KML29的储液。同时进行的媒介物对照组(第I组)按相当的方案以10mL/kg接受媒介物。毒性评价基于死亡率、临床观察和体重、临床和解剖学病变。在整个实验期间对小鼠观察死亡率和临床病征；每天测量体重。处死当天，从所有存活的小鼠采集用于血液学、临床化学的血液样品和尿液以用于多种参数的分析。对所有最终存活的小鼠进行肉眼检查。收集组织并处理以用于显微镜检查。

结果表明CBD和KML29的组合对高至最高测试剂量是良好耐受的。在任何剂量水平，未注意到药物-相关的死亡率或临床病征(表10)。在整个处理持续期间，未注意到平均体重和平均体重增加的药物-相关变化。在中剂量和高剂量组中观察到WBC的轻微升高(主要由于嗜中性白细胞)。在临床化学和尿液中未注意到药物-相关的变化。所测试的临床参数包括WBC、RBC、HB、HCT、MCV、MCH、MCHC、网织红细胞、白细胞分类计数和PLT、葡萄糖、总蛋白、白蛋白、球蛋白、A/G比、胆固醇、甘油三酯、HDL、LDL、BUN；钠、钾和氯化物(表13、14、15、16、17)。在所有药物-处理组中注意到雄性中球蛋白的统计学显著变化(降低20-28％)(表15)和雌性中ALP的统计学显著变化(升高20-42％)(表16)并且由于缺少剂量依赖性或者仅在一种性别中存在而认为与药物无关。当对尿液分析以下参数时，未观察到处理-相关变化：蛋白(mg/dL)、颜色、透明度、葡萄糖(mg/dL)、胆红素、酮(mg/dL)、比重、血液、pH、尿胆素原(EU/dL)和亚硝酸盐；白细胞。在中剂量(MD)雌性组(50％)和高剂量(HD)雄性组(42％)中注意到脾脏的相对器官重量显著增加(表18)。除了HD动物中脾脏上的白色沉积，在任何剂量下未观察到药物-相关的总体病理学发现。通过显微镜，在中剂量和高剂量动物的两种性别组中，在肝、肾和脾脏的腹膜脏层中观察到了浆膜炎症(腹膜炎)。这可能是由于对其中直接接触测试物品的腹膜的局部反应所造成的。

结果显示在小鼠中以0.1+3，0.5+15和1.0+30mg/kg/天的水平连续7天腹膜内施用CBD和KML29的组合，CBD和KML29的组合在高至1.0mg/kg CBD+30mg/kg KML29是良好耐受的，并且可以认为无可观察的影响水平NOEL是0.1mg/kg CBD+3.0mg/kg KML29。

表1：CBD和JZL184的制剂组合的死亡率数据

表2：用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠(n＝6)的体重的组平均值

图例：-/+(p＜0.05)

*平均值±S.D.

表3：用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的血液学参数的组平均值

图例：-/+(p＜0.05)

*平均值±S.D.

表4：用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的白细胞分类计数的组平均值

*平均值±S.D.

表5：用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的临床化学参数的组平均值

*平均值±S.D.

表5：(续)用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的临床化学参数的组平均值

图例：+/-(p＜0.05)表示与对照组相比显著更高更低；

A(-)表示值低于定量下限。

平均值±S.D.

**n＝1

***n＝2

表5：(续)用VBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的临床化学参数的组平均值

图例：+/-(p＜0.05)表示与对照组相比显著更高/更低；

A(-)表示值低于定量下限。

平均值±S.D.

表6：用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠中的尿分析的总结

图例：破折号(-)表示在该组中未发现，值表示除尿液体积、蛋白、比重和pH之外的发生次数。

表6：(续)用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠中的尿分析的总结

图例：破折号(-)表示在该组中未发现，值表示除尿液体积、蛋白、比重和pH之外的发生次数。

表7：用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠(n＝6)中的相对器官重量的组平均值

平均值±S.D.

表8：用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠中的总体病理学发现的总结

图例：NAD-未检测到异常，TS-最终处死，破折号(-)表示无发现，1-最小。

表9：用CBD和JZL184的制剂组合处理的小鼠中的组织病理学发现的总结

图例：破折号(-)表示无发现，1-极小，M-雄性，F-雌性

表10：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠中的死亡率数据

表11：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠中的临床征象的总结

图例：NAD：未检测到异常

表12：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠(n＝6)中的体重的组平均值

图例：-(p＜0.05)或--(p＜0.01)表示显著小于对照组；括号中的数字表示相对于对照的变化百分比。

平均值±S.D.

表13：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的血液学参数的组平均值

图例：-/+(p<0.05)表示显著大于/小于对照组；括号中的数字表示相对于对照的变化百分比；M—雄性和F—雌性

平均值±S.D.

表14：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的白细胞分类计数的组平均值

图例：-/+(p<0.05)或者--/++(p<0.01)表示显著小于/大于对照组；括号中的数字表示相对于对照的变化百分比。

平均值±S.D.

表15：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的临床化学参数的组平均值

图例：+/-(p＜0.05)或者++/--(p＜0.01)表示显著大于/小于对照组；括号中的数字表示相对于对照的变化百分比；

*平均值±S.D.

表16：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的临床化学参数的组平均值

图例：+/-(p＜0.05)表示显著大于/小于对照组；括号中的数字表示相对于对照的变化百分比；(-)表示值小于定量下限。

平均值±S.D.

**n＝2

***n＝1

表17：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠(n＝3)中的临床化学参数的组平均值

*平均值±S.D.

**n＝2

表18：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠中的尿分析的总结

图例：破折号(-)表示在该组中未发现，值表示除尿液体积、蛋白、比重和pH之外的发生次数。

表18：(续)用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠中的尿分析的总结

图例：破折号(-)表示在该组中未发现，值表示除尿液体积、噩白、比重和pH之外的发生次数。

表19：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠(n＝6)中的相对器官重量的组平均值

图例：-/++(p＜0.01)表示显著小于大于对照组；括号中的数字表示相对于对照的变化百分比

表20：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠中的总体病理学发现的总结

图例：NAD—未检测到异常，TS—最终处死，破折号(-)表示无发现。

表21：用CBD和KML29的制剂组合处理的小鼠中的组织病理学发现的总结

图例：破折号(-)表示无发现

协同作用的检测

通过比较小鼠对单独的KML29或单独的JZL184、单独的大麻二醇和两种的组合的反应水平，检测了(a)KML29和CBD和(b)JZL184和CBD的组合的相互作用。如果CBD+MAGL抑制剂处理组显示出大于CBD和MAGL抑制剂各个对于特定浓度的加合作用，则观察到协同作用。

图3提供了数据。如果CI<1，则认为药物组合具有协同作用，如果CI>1，则认为具有拮抗作用，并且如果CI＝1，则认为具有加合作用。两种-药物组合CBD+KML29和CBD+JZl184在所有测试浓度显示出协同性，这表明与各个药物的单独处理相比，多种作用机制提高了组合的效力。CBD(0.1mg/kg)+KML29(3mg/kg)的组合总剂量的CI值为0.108；CBD(1mg/kg)+KML29(30mg/kg)的为0.729；CBD(0.1mg/kg)+JZL184(3mg/kg)的为0.76；和CBD(0.1mg/kg)+JZL184(3mg/kg)的为0.60。

制剂的制备

通过已知的活性药物成分供应商(例如，R&D System,Inc.)提供苯二氮地西泮(大于99％)。通过已知的活性药物成分供应商(例如，Cayman chemicals)提供MAGL抑制剂KML29和JZL184(纯度，>98％)。

赋形剂和稳定剂购自已知的商品化供应商，如BASF Canada、Rouquette Pharma或者Cayman Chemical Co.。赋形剂和稳定剂确保活性药物成分混合并稳定以优化产品的货架期并确保产品的高质量保证和质量控制达到药物产品优良制造规范的最高标准。并非这些元素中的每一个所表示的每一项优势都是本发明的用途所必需的。

使用科学领域中已知的并且如以下实施例所描述的方法，以均一方式混合成分以满足药物产品优良制造规范的所有质量保证和质量控制标准。

制剂可以处于片剂形式，片剂形式含有人等效剂量(HED)的1mg至1000mg CBD和HED的0.1至500mg的MAGL抑制剂作为活性药物成分。这些活性药物成分可以与必需的赋形剂和稳定剂共混以确保优化的产品货架期和剂量一致性。CBD的剂量范围可以在0.1-150mg/kg体重之间。MAGL抑制剂的剂量范围可以在0.1-150mg/kg体重之间。包含MAGL抑制剂和CBD的制剂的剂量范围可以在0.1-150mg/kg JZL184和KML29之间并且对于CBD，在0.1-150mg/kg之间。

其它实施方式为可以向患者递送类似剂量的活性药物成分的气溶胶、液体或贴片。

产品制剂的实施例包括如WO 2014127458 A1中所描述，制备用于药物治疗的经粘膜递送的纳米-乳液形成组合物(％w/w)[21]。简要地：

可以通过溶解乙酰化甘油单酯(45％)制备媒介物，媒介物含有卵磷脂和醇(分别为6.5％)、D-α-生育酚(2％)、聚山梨醇酯-20(18％)和多乙氧基化氢化蓖麻油(22％)。

将CBD和MAGL抑制剂(要根据临床前和先导性研究确定剂量)在40℃溶于媒介物，密封并在冰箱中在黑暗条件下储存。

产品制剂的另一实施例包括如WO 2013098402 A1中所描述，制备用于口服递送的胶囊剂形成组合物(胶囊剂的％w/w)[22][23]。简要地：

步骤1：将无水乳糖(28.0％)、MAGL抑制剂(根据临床前和先导性研究确定剂量0.01mg和1000mg)和一部分(3.925％)聚乙烯N-吡咯烷酮(PVP)混合并通过适合的筛进行筛分。可以向该混合物中添加硬脂酰富马酸钠细粉末(1.25％)。可以用适合的冲头压缩片剂。

步骤2：CBD(剂量—根据临床前研究确定，1mg和1000mg)、预胶凝淀粉(6.25％)、MAGL抑制剂(根据临床前研究确定的人等效剂量，0.1mg至500mg)和剩余部分的PVP(5.0％)均匀混合。可以将该粉末混合物添加至微晶纤维素(Avicel PH 102)(23.75％)以获得CBD颗粒剂。

步骤3：可以使用Zanasi 40E胶囊灌装机，将MAGL抑制剂片剂(步骤1)和CBD颗粒剂(步骤2)两者填充到硬明胶胶囊中。

产品制剂的另一实施例包括如WO 2013098402 A1中所描述，制备用于口服递送的双层片剂形成组合物(片剂的％w/w)[22]。简要地：

步骤1：将MAGL抑制剂(根据临床前和先导性研究确定剂量，0.01mg和1000mg)和一部分甘露糖醇(10.0％)与PVP(2.0％)干法混合。向该混合物中添加甘露糖醇(12.25％)、微晶纤维素(19.0％)和交联羧甲基纤维素钠(6.0％)并混合。最终，添加硬脂酸镁(0.5％)，混合并使用压片机挤压片剂层。

步骤2：对于CBD层的制备，将CBD(剂量可以根据临床前和先导性研究确定，1mg和1000mg)和泊洛沙姆188(6.0％)混合并通过适合的筛。向该混合物中添加甘露糖醇(6.0％)、微晶纤维素(2.8％)和PVP(3.0％)并通过适合的筛。最终，添加硬脂酸镁(0.5％)并混合。该所得混合物准备好进行压缩。

步骤3：使用Fette 102i压片机，从所制备的MAGL抑制剂层(步骤1)和CBD层(步骤2)压缩双层片剂。

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所有引用作为参考并入本文。

已参考一个或多个实施方式描述了本发明。然而，对于本领域技术人员将显而易见的是可以在不背离如权利要求中所定义的本发明的范围的情况下做出一些改变和变化。

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种用于治疗焦虑症的制剂，所述制剂包含以下的组合：

i)有效量的一种或多于一种大麻素；和

ii)有效量的一种或多于一种单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制剂，其中，所述MAGL抑制剂是KML29、JZL184、或它们的组合。

2.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述一种或多于一种大麻素和所述一种或多于一种单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制剂的组合是协同组合。

3.根据权利要求1或2所述的制剂，其中，所述一种或多于一种大麻素是抗焦虑大麻素。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的制剂，其中，所述一种或多于一种大麻素是大麻二醇(CBD)。

5.根据权利要求1所述的制剂，其中，所述焦虑症包括广泛性焦虑症、恐惧症、恐慌症、惊恐发作、强迫症、创伤后应激障碍(PTSD)、分离性焦虑障碍、情境性焦虑障碍、压力、或它们的组合。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的制剂，其中，所述一种或多于一种大麻素和所述一种或多于一种单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制剂以改善所述一种或多于一种大麻素和/或所述一种或多于一种单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制剂的治疗结果的有效量和减少剂量存在。

7.根据权利要求4所述的制剂，其中，所述CBD的有效量在0.01mg至1000mg之间。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的制剂，其中，所述一种或多种MAGL抑制剂的有效量在0.01mg至1000mg之间。

9.一种用于治疗焦虑症的药物制剂，所述药物制剂包含根据权利要求1-8中任一项所述的制剂和生理学可接受的表面活性剂、载体、稀释剂、赋形剂、平滑剂、悬浮剂、成膜物质、以及包衣助剂、或它们的组合。

10.一种通过向对其有需要的受试者施用根据权利要求1-8中任一项所述的制剂或者根据权利要求9所述的药物制剂治疗焦虑症的方法。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述治疗包括延长治疗期。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述延长治疗期是至少21天。

13.根据权利要求10所述的方法，其中，所述治疗包括持久治疗期。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述持久治疗期包括约1至约21天之间、或它们之间的任意天数。

15.根据权利要求10-14中任一项所述的方法，其中，所述制剂经粘膜或口服施用。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述经粘膜施用是经舌下、口腔、鼻、眼、阴道、和/或直肠粘膜施用。

17.根据权利要求10-16中任一项所述的方法，其中，所述制剂以具有药物稳定剂/添加剂的适当的气溶胶、液体、凝胶、膜、或片剂/固体药物载体递送。

18.根据权利要求10-17中任一项所述的方法，其中，所述焦虑症包括广泛性焦虑症、恐惧症、恐慌症、惊恐发作、强迫症(OCD)、创伤后应激障碍(PTSD)、分离性焦虑障碍、情境性焦虑障碍、压力、或它们的组合。

19.根据权利要求1-8中任一项所述的制剂或根据权利要求9所述的药物制剂用于治疗受试者的焦虑症的用途。