阅读说明：本技术 羊齿烯醇用于治疗肺纤维化的用途 (Application of fernasenol in treating pulmonary fibrosis ) 是由 于海涛 杨晓旭 于 2020-07-13 设计创作，主要内容包括：本发明公开了羊齿烯醇用于治疗肺纤维化的用途。研究发现,羊齿烯醇可以有效抑制人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖,还可以有效促进人胚肺成纤维细胞株MRC-5的凋亡,因此羊齿烯醇具有开发成抗肺纤维化药物的前景。(The invention discloses application of ferenol in treating pulmonary fibrosis. Researches show that the ferenol can effectively inhibit the proliferation of a human embryonic lung fibroblast cell strain MRC-5 and can effectively promote the apoptosis of the human embryonic lung fibroblast cell strain MRC-5, so the ferenol has the prospect of developing anti-pulmonary fibrosis drugs.)

羊齿烯醇用于治疗肺纤维化的用途

技术领域

本发明涉及羊齿烯醇的医药用途，具体涉及羊齿烯醇用于治疗肺纤维化的用途。

背景技术

多种肺间质疾病都会引起肺纤维化，肺纤维化严重后就会出现进行性呼吸困难，患者最终因呼吸衰竭而死亡，目前尚没有特别有效的药物用于肺纤维化的治疗。

肺成纤维细胞是肺纤维化形成过程中最重要的细胞，这些细胞一方面会不断增殖合成大量胶原蛋白参与肺纤维化，另一方面会分泌多种细胞因子促进肺纤维化进展。因此，抑制肺成纤维细胞的增殖可以有效抑制肺纤维化的进展。

发明内容

本发明的目的是为了提供羊齿烯醇用于治疗肺纤维化的用途。

实现上述目的的技术方案如下：

羊齿烯醇用于制备治疗肺纤维化的药物的生物医药用途。

一种治疗肺纤维化的药物，以羊齿烯醇为活性成分，并用药学上可以接受的辅料制备成药学上可以接受的剂型。

优选地，辅料可以为固体辅料或液体辅料。

优选地，剂型可以为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂。

有益效果：

研究发现，羊齿烯醇可以有效抑制人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖，还可以有效促进人胚肺成纤维细胞株MRC-5的凋亡，因此羊齿烯醇具有开发成抗肺纤维化药物的前景。

附图说明

图1为不同浓度药物干预48h对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制率。

图2为药物对人胚肺成纤维细胞株MRC-5中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响，其中B为对照组，Y为羊齿烯醇组，P为蒲公英赛醇组。

具体实施方式

一、试验材料

人胚肺成纤维细胞株MRC-5购自上海雅吉生物，液氮冻存。

羊齿烯醇、蒲公英赛醇纯度不低于98％，配制成药物溶液备用。

RPMI1640培养液、胎牛血清购自Gibco。

青霉素、链霉素购自Sigma。

CCK8检测试剂盒购自南京碧云天生物。

二、试验方法

1、细胞培养

将液氮冻存的人胚肺成纤维细胞株MRC-5按照常规方法复苏后悬浮培养在含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI1640培养液中，在37℃、5％CO₂、饱和湿度的恒温培养箱中培养，每2～3d换液传代，取对数生长期的细胞进行实验。

2、CCK8法测定药物对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制作用

取对数生长期的人胚肺成纤维细胞株MRC-5，消化重悬后制成密度为5×10⁴/mL的细胞悬浮液，按照每孔200μL的接种量接种于96孔板，适应性培养24h后，将培养基更换为含2、5、10μM羊齿烯醇或蒲公英赛醇的完全培养基，每个浓度设3个复孔，另设不含细胞的培养液为空白组，置于37℃、5％CO₂、饱和湿度的恒温培养箱中继续培养48h后，每孔加入10μL的CCK8试剂，孵育4h后在酶联免疫检测仪450nm波长处测定每孔OD450值，取3孔平均值，计算增殖抑制率。

增殖抑制率(％)＝[1－(OD药物组－OD空白组)/(OD对照组－OD空白组)]×100％。

3、WB法测定药物对人胚肺成纤维细胞株MRC-5中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达影响

取对数生长期人胚肺成纤维细胞株MRC-5，消化重悬后制成密度1×10⁵/mL的细胞悬浮液，以每孔2mL接种于6孔板，适应性培养24h后，将培养基更换为含5μM羊齿烯醇或蒲公英赛醇的完全培养基，并设不加药培养的细胞为对照组，置于37℃、5％CO₂、饱和湿度的恒温培养箱中继续培养48h后，收集细胞，PBS洗涤，裂解液裂解，测定蛋白浓度，各组取30μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，转膜，5％脱脂奶粉封闭，加入Bcl-2、Bax、GAPDH一抗4℃孵育过夜，洗膜，加入辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育2h，显色，灰度扫描分析。

4、统计学分析

采用软件SPSS17.0进行统计学分析处理，计量数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

三、试验结果

1、对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制作用

不同浓度羊齿烯醇、蒲公英赛醇干预48h对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制率如表1和图1所示，可以发现羊齿烯醇、蒲公英赛醇可以显著抑制人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖，且具有明显的剂量依赖效应。

表1不同浓度药物干预48h对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的增殖抑制率

2、对人胚肺成纤维细胞株MRC-5的促进凋亡作用

图2为羊齿烯醇、蒲公英赛醇对人胚肺成纤维细胞株MRC-5中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响(B为对照组，Y为羊齿烯醇组，P为蒲公英赛醇组)。Bcl-2、Bax是调控凋亡最重要的细胞因子，Bcl-2抑制细胞凋亡，Bax则促进细胞凋亡。可以发现，羊齿烯醇、蒲公英赛醇均显著下调Bcl-2蛋白表达，上调Bax蛋白表达，且蒲公英赛醇对Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响强于羊齿烯醇，二者均具有显著的促进人胚肺成纤维细胞株MRC-5凋亡的作用。