阅读说明：本技术 一种多羟基异黄酮的合成方法 (Synthesis method of polyhydroxy isoflavone ) 是由 景临林 马慧萍 何蕾 邵瑾 赵彤 于 2020-06-08 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种多羟基异黄酮的合成方法,该方法包括以下步骤：(1)将4′,7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺反应,控制4′,7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比及反应温度,使4′,7-二甲氧基异黄酮碳环上的1个或者2个氢原子被溴原子取代,生成相应的溴化物；(2)步骤(2)的溴化物在亚铜盐作用下与甲醇钠反应,使溴化物碳环上的溴原子被甲氧基取代,得到甲氧基化产物；(3)步骤(3)的甲氧基化产物在氯化铝和二甲基硫醚的作用下发生脱甲基反应,得到多羟基异黄酮。本发明起始原料来源丰富,反应条件温和,选择性好,产率高,适合工业化生产。产品纯度大于99.0％,可用于药理活性研究。(The invention discloses a method for synthesizing polyhydroxy isoflavone, which comprises the following steps: (1) reacting 4 ', 7-dimethoxy isoflavone with N-bromosuccinimide, and controlling the molar ratio and reaction temperature of the 4 ', 7-dimethoxy isoflavone and the N-bromosuccinimide to ensure that 1 or 2 hydrogen atoms on a carbon ring of the 4 ', 7-dimethoxy isoflavone are replaced by bromine atoms to generate corresponding bromide; (2) reacting the bromide in the step (2) with sodium methoxide under the action of cuprous salt, so that bromine atoms on carbon rings of the bromide are substituted by methoxy to obtain a methoxylated product; (3) and (4) carrying out demethylation reaction on the methoxylated product in the step (3) under the action of aluminum chloride and dimethyl sulfide to obtain polyhydroxy isoflavone. The invention has the advantages of rich source of initial raw materials, mild reaction conditions, good selectivity and high yield, and is suitable for industrial production. The product purity is more than 99.0%, and the product can be used for pharmacological activity research.)

一种多羟基异黄酮的合成方法

技术领域

本发明属于药物合成领域，具体一种多羟基异黄酮的合成方法。

背景技术

异黄酮类化合物是植物的次生代谢产物，具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗糖尿病、抗辐射、抗缺血再灌注损伤以及神经保护等广泛的生理活性，而这些有益的药理作用大多归因于其优异抗氧化活性，其能够通过抑制和清除自由基和活性氧来避免氧化损伤(Nat.Prod.Rep，2019，36(8)：1156-1195)。研究指出：异黄酮结构中羟基取代基是清除自由基的活性基团，羟基的数量、取代位置和取代形式对活性具有重要影响(Int J Mol Sci，2015，16(6)：12891-12906)。

4′，7，8-三羟基异黄酮和3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，结构式如下：

这两个异黄酮具有优异的抗氧化活性，但是其在天然产物中分布较少，而且含量很低，无法从天然产物中大量获得这些化合物。

4′，7，8-三羟基异黄酮是大豆苷元在体内的主要代谢产物之一(Clin Chim Acta，2003，334(1-2)：77-85)，可以从韩国发酵大豆中分离获得(J Soc.Cosmet.Sci.Korea，2010，36(3)：221-226)，具有显著的自由基清除(Xenobiotica，2013，33(9)：913-925，Biosci Biotechnol Biochem，2004，68(6)：1372-1374)和抗炎活性(Plos one.2014，9(8)：e104938)，还是一种有效的蘑菇酪氨酸酶自杀底物(J.Agric.Food Chem，2007，55(5)：2010-2015)。最新研究表明其还具有抗动脉粥样硬化(Food Chem，2018，240：607-614)和增强记忆的作用(Brain Res.Bull，2018，142，197-206)。目前，4′，7，8-三羟基异黄酮的可以通过生物转化法和化学合成法获得。Pandey(Enzyme.Microbial.Technol.，48，386-392.)等利用细胞色素P450s酶催化大豆甘元，能够以36.3％的最高转化率得到7，8，4′-三羟基异黄酮。Seo(Biosci.Biotechnol.Biochem，2013，77(6)：1245-1250)等则通过米曲霉KACC40247催化大豆苷元产生4′，7，8--三羟基异黄酮，并将最高转化率提高到58％。Wu(Food Sci.Technol.Res，2015，21(4)：557-62)利用米曲霉BCRC 32288进一步将大豆苷元催化生成4′，7，8-三羟基异黄酮转化率提高到77.8％。但该类方法反应过程复杂、不良反应多、副产物毒性较大、后处理较为繁琐、分离纯化困难，往往需要通过HPLC才能得到纯度较高的产物。Goto(Chem.Pharm.Bull，2009，57(4)：346-360)和王星(有机化学，2011，31(8)：1245-1251)等以邻苯三酚和对羟基苯乙酸为原料，在BF₃·Et₂O催化下，发生脱水反应，生成2-(4-羟基苯基)-1-(2，3，4-三羟基苯基)乙酮化合物，然后在MeSO₂Cl-DMF体系中，发生脱氧安息香反应，生成4′，7，8-三羟基异黄酮，但是反应中不但需要使用易燃，有毒，具有强烈的刺激性和强烈腐蚀性的三氟化硼乙醚，而且其总产率仅为30％。

3′，4′，7，8-四羟基异黄酮也是大豆苷元次级代谢产物之一(Arch Microbiol，1995，164(6)：428-34；J.Agric.Food Chem，2001，49：3024-3033)，但是有关其生物活性的研究鲜有报道。Goto(Chem Pharm Bull(Tokyo).2009，57(4)：346-360)等以邻苯三酚和3，4-二羟基苯乙酸为原料，在BF₃·Et₂O催化下，发生脱水反应，然后在MeSO₂Cl-DMF体系中，发生脱氧安息香反应，生成3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，但是总产率仅为15％。

发明内容

基于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种适于工业生产的多羟基异黄酮的合成方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种多羟基异黄酮的合成方法，包括以下步骤：

(1)将4′，7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺(NBS)反应，控制4′，7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比及反应温度，使4′，7-二甲氧基异黄酮碳环上的1个或者2个氢原子被溴原子取代，生成相应的溴化物；

(2)步骤(2)的溴化物在亚铜盐作用下与甲醇钠反应，使溴化物碳环上的溴原子被甲氧基取代，得到甲氧基化产物；

(3)步骤(3)的甲氧基化产物在氯化铝和二甲基硫醚的作用下发生脱甲基反应，得到多羟基异黄酮。

优选地，所述亚铜盐为溴化亚铜、碘化亚铜和/或氯化亚铜。

优选地，当所述多羟基异黄酮为4′，7，8-三羟基异黄酮时，步骤(1)中所述4′，7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶1.1～1.3，反应温度为0～4℃，相应的溴化物为8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮；

当所述多羟基异黄酮为4′，6，7，8-四羟基异黄酮时，步骤(1)中所述4′，7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶2.5～3.5，反应温度为75～85℃，相应的溴化物为3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮；

优选地，所述多羟基异黄酮为4′，7，8-三羟基异黄酮时，具体合成过程包括：

(1)将4′，7-二甲氧基异黄酮溶解于有机溶剂中，在0～4℃下，按4′，7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶1.1～1.3加入N-溴代丁二酰亚胺，反应得到8′-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮，所述8′-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与亚铜盐的摩尔比为1∶1～1.5；

(2)将8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与有机溶剂混合，加热到110～130℃，然后加入亚铜盐和过量的甲醇钠，反应得到4′，7，8-三甲氧基异黄酮；

(3)将氯化铝悬浮于有机溶剂中，冷却至0～8℃，缓慢滴加二甲基硫醚，混匀，加入4′，7，8-三甲氧基异黄酮，升温，于20～30℃反应得到4′，7，8-三羟基异黄酮，其中，氯化铝、二甲基硫醚和4′，7，8-三甲氧基异黄酮的摩尔比为8～10：8～10：1。

更具体地，4′，7，8-三羟基异黄酮的合成方法包括如下步骤，

(1)将10mmol 4′，7-二甲氧基异黄酮溶于80～100mL DMF，冷却到0～4℃，搅拌下加入11～13mmol NBS，继续反应2～3h，加入20～40mL的2M盐酸淬灭反应，加水250～300mL，静置冰箱过夜，过滤，滤饼干燥得8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮；

(2)将4～6mmol亚铜盐悬浮于1～3mL DMF中，20～30℃避光搅拌25～35min，加入40～60mL 25％的甲醇钠/甲醇溶液，继续避光搅拌0.8～1.2h，备用；将5mmol 8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮和4～6mL DMF加热到110～130℃，搅拌加入上述备用液，继续反应2～5h，冷却至室温后，将反应液倒入到40～60mL的2M盐酸溶液中，减压除去溶剂，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，减压除去乙酸乙酯后通过硅胶柱层析分离纯化得4′，7，8-三甲氧基异黄酮；

(3)将2.4～3mmol氯化铝悬浮于8～12mL无水二氯甲烷中，冷却至0～8℃，缓慢滴加2.4～3mmol二甲基硫醚，搅拌20～30min，加入0.3mmol 4′，7，8-三甲氧基异黄酮，升温至20～30℃继续反应5～8h，停止反应，冷却到0～4℃，加入10％(w/w)盐酸溶液搅拌2h，减压除去二氯甲烷，过滤，滤饼用甲醇/水体系重结晶得4′，7，8-三羟基异黄酮。

优选地，所述多羟基异黄酮为3′，4′，7，8-四羟基异黄酮时，具体合成过程包括：

(1)将4′，7-二甲氧基异黄酮溶解于有机溶剂中，在75～85℃下，按4′，7-二甲氧基异黄酮与N-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1∶2.5～3.5加入N-溴代丁二酰亚胺，反应得到3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮；

(2)将3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与有机溶剂混合，加热到110～130℃，然后加入亚铜盐和过量的甲醇钠，反应得到3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮，所述3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮与亚铜盐的摩尔比为1∶2～3；

(3)将氯化铝悬浮于有机溶剂中，冷却至0～8℃，缓慢滴加二甲基硫醚，混匀，加入3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮，升温，于20～30℃反应得到3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，其中，氯化铝、二甲基硫醚和3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮的摩尔比为10～12∶10～12∶1。

更具体地，3′，4′，7，8-四羟基异黄酮的合成方法包括如下步骤，

(1)将3mmol 4′，7-二甲氧基异黄酮溶于25～35mL DMF，搅拌下加入8～10mmolNBS，升温至80℃继续反应2.5～3.5h。加入20～40mL的2M盐酸淬灭反应，加水130～170mL，静置冰箱过夜，过滤，滤饼干燥得3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮；

(2)将4～6mmol亚铜盐悬浮于2～3mL DMF中，20～30℃避光搅拌25～35min，加入40～60mL 25％(w/v)的甲醇钠/甲醇溶液，继续避光搅拌0.8～1.2h，备用；将2mmol 3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮和4～6mL DMF加热到110～130℃，搅拌下加入上述备用液，继续反应2～5h，冷却至室温后，将反应液倒入到40～60mL的2M盐酸溶液中，减压除去溶剂，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，减压除去乙酸乙酯后通过硅胶柱层析分离纯化得3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮；

(3)将4.0～4.8mmol氯化铝悬浮于10～15mL无水二氯甲烷中，冷却至0～8℃，缓慢滴加4.0～4.8mmol二甲基硫醚，搅拌20～30min，加入0.4mmol3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮，升温至20～30℃继续反应8～10h。停止反应，冷却到0～4℃，加入10％(w/w)盐酸溶液搅拌2h，减压除去二氯甲烷，过滤，滤饼用甲醇/水体系重结晶得3′，4′，7，8-四羟基异黄酮。

优选地，4′，7-二甲氧基异黄酮通过以方法得到：将大豆苷元或者刺芒柄花素、碳酸钾和甲基化试剂在有机溶剂中混合反应，得到所述的4′，7-二甲氧基异黄酮，其中，反应温度为60～70℃，大豆苷元∶碳酸钾∶甲基化试剂的摩尔比为1∶2～3∶2～3，或者，刺芒柄花素∶碳酸钾∶甲基化试剂的摩尔比为1∶1～2∶1～2。

优选地，所述甲基化试剂为硫酸二甲酯或碳酸二甲酯。

优选地，所述有机溶剂为丙酮、乙腈、二氯甲烷或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。

本发明所述的多羟基是指三个或三个以上的羟基。

本发明以来源丰富的大豆苷元或刺芒柄花素为起始原料，经过甲基化、溴代、甲氧基化和去甲基化四步反应得到多羟基异黄酮4′，7，8-三羟基异黄酮和3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，总产率达到60％以上(以大豆苷元或者刺芒柄花素计)。4′，7-二甲氧基异黄酮与NBS在不同反应条件下分别生成8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮和3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮，选择性好，产率高。本发明合成方法具有反应条件温和，产率高，易于工业化生产的优势。产物纯度经UPLC监测大于99.0％，可用于药理活性研究。

附图说明：

图1是4′，7，8-三羟基异黄酮的UPLC色谱图。

图2是3′，4′，7，8-四羟基异黄酮的UPLC色谱图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例1

4′，7-二甲氧基异黄酮的合成

将大豆苷元(20mmol，5.08g)和碳酸钾(40mmol，5.52g)悬浮于200mL丙酮中，并加入7.6mL硫酸二甲酯(40mmol)，60℃反应12h。TLC监测，反应完全后，用400μL 25％氨水淬灭反应，加100mL水，并用HCl调PH为酸性后减压除去丙酮，过滤后用纯化水洗涤至中性，干燥得白色粉末5.53g，为4′，7-二甲氧基异黄酮，产率为98％。m.p.162.5～163.0℃。IR(KBr，v)：2956，2833，1632，1607，1513，1438，1293，1250，1204，1176，1030，881，839cm^-1。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.21(d，J＝8.8Hz，1H，C5-H)，7.91(s，1H，C2-H)，7.52(d，J＝8.8Hz，2H，C2′-H，C6′-H)，6.99～6.95(m，3H，C6-H，C3′-H，C5′-H)，6.84(d，J＝2.4Hz，1H，C8-H)，3.90(s，3H，CH₃O)，3.83(s，3H，CH₃O)。¹³C-NMR(101MHz，CDCl₃)δ：175.83(C4)，163.95(C7)，159.56(C4′)，157.94(C9)，152.04(C2)，130.12(C2′，6′)，127.77(C5)，124.85(C3)，124.24(C1′)，118.42(C10)，114.52(C6)，113.95(C3′，5′)，100.08(C8)，55.82(CH₃O)，55.34(CH₃O)。MS(ESI)m/z：283.1([M+H]⁺)。

实施例2

4′，7-二甲氧基异黄酮的合成

将刺芒柄花素(20mmol，5.36g)和碳酸钾(20mmol，2.76g)悬浮于200mL丙酮中，并加入3.8mL硫酸二甲酯(20mmol)，60℃反应12h。TLC监测，反应完全后，用400μL 25％氨水淬灭反应，加100mL水，并用HCl调PH为酸性后减压除去丙酮，过滤后用纯化水洗涤至中性，干燥得白色粉末5.47g，为4′，7-二甲氧基异黄酮，产率为97％。

实施例3

4′，7，8-三羟基异黄酮的制备

(1)8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮的合成

将4′，7-二甲氧基异黄酮(10mmol，2.82g)溶于无水DMF(90mL)中，冷却到0℃，搅拌下加入NBS(12mmol，2.13g)，继续反应2.5h，TLC监测，原料无剩余，停止反应，加入30mL的2M盐酸淬灭反应，再加水270mL，静置冰箱过夜，过滤，滤饼干燥得白色固体3.44g，为8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮，产率为95％。m.p.185.7～186.3℃。IR(KBr，v)：2938，2840，1631，1611，1512，1424，1283，1253，1217，1178，1079，819，779，549cm^-1。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.27(d，J＝8.8Hz，1H，C5-H)，8.03(s，1H，C2-H)，7.51(d，J＝8.8Hz，2H，C2′-H，C6′-H)，7.05(d，J＝8.8Hz，1H，C6-H)，6.99(d，J＝8.4Hz，2H，C3′-H，C5′-H)，4.04(s，3H，CH₃O)，3.84(s，3H，CH₃O)。¹³C-NMR(101MHz，CDCl₃)δ175.64(C4)，160.29(C7)，159.74(C4′)，154.16(C9)，152.39(C2)，130.12(C2′，6′)，126.79(C5)，124.71(C1′)，123.69(C3)，119.47(C10)，114.04(C3′，5′)，109.47(C6)，99.36(C8)，56.95(CH₃O)，55.35(CH₃O)。HR-MS(ESI)m/z：Calcd for C₁₇H₁₃BrO₄([M+K]⁺)398.9629，found 400.9602。

(2)4′，7，8-三甲氧基异黄酮的合成

将溴化亚铜(715mg，5mmol)和2mL DMF室温避光搅拌30min，加入50mL新配制的25％(w/v)甲醇钠/甲醇溶液，继续搅拌1h，备用。将8-溴-4′，7-二甲氧基异黄酮(1.8g，5mmol)和5mL DMF，将其加热到120℃后加入上述备用液，反应2h。停止反应，冷却至室温，将反应液倒入到2M的盐酸(50mL)液中，减压除去溶剂，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，用50mL饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，减压除去乙酸乙酯后通过硅胶柱层析[洗脱剂：V(石油醚)/V(乙酸乙酯)＝3/1]分离纯化得白色针状晶体1.09g，为4′，7，8-三甲氧基异黄酮，产率为70％。m.p.151.2～151.9℃。IR(KBr，v)：2938，2840，1647，1607，1513，1541，1285，1251，1211，1077，829，795，551cm^-1。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.06(d，J＝8.8Hz，1H，C5-H)，8.00(s，1H，C2-H)，7.52(d，J＝9.2Hz，2H，C2′-H，C6′-H)，7.08(d，J＝9.2Hz，1H，C6-H)，6.99(d，J＝8.4Hz，2H，C3′-H，C5′-H)，4.01(s，6H，CH₃O)，3.85(s，3H，CH₃O)。¹³C-NMR(101MHz，CDCl₃)δ176.01(C4)，159.62(C4′)，156.30(C7)，152.17(C2)，150.61(C9)，136.55(C8)，130.16(C2′，6′)，124.48(C1′)，124.07(C3)，121.80(C5)，119.29(C10)，113.99(C3′，5′)，110.04(C6)，61.64(CH₃O)，56.46(CH₃O)，55.35(CH₃O)。MS(ESI)m/z：313.2([M+H]⁺)。

(3)4′，7，8-三羟基异黄酮的合成

将氯化铝(300mg，2.5mmol)悬浮于无水二氯甲烷中(12mL)，冷却至5℃，缓慢滴加182μL二甲基硫醚后，搅拌0.5h，再加入4′，7，8-三甲氧基异黄酮(93.9mg，0.3mmol)，将反应体系置于室温，反应6h。TLC监测，基本反应完全。停止反应，冷却到0℃，加入10％(w/w)盐酸(10mL)溶液，继续搅拌2h，减压除去二氯甲烷，过滤，滤饼用甲醇/水体系重结晶，得白色针状晶体77mg，为4′，7，8-三羟基异黄酮，产率为95％。m.p.＞180℃。IR(KBr，v)：3471，3207，1620，1583，1567，1514，1280，1237，1176，833，190cm^-1。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.27(s，1H，C8-OH)，9.50(d，2H，C7-OH，C4′-OH)，8.33(s，1H，C2-H)，7.49(d，J＝8.8Hz，1H，C5-H)，7.41(d，J＝8.8Hz，2H，C2′-H，C6′-H)，6.97(d，J＝8.8Hz，1H，C6-H)，6.83(d，J＝8.6Hz，2H，C3′-H，C5′-H)。¹³C-NMR(101MHz，DMSO-d₆)δ175.60(C4)，157.57(C4′)，153.10(C2)，150.38(C7)，147.17(C9)，133.32(C8)，130.59(C2′，6′)，123.38(C1′)，123.14(C3)，117.91(C10)，116.11(C5)，115.38(C3′，5′)，114.60(C6)。MS(ESI)m/z：271.2([M+H]⁺)。UPLC：流动相为甲醇∶水(冰乙酸)＝40∶60(0.01％)(v/v)，保留时间为3.89min，流速为0.2mL/min。

实施例4

3′，4′，7，8-四羟基异黄酮的制备

(1)3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮的合成

将4′，7-二甲氧基异黄酮(846mg，3mmol)溶于DMF(30mL)，搅拌下加入NBS(1.6g，9mmol)，升温至80℃，回流反应3h。停止反应，加入30mL的2M盐酸淬灭反应，用少量亚硫酸氢钠还原过量的NBS，加水150mL，静置冰箱过夜，过滤，滤饼干燥得白色固体1.25g，为3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮，产率为95％。m.p.237.7～238.5℃。IR(KBr，v)：3081，2969，2842，1650，1616，1603，1500，1424，1287，1255，1215，1078，1058，801，783cm^-1。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.27(d，1H，J＝9.2Hz，C5-H)，8.04(s，1H，C2-H)，7.77(d，1H，J＝2.4Hz，C2′-H)，7.53(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H，C6′-H)，7.07(d，1H，J＝9.2Hz，C6-H)，6.98(d，1H，J＝9.2Hz，C5′-H)，4.05(s，3H，CH₃O)，3.94(s，3H，CH₃O)。¹³C-NMR(101MHz，CDCl₃)δ：175.32(C4)，160.45(C7)，155.99(C4′)，154.16(C9)，152.65(C2)，133.56(C2′)，129.19(C6′)，126.78(C1′)，125.08(C5)，123.59(C3)，119.34(C10)，111.81(C5′)，111.69(C3′)，109.63(C6)，99.45(C8)，56.98(CH₃O)，56.35(CH₃O)。HR-MS(ESI)m/z：Calcd for C₁₇H₁₂Br₂O₄([M+H]⁺)440.9155，found 440.9161。

(2)3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮的合成

将溴化亚铜(715mg，5mmol)悬浮于2mL DMF中，室温避光搅拌30min，加入50mL新配制好的25％(w/v)甲醇钠/甲醇溶液，继续避光搅拌1h，备用。将3′，8-二溴-4′，7-二甲氧基异黄酮(880mg，2mmol)溶于DMF(5mL)，加热到120℃后加入上述备用液，继续反应2h。停止反应，冷却至室温，将反应液倒入到2M盐酸(50mL)液中，减压除去溶剂，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，用50mL饱和氯化钠洗涤一次，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，减压除去乙酸乙酯后经硅胶柱层析[洗脱剂：V(石油醚)/V(乙酸乙酯)＝3/1]分离纯化得白色针状晶体491mg，为3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮，产率为72％。m.p.166.8～167.8℃。IR(KBr，v)：2934，2837，1635，1615，1596，1516，1451，1284，1270，1254，1171，1145，1082，1023，871，833，558cm^-1。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.05(d，2H，J＝8.4Hz，C5-H，C2-H)，7.22(d，1H，J＝2.4Hz，C2′-H)，7.08～7.04(m，2H，C5′-H，C6′-H)，6.94(d，1H，J＝8.4Hz，C6-H)，4.01(s，6H，CH₃O)，3.93(s，3H，CH₃O)，3.91(s，3H，CH₃O)。¹³C-NMR(101MHz，CDCl₃)δ：176.03(C4)，156.34(C7)，152.35(C2)，150.57(C9)，149.14(C4′)，148.77(C3′)，136.56(C8)，124.50(C1′)，121.73(C3，6′)，121.05(C5)，119.25(C10)，112.53(C2′)，111.18(C5′)，110.11(C6)，61.63(CH₃O)，56.45(CH₃O)，55.97(CH₃O)，55.95(CH₃O)。MS(ESI)m/z：343.1([M+H]⁺)。

(3)3′，4′，7，8-四羟基异黄酮的合成

将氯化铝(586mg，4.4mmol)悬浮于无水二氯甲烷(15mL)，冷却至5℃，缓慢滴加330μL二甲基硫醚后，继续搅拌1h，再加入3′，4′，7，8-四甲氧基异黄酮(137mg，0.4mmol)，将反应体系升值室温，反应8h。停止反应，冷却到0℃，加入10％(w/w)盐酸(15mL)溶液，继续搅拌2h，减压除去二氯甲烷，过滤，滤饼用甲醇/水体系重结晶，得白色固体105mg，为3′，4′，7，8-四羟基异黄酮，产率为92％。m.p.＞320℃。IR(KBr，v)：3435，3194，1621，1576，1553，1527，1411，1375，1291，1189，1081，1028，930cm^-1。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：10.29(s，1H，C7-OH)，9.44(s，1H，C8-OH)，8.98(s，2H，C6-OH，C4′-OH)，8.31(s，1H，C2-H)，7.49(d，1H，J＝8.4Hz，C5-H)，7.04(d，1H，J＝2.0Hz，C2′-H)，6.97(d，1H，J＝8.8Hz，C6-H)，6.84(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H，C6′-H)，6.79(d，J＝8.0Hz，1H，C5′-H)。¹³C-NMR(101MHz，DMSO-d₆)δ：175.58(C4)，153.06(C2)，150.34(C7)，147.11(C9)，145.66(C4′)，145.21(C3′)，133.30(C8)，123.60(C1′)，123.53(C3)，120.37(C6′)，117.93(C10)，117.13(C2′)，116.13(C5)，115.73(C5′)，114.57(C6)。MS(ESI)m/z：287.1([M+H]⁺)。UPLC：流动相为CH₃OH∶H₂O(CH₃COOH)＝30∶70(0.01％)(v/v)，保留时间为5.07min，流速为0.2mL/min。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。