阅读说明：本技术 一种从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的方法 (Method for extracting soybean isoflavone aglycone from soybean milk water ) 是由 刘汝萃 李成辉 崔玉涛 侯尔群 鲁绪强 时玉强 刘代成 王笛 于 2019-06-17 设计创作，主要内容包括：本公开提供了一种从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的方法,以豆浆水作为原料液,向原料液中加入活性白土进行吸附,吸附后获得活性白土渣,利用乙酸乙酯对活性白土渣进行提取获得大豆异黄酮苷元,所述豆浆水为碱提酸沉大豆蛋白工艺排放出的豆浆水。本公开的方法无需以大豆异黄酮苷作为原料,也无需经过化学反应和生物降解,制备方法简单,制备的大豆异黄酮苷元纯度较高。(The invention provides a method for extracting soybean isoflavone aglycone from soybean milk water, which comprises the steps of taking the soybean milk water as a raw material liquid, adding activated clay into the raw material liquid for adsorption, obtaining activated white clay residue after adsorption, extracting the activated white clay residue by using ethyl acetate to obtain the soybean isoflavone aglycone, wherein the soybean milk water is discharged by a process of alkali extraction and acid precipitation of soybean protein. The method disclosed by the invention does not need to take the soybean isoflavone glycoside as a raw material, and also does not need to carry out chemical reaction and biodegradation, the preparation method is simple, and the purity of the prepared soybean isoflavone aglycone is higher.)

一种从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的方法

技术领域

本公开涉及一种从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的方法。

背景技术

这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。

大豆是中国重要粮食作物之一，是一种种子含有丰富植物蛋白质的作物。大豆中富含异黄酮。近年来的很多研究表明，大豆异黄酮具有多种生理功能，例如抗癌、抗心血管疾病、抗骨质疏松、抗女性更年期综合症、抗老年性痴呆，抗机体免疫力下降、抗菌消炎、抗衰老等。

大豆异黄酮主要包括：(1)三羟基异黄酮(又称金雀黄素、染料木素)、(2)二羟基异黄酮(又称大豆苷元、黄豆苷原、大豆素)、(3)黄豆黄素等12种化合物以天然状态存在。大豆异黄酮共分为游离型的大豆异黄酮苷元和结合型的大豆异黄酮苷两类，其中，大豆异黄酮苷元占总量的2％～3％，包括染料木素、大豆素和黄豆黄素。一般来说，大豆异黄酮苷活性的低，当大豆异黄酮苷摄入人体内，在肠道细菌的复杂酶解作用后，转化为具有较高生物活性的大豆异黄酮苷元。现有制备大豆异黄酮苷元方法，大多采用水解或酶解大豆异黄酮苷的方法。然而，这种方法较为复杂、制备的大豆异黄酮苷元纯度较低，且需要消耗大豆异黄酮苷。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本公开的目的是提供一种从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的方法，无需以大豆异黄酮苷作为原料，也无需经过化学反应和生物降解，制备方法简单，制备的大豆异黄酮苷元纯度较高。

为了实现上述目的，本公开的技术方案为：

一方面，一种从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的方法，以豆浆水作为原料液，向原料液中加入活性白土进行吸附，吸附后获得活性白土渣，利用乙酸乙酯对活性白土渣进行提取获得大豆异黄酮苷元，所述豆浆水为碱提酸沉大豆蛋白工艺排放出的豆浆水。

首先，本公开经研究发现碱提酸沉大豆蛋白工艺排放出的豆浆水中含有大量的大豆异黄酮，因而可以作为提取大豆异黄酮苷元的原料。其次，本公开发现活性白土能够将豆浆水中的大豆异黄酮苷元进行富集，从而实现从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的目的。乙酸乙酯和水自然分层，能够将盐、糖、氨基酸、多肽、蛋白等溶水杂质一次除去，使大豆异黄酮苷元纯度大大提高。本公开中能够从每4L豆浆水中提取出12～13mg大豆异黄酮苷元。

由于本公开采用的豆浆水是碱提酸沉大豆蛋白工艺排放的，即本公开也相当于对碱提酸沉大豆蛋白工艺排放出的豆浆水进行水处理，因而另一方面，一种上述方法在碱提酸沉大豆蛋白工艺的水处理中的应用。

本公开的有益效果为：

本公开以碱提酸沉工艺生产大豆蛋白过程中排放的豆浆水为原料制备大豆异黄酮苷元。活性白土吸附后经干燥，用乙酸乙酯一次即可提取大豆异黄酮苷元，不但使活性白土干燥后又可反复使用，而且乙酸乙酯用量大大减少。

本公开选用乙酸乙酯进行提取，乙酸乙酯和水自然分层，只采用薄膜蒸发器蒸馏即可达到反复使用的条件，不像乙醇提取，乙醇精馏设备较复杂，而且投资大，且纯度较低。本公开采用的乙酸乙酯能够将盐、糖、氨基酸、多肽、蛋白等溶水杂质一次除去，使大豆异黄酮苷元纯度大大提高。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

鉴于现有制备大豆异黄酮苷元方法存在步骤复杂、产品纯度较低等不足，为了解决如上的技术问题，本公开提出了一种从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的方法。

本公开的一种典型实施方式，提供了一种从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的方法，以豆浆水作为原料液，向原料液中加入活性白土进行吸附，吸附后获得活性白土渣，利用乙酸乙酯对活性白土渣进行提取获得大豆异黄酮苷元，所述豆浆水为碱提酸沉大豆蛋白工艺排放出的豆浆水。

首先，本公开经研究发现碱提酸沉大豆蛋白工艺排放出的豆浆水中含有大量的大豆异黄酮，因而可以作为提取大豆异黄酮苷元的原料。其次，本公开发现活性白土能够将豆浆水中的大豆异黄酮苷元进行富集，从而实现从豆浆水中提取大豆异黄酮苷元的目的。乙酸乙酯和水自然分层，能够将盐、糖、氨基酸、多肽、蛋白等溶水杂质一次除去，使大豆异黄酮苷元纯度大大提高。

该实施方式的一种或多种实施例中，将豆浆水静置沉降后获取下层溶液，以下层溶液作为原料液。豆浆水经过自然沉降的下层黄色液体，能够减少活性白土的用量。

该系列实施例中，豆浆水经过自然沉降，以1/4的下层液体作为原料液。能够进一步降低活性白土的用量。

该系列实施例中，豆浆水沉降时间为4～5h。能够保证豆浆水中的大部分大豆异黄酮苷元富集在下层液体中。

该实施方式的一种或多种实施例中，原料液与活性白土的投入比为1000:10～15，mL：g，即1～1.5％。

该实施方式的一种或多种实施例中，吸附过程中进行搅拌。搅拌能够促进活性白土的吸附。

该系列实施例中，吸附的时间为0.5～1.5h。

该实施方式的一种或多种实施例中，吸附后进行过滤，获得的滤渣即为活性白土渣。

该实施方式的一种或多种实施例中，将获得的活性白土渣进行干燥。

该系列实施例中，干燥温度不高于140℃。

该实施方式的一种或多种实施例中，活性白土与乙酸乙酯的加入比为10～15:20～30，g：mL。

该实施方式的一种或多种实施例中，提取的过程为：将活性白土渣和乙酸乙酯混合，搅拌，搅拌后将活性白土渣去除获得乙酸乙酯溶液，将乙酸乙酯溶液中的乙酸乙酯去除。

该系列实施例中，搅拌时间为30～60min。

该系列实施例中，搅拌后去除活性白土渣的步骤为：将搅拌后的物料进行离心，离心后获得乙酸乙酯上清液，即为乙酸乙酯溶液。

该系列实施例中，离心的条件为：转速为10000～6000r/min，离心时间为10～15min。

本公开的另一方面，提供了一种上述方法在碱提酸沉大豆蛋白工艺的水处理中的应用。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案，以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本公开的技术方案。

实施例1

取碱提酸沉工艺生产大豆蛋白排放的豆浆水4L，自然沉降4h，得下层1000mL黄色液体(上清无色)。向该液体中加入15g活性白土，磁力搅拌0.5h，过滤，得活性白土渣，自然干燥或烘干(＜140℃)后，加入乙酸乙酯30mL，磁力搅拌60min提取，5000r/min离心12min，取乙酸乙酯上清液旋蒸干后得产品12.5mg，大豆异黄酮苷元的收率为85％。

对获得的产品进行分析，方法如下：

1.将大豆素、大豆素苷、染料木素、染料木苷、黄豆黄素、黄豆黄苷6个标准品分别配成1mg/mL的6个标准品溶液。

2.将本实施例制备的产品用10mL乙酸乙酯溶解作为样品液。

3.用活化后的硅胶GF254高效薄层板(HPTLC)10cm*20cm，对步骤1的6个标准液的每个分别取1μL、2μL、3μL、4μL、5μL制作出6个标准曲线，相应的得6个标准曲线方程，RSD<3％。

4.大豆异黄酮苷(大豆素苷，染料木苷，黄豆黄苷)的检测：对步骤1的三种标准品液(大豆素苷，染料木苷，黄豆黄苷)各5μL，取步骤2制备的样品液5μL。点在GF254HPTLC板上，自然晾干。在双槽的玻璃展开缸展开。加20mL展开剂。展开剂配方：二氯甲烷：甲醇：乙酸＝10:2:0.1，HPTLC板放入展开缸后加盖饱和10分钟后始展开距：13厘米。展毕取出。晾干后在365nm紫外灯下观察。

5.在薄层扫描仪TLC scanner III带有WINcats1.4.1软件(瑞士CAMAG公司)扫描，扫描条件：扫描速度80nm/s，分辨率200μm/step，照射灯D2灯，波长260nm，扫描宽度6.00mm*0.90mm。大豆素苷Rf＝0.41，染料木苷Rf＝0.52，黄豆黄苷Rf＝0.50。

6.大豆异黄酮苷元(大豆素，染料木素，黄豆黄素)的检测：对步骤1的三种标准品液(大豆素，染料木素，黄豆黄素)各5μL，取步骤2制备的样品液5μL。点在GF254HPTLC板上，自然晾干。在双槽的玻璃展开缸展开。加20ml展开剂。展开剂配方：三氯甲烷：甲醇：乙酸＝9:1:0.15，HPTLC板放入展开缸后加盖饱和10分钟后始展开。展开距：10厘米。展毕取出。晾干后在365nm紫外灯下观察。

7.在薄层扫描仪TLC scanner III带有WINcats1.4.1软件(瑞士CAMAG公司)扫描，扫描条件：扫描速度80nm/s，分辨率200μm/step，照射灯D2灯，波长260nm，扫描宽度6.00mm*0.90mm。大豆苷元Rf＝0.50，染料木素Rf＝0.67，黄豆黄素Rf＝0.62。

经检测，12.5mg的产品中，只含有大豆素、染料木素、黄豆黄素，没有大豆异黄酮苷，其中，大豆素2.0mg，染料木素0.5mg，黄豆黄素10.0mg。

实施例2

取碱提酸沉工艺生产大豆蛋白排放的豆浆水4L，自然沉降5h，得下层1000mL黄色液体(上清无色)。向该液体中加入10g活性白土，磁力搅拌1.5h，过滤，得活性白土渣，自然干燥或烘干(＜140℃)后，加入乙酸乙酯20mL，磁力搅拌30min提取，6000r/min离心15min，取乙酸乙酯上清液旋蒸干后得产品12mg，大豆异黄酮苷元的收率为85％。

经检测，检测方法如实施例1，12mg的产品中，只含有大豆素、染料木素、黄豆黄素，没有大豆异黄酮苷，其中，其中大豆素1.7mg，染料木素0.5mg，黄豆黄素9.8mg。

实施例3

取碱提酸沉工艺生产大豆蛋白排放的豆浆水4L，自然沉降5h，得下层1000mL黄色液体(上清无色)。向该液体中加入12g活性白土，磁力搅拌1h，过滤，得活性白土渣，自然干燥或烘干(＜140℃)后，加入乙酸乙酯40mL，磁力搅拌45min提取，4000r/min离心10min，取乙酸乙酯上清液旋蒸干后得产品13mg，大豆异黄酮的收率为83％。

经检测，检测方法如实施例1，13mg的产品中，只含有大豆素、染料木素、黄豆黄素，没有大豆异黄酮苷，其中，其中大豆素2.2mg，染料木素0.6mg，黄豆黄素10.2mg。

实施例1～3制备的大豆异黄酮苷元产量如表1所示。

表1实施例1～3制备的大豆异黄酮苷元产量

以上所述仅为本公开的优选实施例而已，并不用于限制本公开，对于本领域的技术人员来说，本公开可以有各种更改和变化。凡在本公开的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。