阅读说明：本技术 一种坚果炒制品的复配添加剂中tbhq检测方法 (Detection method for TBHQ in compound additive of fried nut product ) 是由 李功 周燕霞 石凯文 张艳 马士飞 杨雅芹 李俐 于 2019-12-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种坚果炒制品的复配添加剂中TBHQ检测方法,属于食品检测技术领域。本申请的坚果炒制品的复配添加剂中TBHQ检测方法,包括依次的样品前处理、标准品制备、平衡色谱条件和样品检测的步骤,所述标准品制备步骤中,TBHQ标准品工作液浓度梯度为50mg/L、20mg/L、10mg/L、5mg/L、1mg/L；可以更全面的覆盖坚果炒货产品中的TBHQ含量。所述平衡色谱条件为使用高效液相色谱仪,包括C<Sub>18</Sub>色谱柱,柱长250mm,内径4.6mm粒径5um,或等效色谱柱及紫外检测器,流动相为0.5％甲酸水溶液：甲醇＝50:50,柱温35℃,进样量10ul,检测波长280nm,该色谱条件更适宜于坚果炒货行业复配添加剂中TBHQ的检测。(The invention discloses a method for detecting TBHQ in a compound additive of a fried nut product, and belongs to the technical field of food detection. The method for detecting TBHQ in the compound additive of the fried nut product comprises the steps of sample pretreatment, standard product preparation, equilibrium chromatographic conditions and sample detection in sequence, wherein in the step of standard product preparation, the concentration gradient of a TBHQ standard product working solution is 50mg/L, 20mg/L, 10mg/L, 5mg/L and 1 mg/L; the TBHQ content in the nut roasted product can be more completely covered. The equilibrium chromatographic condition is to use a high performance liquid chromatograph comprising C 18 A chromatographic column with the length of 250mm and the inner diameter of 4.6mm and the particle size of 5um, or an equivalent chromatographic column and an ultraviolet detector, and a mobile phase is 0.5 percent formic acid water solution: the methanol is 50:50, the column temperature is 35 ℃, the sample injection amount is 10ul, the detection wavelength is 280nm, and the chromatographic condition is more suitable for nutsAnd (3) detecting TBHQ in the compound additive in the roasted seeds and nuts industry.)

一种坚果炒制品的复配添加剂中TBHQ检测方法

技术领域

本发明属于检测技术领域，更具体地说，涉及一种坚果炒制品的复配添加剂中TBHQ检测方法。

背景技术

复配添加剂是含有两种或两种以上食品添加剂的配方混合物。根据2011年7月6日***发布的食品安全国家标准《复配食品添加剂通则》定义，复配食品添加剂是为了改善食品品质、便于食品加工，将两种或两种以上单一品种的食品添加剂，添加或不添加辅料，经物理方法混匀而成的食品添加剂。

TBHQ(特丁基对苯二酚)是国家规定允许少量添加的食用抗氧化剂，跟BHT、BHA相比，TBHQ拥有更安全的无毒性能，因为添加量少。曾经有国内某著名快餐连锁店使用德国洋樱集团的TBHQ被媒体曝光事件。根据美国FDA的相关规定，TBHQ在油脂等中的使用限值是油脂或食物中脂肪的0.02％。[1]国外研究表明，随着剂量的升高，TBHQ显示出对实验动物的健康的影响，例如产生胃癌和对DNA的损伤。[2]TBHQ与其他抗氧剂相比的缺点是它使用的行业比较窄，都是食品方面的，用在医药和化妆品行业的都用其他抗氧剂，例如BHT，茶多酚，但是茶多酚价格比较高，用BHT作为抗氧剂的很广泛。

目前复配添加剂中会添加抗氧化剂，而THBQ则是抗氧化剂中使用量比较大的，所以对TBHQ的监管更加严格，但是现有标准对TBHQ的检测并不完善，并没有针对坚果炒货行业的检测方法，容易在检测过程中由于样品本身不适宜而导致检测异常。

经检索，中国专利申请公布号：CN105699535A，公布日：2016.6.22的发明公开了一种食品中特丁基对苯二酚的检测方法。所述检测方法包括如下步骤：(1)利用高效液相色谱法对待测食品中的特丁基对苯二酚进行分离；(2)在流动注射的条件下，步骤(1)的流出液与化学发光试剂进行混合得到一体系，并进行化学发光反应，根据所述体系的化学发光强度值，即得到食品中特丁基对苯二酚的浓度；所述化学发光试剂为鲁米诺-高锰酸钾体系与碱性pH调节剂的混合液。该发明检测方法针对的是液态流体类油中的THBQ的检测，应用于固体类坚果炒制品中THBQ的检测时，其准确性难以保证。

发明内容

1、要解决的问题

针对现有的坚果炒货行业复配添加剂中TBHQ没有针对性的具体检测方法的问题，本发明提供一种坚果炒制品的复配添加剂中TBHQ检测方法。通过前处理部分可以更有针对性的提取坚果炒货产品中的油脂方便的检测，标准品制备部分可以更全面的覆盖坚果炒货产品中的TBHQ含量，进而准确检测坚果炒制品的复配添加剂中TBHQ的含量。

2、技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种坚果炒制品的复配添加剂中TBHQ检测方法，包括依次的样品前处理、标准品制备、平衡色谱条件和样品检测的步骤，所述标准品制备步骤中，TBHQ标准品工作液浓度梯度为50mg/L、20mg/L、10mg/L、5mg/L、1mg/L；可以更全面的覆盖坚果炒货产品中的TBHQ含量。所述平衡色谱条件为使用高效液相色谱仪，包括C₁₈色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm粒径5um，或等效色谱柱及紫外检测器，流动相为0.5％甲酸水溶液：甲醇＝50:50，柱温35℃，进样量10ul，检测波长280nm，该色谱条件更适宜于坚果炒货行业复配添加剂中TBHQ的检测。

进一步的，所述样品检测的计算公式为：

Xi＝A×V/m；式中：

Xi：试样中抗氧化剂含量，单位为毫克每千克；

A：从标准曲线上得到的TBHQ溶液浓度，单位为微克每毫升；

V：样液最终体积，单位为毫升；

m：称取的试样油脂质量，单位为克；

结果保留三位有效数字或保留到小数点后两位。

进一步的，所述样品前处理中，将需检测的坚果通过去壳机去除外壳，制得坚果仁，经挑拣后得到无杂质的坚果仁，将其打碎制成均匀颗粒状样品后置于磨口试剂瓶中，加入石油醚混匀浸泡制成浸泡液；浸泡液经定性滤纸过滤，滤出液用圆底烧瓶收集，分离出固体杂质，获得所需滤出液；将含滤出液的圆底烧瓶连接旋转蒸发器，置于水浴锅内旋转蒸发，瓶内石油醚全部挥发，只剩油脂样品时停止；油脂样品进行称量，称量后置于离心管中；装有油脂样品的离心管中加入乙腈饱和的正己烷溶液，漩涡混匀后进行超声处理；超声处理后的离心管中加入正己烷饱和的乙腈溶液，漩涡混匀后离心处理；离心后的溶液中取出乙腈提取液备用，再向离心管中加入正己烷饱和的乙腈溶液，再漩涡混匀后离心处理；第二次离心后的溶液中取出乙腈提取液与第一次乙腈提取液混合，重复向离心管中加入正己烷饱和的乙腈溶液，漩涡混匀后再离心；第三次离心后的溶液中取出乙腈提取液与前两次乙腈提取液混合，制得最终目标产物，以备上机使用。

进一步的，标准品制备步骤中TBHQ标准品纯度要求≥98％，将TBHQ标准品准确称取后置于容量瓶，再加入乙腈溶剂定容至刻度，制成储备液，避光保存；将储备液吸取定量后置于棕色容量瓶，再加入乙腈溶剂定容至刻度，制成中间液，避光保存；将中间液分别吸取50ml、20ml、10ml、5ml、1ml置于棕色容量瓶，再加入乙腈溶剂定容至刻度，制成50mg/L、20mg/L、10mg/L、5mg/L、1mg/L工作液，以备上机使用。

进一步的，所述样品前处理中，具体的操作参数为：坚果通过去壳机去除外壳，制得坚果仁至少200g以上，经挑拣后得到无杂质的瓜子仁，将其打碎制成约5mm均匀颗粒状样品；将均匀颗粒状样品置于250ml磨口试剂瓶中，加入30～60℃沸程的石油醚，用量约为样品的2～3倍，充分混匀浸泡约12h，制成浸泡液；浸泡液经定性滤纸过滤，滤出液用圆底烧瓶收集，分离出固体杂质获得所需滤出液；含滤出液的圆底烧瓶，连接旋转蒸发器，置于60℃水浴锅内，旋转蒸发3-10分钟，瓶内石油醚全部挥发，只剩油脂样品即可停止；油脂样品用电子天平进行称量，称量1g精确到0.01g，置于50ml离心管中；装有油脂样品的离心管中加入5ml乙腈饱和的正己烷溶液，漩涡混匀1min，超声处理2h；超声处理后的离心管中加入5ml正己烷饱和的乙腈溶液，漩涡混匀2min，3000r/min离心5min；离心后的溶液中取出乙腈提取液备用，再向离心管中加入5ml正己烷饱和的乙腈溶液，漩涡混匀2min，3000r/min离心5min；第二次离心后的溶液中取出乙腈提取液与第一次乙腈提取液混合，重复向离心管中加入5ml正己烷饱和的乙腈溶液，漩涡混匀2min，3000r/min离心5min。

进一步，标准品制备中，具体的操作参数为：所述TBHQ标准品的纯度要求≥98％；将TBHQ标准品准确称取0.1g精确到0.1mg，置于100ml棕色容量瓶，再加入乙腈溶剂定容至刻度，制成1000mg/L储备液，0-4℃避光保存；将储备液吸取10ml，置于100ml棕色容量瓶，再加入乙腈溶剂定容至刻度，制成100mg/L中间液，0-4℃避光保存。

3、有益效果

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

(1)本发明的样品前处理步骤，将样品粉碎用试剂提取出所需目标物，用标准试剂与提取目标物反应制得最终产物，这种方式能更好的提取油脂，方便后面的检测，检测结果也能更贴近国标限量要求；

(2)本发明的标准品制备步骤，所用的TBHQ标准品工作液浓度梯度为50mg/L、20mg/L、10mg/L、5mg/L、1mg/L，而坚果炒货产品中的TBHQ等效含量约为10mg/L，该浓度梯度的TBHQ标准品工作液可以更全面的覆盖坚果炒货产品；

(3)本发明的平衡色谱条件步骤，所用参数参照日常检测中的特殊情况，由于坚果炒货产品添加的复配添加剂比较复杂，故该色谱条件能更适宜于该样品中的TBHQ检测，区分杂质干扰，提高检测准确度。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。

实施例1

本实施例的坚果炒制品的复配添加剂中TBHQ检测方法，具体步骤为：

步骤一、样品前处理：将坚果，比如表一中的各种原料，通过去壳机去除外壳，制得坚果仁至少200g以上，经挑拣后得到无杂质的坚果仁，将其打碎制成约5mm均匀颗粒状样品；将均匀颗粒状样品置于250ml磨口试剂瓶中，加入30～60℃沸程的石油醚，用量约为样品的2～3倍，充分混匀浸泡约12h，制成浸泡液；浸泡液经定性滤纸过滤，滤出液用圆底烧瓶收集，分离出固体杂质获得所需滤出液；含滤出液的圆底烧瓶，连接旋转蒸发器，置于60℃水浴锅内，旋转蒸发3-10分钟，瓶内石油醚全部挥发，只剩油脂样品即可停止；油脂样品用电子天平进行称量，称量1g精确到0.01g，置于50ml离心管中；装有油脂样品的离心管中加入5ml乙腈饱和的正己烷溶液，漩涡混匀1min，超声处理2h；超声处理后的离心管中加入5ml正己烷饱和的乙腈溶液，漩涡混匀2min，3000r/min离心5min；离心后的溶液中取出乙腈提取液备用，再向离心管中加入5ml正己烷饱和的乙腈溶液，漩涡混匀2min，3000r/min离心5min；第二次离心后的溶液中取出乙腈提取液与第一次乙腈提取液混合，重复向离心管中加入5ml正己烷饱和的乙腈溶液，漩涡混匀2min，3000r/min离心5min；第三次离心后的溶液中取出乙腈提取液与前两次乙腈提取液混合，制得最终目标产物，以备上机使用；

步骤二、标准品制备：准备TBHQ标准品且纯度要求≥98％；将TBHQ标准品准确称取0.1g精确到0.1mg，置于100ml棕色容量瓶，再加入乙腈溶剂定容至刻度，制成1000mg/L储备液，0-4℃避光保存；将储备液吸取10ml，置于100ml棕色容量瓶，再加入乙腈溶剂定容至刻度，制成100mg/L中间液，0-4℃避光保存；将中间液分别吸取50ml、20ml、10ml、5ml、1ml置于100ml棕色容量瓶，再加入乙腈溶剂定容至刻度，制成50mg/L、20mg/L、10mg/L、5mg/L、1mg/L工作液，以备上机使用；

步骤三、平衡色谱条件：用高效液相色谱仪，包括C18色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm粒径5um，或等效色谱柱及紫外检测器，流动相为0.5％甲酸水溶液：甲醇＝50:50，柱温35℃，进样量10ul，检测波长280nm；

步骤四、样品检测：用高效液相色谱仪对步骤一的目标产物进行上机检测；

步骤五、计算：将检测结果代入公式计算、计算公式为：

Xi＝A×V/m

式中：

Xi———试样中抗氧化剂含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；

A———从标准曲线上得到的TBHQ溶液浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；

V———样液最终体积，单位为毫升(mL)；

m———称取的试样油脂质量，单位为克(g)。

举例说明：如步骤四测得样品1-奶香瓜子测得A值为4.4121μg/mL，V值为15ml，m值为1.103g代入公式计算得出X值为60mg/kg，单位转换后即为表一中的0.06g/kg；

如步骤四测得样品2-菊花瓜子测得A值为4.0141μg/mL，V值为15ml，m值为1.141g代入公式计算得出X值为53mg/kg，单位转换后即为表一中的0.05g/kg；

表一中其它步骤四测得的结果不再赘述。

结果保留三位有效数字(或保留到小数点后两位)检测结果如下表一：

表一：

序号	样品名称	检测结果g/kg		样品名称	检测结果g/kg
						1	奶香瓜子	0.06	24	奶香瓜子	0.08
2	菊花瓜子	0.05	25	凉茶瓜子	0.05
						3	清凉小而香	0.003	26	多味瓜子	0.03
4	草本好南仁	0.17	27	凉茶瓜子	0.03
						5	草本好南仁	0.16	28	多味瓜子	0.02
6	茉莉好南仁	0.03	29	香瓜子	0.04
						7	香瓜子	0.02	30	香瓜子	0.07
8	麻辣怪味花生	0.12	31	凉茶瓜子	0.05
						9	菊花瓜子	0.03	32	菊花瓜子	0.01
10	香瓜子	0.02	33	奶香瓜子	0.05
						11	香瓜子	0.06	34	奶香瓜子	0.08
12	香瓜子	0.04	35	凉茶瓜子	0.04
						13	绿茶好南仁	0.15	36	奶香瓜子	0.02
14	香瓜子	0.04	37	香瓜子	0.07
						15	奶香瓜子	0.04	38	香瓜子	0.01
16	菊花瓜子	0.06	39	香瓜子	0.03
						17	开口西瓜子	0.02	40	香瓜子	0.02
18	多味瓜子	0.03	41	凉茶瓜子	0.04
						19	香瓜子	0.03	42	香瓜子	0.06
20	奶香瓜子	0.04	43	香瓜子	0.04
						21	蟹黄豆	0.05	44	多味瓜子	0.02
22	香瓜子	0.03	45	凉茶瓜子	0.03
						23	奶香瓜子	0.04	46	菊花瓜子	0.05

该组检测结果与实际生产投料接近，且方法操作更能测得坚果炒货产品中油脂的TBHQ含量。

综上，可以看出，本复配添加剂检测方法供了对坚果炒货类产品新的处理方法，检测结果准确可靠更适宜于坚果炒货类样品的检测。

本发明所述实例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明构思和范围进行限定，在不脱离本发明设计思想的前提下，本领域工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的保护范围。