阅读说明：本技术 丹参酮iia磺酸钠在制备伴随血液中同型半胱氨酸升高的急性或慢性疾病的药物中的应用 (Application of tanshinone IIA sodium sulfonate in preparation of medicine for treating acute or chronic diseases accompanied with increase of homocysteine in blood ) 是由 唐靖一 陈昕琳 周忠焱 马子霖 赵外荣 肖颖 施雯婷 于 2018-09-13 设计创作，主要内容包括：本发明涉及丹参酮IIA磺酸钠单独或者作为有效成分在制备伴随血液中同型半胱氨酸升高的急性或慢性疾病的药物中的应用。本发明运用血管内皮细胞、心肌细胞、神经细胞、离体血管模型,模拟高同型半胱氨酸对心脑血管系统的损伤作用,发现丹参酮IIA磺酸钠对高同型半胱氨酸引起的心脑血管损伤具有保护和/或治疗作用,弥补了对抗同型半胱氨酸引起的心脑血管损害的保护和/或治疗药物的空白。本发明提供的药物适用于引起血液内同型半胱氨酸异常升高的疾病,只需要在血液内达到有效浓度即可发挥对抗同型半胱氨酸引起心脑血管损伤的保护和/或治疗作用,为血液中同型半胱氨酸升高疾病的心脑血管损伤治疗提供了更好的选择。(The invention relates to application of tanshinone IIA sodium sulfonate in preparation of drugs for treating acute or chronic diseases accompanied with increase of homocysteine in blood independently or as an effective component. The invention uses vascular endothelial cells, myocardial cells, nerve cells and isolated blood vessel models to simulate the damage effect of homocysteine on the cardiovascular and cerebrovascular systems, finds that the tanshinone IIA sodium sulfonate has the protection and/or treatment effect on the cardiovascular and cerebrovascular damage caused by homocysteine, and fills the blank of protection and/or treatment medicines for resisting the cardiovascular and cerebrovascular damage caused by homocysteine. The medicine provided by the invention is suitable for diseases causing abnormal increase of homocysteine in blood, can play a role in protecting and/or treating cardiovascular and cerebrovascular injuries caused by resisting homocysteine only by reaching effective concentration in blood, and provides a better choice for treating cardiovascular and cerebrovascular injuries caused by diseases causing the increase of homocysteine in the blood.)

丹参酮IIA磺酸钠在制备伴随血液中同型半胱氨酸升高的急 性或慢性疾病的药物中的应用

技术领域

本发明属于制药领域，涉及丹参酮IIA磺酸钠在制备预防和/或治疗高同型半胱氨酸引起心脑血管损伤相关疾病中的应用

背景技术

同型半胱氨酸是冠心病、动脉粥样硬化等心脑血管疾病的独立危险因素，其致病机理包括影响血管内皮功能，促进平滑肌增殖，促进血栓形成，心血管毒性等。部分肾病、肝病、代谢性疾病、神经系统疾病、癌症，某些药物摄入等临床表现为血液中的同型半胱氨酸异常升高。目前临床上预防与治疗高同型半胱氨酸的药物主要为以干预同型半胱氨酸的转甲基途径或转硫途径，或同时干预这两种途径的含B族维生素和叶酸的复方制剂，然而尚缺乏权威的证据支持其对动脉粥样硬化等心脑血管疾病的发生率、死亡率的改善作用。因此，开发一种对抗高同型半胱氨酸引起的心血管损伤保护剂，对于相关疾病的治疗具有重要的意义，其具备广阔的应用前景。

丹参酮IIA磺酸钠为中药丹参中成分丹参酮IIA的水溶性衍生物，通过引入磺酸钠基团，极大地增强了水溶性，在临床上制成了注射剂，克服了丹参酮IIA水溶性差、口服生物利用度低，难以成药的问题，其CAS no.为：69659-80-9，结构式为：

丹参酮IIA磺酸钠注射液已经广泛应用于临床冠心病、心绞痛、室性早搏等疾病的治疗，现代药理学表明其具备抗氧化、抗炎等药理活性，具有明确的心血管保护作用，然而其对抗高同型半胱氨酸引起的心血管损伤尚未有报道。

发明内容

针对现有技术的上述不足，根据本发明的实施例，希望提供一种提供丹参酮IIA磺酸钠在制备治疗与预防伴同型半胱氨酸升高相关疾病的心脑血管损伤相关药物中的应用。

本发明者为了完成本发明，采用多种模型模拟高同型半胱氨酸的心脑血管损伤作用，研究了丹参酮IIA磺酸钠用于治疗和预防同型半胱氨酸引起的心脑血管损伤的功效。

本发明中，丹参酮IIA磺酸钠单独或者作为有效成分在制备伴随血液中同型半胱氨酸升高的急性或慢性疾病的药物中的应用。

根据本发明的实施例，本发明前述伴随血液中同型半胱氨酸升高的急性和/或慢性疾病，包含但不限于(1)心脑血管系统疾病如高血压、冠心病、心衰、心律失常、动脉粥样硬化、脑卒中等(2)神经系统疾病如认知障碍、老年痴呆、偏头痛等(3)肾脏系统疾病如急慢性肾衰等(4)代谢性疾病如糖尿病、痛风、骨质疏松等(5)精神类疾病如精神***症等(6)眼部疾病如白内障、青光眼等(7)癌症(8)先天性疾病(9)药物引起的血液同型半胱氨酸升高等。

根据本发明的实施例，本发明前述丹参酮IIA磺酸钠的剂型为以丹参酮IIA磺酸钠为原料制剂或以丹参酮IIA磺酸钠为组成成分的复方制剂，包括但不限于注射剂、片剂、胶囊、脂质体、颗粒剂、口服液、丸剂等。

高同型半胱氨酸显著引起血管内皮细胞、心肌细胞毒性，内皮细胞迁移抑制，血管收缩舒张功能障碍，表明其对心血管系统具有明显的毒性。本发明的研究资料表明，丹参酮IIA磺酸钠能有效地抑制高同型半胱氨酸造成的心血管损伤，对于表现为血液中同型半胱氨酸升高的各类疾病均可以起到预防和治疗心血管损伤的作用。并且，丹参酮IIA磺酸钠已是临床上用的成药，拓展其临床适应症具有巨大的市场应用前景。

附图说明

图1同型半胱氨酸(Hcy)在内皮细胞上的毒性作用(与对照组相比***P<0.001)。

图2丹参酮IIA磺酸钠(STS)对同型半胱氨酸(Hcy)引起血管内皮细胞的毒性的保护作用(与对照组相比###P<0.001，与模型组比**P<0.01，***P<0.001)。

图3丹参酮IIA磺酸钠(STS)对同型半胱氨酸(Hcy)引起血管内皮细胞迁移抑制的保护作用(与对照组相比###P<0.001，#P<0.05；与模型组比*P<0.05，**P<0.01)。

图4同型半胱氨酸(Hcy)在心肌细胞上的毒性作用(与对照组相比*P<0.05，***P<0.001)。

图5丹参酮IIA磺酸钠(STS)对同型半胱氨酸(Hcy)引起心肌细胞的毒性的保护作用(与对照组相比###P<0.001，与模型组比**P<0.01，***P<0.001)。

图6同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠胸主动脉舒缩功能的损伤作用(与对照组比***P<0.001)。

图7丹参酮IIA磺酸钠(STS)对同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠胸主动脉舒缩功能损伤的保护作用(与对照组比###P<0.001，与模型组比***P<0.001)。

图8同型半胱氨酸(Hcy)在神经细胞上的毒性作用(与对照组相比***P<0.001)。

图9丹参酮IIA磺酸钠(STS)对同型半胱氨酸(Hcy)引起神经细胞的毒性的保护作用(与对照组相比###P<0.001，与模型组比**P<0.01，***P<0.001)。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修改同样落入本发明权利要求所限定的范围。

实施例1(丹参酮IIA磺酸钠对体外同型半胱氨酸导致内皮细胞损伤的保护作用)

实验主要试剂：同型半胱氨酸购自sigma公司，其货号及规格为：H4628-5G；MTT购自sigma公司，货号及规格为：M2128-5G；丹参酮IIA磺酸钠购自成都曼思特公司，其货号及规格为：A0058-20mg。HUVEC内皮细胞购自美国ATCC公司，其货号为：CRL-1730；

1.1同型半胱氨酸对血管内皮细胞的毒性作用

将人脐静脉内皮细胞按照1X10⁴个/mL的密度接种至96孔板中，每孔100μl，于CO₂培养箱(37℃，5％CO₂)中培养24h。按照空白对照组，同型半胱氨酸不同剂量组(1，2，4，8mM)，分别加药24h，检测细胞活性(MTT法)。结果显示，同型半胱氨酸显著影响血管内皮细胞的细胞活性(如图1)。

1.2丹参酮IIA磺酸钠对同型半胱氨酸引起血管内皮细胞的毒性的保护作用

将人脐静脉内皮细胞按照1X10⁴个/mL的密度接种至96孔板中，每孔100μl，于CO₂培养箱(37℃，5％CO₂)中培养24h。按照空白对照组，模型组(同型半胱氨酸8mM)，不同剂量丹参酮IIA磺酸钠干预组(25，50，100μM)，分别加药24h，检测细胞活性(MTT法)。结果显示，丹参酮IIA磺酸钠显著保护同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞毒性(如图2)。

1.2丹参酮IIA磺酸钠对同型半胱氨酸引起血管内皮细胞迁移抑制的保护作用

将人脐静脉内皮细胞按照10X10⁴个/mL的密度接种至12孔板中，每孔1ml，于CO₂培养箱(37℃，5％CO₂)中培养24h。用1ml枪头，在孔板中画出十字，拍照。按照空白对照组，模型组(同型半胱氨酸4mM)，不同剂量丹参酮IIA磺酸钠干预组(25，50，100μM)，分别加药12h和24h，拍照观察，并用Image J测量迁移距离。结果显示，丹参酮IIA磺酸钠显著保护同型半胱氨酸引起血管内皮细胞迁移抑制(如图3)。

实施例2(丹参酮IIA磺酸钠对体外同型半胱氨酸导致心肌细胞损伤的保护作用)

实验主要试剂：同型半胱氨酸购自sigma公司，其货号及规格为：H4628-5G；MTT购自sigma公司，货号及规格为：M2128-5G；丹参酮IIA磺酸钠购自成都曼思特公司，其货号及规格为：A0058-20mg。H9c2心肌细胞购自上海中科院细胞库，其货号为：GNR 5；

2.1同型半胱氨酸对心肌细胞的毒性作用

将人心肌细胞按照0.8X10⁴个/mL的密度接种至96孔板中，每孔100μl，于CO₂培养箱(37℃，5％CO₂)中培养24h。按照空白对照组，同型半胱氨酸不同剂量组(0.5，1，2，4mM)，分别加药24h，检测细胞活性(MTT法)。结果显示，同型半胱氨酸显著影响心肌细胞的细胞活性(如图4)。

2.2丹参酮IIA磺酸钠对同型半胱氨酸引起心肌细胞的毒性的保护作用

将人心肌细胞按照0.8X10⁴个/mL的密度接种至96孔板中，每孔100μl，于CO₂培养箱(37℃，5％CO₂)中培养24h。按照空白对照组，模型组(同型半胱氨酸4mM)，不同剂量丹参酮IIA磺酸钠干预组(10，30，100μM)，分别加药24h，检测细胞活性(MTT法)。结果显示，丹参酮IIA磺酸钠显著保护同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞毒性(如图5)。

实施例3(丹参酮IIA磺酸钠对体外同型半胱氨酸导致大鼠胸主动脉舒缩功能损伤的保护作用)

实验主要试剂：同型半胱氨酸购自sigma公司，其货号及规格为：H4628-5G；丹参酮IIA磺酸钠购自成都曼思特公司，其货号及规格为：A0058-20mg。Wistar大鼠由上海中医药大学附属龙华医院SPF级动物实验中心提供。

3.1同型半胱氨酸对大鼠胸主动脉舒缩功能的损伤作用

将大鼠胸主动脉血管环分离出来后，于泰盟组织灌流系统中培养并记录其收缩舒张力的变化。培养条件为：Krebs生理平衡液体，37℃，5％二氧化碳，95％氧气。血管在基础张力下平衡1h后，用60mM KCl收缩血管，然后用Krebs生理平衡液再平衡，重复三次。用1μM苯肾上腺素(Phe)预收缩血管，用累计浓度乙酰胆碱(Ach)1nM-3μM舒张血管，其最大舒张大于80％。按照空白对照组，同型半胱氨酸不同剂量组(4，8mM)，分别加药30min，用1μM苯肾上腺素(Phe)预收缩血管，用累计浓度乙酰胆碱(Ach)1nM-3μM舒张血管。结果显示，丹参酮IIA磺酸钠改善高同型半胱氨酸引起的大鼠动脉血管收缩舒张障碍(如图6)。

3.2丹参酮IIA磺酸钠对同型半胱氨酸对大鼠胸主动脉舒缩功能损伤的保护作用

将大鼠胸主动脉血管环分离出来后，于泰盟组织灌流系统中培养并记录其收缩舒张力的变化。培养条件为：Krebs生理平衡液体，37℃，5％二氧化碳，95％氧气。血管在基础张力下平衡1h后，用60mM KCl收缩血管，然后用Krebs生理平衡液再平衡，重复三次。用1μM苯肾上腺素(Phe)预收缩血管，用累计浓度乙酰胆碱(Ach)1nM-3μM舒张血管，其最大舒张大于80％。分别按照空白对照组，空白对照组，模型组(同型半胱氨酸4mM)，丹参酮IIA磺酸钠干预组(50μM)，分别加药30min，用1μM苯肾上腺素(Phe)预收缩血管，用累计浓度乙酰胆碱(Ach)1nM-3μM舒张血管。结果显示，丹参酮IIA磺酸钠改善高同型半胱氨酸引起的大鼠动脉血管收缩舒张障碍(如图7)。

实施例4(丹参酮IIA磺酸钠对体外同型半胱氨酸导致神经细胞损伤的保护作用)

实验主要试剂：同型半胱氨酸购自sigma公司，其货号及规格为：H4628-5G；MTT购自sigma公司，货号及规格为：M2128-5G；丹参酮IIA磺酸钠购自成都曼思特公司，其货号及规格为：A0058-20mg。SH-SY5Y人神经细胞购自美国ATCC细胞库，其货号为：CRL-2266；

4.1同型半胱氨酸对神经细胞的毒性作用

将人神经细胞按照1X10⁴个/mL的密度接种至96孔板中，每孔100μl，于CO₂培养箱(37℃，5％CO₂)中培养24h。按照空白对照组，同型半胱氨酸不同剂量组(1，2，4，8mM)，分别加药24h，检测细胞活性(MTT法)。结果显示，同型半胱氨酸显著降低神经细胞的细胞活性(如图8)，高浓度Hcy对神经细胞有损伤作用。

4.2丹参酮IIA磺酸钠对同型半胱氨酸引起神经细胞的毒性的保护作用

将人神经细胞按照1X10⁴个/mL的密度接种至96孔板中，每孔100μl，于CO2培养箱(37℃，5％CO2)中培养24h。按照空白对照组，模型组(同型半胱氨酸4mM)，不同剂量丹参酮IIA磺酸钠干预组(25，50，100μM)，分别加药24h，检测细胞活性(MTT法)。结果显示，丹参酮IIA磺酸钠显著保护同型半胱氨酸诱导的神经细胞毒性(如图9)。

内皮细胞损伤是多种心脑血管疾病如动脉粥样硬化、高血压等发生发展的病理过程，同型半胱氨酸影响内皮细胞活性，造成内皮细胞损伤，实施例1-4的实验证明丹参酮IIA磺酸钠对于同型半胱氨酸导致的内皮细胞损伤具有保护作用。

在心肌缺血、心衰等心血管疾病的发生发展中都伴随着心肌细胞损伤，同型半胱氨酸导致心肌细胞损伤是心血管系统疾病发病的危险因素，实施例1-4的实验证明丹参酮IIA磺酸钠对于同型半胱氨酸导致的心肌细胞损伤具有保护作用，进一步可以推断丹参酮IIA磺酸钠可以用于预防和治疗伴同型半胱氨酸升高的心血管系统疾病，

神经细胞是神经系统的基本组成单位，高同型半胱氨酸会引起神经细胞活性降低甚至导致神经细胞损伤，引起一系列伴同型半胱氨酸升高的脑血管系统疾病，丹参酮IIA磺酸钠对于同型半胱氨酸引起的神经细胞损伤具有保护作用。

各系统疾病基础致病机理均涉及血管病变，内皮细胞及其功能是影响血管结构和功能的重要因素，同时血管内皮细胞是血液中高同型半胱氨酸毒性直接的作用靶标。实施例1-4的实验可见丹参酮IIA磺酸钠对于高同型半胱氨酸导致的内皮细胞损伤具有保护作用，进一步可以推断丹参酮IIA磺酸钠对于伴同型半胱氨酸升高导致的系统疾病具有预防或治疗作用。