阅读说明：本技术 一种眼用制剂及其制备方法和应用 (Eye preparation and preparation method and application thereof ) 是由 高子彬 张福云 张国刚 孟思 臧香环 付玉飞 黄德胜 李玲玲 霍月香 李硕 张惠 于 2019-12-23 设计创作，主要内容包括：本发明涉及药物制剂技术领域,具体公开一种眼用制剂及其制备方法和应用。本发明提供的眼用制剂的活性组分为可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB,其可有效抑制可溶性环氧化物水解酶(sEH)的表达,降低视网膜中周细胞的丧失,改善微血管病变程度,从而达到防治糖尿病视网膜病变的目的。本发明提供的眼用制剂可将t-AUCB与药学上可接受的辅料制备成临床上所用的药物制剂,如滴眼剂、眼用膏剂或眼用凝胶剂等,实现眼部局部给药,有利于提高患者的用药顺应性,且本发明提供的眼用制剂的制备方法简单、可控性强,有利于实现工业化生产,在防治糖尿病视网膜病变领域具有广阔的应用前景。(The invention relates to the technical field of medicinal preparations, and particularly discloses an ophthalmic preparation as well as a preparation method and application thereof. The active component of the ophthalmic preparation provided by the invention is a soluble epoxide hydrolase inhibitor t-AUCB, which can effectively inhibit the expression of soluble epoxide hydrolase (sEH), reduce the loss of pericytes in retina and improve the degree of microvascular disease, thereby achieving the purpose of preventing and treating diabetic retinopathy. The ophthalmic preparation provided by the invention can be prepared into a clinically used pharmaceutical preparation such as eye drops, ophthalmic ointment or ophthalmic gel by using the t-AUCB and pharmaceutically acceptable auxiliary materials, realizes local administration to eyes, is favorable for improving the medication compliance of patients, has a simple preparation method and strong controllability, is favorable for realizing industrial production, and has wide application prospects in the field of preventing and treating diabetic retinopathy.)

一种眼用制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药物制剂技术领域，尤其涉及一种眼用制剂及其制备方法和应用。

背景技术

糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy，DR)属于微血管病变，是糖尿病最常见、最严重的慢性并发症之一，已经成为当前全球致盲的重要原因。其基本病理改变是视网膜的血-视网膜屏障的破坏和视网膜新生血管的形成，黄斑水肿，最终视网膜脱离，导致失明。目前，临床上用于治疗糖尿病视网膜病变的手段主要有：玻璃体内注射血管生长因子抑制剂和激光光凝手术。眼内注射血管生长因子抑制剂用药不方便，而且频繁的在玻璃体内注射药物会引起葡萄膜炎、白内障、视网膜脱离以及眼内感染等局部并发症；激光光凝手术在手术过程中有可能会损伤一部分正常的视网膜组织，从而造成视野缺陷，手术过程中还容易造成局部损伤，产生视网膜水肿或者医源性视网膜裂孔，存在一定的风险。因此，糖尿病视网膜病变的治疗仍然充满了挑战，探索全新的治疗模式成为研究的新方向。

发明内容

针对现有的糖尿病视网膜病变治疗方法存在较多并发症以及治疗用药不方便的问题，本发明提供一种眼用制剂及其制备方法和应用。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：

一种眼用制剂，其活性成分为可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB的全称为trans-4-[4-(3-adamantan-1-yl-ureido)-cyclohexyloxyl]-benzoic-acid。

优选的，所述眼用制剂还包括药学上可接受的辅料。

优选的，所述辅料包括表面活性剂或包合材料，以及渗透压调节剂和pH调节剂。

优选的，所述表面活性剂为吐温80、司盘80、聚氧乙烯蓖麻油、泊洛沙姆122、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆338、或泊洛沙姆407、聚乙二醇或聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯中至少一种。

优选的，所述包合材料为β-环糊精、γ-环糊精、甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟丙基-γ-环糊精或磺丁基-β-环糊精中至少一种。

t-AUCB溶解度较低，作为外用制剂较难达到有效含量，本发明通过加入表面活性剂或制备成包合材料等方法可提高t-AUCB的溶解度，进而有利于将其制备成滴眼剂等剂型，实现眼部局部给药，提高用药的便利度。

优选的，所述渗透压调节剂为氯化钠、氯化钾、硫酸氢钠或柠檬酸钠中至少一种。

所述渗透压调节剂的用量以调节渗透压至280-330mOsm/Kg为准。

优选的，所述pH调节剂为氢氧化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、柠檬酸钠或柠檬酸中至少一种。

所述pH调节剂的用量以调节pH至5.0-9.0为准。

本发明中所述药学可接受的辅料可为本领域常规的上述药用辅料，选择的表面活性剂、包合材料、渗透压调节剂或pH调节剂的具体类型对眼用制剂的治疗效果不会产生显著影响。

优选的，所述眼用制剂的剂型为滴眼剂、眼膏或眼用凝胶剂。

更优选的，所述眼用制剂的剂型为滴眼剂。

优选的，所述眼用制剂中可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB的含量为0.01-10wt％。

更优选的，所述眼用制剂中可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB的含量为0.05-1wt％。

综合考虑治疗效果和成本，将可溶性环氧化物水解酶抑制剂的含量选择为0.05-1wt％，不仅可达到较好的治疗效果，同时还能降低生产成本。

本发明还提供一种眼用制剂的制备方法，包括如下步骤：

将表面活性剂或包合材料，溶于水中，混合均匀，加入渗透压调节剂，调节渗透压至280-330mOsm/Kg，加入可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB混合均匀，加入pH调节剂，调节pH至5.0-9.0，得所述眼用制剂。将制备所得的眼用制剂置于滴眼瓶中，于4℃储存。

本发明还提供了上述任一项所述眼用制剂在治疗糖尿病视网膜病变中的应用。

本发明提供的眼用制剂的活性组分为可溶性环氧化物水解酶抑制剂(t-AUCB)，其可有效抑制可溶性环氧化物水解酶(sEH)的表达，降低视网膜中周细胞的丧失，改善微血管病变程度，从而达到防治糖尿病视网膜病变的目的。本发明提供的眼用制剂可将t-AUCB与药学上可接受的辅料制备成临床上所用的药物制剂，如滴眼剂、眼用膏剂或眼用凝胶剂等，实现眼部局部给药，有利于提高患者的用药顺应性，且本发明提供的眼用制剂的制备方法简单、可控性强，有利于实现工业化生产，在防治糖尿病视网膜病变领域具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为本发明药效学研究中各组大鼠的视网膜中sEH活性的对比图；

图2为本发明药效学研究中模型组的大鼠的视网膜血管消化铺片的显微镜照片；

图3为本发明药效学研究中各组大鼠的视网膜毛细血管游离周细胞数/总周细胞数的对比图；

图4为本发明药效学研究中各组大鼠视网膜毛细血管总周细胞数*10^5/毛细血管面积的对比图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

为了更好的说明本发明，下面通过实施例做进一步的举例说明。

实施例1

本实施例提供一种治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂，处方用量如下表所示：

物料名称	处方量	质量浓度(W/V)％
			t-AUCB	0.25g	0.05％
聚氧乙烯蓖麻油35	25g	5％
			氯化钠	4.25g	0.85％
磷酸氢二钠	适量	适量
			蒸馏水至	500g	—

上述治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂的制备方法如下：

取处方量的聚氧乙烯蓖麻油35，加入到蒸馏水100g，搅拌至溶解，加入处方量的氯化钠，混合均匀，加入处方量的t-AUCB，溶解后，用磷酸二氢钠溶液调节pH至7.0，加蒸馏水至500g，得治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂。将制备的滴眼剂置于滴眼瓶中，4℃储存。

实施例2

本实施例提供一种治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂，处方用量如下表所示：

物料名称	处方量	质量浓度(W/V)％
			t-AUCB	0.25g	0.05％
聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯	35g	7％
			氯化钠	4.05g	0.81％
氢氧化钠	适量	适量
			蒸馏水至	500g	—

上述治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂的制备方法如下：

取处方量的聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯，加入到蒸馏水100g，搅拌至溶解，加入处方量的氯化钠，混合均匀，加入处方量的t-AUCB，溶解后，用氢氧化钠溶液调节pH至7.0，加蒸馏水至500g，得治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂。将制备的滴眼剂置于滴眼瓶中，4℃储存。

实施例3

本实施例提供一种治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂，处方用量如下表所示：

物料名称	处方量	质量浓度(W/V)％
			t-AUCB	0.25g	0.05％
γ-环糊精	50g	10％
			氯化钠	3.05g	0.61％
磷酸氢二钠	适量	适量
			蒸馏水至	500g	—

上述治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂的制备方法如下：

取处方量的γ-环糊精，加入到蒸馏水100g，搅拌至溶解，加入处方量的氯化钠，混合均匀，加入处方量的t-AUCB，溶解后，用磷酸氢二钠溶液调节pH至7.0，加蒸馏水至500g，得治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂。将制备的滴眼剂置于滴眼瓶中，4℃储存。

实施例4

本实施例提供一种治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂，处方用量如下表所示：

物料名称	处方量	质量浓度(W/V)％
			t-AUCB	0.05g	0.01％
γ-环糊精	50g	10％
			氯化钾	3.65g	0.73％
磷酸氢二钠	适量	适量
			蒸馏水至	500g	—

上述治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂的制备方法如下：

取处方量的γ-环糊精，加入到蒸馏水100g，搅拌至溶解，加入处方量的氯化钾，混合均匀，加入处方量的t-AUCB，溶解后，用磷酸氢二钠溶液调节pH至7.0，加蒸馏水至500g，得治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂。将制备的滴眼剂置于滴眼瓶中，4℃储存。

实施例5

本实施例提供一种治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂，处方用量如下表所示：

物料名称	处方量	质量浓度(W/V)％
			t-AUCB	50g	10％
γ-环糊精	50g	10％
			氯化钠	3.95g	0.79％
磷酸氢二钠	适量	适量
			蒸馏水至	500g	—

上述治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂的制备方法如下：

取处方量的γ-环糊精，加入到蒸馏水100g，搅拌至溶解，加入处方量的氯化钠，混合均匀，加入处方量的t-AUCB，溶解后，用磷酸氢二钠溶液调节pH至7.0，加蒸馏水至500g，得治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂。将制备的滴眼剂置于滴眼瓶中，4℃储存。

实施例6

本实施例提供一种治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂，处方用量如下表所示：

物料名称	处方量	质量浓度(W/V)％
			t-AUCB	0.5g	0.1％
羟丙基-β-环糊精	50g	10％
			氯化钠	3.35g	0.67％
氢氧化钠	适量	适量
			蒸馏水至	500g	—

上述治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂的制备方法如下：

取处方量的羟丙基-β-环糊精，加入到蒸馏水100g，搅拌至溶解，加入处方量的氯化钠，混合均匀，加入处方量的t-AUCB，溶解后，用氢氧化钠溶液调节pH至7.0，加蒸馏水至500g，得治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂。将制备的滴眼剂置于滴眼瓶中，4℃储存。

药效学研究

1.糖尿病视网膜病变大鼠视网膜中可溶性环氧化物水解酶(sEH)的活性测定

采用化学诱导方法建立糖尿病视网膜病变模型。将Wistar大鼠(180-200g)适应性饲喂一周后，禁食10h，腹腔注射2wt％的链脲佐菌素(STZ)的柠檬酸盐溶液，按60mg/Kg的剂量注射。5d后测量空腹血糖，若血糖水平>16.65mmol/L，表明糖尿病大鼠模型建立成功。

糖尿病模型建立成功后第六周将大鼠随机分为2组，分别为：模型组3只，给药组3只。并设置正常组3只。给药组于大鼠眼内滴加实施例6制备的滴眼剂，每天两次，每次20μL，给药六周后，分别摘取正常组、模型组和给药组大鼠眼球，解离出视网膜称重，匀浆，匀浆液离心，取上清液按照照大鼠可溶性环氧化物水解酶(sEH)酶联免疫分析试剂盒操作规程测定正常组、模型组、给药组大鼠视网膜中的sEH活性，试验结果如图1所示。

从图中可以看出，给药组大鼠视网膜中的sEH活性明显低于模型组(P＝0，P＜0.05)，且与正常组大鼠视网膜中sEH活性无显著性差异(P＝0.244，P＞0.05)。这说明，给药6周后，大鼠视网膜sEH活性明显降低，证明了本发明提供的滴眼剂可明显抑制大鼠视网膜中sEH活性。

2.对糖尿病视网膜病变的大鼠进行视网膜血管消化铺片

采用化学诱导方法建立糖尿病视网膜病变模型。将Wistar大鼠(180-200g)适应性饲喂一周后，禁食10h，腹腔注射2wt％的链脲佐菌素(STZ)的柠檬酸盐溶液，按60mg/Kg的剂量注射。5d后测量空腹血糖，若血糖水平>16.65mmol/L，表明糖尿病大鼠模型建立成功。

糖尿病模型建立成功后第六周将大鼠随机分为2组，分别为：模型组3只，给药组3只。并设置正常组3只。给药组于大鼠眼内滴加实施例6制备的滴眼剂，每天两次，给药六周后，分别摘取正常组、模型组和给药组大鼠眼球，用4wt％多聚甲醛固定24h，分离视网膜，37℃蒸馏水冲洗4h，然后采用胃蛋白酶和胰蛋白酶联合消化，得到透明血管网进行铺片，进行糖原PAS染色试剂盒染色，显微镜下随机选取10个视野观察并拍照，采用ImageJ图像分析软件对图像进行处理，对周细胞、游离周细胞计数，计算毛细血管面积，比较各组游离周细胞数/总周细胞数、周细胞数/毛细血管面积的大小，结果如图2-图4所示。

图2为模型组大鼠的视网膜血管消化铺片的显微镜照片，图3为各组大鼠的视网膜毛细血管游离周细胞数/总周细胞数的对比图；图4为各组大鼠视网膜毛细血管总周细胞数*10^5/毛细血管面积的对比图。

给药组的游离周细胞数/总周细胞数数目明显低于模型组(P＝0，P＜0.05)，且给药组与正常组无显著性差异(P＝0.280，P＞0.05)。

给药组的总周细胞数*10^5/毛细血管面积明显高于模型组(P＝0，P＜0.05)，且给药组与正常组无显著性差异(P＝0.447，P＞0.05)。

这说明本发明提供的滴眼剂可明显降低糖尿病大鼠视网膜中周细胞的丧失，改善微血管病变程度。

本发明实施例提供的治疗糖尿病视网膜病变的滴眼剂中t-AUCB浓度在0.01-10wt％的范围内，可以取得基本相当的治疗效果。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。