阅读说明：本技术 酪氨酸激酶抑制剂与cdk4/6抑制剂联合在制备预防或***疾病的药物中的用途 (Use of a tyrosine kinase inhibitor in combination with a CDK4/6 inhibitor for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of a neoplastic disease ) 是由 蒋家骅 廖成 张连山 孙飘扬 沈琳 高静 龚继芳 于 2019-08-20 设计创作，主要内容包括：本发明涉及酪氨酸激酶抑制剂与CDK4/6抑制剂联合在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途。具体而言,本发明涉及酪氨酸激酶抑制剂式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体与CDK4/6抑制剂联合在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的用途。<Image he="388" wi="700" file="DDA0002172187550000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention relates to the use of a tyrosine kinase inhibitor in combination with a CDK4/6 inhibitor for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of a neoplastic disease. Specifically, the invention relates to an application of a tyrosine kinase inhibitor compound shown as a formula (I) or a compound thereof or a pharmaceutically acceptable salt or a stereoisomer thereof and a CDK4/6 inhibitor in preparation of a medicament for preventing or treating tumor diseases.)

酪氨酸激酶抑制剂与CDK4/6抑制剂联合在制备预防或治疗肿 瘤疾病的药物中的用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及酪氨酸激酶抑制剂与CDK4/6抑制剂联合在制备预防或***疾病的药物中的用途。

背景技术

恶性肿瘤是危害人们生命健康的重大疾病。近年来，随着肿瘤生物学及相关学科的飞速发展，针对肿瘤细胞内异常信号系统靶点的特异性抗肿瘤药物是新药研发的焦点。同时，多种抗肿瘤药物联合用于***疾病也是科学研究的热点。

受体酪氨酸激酶是一类参与信号转导的跨膜蛋白，在多种细胞中表达，调节细胞的生长、分化和新生血管生成。研究表明，超过50％的原癌基因和癌基因产物都具有酪氨酸激酶活性，它们的异常表达将导致肿瘤发生，另外还与肿瘤的侵袭和转移、肿瘤新生血管的生成、肿瘤的化疗抗性密切相关。目前已公开了一些酪氨酸激酶抑制剂，例如拉帕替尼(Lapatinib)、来那替尼(Neratinib)等。WO2011029265公开了一种有效的酪氨酸激酶抑制剂及其制备方法，其结构如式I所示，

该化合物具有明显的药效优势。CN102933574A中描述了该化合物的二马来酸盐形式，其具有改善的理化性质、药代动力学性质以及生物利用度。

另外，已有大量研究发现肿瘤与细胞周期反常相关，大部分肿瘤都存在有丝***信号蛋白的大量突变/抗有丝***信号蛋白缺陷，基因组不稳定性(GIN)和染色体组不稳定性(CIN)，这三种基本的细胞周期缺陷都直接或间接由细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的失控引起。细胞周期蛋白Cyclin B/CDK1、Cyclin A/CDK2、Cyclin E/CDK2、Cyclin D/CDK4、Cyclin D/CDK6和其它杂二聚物(包括CDK3和CDK7)是细胞周期进展的重要调节剂。目前已公开了一些CDK抑制剂，其中CDK4/6抑制剂有abemaciclib、ribociclib、palbociclib等等。W02014183520提供了一种有效的CDK4/6抑制剂，其结构如式II所示，

WO2016124067公开了上述新的CDK4/6抑制剂的羟乙基磺酸盐。

现有技术公开了一些酪氨酸激酶抑制剂与CDK4/6抑制剂联合用于肿瘤疾病治疗的方案。Shom Goel等(Cancer Cell 29,255–269)公开了拉帕替尼和abemaciclib用于治疗拉帕替尼耐药的HER-2阳性乳腺癌细胞，结果显示两者联合治疗后能够有效的协同抑制乳腺癌细胞的活力。

本发明提供了一种新的酪氨酸激酶抑制剂与CDK4/6抑制剂联合在制备预防或***疾病的药物中的用途，并显示了良好的抑瘤效果。

发明内容

本发明提供了酪氨酸激酶抑制剂与CDK4/6抑制剂联合在制备预防或***疾病的药物中的用途，其中，所述酪氨酸激酶抑制剂选自式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体，

在某些实施方式中，所述的CDK4/6抑制剂可以是abemaciclib、ribociclib、palbociclib、alvocidib、trilaciclib、voruciclib、AT-7519、G1T-38、FLX-925、INOC-005、G1T28-1、BPI-1178、gossypin、G1T30-1、GZ-38-1、P-276-00、staurosporine、R-547、PAN-1215、PD-0183812、AG-024322、NSC-625987、CGP-82996、PD-171851或式(II)所示化合物，优选abemaciclib、ribociclib、palbociclib、alvocidib或式(II)所示化合物，更优选式(II)所示化合物或其复合物或其可药用盐，

在某些实施方式中，所述肿瘤疾病可以是乳腺肿瘤、卵巢癌、***癌、黑色素瘤、脑瘤、食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、皮肤癌、成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、肉瘤、脂肪肉瘤、骨软骨瘤、骨瘤、骨肉瘤、***瘤、睾丸肿瘤、子宫癌、头颈肿瘤、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、真性红细胞增多症、白血病、甲状腺肿瘤、输尿管肿瘤、***、胆囊癌、胆管癌或绒毛膜上皮癌。

在某些实施方式中，所述肿瘤疾病选自HER2阳性或HER2突变肿瘤。

在某些实施方式中，所述肿瘤疾病选自HER2阳性或HER2突变的乳腺癌或胃癌。

在某些实施方式中，所述的胃癌包括胃食管结合部癌。

在某些实施方式中，所述的胃癌为HER2抑制剂耐药的胃癌。在某些实施方式中，所述的HER2抑制剂选自曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼、阿法替尼、卡奈替尼(Canertinib)、来那替尼和式(I)所示化合物中的一种或几种，优选式(I)所示化合物。

在某些实施方式中，所述的乳腺肿瘤选自***肿瘤、男性乳腺肿瘤、乳腺恶性淋巴瘤、纤维上皮性肿瘤、上皮-肌上皮性肿瘤、导管内癌、小叶原位癌、***湿疹样乳腺癌、早期浸润性导管癌、早期浸润性小叶癌、***状癌、髓样癌、小管癌、腺样囊性癌、粘液腺癌、大汗腺样癌、鳞状细胞癌、浸润性小叶癌、浸润性导管癌、硬癌。

本发明优选的实施方式中，所述式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体与CDK4/6抑制剂的重量比例选自0.01:1-100:1，优选1:0.1、1:0.125、1:0.14、1:0.15、1:0.175、1:0.1875、1:0.2、1:0.25、1:0.28、1:0.3、1:0.35、1:0.4、1:0.5、1:0.7、1:0.75、1:1、1:1.25、1:1.75、1:2、1:2.5、1:3.5、1:4、1:5、1:8、1:10、1:15、2:15、1:20、1:25、3:1、3:2、6:1、6:5、6:7、8:5、8:7、12:1、15:7、16:3、16:5、16:7、16:15、16:25、16:35、24:5、24:7、60:7。

本发明优选的另一个实施方式中，所述式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体的剂量范围选自100-1000mg；所述CDK4/6抑制剂的剂量范围选自1-1000mg。

在某些实施方案中，所述式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体的剂量选自100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg，600mg、700mg、750mg、800mg、900mg、1000mg。

本发明所述CDK4/6抑制剂的剂量选自5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg，600mg、700mg、750mg、800mg、900mg、1000mg。

本发明所述药物的可药用盐可以是盐酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、乙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、戊酸盐、谷氨酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、羟乙基磺酸盐、马来酸盐。苹果酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、双羟萘酸盐、水杨酸盐、香草酸盐、扁桃酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐或月桂基磺酸盐等。

在某些实施方式中，所述式(I)所示化合物的可药用盐为马来酸盐，优选二马来酸盐。

在某些实施方式中，所述式(II)所示化合物的可药用盐为羟乙基磺酸盐。

本发明所述联合的给药方式选自同时给药、独立地配制并共给药或独立地配制并相继给药。

本发明所述联合的给药途径选自经口给药、胃肠外给药、经皮给药，所述胃肠外给药包括但不限于静脉注射、皮下注射、肌肉注射。

本发明进一步涉及式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体与CDK4/6抑制剂联合在制备预防或***疾病的药物中的用途，其中式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体的给药频次可以是一日一次、一日二次、一日三次、一周一次、二周一次、三周一次或一月一次，CDK4/6抑制剂的给药频次可以是一日一次、一日二次、一日三次、一周一次、二周一次、三周一次或一月一次。

在某些实施方式中，式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体的给药频次是一日一次，CDK4/6抑制剂的给药频次是一日一次。

在某些实施方式中，给药周期是21天，所述式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体的给药频次为一日一次，连续给药，所述CDK4/6抑制剂的给药频次是一日一次，连续给药。

在某些实施方式中，给药周期是28天，所述式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体的给药频次为一日一次，连续给药四周，所述CDK4/6抑制剂的给药频次是一日一次，连续给药三周，停药一周。

在某些实施方式中，给药周期是28天，所述式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体的给药频次为一日一次，连续给药四周，给药剂量为每天400mg或320mg，所述CDK4/6抑制剂的给药频次是一日一次，连续给药三周，停药一周，给药剂量为每天100mg、125mg、150mg或175mg。

本发明所述的方案中，所述的联合任选的还包含其他组分，所述其他组分包括但不限于其他抗肿瘤药等。

本发明还提供了式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体与CDK4/6抑制剂联合在制备预防或***疾病的药物中的用途，其中，所述的CDK4/6抑制剂为式(II)所示化合物或其复合物或其可药用盐。

本发明还提供了一种***疾病的方法，包括向患者施用本发明所述的式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体与CDK4/6抑制剂。

本发明还涉及一种包含式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体、CDK4/6抑制剂以及一种或多种药用载体、赋形剂、稀释剂的药物组合物。所述药物组合物可以制成药学上可接受的任一剂型。例如，可以配制为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、栓剂、吸入剂或喷雾剂。

本发明所述的含式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体以及CDK4/6抑制剂的药物组合物，可以单独给药，或者与一种或多种治疗剂联合使用。

待组合的各成分(例如，式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体与CDK4/6抑制剂，式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体与CDK4/6抑制剂与其他任意组分药物)可同时给药或依次顺序地分开用药。此外，待组合的各成分还可以以同一制剂形式或以分开的不同制剂的形式联合给药。

本发明还提供了一种药物包装盒，其中包装有本发明所述的酪氨酸激酶抑制剂与CDK4/6抑制剂的药物组合物，其中酪氨酸激酶抑制剂选自式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体。

本发明所述的“联合”是一种给药方式，是指一定时间期限内给予至少一种剂量的式(I)所示化合物以及至少一种剂量的CDK4/6抑制剂，其中给予的药物都显示药理学作用。所述的时间期限可以是一个给药周期内，优选4周内，3周内，2周内，1周内，或24小时以内，更优选12小时以内。可以同时或依次给予式(I)所示化合物以及CDK4/6抑制剂。这种期限包括这样的治疗，其中通过相同给药途径或不同给药途径给予式(I)所示化合物以及CDK4/6抑制剂。本发明所述联合的给药方式选自同时给药、独立地配制并共给药或独立地配制并相继给药。

本发明将式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐或其立体异构体与CDK4/6抑制剂联合给药，从而增强了抗肿瘤活性，以及改善了肿瘤疾病的治疗效果。

附图说明

图1为HER2抑制剂继发耐药胃癌PDX模型的鉴定。

图2为耐药前后PDX组织的病理形态学一致性鉴定。

图3为western blot方法检测耐药前后组织中细胞周期几个关键分子的表达变化。

图4为耐药PDX模型中运用单药或联合用药后的肿瘤生长曲线(A)，以及westernblot方法检测用药前后细胞周期几个关键分子的表达变化(B)。

具体实施方式

实施例1：式(I)所示化合物和式(II)所示化合物联合给药与各自单独给药对乳腺癌PDX(ER-，HER2+)BALB/c裸小鼠的药效作用研究。

1.受试药物

药物名称：式(I)所示化合物的二马来酸盐，根据CN102933574A公开的方法制备；式(II)所示化合物的羟乙基磺酸盐，根据WO2016124067公开的方法制备。

配制方法：式(I)所示化合物的二马来酸盐用蒸馏水配制；式(II)所示化合物的羟乙基磺酸盐用0.05M柠檬酸/0.5％CMC-Na/1％Tween 80(w/v)的去离子水配制。

2.实验动物

BALB/c裸小鼠，6-8周龄，雌性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。实验动物使用许可证号：SCXK(沪)2015-0022。饲养环境：SPF级。

饲养环境：温度：控制温度20～26℃；相对湿度：控制相对湿度40％～70％；光照：自动光照，每12h明暗交替。

3.实验步骤

将病人乳腺癌肿瘤(浸润性导管癌III级，上皮细胞来源)于1640培养液中剪成为15-30mm³的小块接种到裸鼠的皮下，待肿瘤长至600-700mm3后在裸鼠身上进行传代。待第八代(P8)肿瘤长至600-700mm³时，将肿瘤在1640培养液中剪成为15-30mm³的小块用于实验裸鼠皮下接种。待肿瘤生长至200-250mm³后，将动物随机分组并给药。试验组分为对照组，式(I)所示化合物的二马来酸盐单药组(给药剂量5mg/kg、10mg/kg)、式(II)所示化合物的羟乙基磺酸盐单药组(给药剂量150mg/kg)、式(I)所示化合物的二马来酸盐+式(II)所示化合物的羟乙基磺酸盐联合组(给药剂量5mg/kg+150mg/kg、10mg/kg+150mg/kg)，每组6只。每组给药体积为10ml/kg。每天灌胃给药1次，共3周。每周测2-3次瘤体积，称鼠重，记录数据。肿瘤体积(V)计算公式为：

V＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长、宽。

T/C(％)＝(T-T0)/(C-C0)×100％，其中T、C为实验结束时的肿瘤体积；T0、C0为实验开始时的肿瘤体积。

实施例2：式(I)所示化合物和式(II)所示化合物联合给药与各自单独给药对HER2抑制剂耐药的胃癌PDX小鼠的药效作用研究

HER2抑制剂敏感的PDX模型以及HER2抑制剂耐药PDX模型的构建流程如下(式(I)所示化合物为HER2抑制剂)：

用实时性内镜活检微量晚期胃癌组织构建大规模基于患者肿瘤组织的小鼠皮下移植瘤(patient-derived tumor xenograft,PDX)模型，建立PDX组织库。从PDX组织库中复苏PDX组织，接种至小鼠皮下，待肿瘤体积长至约150-200mm³大小(历时约1个月)，开始给予式(I)所示化合物并历时约3个月时间(灌胃，每天一次，单次剂量为20mg/kg)，肿瘤表现出对20mg/kg的式(I)所示化合物耐药；分离肿瘤组织，重新接种到新小鼠中，待肿瘤体积长至约150-200mm³大小(历时约1个月)，开始给予式(I)所示化合物并历时约3个月时间(灌胃，每天一次，单次剂量为40mg/kg)，肿瘤表现出对40mg/kg的式(I)所示化合物完全耐药。C019代表皮下接种复苏PDX组织1个月后的小鼠，S019代表以20mg/kg单次剂量给予式(I)所示化合物2周后的小鼠，R019代表以40mg/kg单次剂量给予式(I)所示化合物3个月后的小鼠。

耐药试验的方法：抑制剂组给予式(I)所示化合物(灌胃，每天一次，单次剂量为40mg/kg)，对照组给予等体积生理盐水，每隔3天测量肿瘤体积。C019和R019模型的药物敏感性结果见图1(每组均为5只小鼠的平均值)。C019对式(I)所示化合物高度敏感，式(I)所示化合物的抑瘤率>100％。R019显示出对式(I)所示化合物的高度耐药。

C019、S019和R019的PDX组织进行HE染色，结果见图2。PDX组织历经长时间药物诱导后病理形态学保持一致。

对耐药前后的PDX组织(C019的PDX组织、S019的PDX组织和R019的PDX组织)进行转录组测序，对测序结果进行信号通路富集分析发现，相对于耐药前组织，耐药后组织中细胞周期的异常调控富集最显著，用western blot对耐药前后组织进行验证，发现参与细胞周期调控的关键分子(cyclin D1、CDK4/6、pRb等)表达水平在耐药后组织中显著上调(图3)，尤其是CDK4/6及cyclin D1的下游效应分子Rb磷酸化显著升高。因此发明人推测，cyclinD1-CDK4/6通路异常可能参与胃癌HER2靶向治疗耐药，联合CDK4/6抑制剂或可成为耐药后治疗策略，该假说在耐药PDX模型中进行了验证。

联合给药方法：

对HER2抑制剂耐药的PDX模型(R019小鼠，每组5只小鼠)分组给药：

第一组(对照组)：每天一次灌胃(口服)给予生理盐水，单只单次体积为100μl，连续3周；

第二组(HER2抑制剂组)：每天一次灌胃(口服)给予式(I)所示化合物，单只单次体积为100μl，单次剂量为“式(I)所示化合物40mg/kg”，连续3周；

第三组(CDK4/6抑制剂组)：每天一次灌胃(口服)给予式(II)所示化合物，单只单次体积为100μl，单次剂量为“式(II)所示化合物100mg/kg”，连续3周；

第四组(CDK4/6抑制剂联合HER2抑制剂组)：每天一次灌胃(口服)给予式(I)所示化合物和式(II)所示化合物，单只单次体积为100μl，单次剂量为“式(I)所示化合物40mg/kg”和“式(II)所示化合物100mg/kg”，连续3周。

每隔3天测量肿瘤体积，结果见图4A，CDK4/6抑制剂联合HER2抑制剂具有显著的协同抑瘤作用。

联合用药后，组织中参与细胞周期的关键分子(cyclin D1、CDK4/6、pRb等)表达下调，尤其pRb显著下调，细胞停滞于G1期，而发挥抑瘤作用(图4B)。

实施例3：式(I)所示化合物和式(II)所示化合物联合给药用于治疗HER2表达阳性晚期胃癌

1、试验药物

式(I)所示化合物的二马来酸盐片剂，规格为40mg、60mg、200mg、160mg和80mg；

式(II)所示化合物的羟乙基磺酸盐片剂，规格为125mg和25mg。

2、入组受试者

(1)年龄为18～75岁；

(2)ECOG评分0～1级；

(3)经病理学确诊的HER2表达阳性，临床分期为III、IV期的胃癌(包括胃食管结合部癌)患者(HER2表达阳性指免疫组化染色为2+且经荧光原位杂交技术[FISH]确认阳性者，或免疫组化染色为3+)；

(4)既往接受过针对转移性疾病的系统治疗并出现疾病进展。

3、给药方法

筛选合格的受试者，给予式(I)所示化合物及式(II)所示化合物。21天或28天为一个给药周期，式(I)所示化合物的给药方法为：口服，每日一次，给药剂量为每天400mg或320mg；式(II)所示化合物的给药方法为：口服，每日一次，给药剂量为每天100mg、125mg、150mg或175mg。持续给药至疾病进展，不能耐受毒性或患者意愿拒绝继续治疗，评估其病理缓解情况。

4、试验结果

共评价了3例经治疗的受试者，给药方法为28天为一个给药周期，式(I)所示化合物400mg，口服，每天一次，连续4周；式(II)所示化合物100mg，口服，每天一次，连续3周，停药一周。

患者A经治疗两个周期后，患者病灶缩小SD(stable disease)，肿瘤标志物由治疗前的CEA 121.4ng/ml,CA199 60U/ml,CA72.4 5.4U/ml变成治疗后的CEA 15.8ng/ml,CA19945.3U/ml,CA72.4 4.1U/ml，从治疗中获益明显。

患者B经治疗两个周期后，患者病灶缩小特别明显，肿瘤标志物CEA、CA199、CA72.4也分别由入组前的122.2ng/ml、1871U/ml、23.54U/ml降低到26.97ng/ml、86.1U/ml、7.92U/ml，评效PR(partial response)，病灶显著缩小，从治疗中获益明显。

患者C经治疗两个周期后，患者病灶缩小特别明显(肿瘤缩小约20％)，肿瘤标志物CEA、CA199、CA72.4也分别由入组前的5.49ng/ml、250.1U/ml、78.46U/ml降低到1.92ng/ml、14.32U/ml、12.74U/ml，评效缩小SD，病灶显著缩小，从治疗中获益明显。