阅读说明：本技术 具有抗氧化功能的多肽vvc及其应用 (Polypeptide VVC with antioxidant function and application thereof ) 是由 朱作艺 何建民 王伟 张玉 王君虹 李雪 孙素玲 于 2019-11-14 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种具有抗氧化功能的多肽VVC,其氨基酸序列为：Val-Val-Cys。本发明还同时公开了上述具有抗氧化功能的多肽VVC的用途：作为抗氧化剂,特别是作为食品、保健品、化妆品中的抗氧化剂。(The invention discloses a polypeptide VVC with an antioxidant function, which has an amino acid sequence as follows: Val-Val-Cys. The invention also discloses the application of the polypeptide VVC with the antioxidant function, which comprises the following steps: can be used as antioxidant, especially antioxidant in food, health product, and cosmetic.)

具有抗氧化功能的多肽VVC及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种具有抗氧化功能的多肽VVC，以及其作为抗氧化剂在食品、保健品和化妆品中的应用。

背景技术

生物分子的氧化是一个自由基介导的过程，由食品氧化变质，以及人体代谢产生的自由基均会对细胞和组织造成严重的氧化损伤，进而会导致身体衰老，以及心血管、癌症等疾病。将抗氧化剂以食品添加剂的形式应用于食品中，不仅可以阻止或延缓食品氧化，改善食品品质、延长食品的保质期，另一方面某些抗氧化剂还可以在相关的食品产品中扮演活性功能作用，继而在人体内能够发挥抗氧化功效，清除自由基等对人体的危害。目前在食品工业中普遍使用的抗氧化剂有叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)、叔丁基对二苯酚(TBHQ)等，这些抗氧化剂虽然能有效抑制氧化，但对人体健康存在一定的潜在危险，目前各国也都制定了使用限量。因此寻找安全、健康的抗氧化剂越来越受到研究人员关注。

多肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，其中具有生物活性的多肽被称为生物活性肽，生物活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能，比原料蛋白更容易消化吸收，具有更优异的理化特性、营养特性和生物学活性。抗氧化肽指具有抗氧化活性的多肽，具有消除自由基、抑制或减缓氧化反应的特点，可用于改善食品品质、延长食品的保质期，在生物体内可减轻自由基对机体的损伤等，因而在食品、保健品、药品及化妆品等领域均具有良好的应用前景。目前已有很多研究者从动物或者植物组织中制备得到抗氧化肽。在公开发表的科技文献中，已有报道从不同的动植物材料中分离、鉴定出抗氧化肽，这些鉴定获得的抗氧化肽在这些动植物原料中含量少，回收得率低，并且需要复杂繁琐的分离纯化等制备技术和过程。因此，通过从动植物原料中分离鉴定出的新的具有抗氧化活性的多肽，根据其鉴定的序列结构，通过化学合成法制备，可解决含量少、回收得率低等问题，对于促进抗氧化肽在食品、保健品及化妆品等领域的应用具有重要的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种新的具有较强抗氧化活性的肽序列以及用途。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种具有抗氧化功能的多肽VVC，该多肽VVC的氨基酸序列为：Val-Val-Cys。

多肽VVC从蜂王浆蛋白酶解产物中鉴定获得。本发明的多肽VVC可由多肽合成公司通过化学合成制备。

本发明还同时提供了上述具有抗氧化功能的多肽VVC的用途，其特征是：作为抗氧化剂。特别是作为食品、保健品、化妆品中的抗氧化剂。

该抗氧化剂以此抗氧化多肽VVC为主要成分。

本发明提供的抗氧化肽具有较强的抗氧化作用，安全无毒副作用，分子量小，易吸收，可作为抗氧化剂应用于食品添加剂，也可作为功能成分，用于功能食品、保健品及化妆品中。

本发明的抗氧化肽VVC是针对清除ABTS自由基、羟自由基、DPPH自由基能力和铁离子还原能力作为活性强弱指标，从而表现出具有抗氧化功能的特性。

本发明提供的抗氧化肽VVC具备较强的抗氧化、清除自由基、还原能力等功能活性。抗氧化肽VVC对ABTS自由基清除率的IC50值为0.096mg/mL，对羟自由基清除率的IC50值为0.382mg/mL，对DPPH自由基清除率的IC50值为0.124mg/mL，抗氧化肽VVC浓度为1.0mg/mL时，其针对铁离子的还原能力相当于3.897mmol/L Trolox。

本发明的抗氧化肽可以和其它物质混合作为抗氧化剂；抗氧化肽或以抗氧化肽为主要成分的抗氧化剂可以应用于食品、保健品和化妆品等领域。

该三肽结构(VVC)具有抗氧化活性未见报道，属于新的具有抗氧化活性的功能肽。

本发明的抗氧化多肽可以通过蜂王浆蛋白的酶水解及其后续的分离纯化等过程来制备，或者通过化学合成制备。该多肽分子量小，易于吸收，具有较强的自由基清除能力和铁离子还原能力，可以作为功能活性成分或抗氧化剂，应用于食品、保健品和化妆品等领域。

附图说明

下面结合附图对本发明的

具体实施方式

作进一步详细说明。

图1是抗氧化肽清除ABTS自由基的作用；

图2是抗氧化肽清除羟自由基的作用；

图3是抗氧化肽清除DPPH自由基的作用；

图4是抗氧化肽还原铁离子能力。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：抗氧化肽的活性测定

本发明中所涉及的抗氧化活性的检测方法：

1)ABTS自由基清除能力：本实验使用南京建成生物工程研究所生产的总抗氧化能力测定试剂盒(ABTS法，产品序号A015-2)进行ABTS自由基清除能力测定，即在96孔板上加入170μL ABTS工作液，20μL应用液，再加入10μL样品溶液(浓度为0.02～1.0mg/mL的多肽VVC溶液)，混匀，室温反应6min，测定414nm处的吸光度值A₁，以蒸馏水代替样品做空白对照测定吸光度值A₀。按下式计算清除能力，结果见图1。

清除率＝(A₀-A₁)/A₀×100％。

2)羟自由清除能力测定：本实验使用南京建成生物工程研究所生产的羟自由基测试盒(产品序号A018)测定，具体操作步骤如下：依次加入0.2mL底物应用液，0.2mL样品溶液(浓度为0.02～1.0mg/mL的多肽VVC溶液)，0.4mL试剂三应用液，混匀，37℃反应1min，从加完试剂三应用液开始到1min结束，立即加入显色剂终止反应，室温放置20min后，550nm下测定吸光度值A₁，以蒸馏水代替样品做空白对照测定吸光度值A₀。按下式计算清除能力，结果见图2。

清除率＝(A₀-A₁)/A₀×100％。

3)DPPH自由基清除能力测定：取0.5mL样品溶液(浓度为0.02～1.0mg/mL的多肽VVC溶液)与2.5mL DPPH试剂(0.2mmol/L的乙醇溶液)混合，避光静置20min，517nm处测定吸光度值A₁，以蒸馏水替代样品作为空白对照测定吸光度值A₀。按下式计算清除能力，结果见图3。

清除率＝(A₀-A₁)/A₀×100％

4)铁离子还原能力测定：本实验使用南京建成生物工程研究所生产的总抗氧化能力检测试剂盒(产品序号A015-3-1)测定，具体操作步骤如下：即在96孔板上加入5μL样品溶液(浓度为0.02～1.0mg/mL的多肽VVC溶液)，再加入180μL FRAP工作液，混匀，37℃反应3-5min，测定593nm处的吸光度值A₁，同时以不同浓度(浓度为0.1，0.2，0.4，0.8，1.0mmol/L)的Trolox溶液做标准对照溶液，以相当于mmol/L Trolox溶液来定义还原能力，还原能力以mmoL/L Trolox表示。结果见图4。

本发明提供的抗氧化肽VVC(作为样品)具备较强的抗氧化、清除自由基、还原能力等功能活性。抗氧化肽VVC对ABTS自由基清除率的IC₅₀值为0.096mg/mL，对羟自由基清除率的IC₅₀值为0.382mg/mL，对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为0.124mg/mL，抗氧化肽VVC浓度为1.0mg/mL时，其针对铁离子的还原能力相当于3.897mmol/L Trolox。

对比例1、选用如表1所述的多肽，按照上述实施例1所述方法进行检测，所得结果与本发明的对比如下表1所述。

表1

实施例2：抗氧化肽的应用

1)、片剂的制造：按30％的抗氧化肽(VVC)，36％的乳糖，30％结晶纤维素，4％的水充分混合后，通过压片机进行压片，制造成具有抗氧化作用的片剂。

2)、功能饮料的制造：将饮料各组分按以下比例进行充分混合：果汁20％，柠檬酸0.3％，白砂糖10％，香料0.2％，抗氧化肽(VVC)为1％，水68.5％，制成具有抗氧化功能的果汁饮料。

3)、化妆水的制造：将化妆水各组分按以下比例进行充分混合：水94.98％，甘油2.0％，酒精1％，丁二醇1.9％，防腐剂0.02％，抗氧化肽(VVC)为0.1％，制成具有抗氧化功能的化妆水。

上述％均为质量％。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

序列表

<110> 浙江省农业科学院

<120> 具有抗氧化功能的多肽VVC及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Val Val Cys

1