阅读说明：本技术 硝酸咪康唑的含量检测方法 (Method for detecting content of miconazole nitrate ) 是由 徐奇清 孙迎 聂姣 叶小妹 赵奉君 于 2018-07-23 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种硝酸咪康唑的含量检测方法,用溶剂将待测样品稀释成硝酸咪康唑的含量为0.02mg/mL～0.2mg/mL的供试品溶液；取10μL～20μL所述供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行检测,得到所述待测样品中硝酸咪康唑的含量；所述高效液相色谱检测时的色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：由乙腈、磷酸盐溶液和三乙胺按体积比为(35～50):(50～65):1组成,所述流动相的pH值为3±0.1,所述磷酸盐溶液的浓度为0.02mol/L～0.08mol/L；流速：0.5mL/min～1.5mL/min；柱温：25℃～35℃；检测波长：210nm～240nm；所述溶剂的组成与所述流动相相同。该方法条件响应值高,硝酸咪康唑出峰快,能够实现快速测定其含量,提高了检测工作效率,有利于控制产品的质量。(The invention relates to a method for detecting the content of miconazole nitrate, which comprises the following steps of diluting a sample to be detected into a sample solution with the content of miconazole nitrate of 0.02 mg/mL-0.2 mg/mL by using a solvent; injecting 10-20 mu L of the sample solution into a high performance liquid chromatograph for detection to obtain the content of miconazole nitrate in the sample to be detected; the chromatographic conditions in the high performance liquid chromatography detection are as follows: a chromatographic column: octadecylsilane chemically bonded silica is used as a filling agent; mobile phase: the mobile phase consists of acetonitrile, phosphate solution and triethylamine according to the volume ratio of (35-50): (50-65): 1, the pH value of the mobile phase is 3 +/-0.1, and the concentration of the phosphate solution is 0.02 mol/L-0.08 mol/L; flow rate: 0.5mL/min to 1.5 mL/min; column temperature: 25-35 ℃; detection wavelength: 210nm to 240 nm; the solvent is of the same composition as the mobile phase. The method has high condition response value and quick miconazole nitrate peak emergence, can realize quick determination of the content of the miconazole nitrate peak, improves the detection working efficiency and is beneficial to controlling the quality of products.)

硝酸咪康唑的含量检测方法

技术领域

本发明涉及化学检测技术领域，特别是涉及一种硝酸咪康唑的含量检测方法。

背景技术

香波是外来语“shampoo”的译音，主要由洗涤剂、辅助洗涤剂和添加剂组成，主要具有清洁和保养毛发的作用；添加剂可满足香波的特殊需要并赋予香波多种不同的功效，使香波的作用不断细化，在香波中添加具有抗菌作用的硝酸咪康唑等药用成分制成的复方香波制剂，是一种新型的宠物用兽药香波制剂。

传统硝酸咪康唑的含量检测方法是采用电位滴定法测定，其滴定液通常为0.1mol/L高氯酸滴定液；电位滴定法是在滴定过程中通过测量电位变化以确定滴定终点的方法，此方法在运用上存在一定的局限性，在检测低浓度药物时其灵敏度可能会影响检测结果的准确度，而且高氯酸是一种酸性较强的无机酸，其具有强氧化性，在室温下容易分解，作为滴定液具有不稳定的因素，浓度的变化易使得检测结果出现误差。中国药典中采用高效液相色谱法(HPLC，High Performance Liquid Chromatography)仅控制硝酸咪康唑原料或其单方制剂中的有关物质，对其复方制剂的检测方法未见记载。经过采用上述方法进行复方香波制剂中硝酸咪康唑的含量测定的实验验证，结果表明上述传统方法并不适用于复方香波制剂中硝酸咪康唑的含量检测。因此，目前，尚未有针对复方香波制剂的质量标准和检测其中硝酸咪康唑的含量的有效方法。

发明内容

基于此，提供一种硝酸咪康唑的含量检测方法，能够快速、有效的检测出含有硝酸咪康唑的香波中硝酸咪康唑的含量。

一种硝酸咪康唑的含量检测方法，包括如下步骤：

用溶剂将待测样品稀释成硝酸咪康唑的含量为0.02mg/mL～0.2mg/mL的供试品溶液；

取10μL～20μL所述供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行检测，得到所述待测样品中硝酸咪康唑的含量；

所述高效液相色谱检测时的色谱条件为：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：由乙腈、磷酸盐溶液和三乙胺按体积比为(35～50):(50～65):1组成，所述流动相的pH值为3±0.1；所述磷酸盐溶液的浓度为0.02mol/L～0.08mol/L；

流速：0.5mL/min～1.5mL/min；

柱温：25℃～35℃；

检测波长：210nm～240nm；

所述溶剂的组成与所述流动相相同。

需要说明的是，硝酸咪康唑的含量不限于以mg/mL为单位，还可为质量百分含量、摩尔浓度等其他浓度单位。

在其中一个实施例中，所述待测样品为含有硝酸咪康唑的香波。

在其中一个实施例中，所述检测波长为226nm。

在其中一个实施例中，所述流动相由乙腈、磷酸盐溶液和三乙胺按体积比为(40～50):(50～60):1组成。

在其中一个实施例中，所述流动相由乙腈、磷酸盐溶液和三乙胺按体积比为45:55:1组成。

在其中一个实施例中，所述磷酸盐溶液为磷酸氢二钠溶液。

进一步地，所述磷酸氢二钠溶液的浓度为0.05mol/L。

在其中一个实施例中，所述色谱柱为ZORBZX Eclipse XDB-C18Analytical 4.6×150mm 5-Micron或Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm。

较优地，所述色谱柱为ZORBZX Eclipse XDB-C18Analytical 4.6×150mm 5-Micron。

在其中一个实施例中，所述流速为0.8mL/min～1.2mL/min。

在其中一个实施例中，所述供试品溶液中硝酸咪康唑的含量为0.05mg/mL～0.15mg/mL。

在其中一个实施例中，调节所述流动相的pH值所用的调节剂为磷酸。

在其中一个实施例中，所述检测方法还包括以下步骤：

按外标法用硝酸咪康唑对照品进行HPLC检测，得到硝酸咪康唑的含量与峰面积的关系，根据所述硝酸咪康唑的含量与峰面积的关系及所述供试品溶液在高效液相色谱仪中检测得到的色谱图中硝酸咪康唑的峰面积，计算得到所述待测样品中硝酸咪康唑的含量。

在其中一个实施例中，按外标法用硝酸咪康唑对照品绘制标准曲线，根据所述标准曲线计算得到所述待测样品中硝酸咪康唑的含量。

具体的，取适量硝酸咪康唑对照品，于所述溶剂中配制成含0.02mg/mL～0.2mg/mL硝酸咪康唑对照样品，与所述供试品溶液平行地进行样品处理和检测，测出各峰面积对应的硝酸咪康唑的浓度，绘制出标准曲线；

测出所述供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行检测得到的色谱图中硝酸咪康唑的峰面积，根据所述标准曲线，计算得到所述待测样品中硝酸咪康唑的含量。

上述检测方法通过选择合适的流动相组分，并调整流动相的配比组成以及结合其他参数条件，使得检测条件响应值高，在保证组分分离度的情况下，硝酸咪康唑出峰快，能够有效缩短硝酸咪康唑的保留时间，快速准确地测定含有硝酸咪康唑的香波制剂中硝酸咪康唑的含量，解决了复方硝酸咪康唑香波中硝酸咪康唑含量测定的问题，同时大大提高了检测工作效率，有利于控制产品的质量。此外上述检测方法不仅可适用于含有硝酸咪康唑的香波制剂，还可应用于其他产品或制剂中硝酸咪康唑的含量检测。

附图说明

图1为实施例1复方硝酸咪康唑香波中硝酸咪康唑HPLC检测图谱；

图2为实施例1硝酸咪康唑对照品HPLC检测图谱。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明所用复方硝酸咪康唑香波为佛山市南海东方澳龙制药有限公司自制，主要由硝酸咪康唑、硝酸咪康唑、洗涤剂和多种添加剂等组成；硝酸咪康唑对照品购自Sigma公司；乙腈和三乙胺为色谱纯，磷酸氢二钠和磷酸为分析纯。

实施例1

一种硝酸咪康唑的含量检测方法，包括以下步骤：

1)精密称取复方硝酸咪康唑香波10g，用适量溶剂将其稀释，配制成硝酸咪康唑含量约为0.1mg/mL的供试品溶液；所述溶剂是由乙腈、0.05mol/L磷酸氢二钠溶液和三乙胺按体积比为45:55:1组成，用磷酸溶液调节pH值至3.0。

2)取10μL供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行检测，得到如图1所示的色谱图。

色谱条件为：

色谱柱：ZORBZX Eclipse XDB-C18Analytical 4.6×150mm 5-Micron；

流动相：由乙腈、0.05mol/L磷酸氢二钠溶液和三乙胺按体积比为45:35:1组成，用磷酸溶液调节pH值至3.0；

流速：1.0mL/min

柱温：30℃；

检测波长：226nm。

3)精密称取硝酸咪康唑对照品1g，用步骤1)中的溶剂稀释成0.1mg/mL硝酸咪康唑溶液，同上法测定，得到如图2所示的色谱图。

4)按外标法绘制标准曲线，以峰面积计算，得到供试品溶液液中硝酸咪康唑的含量为0.986mg/mL，进行通过计算得到复方硝酸咪康唑香波中硝酸咪康唑的含量与实际相符。

从图1和图2中可知，硝酸咪康唑的出峰时间非常接近，仅相差约20s，说明实施例1的检测方法响应值高，出峰快，硝酸咪康唑的保留时间在2.8min左右，因此，在较短时间内(4min钟)即可完成对硝酸咪康唑的分析测定，在保证分离度的情况下，实现了快速有效的分析，能够解决复方硝酸咪康唑香波中硝酸咪康唑含量的测定，有利于控制产品的质量。

实施例2系统适用性验证

色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相由乙腈-0.05mol/L磷酸氢二钠溶液-三乙胺按体积比为45:55:1组成，用磷酸调节pH至3.0；柱温为30℃，流速1.0mL/min，检测波长226nm。按硝酸咪康唑的理论塔板数均应大于2000，分离度应大于1.5。

取复方硝酸咪康唑香波适量，加流动相制成约含0.1mg/mL硝酸咪康唑的供试品溶液各10μL，注入色谱仪中进行检测验证。

结果：硝酸咪康唑的理论塔板数大于2000，且色谱图中硝酸咪康唑的峰与其他峰的分离度大于1.5，结果表明实现完全分离。

实施例3专属性试验

将稀释液(甲醇)精密量取10μL注入液相色谱仪，记录图谱，得到空白图谱；

将硝酸咪康唑对照品加流动相制成每1mL中约含0.1mg的溶液，精密量取10μL注入液相色谱仪，按照实施例1的色谱条件进行，记录色谱图，得到对照图谱(参照图2)；从图谱中得知硝酸咪康唑的保留时间为3.0min左右；将复方硝酸咪康唑供试品加流动相制成每1mL中约含0.1mg硝酸咪康唑的溶液，精密量取10μL注入液相色谱仪，按实施例1的色谱条件进行，记录色谱图，得到供试品图谱(参照图1)；从图谱中得知硝酸咪康唑的保留时间为2.8min左右；

通过图谱中保留时间判断，可知该发明检测方法的专属性好。

实施例4线性试验

将硝酸咪康唑对照品加流动相分别配置成0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL的溶液，精密量取10μL注入液相色谱仪，按实施例1的色谱条件，记录色谱图，获得硝酸咪康唑的回归曲线图，得到R＝0.9998，说明该检测方法线性好。

实施例5准确度试验

按复方硝酸咪康唑香波的处方比例，分别按标示量的80％、100％、120％配置三种不同浓度的样品各100mL，每个浓度测定3份，按照按实施例1含量检测方法进行硝酸咪康唑回收率试验，计算回收率，分别计算RSD值；标示量浓度为80％的回收率为99.26％，RSD为0.03％；标示量浓度为100％的回收率为99.62％，RSD为0.01％；标示量浓度为120％的回收率为99.14％，RSD为0.02％，说明准确度高。

实施例6精密度试验

1、精密度——重复性

取复方硝酸咪康唑香波供试品，加流动相稀释成约含0.1mg/mL硝酸咪康唑的溶液，精密量取10μL，注入高效液相色谱仪，按实施例1的色谱条件进行，重复进样6次，比较峰面积，计算其RSD值，得到RSD为0.03％，说明该发明的精密度重现好。

2、精密度——中间精密度

取复方硝酸咪康唑香波供试样品按照实施例1取样量80％、100％、120％，精密称取，每个浓度分别制备3份供试品溶液，按实施例1的检测方法进行测定，计算RSD值，得到RSD为0.04％，说明该发明的精密度中间精密度好。

3、精密度——再现性

在不同实验室，由不同的试验人员分别取同一批次复方硝酸咪康唑香波供试品适量，加流动相稀释成约含0.1mg/mL硝酸咪康唑的溶液，精密量取10μL，注入高效液相色谱仪，按实施例1的检测方法进行测定，重复进样6次，计算RSD值，得到RSD值为0.03％，说明该发明的精密度再现性好。

实施例7检测限

称取硝酸咪康唑对照品适量，用流动相溶解，并逐级稀释样品溶液，调节供试品溶液浓度，使硝酸咪康唑峰的响应值约为噪音水平的10倍，记录色谱图，得到实施例1检测方法的检测限为0.02mg/mL。

实施例8定量限

称取硝酸咪康唑对照品适量，用流动相溶解，并逐级稀释样品溶液，调节供试品溶液浓度，使硝酸咪康唑峰的响应值约为噪音水平的3倍，记录色谱图，得到实施例1检测方法的定量限为0.02mg/mL。

实施例9耐用性试验

1、耐用性——对色谱柱

在实施例1的检测方法下、不改变其他色谱条件下将不同的C18柱对本发明检测方法进行验证；称取硝酸咪康唑对照品，用流动相稀释成约含0.1mg/mL硝酸咪康唑的溶液，精密量取10μL，注入高效液相色谱仪中进行检测，重复6次，计算RSD值，得到色谱柱1(ZORBZXEclipse XDB-C18Analytical 4.6×150mm 5-Micron)的RSD值为0.02％；同法用色谱柱2(Kromasil 100-5-C18 4.6×150mm)进行验证，得到RSD值为0.02％；综上结果，可证明该发明对色谱柱的耐用性好。

2、耐用性——对温度

在本发明实施例1的检测方法、不改变其他色谱条件下将色谱柱的温度分别设置为25℃、30℃、35℃，分别计算RSD值，RSD值均在要求范围内(≤2％)，说明本发明的方法对色谱柱的温度耐用性好。

3、耐用性——对流速

在本发明实施例1的检测方法、不改变其他色谱条件下将洗脱流速设置0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min，分别计算RSD值，RSD值均在要求范围内(≤2％)，说明本发明对流速的耐用性好。

4、耐用性——对流动相中pH

在本发明实施例1的检测方法、不改变其他色谱条件下将流动相中pH调为2.9、3.0、3.1，分别进样并计算RSD值，RSD值均在要求范围内(≤2％)，说明本发明对流动相中pH的耐用性好。

实施例10

实施例10与实施例1基本相同，不同之处在于：流动相由乙腈、0.05mol/L磷酸氢二钠溶液和三乙胺按体积比为40:60:1组成，用磷酸溶液调节pH至3.0。

实施例10的色图谱显示，硝酸咪康唑的条件响应值高，分离度大，硝酸咪康唑的出峰响应时间为4.8min左右，能有效测定复方硝酸咪康唑香波中硝酸咪康唑的含量。

实施例11

实施例11与实施例1基本相同，不同之处在于：流动相由乙腈、0.05mol/L磷酸氢二钠溶液和三乙胺按体积比为50:50:1组成，用磷酸溶液调节pH至3.0。

实施例11的色图谱显示，硝酸咪康唑的条件响应值高，分离度大，硝酸咪康唑的出峰响应时间为6.5min左右，能有效测定复方硝酸咪康唑香波中硝酸咪康唑的含量。

对比例1

对比例1参照中国药典中硝酸咪康唑单方制剂中硝酸咪康唑的含量HPLC测定的方法进行，其与实施例1的待测样品、对照品的处理方法和检测方法基本相同，不同之处在于色谱条件中的流动相有所不同，具体如下:

流动相：按体积比为40:40:20，由甲醇、乙腈和1.5％醋酸铵溶液组成。

从检测得到的色谱图可以看出基线非常不稳定，而且在检测过程中容易造成色谱柱和高效液相色谱仪堵塞，对色谱仪和色谱柱损坏较大，因此，表明对比例1的检测方法(即中国药典中记载的硝酸咪康唑HPLC检测方法)不适用于复方香波制剂中的硝酸咪康唑的含量检测。

对比例2

对比例2与实施例1基本相同，不同之处在于：流动相由乙腈、0.05mol/L磷酸氢二钠溶液和三乙胺按体积比为60:40:1组成，用磷酸溶液调节pH至3.0

对比例2硝酸咪康唑出峰晚，且峰跨度时间约2min，不能很好的将硝酸咪康唑分离出来，从而无法实现准确有效的测定。

结论：通过上述实施例1～11和对比例1～2的检测结果可以说明，本发明实施例的硝酸咪康唑的检测方法，检测条件响应值高，能够充分保证组分的分离，硝酸咪康唑出峰快，在4min内即可完成对硝酸咪康唑的分析测定，可以大大提高了检测工作效率，有利于控制产品的质量；而且经过实验验证，本发明上述方法专属性强、线性好、准确度高、精密度好、耐用性好等优势，可应用于硝酸咪康唑及其相关制剂的中硝酸咪康唑的含量检测。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。