阅读说明：本技术 一种雷美替胺对映异构体检测方法及其质量控制标准 (Ramelteon enantiomer detection method and quality control standard thereof ) 是由 陆华龙 于 2018-06-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种雷美替胺对映异构体检测方法及其质量控制标准。本发明采用高效液相色谱法,通过使用正相色谱柱,有机溶剂试剂作为流动相,根据雷美替胺消旋体对雷美替胺中的对映异构体进行定位,能够对存在于各类剂型中的雷美替胺进行其对映异构体检查,提高现有的雷美替胺的质量标准,为今后制定雷美替胺的对映异构体测定标准提供依据。该检测方法具有较高的准确度和精密度,耐用性强,适合工业上用于雷美替胺对映异构体的检查及质量控制。(The invention discloses a ramelteon enantiomer detection method and a quality control standard thereof. The invention adopts the high performance liquid chromatography, uses the normal phase chromatographic column and the organic solvent reagent as the mobile phase, positions the enantiomer in the ramelteon according to the ramelteon racemate, can check the enantiomer of the ramelteon existing in various dosage forms, improves the quality standard of the existing ramelteon, and provides a basis for the determination standard of the enantiomer of the ramelteon in the future. The detection method has high accuracy and precision and strong durability, and is suitable for the detection and quality control of ramelteon enantiomer in industry.)

一种雷美替胺对映异构体检测方法及其质量控制标准

技术领域

本发明涉及一种雷美替胺对映异构体检测方法及其质量控制标准，属于药物分析技术领域。

技术背景

雷美替胺是一种褪黑激素受体激动剂，对褪黑激素MT1和MT2受体均具有高度亲和力，并且选择性高于MT3受体。在体外表达人类MT1或MT2受体的细胞中，雷美替胺显示完全激动活性。雷美替胺对MT1和MT2受体的活性使其具有睡眠促进特征，因为这些受体通过内源性褪黑激素作用，被认为涉及昼夜节律潜在的正常醒睡周期维持。雷美替胺对GABA受体复合物或结合神经肽类、细胞因子类、5-羟色胺类、多巴胺类、去甲肾上腺素类、乙酰胆碱类和阿片类受体没有可评估的亲和力。在一项标准板筛选中雷美替胺对许多所选择的酶活性也没有干扰。

雷美替胺的主要代谢产物M-II具有活性，并且对人类MT1和MT2受体的亲合力分别为母体分子的五分之一和十分之一，并且在体外功能测试中活性比雷美替胺低17～25倍。尽管M-II对MT1和MT2受体的活性低于母体药物，但与雷美替胺相比，M-II在更高浓度循环，比母体药物产生的平均全身暴露高20～100倍。M-II对5-羟色胺5-HT2B受体具有微弱亲合力，但对其他受体或酶没有可评估的亲合力。类似于雷美替胺，M-II对许多内源性酶的活性没有干扰。所有其他已知的雷美替胺代谢产物均没有活性。由于氯卡色林是单一对映体，控制其原料药中的杂质含量特别是其对映异构体的含量对于降低其不良反应具有重要的意义。基于此，本发明提供一种雷美替胺对映异构体检测方法及其质量控制标准。

其中雷美替胺的结构式如下：

发明内容

为了准确反映雷美替胺原料药中对映异构体的含量，可以为质量标准的制定提供合理的依据，以便能够更好的控制和掌握产品质量，从而提高临床用药的安全性，本发明提供一种雷美替胺对映异构体检测方法及其质量控制标准。该检测方法具有较高的准确度和精密度，耐用性强，适合工业上用于雷美替胺对映异构体的检查及质量控制。

本发明通过下述技术方案实现上述目的的：

雷美替胺是一种褪黑激素受体激动剂，其化学名称为(S)-N-[2-(1,6,7,8-四氢-2H-茚并[5,4-b]呋喃-8-基)乙基]丙酰胺。本发明所述的盐雷美替胺对映异构体与雷美替胺呈镜像对称，其化学式为C₁₆H₂₁NO₂ ，其化学名称为(R)-N-[2-(1,6,7,8-四氢-2H-茚并[5,4-b]呋喃-8-基)乙基]丙酰胺。本发明所提供的一种雷美替胺对映异构体检测方法，其包括如下步骤：

1 )系统适用性试验溶液的制备：取雷美替胺消旋体对照品，加流动相溶解稀释，配制成0.1mg/ml～0.5mg/ml 的溶液，作为系统适用性试验溶液；

2 )供试品溶液的制备：取雷美替胺，加流动相溶解稀释，配制成0.2mg/ml ～ 1.0mg/ml 的雷美替胺溶液，作为供试品溶液；

3 )对照溶液的制备：精密量取供试品溶液适量，加流动相稀释配制成0.01mg/ml～0.1mg/ml 的雷美替胺溶液，作为对照溶液；

4 )色谱条件与系统适用性试验：采用手性柱CHIRALPAK AD-H，4 .6×250mm，正己烷-乙醇为流动相，其中流动相中正己烷-乙醇的体积比为80～95/20～5，流速0.6～1.4ml/min，检测波长为200～220nm，柱温20～35℃；

5 )雷美替胺对映异构体测定：分别精密量取所述系统适用性试验溶液、供试品溶液、对照溶液各2μl ～50μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量。

上述所述的一种雷美替胺对映异构体检测方法，其具体包括如下步骤：

1 )系统适用性试验溶液的制备：取雷美替胺消旋体对照品50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度，作为系统适用性试验溶液；

2 )供试品溶液的制备：取雷美替胺50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度，作为供试品溶液；

3 )对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置100ml容量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度，作为对照溶液；

4 )色谱条件与系统适用性试验采用手性柱CHIRALPAK AD-H，4 .6×250mm，正己烷-乙醇为流动相，其中流动相中正己烷-乙醇的体积比为90/10，流速1.0ml/min，检测波长为210nm，柱温25℃；理论塔板数按雷美替胺峰计应不低于2500，系统适应性试验中的雷美替胺峰与其对映异构体峰的分离度应符合规定；

5 )雷美替胺对映异构体测定：取系统适用性溶液20μl，注入液相色谱仪，雷美替胺与雷美替胺对映异构体的分离度应符合要求；取上述对映异构体对照溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品溶液图谱中如检出对映异构体峰，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量。

本发明还提供一种雷美替胺对映异构体的质量控制标准，其中雷美替胺对映异构体的含量测定上述所述的检测方法。采用上述检测方法测定时，所述雷美替胺对映异构体的含量不得超过0.5％。为更加严格的控制产品质量，保证用药安全性，将对映异构体检查的标准提高为不得过0.2％。

实验例1：检测方法中流动相筛选

本发明人对雷美替胺对映异构体检查的流动相进行了筛选。试验结果见表1。

表1 雷美替胺对映异构体检查色谱条件选择

实验结果发现，当流动相为正己烷-乙醇( 90:10，V/V)时，所获的得HPLC图谱中主峰峰型好，保留时间合适，且主峰与杂质峰的分离达到了较好的效果。因此将正己烷-乙醇( 90:10，V/V )确定为雷美替胺异构体杂质检查的最终流动相条件。

实验例2：检测波长选择

取雷美替胺及雷美替胺消旋体对照品适量，分别用流动相溶解并稀释成浓度约为5μg/ml的溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2015年版四部通则0401)，分别在200～400nm波长范围内扫描。扫描结果发现，雷美替胺在210nm波长处有最大吸收，因此选择210nm为异构体检查的检测波长。

附图说明

图1为雷美替胺与其对映异构体的分离度色谱图，其中tR为15.345的为雷美替胺的对映异构体，tR为10.925的为雷美替胺。检测器A通道1的检测波长为210nm。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步描述本发明，但所述技术领域人员应能知晓，所述的实施例并不以任何方式限定本发明，本发明的技术保护范围以权利要求书为准。

实施例1：本发明所述的雷美替胺对映异构体检测方法的方法学考察

1.1方法专属性试验

分离度试验：取雷美替胺与雷美替胺消旋体对照品适量，分别用流动相配成一定浓度的溶液，在选定色谱条件下进样20μl，记录色谱图；色谱图如图1所示，结果雷美替胺峰与其对映异构体峰的分离度为7.49，分离度良好。

1.2准确度试验

取雷美替胺消旋体对照品约50mg，精密称定，置100ml容量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度，精密移取1ml置50ml容量瓶中，用流动相稀释定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液；称取雷美替胺原料约50mg共3份，精密称定，置3个100ml量瓶中，用流动相稀释定容至刻度，摇匀，分别精密量取0.8ml、1.0ml、1.2ml，置100ml容量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度，制成80％、100％和120％的三个浓度水平，分别用流动相稀释至刻度，摇匀，作为回收率测定供试品溶液，每个浓度水平重复三次。

依色谱条件，分别取上述溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，据测得量和实际加入量计算回收率。试验结果见表2。结论：本法准确度良好，符合测试要求。

表2 雷美替胺对映异构体准确度试验

1 .3精密度试验

1 .3 .1 .重复性试验

取雷美替胺消旋体对照品约50mg，精密称定，置100ml容量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度，作为储备溶液；取雷美替胺样品约50mg，共6份，精密称定，置6个100ml容量瓶中，分别加入储备液2ml，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液；精密量供试品溶液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，对结果进行评价。试验结果见表3。结论：6次测量结果的RSD％为1 .66％，符合验证方案要求，证实该方法具有一定的精密度。

表3 雷美替胺对映异构体重复性试验

1 .3 .2 进样精密度

取雷美替胺约50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，用流动相溶解定容至刻度，精密移取1ml该溶液置100ml容量瓶中，用流动相定容至刻度，配制成浓度为5μg/ml的溶液，依法测定，连续进样6次，每次20μl，记录峰面积，并对结果进行评价，试验结果见表4。结论：本法精密度良好，符合测试要求。

表4 雷美替胺对映异构体进样精密度试验结果

1 .4线性与范围

取雷美替胺对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成浓度范围为1μg/ml～6μg/ml的溶液作为系列标准溶液。依色谱条件，分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度C(μg/ml )为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，并计算回归方程和相关系数。试验结果见表5。

表5 雷美替胺线性与范围试验结果

1 .5定量限和检测限

调节仪器灵敏度，用流动相配制成一定浓度的雷美替胺消旋体溶液，逐步稀释后进样20μl，使主峰高为基线噪音的3倍左右，记录色谱图，得雷美替胺对映异构体的最小检测限为0 .2ng。

调节仪器灵敏度，用流动相配制成一定浓度的雷美替胺消旋体溶液，逐步稀释后进样20μl，使主峰高为基线噪音的10倍左右，记录色谱图，得雷美替胺对映异构体的最小定量限为1 .0ng。

调节仪器灵敏度，用流动相配制成一定浓度的雷美替胺溶液，逐步稀释后进样20μl，使主峰高为基线噪音的3倍左右，记录色谱图，得雷美替胺对映异构体的最小检测限为0.1ng。

调节仪器灵敏度，用流动相配制成一定浓度的雷美替胺溶液，逐步稀释后进样20μl，使主峰高为基线噪音的10倍左右，记录色谱图，得雷美替胺对映异构体的最小定量限为0.4ng。

1 .6溶液稳定性试验

取雷美替胺约50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，用流动相溶解定容至刻度，精密移取1ml该溶液置100ml容量瓶中，用流动相定容至刻度，配制成浓度为5μg/ml的溶液，作为标准溶液。分别于0、2、4、8、12、24小时，精密吸取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见表6。

表6 标准溶液稳定性

实施例2：本发明雷美替胺对映异构体检测方法及其质量检查

一种雷美替胺对映异构体检测方法，其具体包括如下步骤：

1 )系统适用性试验溶液的制备：取雷美替胺消旋体对照品50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度，作为系统适用性试验溶液；

2 )供试品溶液的制备：取雷美替胺50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度，作为供试品溶液；

3 )对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置100ml容量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度，作为对照溶液；

4 )色谱条件与系统适用性试验采用手性柱CHIRALPAK AD-H，4 .6×250mm，正己烷-乙醇为流动相，其中流动相中正己烷-乙醇的体积比为90/10，流速1.0ml/min，检测波长210nm，柱温25℃；理论塔板数按雷美替胺峰计应不低于2500，系统适应性试验中的雷美替胺峰与其对映异构体峰的分离度应符合规定；

5 )雷美替胺对映异构体测定：取系统适用性溶液20μl，注入液相色谱仪，雷美替胺与雷美替胺对映异构体的分离度应符合要求；取上述对映异构体对照溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品溶液图谱中如检出对映异构体峰，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量。

使用上述检测方法对三批样品及稳定性样品对映异构体检查结果见表7和表8。

表7 雷美替胺样品对映异构体检查结果

批号	20150703	20150710	20150813
				异构体	未检出	未检出	未检出

表8 雷美替胺稳定性样品对映异构体检查结果

结论：本品对映异构体检查初始拟定的标准为不得过0 .5％，但经过加速及长期放样的多批次检验，均未检出对映异构体，为更加严格的控制产品质量，保证用药安全性，将对映异构体检查的标准提高为不得过0 .2％。