阅读说明：本技术 一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法 (production method of protease for promoting growth of plant roots and fruits ) 是由 秦春国 于 2019-09-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法,包括如下步骤：S1：相同或同属植物茎叶收集,选取相同可植物或同属科植物的茎叶,块茎,块根进行收集；S2：预处理,对收集到的茎叶,块茎或块根进行洗净,粉碎处理；S3：加入磷酸缓冲液,搅拌均浆,对粉碎物中加入磷酸缓冲液,充分搅拌均匀成浆；S4：过滤离心获得上清液和残渣,对匀浆进行过滤,并对过滤离心处理,获得上清液和残渣；S5：上清液硫酸铵盐析,离心收集上层不溶物,对上清液中加入硫酸铵盐析；本发明中,选取相同可植物或同属科植物的茎叶,块茎,块根进行收集,来生产蛋白酶,可以大大提升生产出的成品对植物根系及果实的促进生长作用,而且适应性更好,副作用更小。(the invention discloses a method for producing protease for promoting growth of plant roots and fruits, which comprises the following steps: s1: collecting stems and leaves of plants of the same or same genus, and collecting stems, leaves, tubers and root tubers of plants of the same or same genus; s2: pre-treating, namely cleaning and crushing the collected stem leaves, tubers or root tubers; s3: adding phosphate buffer solution, stirring and homogenizing, adding phosphate buffer solution into the crushed material, and fully and uniformly stirring to form slurry; s4: filtering and centrifuging to obtain supernatant and residue, filtering the homogenate, and centrifuging the filtration to obtain supernatant and residue; s5: salting out the supernatant by ammonium sulfate, centrifuging to collect insoluble substances on the upper layer, and adding ammonium sulfate into the supernatant for salting out; in the invention, the stem leaves, tubers and root tubers of the same plants or plants in the same family are selected for collection to produce the protease, so that the growth promoting effect of the produced finished products on plant roots and fruits can be greatly improved, the adaptability is better, and the side effect is less.)

一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体为一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法。

背景技术

蛋白酶是生物体内的一类酵素（酶），它们能够有效分解蛋白质；分解方法是打断那些将氨基酸连结成多肽链的肽键；抑制蛋白酶活性的小分子化合物被称蛋白酶抑制剂；许多病毒蛋白酶的抑制剂是很有效的抗病毒药；按其水解多肽的方式，可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。内肽酶将蛋白质分子内部切断，形成分子量较小的月示和胨。外肽酶从蛋白质分子的游离氨基或羧基的末端逐个将肽键水解，而游离出氨基酸，前者为氨基肽酶后者为羧基肽酶。按其活性中心和最适pH值，又可将蛋白酶分为丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。按其反应的最适pH值，分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。工业生产上应用的蛋白酶，主要是内肽酶。蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。催化蛋白质水解的酶类。种类很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶等。蛋白酶对所作用的反应底物有严格的选择性，一种蛋白酶仅能作用于蛋白质分子中一定的肽键，如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。蛋白酶分布广，主要存在于人和动物消化道中，在植物和微生物中含量丰富。由于动植物资源有限，工业上生产蛋白酶制剂主要利用枯草杆菌、栖土曲霉等微生物发酵制备。

而在植物根系的生长以及果实的生长过程中往往因为生长不充分，影响其收成，大大降低了果实的产量，因而促进植物根系和果实的生长是很多种植户必须要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于：为了解决植物根系的生长以及果实的生长过程中往往因为生长不充分，影响其收成，大大降低了果实的产量问题，提供一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法。

本发明采用的技术方案如下：

一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法，包括如下步骤：

S1：相同或同属植物茎叶收集，选取相同可植物或同属科植物的茎叶，块茎，块根进行收集；

S2：预处理，对收集到的茎叶，块茎或块根进行洗净，粉碎处理；

S3：加入磷酸缓冲液，搅拌均浆，对粉碎物中加入磷酸缓冲液，充分搅拌均匀成浆；

S4：过滤离心获得上清液和残渣，对匀浆进行过滤，并对过滤离心处理，获得上清液和残渣；

S5：上清液硫酸铵盐析，离心收集上层不溶物，对上清液中加入硫酸铵盐析，并离心处理，收集上层不溶物；

S6：用微碱性柠檬酸缓冲液溶解上层不溶物，对收集的上层不溶物中加入微碱性柠檬酸缓冲液进行溶解；

S7：对溶解液进行透析定容获得蛋白酶提取液，将加入微碱性柠檬酸缓冲液的溶解液进行透析定容，获取蛋白酶提取液；

S8：制备发酵用的培养基，根据需要按照一定配比制备发酵用的培养基；

S9：接种荧光假单包、解脂酵母，对制备培养基中接种荧光假单包、解脂酵母；

S10：发酵，将接种荧光假单包、解脂酵母的培养基搅拌后发酵；

S11：分离纯化，对发酵结束后得到的酶进一步分离杂质，纯化目标酶；

S12：混合得到成品，将纯化的目标酶和获取的蛋白酶提取液混合，得到成品。

其中，所述S2：预处理包括如下步骤：

S201：清洗去杂，对收集到的茎叶，块茎或块根进行清洗，去除不需要的杂质；

S202：粉碎，利用粉碎机对清洗去杂后的茎叶，块茎或块根进行粉碎处理，并收集待用。

其中，所述S4：过滤离心获得上清液和残渣包括如下步骤：

S401：过滤浆液，对匀浆采用过滤网进行过滤；

S402：过滤液离心处理，对过滤后得到的过滤液加入离心设备中进行离心处理；

S403：收集上清液和残渣，对离心处理后得到的上清液进行收集，同时对过滤得到的残渣进行收集。

其中，所述过滤网是8层纱布组成的滤网。

其中，所述离心设备是转速为4000rpm的离心机，对过滤液进行10min的离心处理。

其中，所述S8：制备发酵用的培养基包括如下步骤：

S801：配料，配备一定比例的动物蛋白，植物蛋白，无机盐和水；

S802：加入发酵辅料，

S803：搅拌匀质，利用搅拌机将配置好的培养基搅拌均匀，备用。

其中，所述蛋白酶成品需进行包装以及入库储存。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

1、本发明中，选取相同可植物或同属科植物的茎叶，块茎，块根进行收集，来生产蛋白酶，可以大大提升生产出的成品对植物根系及果实的促进生长作用，而且适应性更好，副作用更小。

2、本发明中，利用对过滤出的上清液和残渣进行分部处理，在将处理后的物质融合的方法，大大增加了生产效率，同时也减少生产成本。

3、本发明中，对粉碎物中加入磷酸缓冲液充分搅拌均匀成浆的浆液进行8层纱布滤网进行过滤，过滤效果好，残渣少，便于后续对过滤液中的上清液进行提取。

4、本发明中，所述离心设备是转速为4000rpm的离心机，对过滤液进行10min的离心处理，分离的彻底，容易吸取上清液。

附图说明

图1为本发明实施例一的结构示意框图；

图2为本发明实施例二的结构示意框图；

图3为本发明中S2的结构示意框图；

图4为本发明中S4的结构示意框图；

图5为本发明中S8的结构示意框图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

在本发明的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制；术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性；此外，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

实施例一，参照图1，一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法，包括如下步骤：

S1：相同或同属植物茎叶收集，选取相同可植物或同属科植物的茎叶，块茎，块根进行收集；

S2：预处理，对收集到的茎叶，块茎或块根进行洗净，粉碎处理；

S3：加入磷酸缓冲液，搅拌均浆，对粉碎物中加入磷酸缓冲液，充分搅拌均匀成浆；

S4：过滤离心获得上清液和残渣，对匀浆进行过滤，并对过滤离心处理，获得上清液和残渣；

S5：上清液硫酸铵盐析，离心收集上层不溶物，对上清液中加入硫酸铵盐析，并离心处理，收集上层不溶物；

S6：用微碱性柠檬酸缓冲液溶解上层不溶物，对收集的上层不溶物中加入微碱性柠檬酸缓冲液进行溶解；

S7：对溶解液进行透析定容获得蛋白酶提取液，将加入微碱性柠檬酸缓冲液的溶解液进行透析定容，获取蛋白酶提取液。

实施例二，参照图2，一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法，包括如下步骤：

S1：相同或同属植物茎叶收集，选取相同可植物或同属科植物的茎叶，块茎，块根进行收集；

S2：预处理，对收集到的茎叶，块茎或块根进行洗净，粉碎处理；

S3：加入磷酸缓冲液，搅拌均浆，对粉碎物中加入磷酸缓冲液，充分搅拌均匀成浆；

S4：过滤离心获得上清液和残渣，对匀浆进行过滤，并对过滤离心处理，获得上清液和残渣；

S8：制备发酵用的培养基，根据S4中获得的残渣按照一定配比制备发酵用的培养基；

S9：接种荧光假单包、解脂酵母，对制备培养基中接种荧光假单包、解脂酵母；

S10：发酵，将接种荧光假单包、解脂酵母的培养基搅拌后发酵；

S11：分离纯化，对发酵结束后得到的酶进一步分离杂质，纯化目标酶；

S12：混合得到成品，将纯化的目标酶和获取的蛋白酶提取液混合，得到成品。

实施例三，参照图1～3，一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法，包括如下步骤：

S1：相同或同属植物茎叶收集，选取相同可植物或同属科植物的茎叶，块茎，块根进行收集；

S2：预处理，对收集到的茎叶，块茎或块根进行洗净，粉碎处理；

S3：加入磷酸缓冲液，搅拌均浆，对粉碎物中加入磷酸缓冲液，充分搅拌均匀成浆；

S4：过滤离心获得上清液和残渣，对匀浆进行过滤，并对过滤离心处理，获得上清液和残渣；

S5：上清液硫酸铵盐析，离心收集上层不溶物，对上清液中加入硫酸铵盐析，并离心处理，收集上层不溶物；

S6：用微碱性柠檬酸缓冲液溶解上层不溶物，对收集的上层不溶物中加入微碱性柠檬酸缓冲液进行溶解；

S7：对溶解液进行透析定容获得蛋白酶提取液，将加入微碱性柠檬酸缓冲液的溶解液进行透析定容，获取蛋白酶提取液；

S8：制备发酵用的培养基，根据S4中获得的残渣按照一定配比制备发酵用的培养基；

S9：接种荧光假单包、解脂酵母，对制备培养基中接种荧光假单包、解脂酵母；

S10：发酵，将接种荧光假单包、解脂酵母的培养基搅拌后发酵；

S11：分离纯化，对发酵结束后得到的酶进一步分离杂质，纯化目标酶；

S12：混合得到成品，将纯化的目标酶和获取的蛋白酶提取液混合，得到成品。

其中，所述S2：预处理包括如下步骤：

S201：清洗去杂，对收集到的茎叶，块茎或块根进行清洗，去除不需要的杂质；

S202：粉碎，利用粉碎机对清洗去杂后的茎叶，块茎或块根进行粉碎处理，并收集待用。

实施例四，参照,1～4，一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法，包括如下步骤：

S1：相同或同属植物茎叶收集，选取相同可植物或同属科植物的茎叶，块茎，块根进行收集；

S2：预处理，对收集到的茎叶，块茎或块根进行洗净，粉碎处理；

S3：加入磷酸缓冲液，搅拌均浆，对粉碎物中加入磷酸缓冲液，充分搅拌均匀成浆；

S4：过滤离心获得上清液和残渣，对匀浆进行过滤，并对过滤离心处理，获得上清液和残渣；

S5：上清液硫酸铵盐析，离心收集上层不溶物，对上清液中加入硫酸铵盐析，并离心处理，收集上层不溶物；

S6：用微碱性柠檬酸缓冲液溶解上层不溶物，对收集的上层不溶物中加入微碱性柠檬酸缓冲液进行溶解；

S7：对溶解液进行透析定容获得蛋白酶提取液，将加入微碱性柠檬酸缓冲液的溶解液进行透析定容，获取蛋白酶提取液；

S8：制备发酵用的培养基，根据S4中获得的残渣按照一定配比制备发酵用的培养基；

S9：接种荧光假单包、解脂酵母，对制备培养基中接种荧光假单包、解脂酵母；

S10：发酵，将接种荧光假单包、解脂酵母的培养基搅拌后发酵；

S11：分离纯化，对发酵结束后得到的酶进一步分离杂质，纯化目标酶；

S12：混合得到成品，将纯化的目标酶和获取的蛋白酶提取液混合，得到成品。

其中，所述S2：预处理包括如下步骤：

S201：清洗去杂，对收集到的茎叶，块茎或块根进行清洗，去除不需要的杂质；

S202：粉碎，利用粉碎机对清洗去杂后的茎叶，块茎或块根进行粉碎处理，并收集待用。

其中，所述S4：过滤离心获得上清液和残渣包括如下步骤：

S401：过滤浆液，对匀浆采用过滤网进行过滤；

S402：过滤液离心处理，对过滤后得到的过滤液加入离心设备中进行离心处理；

S403：收集上清液和残渣，对离心处理后得到的上清液进行收集，同时对过滤得到的残渣进行收集。

其中，所述过滤网是8层纱布组成的滤网。

其中，所述离心设备是转速为4000rpm的离心机，对过滤液进行10min的离心处理。

实施例五，参照,1～5，一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法，包括如下步骤：

S1：相同或同属植物茎叶收集，选取相同可植物或同属科植物的茎叶，块茎，块根进行收集；

S2：预处理，对收集到的茎叶，块茎或块根进行洗净，粉碎处理；

S3：加入磷酸缓冲液，搅拌均浆，对粉碎物中加入磷酸缓冲液，充分搅拌均匀成浆；

S4：过滤离心获得上清液和残渣，对匀浆进行过滤，并对过滤离心处理，获得上清液和残渣；

S5：上清液硫酸铵盐析，离心收集上层不溶物，对上清液中加入硫酸铵盐析，并离心处理，收集上层不溶物；

S6：用微碱性柠檬酸缓冲液溶解上层不溶物，对收集的上层不溶物中加入微碱性柠檬酸缓冲液进行溶解；

S7：对溶解液进行透析定容获得蛋白酶提取液，将加入微碱性柠檬酸缓冲液的溶解液进行透析定容，获取蛋白酶提取液；

S8：制备发酵用的培养基，根据S4中获得的残渣按照一定配比制备发酵用的培养基；

S9：接种荧光假单包、解脂酵母，对制备培养基中接种荧光假单包、解脂酵母；

S10：发酵，将接种荧光假单包、解脂酵母的培养基搅拌后发酵；

S11：分离纯化，对发酵结束后得到的酶进一步分离杂质，纯化目标酶；

S12：混合得到成品，将纯化的目标酶和获取的蛋白酶提取液混合，得到成品。

其中，所述S2：预处理包括如下步骤：

S201：清洗去杂，对收集到的茎叶，块茎或块根进行清洗，去除不需要的杂质；

S202：粉碎，利用粉碎机对清洗去杂后的茎叶，块茎或块根进行粉碎处理，并收集待用。

其中，所述S4：过滤离心获得上清液和残渣包括如下步骤：

S401：过滤浆液，对匀浆采用过滤网进行过滤；

S402：过滤液离心处理，对过滤后得到的过滤液加入离心设备中进行离心处理；

S403：收集上清液和残渣，对离心处理后得到的上清液进行收集，同时对过滤得到的残渣进行收集。

其中，所述过滤网是8层纱布组成的滤网。

其中，所述离心设备是转速为4000rpm的离心机，对过滤液进行10min的离心处理。

其中，所述S8：制备发酵用的培养基包括如下步骤：

S801：配料，配备一定比例的动物蛋白，植物蛋白，无机盐和水；

S802：加入发酵辅料，

S803：搅拌匀质，利用搅拌机将配置好的培养基搅拌均匀，备用。

其中，所述蛋白酶成品需进行包装以及入库储存。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。