阅读说明：本技术 Wnk激酶抑制剂在预防和/或治疗肺动脉高压中的用途 (Use of WNK kinase inhibitors for the prevention and/or treatment of pulmonary hypertension ) 是由 何昆仑 张泽宇 刘春蕾 高晓健 李鑫 李晨 韦清霞 李寒露 于 2019-09-17 设计创作，主要内容包括：本发明公开了WNK激酶抑制剂在预防和/或治疗肺动脉高压中的用途,特别是WNK463在预防和/或治疗肺动脉高压及其并发症中的用途。本申请的发明人经试验发现,WNK激酶抑制剂(特别是WNK463)对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压模型大鼠的肺循环-右心压力、功能及右心室肥厚等均显示出较好的保护作用,其具有开发成防治肺动脉高压及其并发症的药物的潜在价值。(The invention discloses application of a WNK kinase inhibitor in prevention and/or treatment of pulmonary hypertension, in particular application of WNK463 in prevention and/or treatment of pulmonary hypertension and complications thereof. Through experiments, the inventor of the application finds that WNK kinase inhibitors (particularly WNK463) show good protective effects on pulmonary circulation-right heart pressure, functions, right ventricular hypertrophy and the like of a pulmonary arterial hypertension model rat induced by Monocrotaline (MCT), and have potential values for developing medicines for preventing and treating pulmonary arterial hypertension and complications thereof.)

WNK激酶抑制剂在预防和/或治疗肺动脉高压中的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种WNK激酶抑制剂在制备预防和/或治疗肺动脉高压及其并发症的产品中的用途，特别是WNK463在制备预防和/或治疗肺动脉高压及其并发症的产品中的用途。

背景技术

肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension，PAH)指肺动脉压力升高超过一定界值的一种血流动力学和病理生理状态，病因复杂，由多种心、肺或肺血管疾病引起，其可导致右心衰竭，可以是一种独立的疾病，也可以是并发症，还可以是综合征。其血流动力学诊断标准为：海平面静息状态下，右心导管检测肺动脉平均压≥25mmHg。

肺动脉高压分为原发性和继发性两类。随着对肺动脉高压认识的逐步深入，2003年世界卫生组织(WHO)“肺动脉高压会议”按照病因、病理生理、治疗方案及预后特点对肺动脉高压进行分类，2004年美国胸科医师学院(ACCP)和欧洲心血管病学会(ESC)对此进行了修订，该分类方法对肺动脉高压患者的治疗具有指导意义。一般认为，平静状态下右心导管检测肺动脉平均压≥25mmHg时即为肺动脉高压(Badesch et al.,2009)。根据静息PAPm可将肺动脉高压进行分级，轻度为26-35mmHg；中度为36-45mmHg；重度＞45mmHg。

肺动脉高压以肺小动脉血管重构、肺动脉血管平滑肌增殖为病理特征，表现为肺循环压力和阻力增加，可出现右心负荷增大，右心功能不全，肺血流减少，从而引起一系列临床表现；病程中肺动脉高压常呈进行性发展。特别是增强肺动脉血管张力导致的右心衰，是严重威胁人类生命健康的疾病。

肺动脉高压是一种能够治疗的疾病，但目前尚无特效的治愈方法。传统的治疗方法包括吸氧、强心、利尿、钙通道阻滞剂和抗凝剂辅助治疗剂等，主要起到症状的缓解作用。

近年来，靶向治疗药物的研发与推广使用(主要包括前列环素类药物、内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶-5抑制剂以及新近探索的可溶性鸟苷酸环化酶激动剂、5-羟色胺转运子抑制剂、生长因子抑制剂、Rho激酶抑制剂等)以及活体肺移植等治疗方法大大改善了患者的预后。

尽管这些药物能在一定程度上缓解PAH的症状，肺动脉高压目前仍然是一种无法治愈且病死率较高的疾病，患者接受治疗情况下的中位生存时间仅为2.7年，目前肺动脉高压仍缺乏特效的治愈方法，因此，寻找新的特异性治疗药物显得尤为迫切。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供一种WNK激酶抑制剂在制备预防和/或治疗肺动脉高压及其并发症的产品中的用途。

具体地，上述WNK激酶抑制剂具有通式Ⅰ的结构：

其中，R₁-R₁₃独立地选自：氢、取代或未取代的烷基、取代的或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的杂环基烷基、-COR₁₆、-C(O)OR₁₆、-C(O)NR₁₆R₁₇、-CH＝NR₁₆、-CN、-OR₁₆、-OC(O)R₁₆、-S(O)_t-R₁₆、-NR₁₆R₁₇、-NR₁₆C(O)R₁₇、-NO₂、-N＝CR₁₆R₁₇和卤素；

R₁₄和R₁₅独立地选自：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的杂环基、取代的或未取代的杂环基烷基、-COR₁₆、-C(O)OR₁₆和-C(O)NR₁₆R₁₇；或者，R₁₄和R₁₅与二者共同连接的氮原子形成取代或未取代的杂环基；

R₁₆和R₁₇独立地选自：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂环基和卤素。

在本发明的一个实施方式中，R₁、R₂、R₃、R₁₂和R₁₃独立地选自：氢、卤素和取代或未取代的烷基。

在本发明的一个实施例中，R₁、R₂、R₃、R₁₂和R₁₃均为氢。

在本发明的一个实施方式中，R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀和R₁₁独立地选自：氢、卤素和取代或未取代的烷基。

在本发明的一个实施例中，R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀和R₁₁均为氢。

在本发明的一个实施例中，R₁₄为氢。

在本发明的一个实施方式中，R₁₅选自：氢、取代或未取代的烷基和取代的或未取代的环烷基。

在本发明的一个

具体实施方式

中，R₁₅选自：C1-6的烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基等。

在本发明的一个实施例中，R₁₅为叔丁基。

在本发明的一个实施方式中，上述WNK激酶抑制剂为WNK463，即N-(叔丁基)-1-(1-(5-(5-(三氟甲基)-1,3,4-恶二唑-2-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺，其结构式如下：

具体地，上述肺动脉高压为原发性肺动脉高压或继发性肺动脉高压，如，动脉性肺动脉高压(例如特发性肺动脉高压、可遗传性肺动脉高压、药物和毒物所致肺动脉高压或新生儿持续性肺动脉高压)、左心疾病相关性肺动脉高压(例如心脏收缩功能不全所致肺动脉高压、舒张功能不全所致肺动脉高压、瓣膜病所致肺动脉高压)、肺部疾病所致肺动脉高压(例如慢性阻塞性肺疾病所致肺动脉高压、肺气肿所致肺动脉高压或肺间质性疾病所致肺动脉高压)、低氧血症所致肺动脉高压(例如睡眠呼吸暂停综合征所致肺动脉高压、慢性高原病所致肺动脉高压比如高原性心脏病)和慢性血栓栓塞性肺动脉高压，等。

具体地，上述肺动脉高压的并发症为慢性阻塞性肺气肿、慢性肺源性心脏病、右心衰竭，等。

具体地，上述产品为药品、食品、保健品，等。

本发明还提供一种药物组合物在制备预防和/或治疗肺动脉高压及其并发症的产品中的用途，该药物组合物包含WNK激酶抑制剂以及一种或多种药学上可接受的辅料。

具体地，上述用途中，WNK激酶抑制剂、肺动脉高压及其并发症和产品具有本发明上述定义。

在本发明的一个实施方案中，上述药物组合物中，WNK激酶抑制剂为唯一活性成分。

在本发明的另一个实施方案中，上述药物组合物中，WNK激酶抑制剂与一种或多种其它用于预防和/或治疗肺动脉高压及其并发症的活性成分联用，其中，WNK激酶抑制剂与该活性成分可配制用于同时、单独或顺序给药(simultaneous,separate or sequentialadministration)。

在本发明的一个实施方案中，上述其他活性成分选自：前列环素类药物、内皮素受体拮抗剂、5型磷酸二酯酶抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶激动剂、5-羟色胺转运子抑制剂、生长因子抑制剂以及Rho激酶抑制剂中的一种或多种。

具体地，上述前列环素类药物可选自：贝前列素(Benapnost)、曲前列素(Treprostinil)、伊洛前列素(Iloprost)和依前列醇(Epoprostenol)的一种或者多种。

具体地，上述内皮素受体拮抗剂可选自：波生坦(Bosentan)、安立生坦(Ambrisentan)和马西替坦(Macitentan)的一种或者多种。

具体地，上述5型磷酸二酯酶抑制剂可选自：西地那非(Sildenafil)、伐地那非(Vardenafil)和他达那非(Tadalafil)中的一种或多种。

具体地，上述可溶性鸟苷酸环化酶激动剂可为利奥西呱(Riociguat)。

具体地，上述5-羟色胺转运子抑制剂可为沙格雷酯(Sarpogrelate)。

具体地，上述药物组合物的制剂形式可以是任何可药用的剂型，如，片剂(包括糖衣片剂、膜包衣片剂、舌下片剂、口腔崩解片、口腔片剂等等)、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂(包括软胶囊、微胶囊)、锭剂、糖浆剂、液体、乳剂、混悬剂、控制释放制剂(例如，瞬时释放制剂、缓释制剂、缓释微囊)、气雾剂、膜剂(例如，口服崩解膜剂、口腔粘膜-粘附膜剂)、注射剂(例如，皮下注射、静脉注射、肌内注射、腹膜内注射)、静脉滴注剂、透皮吸收制剂、软膏剂、洗剂、粘附制剂、栓剂(例如，直肠栓剂、***栓剂)、小药丸、鼻制剂、肺制剂(吸入剂)、眼睛滴剂等等、口服或胃肠外制剂。在本发明的一个实施方式中，上述药物组合物为口服制剂。

具体地，上述药物组合物通过口服、喷雾吸入、直肠用药、鼻腔用药、颊部用药、局部用药、非肠道给药，例如，皮下、静脉、肌内、鞘内、心室内、胸骨内、颅内或腹膜内注射或输入的途径向体内施加药物组合物，或借助外植储器用药。在本发明的一个实施方式中，上述药物组合物通过口服给药。

具体地，上述药学上可接受的辅料选自：溶剂、乳化剂、增塑剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、甜味剂和润滑剂等中的一种或两种以上的组合。

具体地，上述溶剂如水、甲醇、乙醇、异丙醇、羟丙基-β-环糊精、聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯、二氯甲烷丙酮或乙酸乙酯中的一种或两种以上的组合。

具体地，上述乳化剂如聚乙二醇油酸酯、聚乙烯醇、甘油硬脂酸酯或吐温-80中的一种或两种以上的组合。

具体地，上述增塑剂如聚乙二醇、蓖麻油、甘油或山梨醇中的一种或两种以上的组合。

具体地，上述崩解剂如交联聚维酮、羟甲纤维素钠、甲基纤维素钠淀粉或低取代羟丙纤维素中的一种或两种以上的组合。

具体地，上述填充剂如微晶纤维素、赤藓醇、山梨醇、甘露醇、预胶化淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖中的一种或两种以上的组合。

具体地，上述粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆、羟丙基纤维素、明胶、瓜尔胶、羟甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、硅酸镁铝、乙基纤维素、羟乙基纤维素、预胶凝淀粉、***胶、聚乙烯醇、聚维酮、麦芽糊精或海藻酸钠中的一种或两种以上的组合。

具体地，上述甜味剂如阿司帕坦、木糖醇、薄荷脑、薄荷香精、安塞蜜、甜菊糖苷或三氯蔗糖中的一种或两种以上的组合。

具体地，上述润滑剂如滑石粉、氢化硬脂酸钙、十二烷基硫酸镁、硬脂酰醇富马酸钠、水合硅胶钠、氢化蓖麻油、硬脂酸锌或硬脂酸镁中的一种或两种以上的组合。

本发明还提供一种预防和/或治疗肺动脉高压及其并发症的方法，其包括向由此需要的受试者给与有效量的WNK激酶抑制剂或本发明上述药物组合物的步骤。

具体地，上述方法中，WNK激酶抑制剂、药物组合物、肺动脉高压及其并发症具有本发明上述定义。

在本发明的一个实施方案中，上述受试者为哺乳动物，特别是人。

具体地，上述WNK激酶抑制剂的有效量取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病症的严重程度以及诊治医师的主观判断，等。

本申请的发明人经试验发现，WNK激酶抑制剂(特别是WNK463)对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压模型大鼠的肺循环-右心压力、功能及右心室肥厚等均显示出较好的保护作用，其具有开发成防治肺动脉高压及其并发症的药物的潜在价值。

附图说明

图1所示为模型组和治疗组大鼠的生存曲线的变化。

图2所示为各组大鼠的mPAP的变化，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，模型组vs对照组；^#p<0.05，^##p<0.01，^###p<0.001，治疗组vs模型组；one-way ANOVA。

图3所示为各组大鼠的RVSP的变化，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，模型组vs对照组；^#p<0.05，^##p<0.01，^###p<0.001，治疗组vs模型组；one-way ANOVA。

图4所示为各组大鼠的TAPES的变化，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，模型组vs对照组；^#p<0.05，^##p<0.01，^###p<0.001，治疗组vs模型组；one-way ANOVA。

图5所示为各组大鼠的RVID的变化，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，模型组vs对照组；^#p<0.05，^##p<0.01，^###p<0.001，治疗组vs模型组；one-way ANOVA。

图6所示为各组大鼠的RVHI的变化，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，模型组vs对照组；^#p<0.05，^##p<0.01，^###p<0.001，治疗组vs模型组；one-way ANOVA。

具体实施方式

除非另有定义，本发明中所使用的所有科学和技术术语具有与本发明涉及技术领域的技术人员通常理解的相同的含义。

在本发明的内容中，以下术语具有如下详述的含义。

“烷基”指的是直链或支链的且不含不饱和键的烃链自由基，且该烃链自由基以单键与分子其它部分连接。典型的烷基基团含有1至约12个、1至约8个、或者1至约6个碳原子，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基等。如果烷基被环烷基取代，其相应为“环烷基烷基”自由基，如环丙基甲基。如果烷基被芳基取代，那么其相应为“芳烷基”自由基，如苄基、二苯甲基或苯乙基。如果烷基被杂环基取代，那么其相应为“杂环基烷基”自由基。

“烯基”指的是至少含两个碳原子、至少一个不饱和键的直链或支链的烃链自由基，且该烃链自由基以单键与分子其它部分连接。典型的烯基基团含有2至约12个、2至约8个或者2至约6个碳原子。在具体实施方式中，烯基基团为乙烯基、1-甲基-乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基或丁烯基。

“环烷基”指的是脂环烃。典型的环烷基含1至4个单环和/或稠环、含3至约18个碳原子，优选3至10个碳原子，如环丙基、环己基或金刚烷基。在具体实施方式中，环烷基含3至约6个碳原子。

“芳基”指的是单环或多环自由基，包括含单芳基基团和/或稠芳基基团的多环自由基。典型的芳基基团包含1至3个单环或稠环及6至约18个碳环原子，优选6至约14个碳环原子，如苯基、萘基、联苯基、茚基、菲基或蒽基自由基。

“杂环基”包括含1至3个单环和/或稠环及3至约18个环原子的杂芳香族基团和杂脂环基团。优选的杂芳香族基团和杂脂环基团含5至约10个环原子。本发明的化合物中的合适的杂芳基含1、2或3种杂原子，所述杂原子选自N、O或S原子。

“卤素”或“卤基”是指溴代、氯代、碘代或氟代。

本文所涉及的任何化合物均旨在代表这样的特定化合物及其某些变形或某些形式。特别地，在这里所涉及的化合物可能具有不对称中心，并因此存在不同的对映体或非对映体形式。由此，本文涉及的任何给定的化合物代表外消旋物的任意一种、一种或多种对映体形式、一种或多种非对映体形式、及其混合物。同样地，也可能存在双键的立体异构体或几何异构体，由此在一些情况中，分子可能存在为(E)-异构体或(Z)-异构体(反式和顺式异构体)。如果分子包含多个双键，那么每个双键将具有其自身的立体异构现象，其可以与所述分子的其它双键的立体异构现象相同或不同。此外，本文中涉及的化合物可存在阿托异构体。本文涉及的化合物的所有立体异构体，包括对映体、非对映异构体、几何异构体和阿托异构体、及其混合物，都在本发明的范围内。

此外，本文所涉及的任何化合物可以互变异构体形式存在。特别地，术语互变异构体是指化合物的两个或多个结构异构体中的一个，这些异构体间存在平衡，可以相互转换。常见的互变异构体对为烯胺-亚胺、酰胺-亚胺酸、酮-烯醇、内酰胺-内酰亚胺等。

除非另有说明，本发明的化合物还包括同位素标记的形式，即区别仅在于存在一种或多种富含同位素的原子的化合物。例如，具有仅用氘或氚来替代至少一个氢原子、或者使用富含¹³C或¹⁴C的碳来替代至少一个碳、或者使用富含¹⁵N的氮来替代至少一个氮的现有结构的化合物均包含在本发明范围内。

本发明中，术语“肺动脉高压”与通常所说的高血压是两种截然不同的疾病。人的心脏分为左心系统和右心系统，日常所说的高血压是指从左心系统发出的给全身供血的动脉压力升高；而从右心系统发出的动脉专门负责给肺部供血，被称为肺动脉，而这部分动脉压力升高则被称为肺动脉高压。

本发明中，术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。

术语“受试者”可以指患者或者其它接受本发明组合物以治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，例如人、狗、猴、牛、马等。

术语“治疗”包括在疾病和/或病症发作之后，根除、移除、逆转、缓解、改变或控制该疾病和/或病症。

术语“预防”指在疾病和/或病症发作之前，通过治疗以避免、最小化或令该疾病和/或病症难于发作或发展的能力。

术语“疾病和/或病症”是指所述受试者的一种身体状态，该身体状态与本发明所述疾病和/或病症有关。

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

1、材料与方法

1.1动物

SD大鼠70只(200g左右，雄性，SPF级)，购自北京维通利华实验动物有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0006。恒温恒湿条件下饲养，定时给予全价营养饲料喂食，室温22-25℃，湿度50％-70％。

1.2试剂与样品

WNK463粉剂，购自selleck；

DMSO，购自solaxbio；

PEG300，购自源叶生物；

吐温80，购自美仑生物；

野百合碱(monocrotaline，MCT)粉剂，购自Sigma。

WNK463的溶剂：5％DMSO+30％PEG300+5％吐温80+60％双蒸水，pH＝7。

MCT的溶剂：1M HCl+NaOH+双蒸水，pH＝7。

1.3仪器

小动物呼吸机(kent scientific，美国)；

多功能生理仪(Millar，美国)；

小动物超声仪(Visual Sonics Inc，加拿大)。

1.4实验设计与过程

将70只大鼠随机分为3组：对照组15只，给予双蒸水注射；模型组30只，给予MCT皮下注射；治疗组25只，给予MCT皮下注射。14天后对照组和模型组经灌胃给予溶剂，治疗组经灌胃给予WNK463(3mg/kg)+溶剂，每日一次并持续14天。

1.5指标检测方法

3％的戊巴比妥钠，0.2ml/100g腹腔注射麻醉大鼠，行超声检测。之后将大鼠仰卧位固定于手术台上，气管切管，连接呼吸机，开胸，暴露心脏，导管***右心室，行右心导管检查。处死大鼠，取出心脏，去除心房组织及附着脂肪，分离左右心室，滤纸吸干水分，分别称重。

1.6统计学方法

所有数据用Mean±SD表示，组间比较为单因素方差分析，p＜0.05为差异有统计学意义，采用GraphPadPrism 5软件包进行统计学处理。

2、实验结果

2.1各组处理对大鼠生存率的影响

模型组和治疗组大鼠的生存曲线的变化如图1所示。

由图1可知，28天后，与模型组相比，WNK463治疗组大鼠的生存率明显升高，生存曲线差异具有统计学意义(p＜0.05)。

2.2各组处理对大鼠右心-肺循环压力的影响

各组大鼠的肺动脉平均压(mPAP)和右心室收缩压(RVSP)的变化分别如图2和图3所示。

由图2和图3可知，28天后，与对照组相比，模型组大鼠的mPAP和RVSP明显升高，差异具有显著性(p＜0.05)。与模型组相比，WNK463治疗组大鼠的mPAP和RVSP明显降低，差异有统计学意义(p＜0.05)。

2.3各组处理对大鼠右心-肺循环功能的影响

各组大鼠的三尖瓣环收缩期位移(TAPES)和右心室内径(RVID)的变化分别如图4和图5所示。

由图4和图5可知，28天后，与对照组相比，模型组大鼠的TAPES明显降低，RVID明显升高，差异具有显著性(p＜0.001)。与模型组相比，WNK463治疗组大鼠的TAPES明显升高，RVID明显降低，差异有统计学意义(p＜0.01和p＜0.05)。

2.4各组处理对大鼠右室肥厚指数的影响

各组大鼠的右心室肥厚指数(RVHI)的变化如图6所示

由图6可知，28天后，与对照组相比，模型组大鼠的RVHI明显升高，差异具有显著性(p＜0.001)。与模型组相比，WNK463治疗组大鼠的RVHI明显降低，差异有统计学意义(p＜0.001)。

上述结果表明，WNK463对MCT诱导的肺动脉高压模型大鼠的肺动脉高压及心脏损伤等具有保护作用，有望开发成防治肺动脉高压的药物。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。