阅读说明：本技术 一种抗肺鳞癌药物组合物及Antrodin C作为一代抗肺鳞癌药物增效剂的应用 (A kind of application of anti-lung squamous cancer pharmaceutical composition and Antrodin C as the anti-lung squamous cancer medicament synergistic agent of a generation ) 是由 汪雯翰 龙云凤 贾薇 王毅谦 陈雷 封政 张劲松 杨焱 蒋鲁岩 刘艳芳 唐泰山 于 2019-09-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种抗肺鳞癌药物组合物及Antrodin C作为一代抗肺鳞癌药物增效剂的应用,ADC与吉非替尼联合用药对于非小细胞肺鳞癌的治疗产生了显著的协同增效,ADC能够作为吉非替尼的增效剂,与吉非替尼联合,能够显著增强吉非替尼对于非小细胞肺鳞癌的治疗效果,联合用药可以降低吉非替尼的剂量,减少毒副作用,并提高治疗效果。(A kind of application the invention discloses anti-lung squamous cancer pharmaceutical composition and Antrodin C as the anti-lung squamous cancer medicament synergistic agent of a generation, ADC and Gefitinib drug combination produce significant synergy for the treatment of non-small cell lung squamous cancer, ADC can be as the synergist of Gefitinib, combine with Gefitinib, Gefitinib can be significantly increased for the therapeutic effect of non-small cell lung squamous cancer, drug combination can reduce the dosage of Gefitinib, reduce toxic side effect, and improve therapeutic effect.)

一种抗肺鳞癌药物组合物及Antrodin C作为一代抗肺鳞癌药 物增效剂的应用

技术领域

本发明属于抗肺癌药物技术领域，具体涉及一种抗肺鳞癌药物组合物及AntrodinC作为一代抗肺鳞癌药物增效剂的应用。

背景技术

吉非替尼是一种选择性表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂，该酶通常表达于上皮来源的实体瘤。对于EGFR酪氨酸激酶活性的抑制可妨碍肿瘤的生长，转移和血管生成，并增加肿瘤细胞的凋亡。在体内，吉非替尼广泛抑制异种移植于裸鼠的人肿瘤细胞衍生系的肿瘤生长，并提高化疗、放疗及激素治疗的抗肿瘤活性。在临床实验中已证实吉非替尼对局部晚期或转移性非小细胞肺癌具客观的抗肿瘤反应并可改善疾病相关的症状。

然而，吉非替尼毒副作用较强，接受吉非替尼治疗的患者，偶尔可发生急性间质性肺病，部分患者可因此死亡，伴发先天性肺纤维化/间质性肺炎/肺尘病/放射性肺炎/药物诱发性肺炎的患者出现这种情况时死亡率增加。且吉非替尼的疗效相比于厄洛替尼、奥希替尼来说较差。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。

因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种抗肺鳞癌药物组合物。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种抗肺鳞癌药物组合物，其中：所述抗肺鳞癌药物组合物包括，Antrodin C和吉非替尼。

作为本发明所述的抗肺鳞癌药物组合物的一种优选方案：所述Antrodin C和吉非替尼的摩尔比为1：(0.15～2.5)。

作为本发明所述的抗肺鳞癌药物组合物的一种优选方案：所述Antrodin C和吉非替尼的摩尔比为1：1.25。

作为本发明所述的抗肺鳞癌药物组合物的一种优选方案：所述肺鳞癌，包括非小细胞肺癌。

作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供Antrodin C作为一代抗肺鳞癌药物增效剂的应用。

作为本发明所述Antrodin C作为一代抗肺鳞癌药物增效剂的应用的一种优选方案：所述一代抗肺鳞癌药物，包括非小细胞肺癌。

作为本发明所述Antrodin C作为一代抗肺鳞癌药物增效剂的应用的一种优选方案：所述一代抗肺鳞癌药物，为吉非替尼。

作为本发明所述Antrodin C作为一代抗肺鳞癌药物增效剂的应用的一种优选方案：所述Antrodin C和吉非替尼的摩尔比为1：(0.15～2.5)。

作为本发明所述Antrodin C作为一代抗肺鳞癌药物增效剂的应用的一种优选方案：所述Antrodin C和吉非替尼的摩尔比为1：1.25。

本发明的有益效果：本发明研究发现，ADC与吉非替尼联合用药对于非小细胞肺鳞癌的治疗产生了显著的协同增效，ADC能够作为吉非替尼的增效剂，与吉非替尼联合，能够显著增强吉非替尼对于非小细胞肺鳞癌的治疗效果，联合用药可以降低吉非替尼的剂量，减少毒副作用，并提高治疗效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：

图1为ADC和EGFR突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合用药对A549细胞增殖的影响。

图2ADC和EGFR突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合用药对A549细胞克隆形成的影响。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。

实施例1：

实验方法：

材料和细胞株

樟芝皿培菌丝体由台湾诚谦生物科技有限公司提供。Antrodin C(以下简称ADC)为本实验从樟芝菌丝体内提取获得。A549(人肺癌细胞)细胞株购于中国科学院上海生命科学院研究院细胞资源中心。

试剂和主要仪器

DMEM培养基、胎牛血清及0.25％EDTA-胰酶购自美国Gibco公司；4％多聚甲醛固定液和结晶紫染液购自碧云天生物技术研究所；alamarBlue^TM购自英国AbD Serotec公司；

CO₂培养箱和RS12生物安全柜为美国Thermo公司产品；IX2-ILL100倒置显微镜为日本Olympus公司产品；恒温培养振荡器为上海智城分析仪器制造有限公司产品；SynergyHT多功能酶标仪为美国Bio-Tek公司产品。

肿瘤细胞增殖抑制实验：

选择生长良好的对数期A549细胞将其消化后，并加入新鲜配置的DMEM培养基制成单细胞悬液，并调整细胞浓度，使细胞终浓度为2.5×10⁴个/mL，然后接种到96孔板中，每孔接种200μL细胞悬液。在37℃、5％CO₂培养箱中培养24h使细胞完全贴壁，然后吸去培养基，并加入含不同浓度样品的培养基100μL，同时以加入含5‰DMSO的培养基100μL作为阴性对照。此实验每个样品做5个重复。在37℃和5％CO₂培养箱中培养72h后，将培养基吸去，然后加入180μL无色的DMEM培养基和20μL 0.075mg/mL alamarBlue^TM试剂，培养约2～6h，等到阴性对照组样孔颜色发生明显变化后，再用酶标仪测定570nm和600nm下的吸光度，然后根据公式计算样品对A549细胞的抑制率。

平板克隆法检测细胞活力：

选择生长良好的对数期A549细胞将其消化后，并加入新鲜配置的DMEM培养基制成单细胞悬液，并调整细胞浓度，使细胞终浓度为2×10 ⁵个/mL，然后接种到12孔板中，每孔加入1mL细胞悬液，在37℃、5％CO₂培养箱中培养24h使其完全贴壁。在37℃和5％CO₂培养箱中培养24h使细胞完全贴壁，然后吸去培养基，并加入含不同浓度样品的培养基100μL，同时以加入含5‰DMSO的培养基100μL作为阴性对照。细胞加样处理48h后，去除培养基，用胰酶消化细胞，并调整细胞浓度，使细胞终浓度为0.2×10 ³个/mL，将细胞悬液接种于6孔板中，每孔加入2mL细胞悬液，在37℃和5％CO₂培养箱中培养，在细胞培养期间需要定时更换等量新鲜培养基。细胞培养至两周后，用放置到室温PBS清洗细胞。然后在通风厨下，用500μL/孔的4％多聚甲醛固定液将细胞固定5min，再用PBS将4％多聚甲醛固定液清洗掉，然后将细胞用结晶紫染液进行染色3min左右，最后用PBS将染液完全清洗干净，统计细胞的克隆数，以大于50及以上的细胞记为一个克隆。

抑制率的计算公式

细胞迁移能力检测：

选择生长良好的对数期A549细胞将其消化后，并加入新鲜配置的DMEM培养基制成单细胞悬液，并调整细胞浓度，使细胞终浓度为5×10⁵个/mL，然后接种到6孔板中，每孔加入2mL的细胞悬液，在37℃、5％CO₂培养箱中培养24h使其完全贴壁。然后用10μL的移液枪及枪头在培养孔中间制造3条划痕，枪头需垂直于孔底，每条划痕间大约相隔0.5-1cm，然后用放置到室温PBS小心清洗两次去除细胞碎片，加入含不同浓度样品的培养基100μL，同时以加入含5‰DMSO的培养基100μL作为阴性对照。在加样处理48h后将细胞拿出，在倒置显微镜下拍照。

实验结果：

ADC和EGFR突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合用药对A549细胞的增殖的抑制率：

通过alamarBlue^TM法检测观察ADC和表皮生长因子(Epidermal Growth FactorReceptor，EGFR)突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合处理对A549细胞增殖的抑制作用。如表1所示，ADC和厄洛替尼或奥希替尼对A549增殖没有明显的影响，而ADC和吉非替尼可以显著增加吉非替尼的抗非小细胞肺鳞癌活性。如表2所示，ADC浓度达到20uM可以明显降低吉非替的使用浓度，其的抑制率能够达到66.85％。

表1 ADC对EGFR突变型非小细胞肺鳞癌靶向药抑制A549细胞增殖的抑制率

表2 ADC和EGFR突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合用药对A549细胞增殖的抑制率

ADC和EGFR突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合用药对A549细胞克隆形成的抑制率：

通过alamarBlue^TM法检测观察ADC和表皮生长因子(Epidermal Growth FactorReceptor，EGFR)突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合处理对A549细胞增殖的抑制作用。如表3所示，ADC和厄洛替尼或奥希替尼对A549克隆形成没有明显的影响，而ADC和吉非替尼可以显著增加吉非替尼的抗非小细胞肺鳞癌活性。

表3ADC和EGFR突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合用药对A549细胞克隆形成的抑制率

ADC和EGFR突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合用药对A549细胞迁移的抑制率：

通过alamarBlue^TM法检测观察ADC和表皮生长因子(Epidermal Growth FactorReceptor，EGFR)突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合处理对A549细胞增殖的抑制作用。如表4所示，ADC和厄洛替尼或奥希替尼对A549增殖没有明显的影响，而ADC和吉非替尼可以显著增加吉非替尼的抗非小细胞肺鳞癌活性。

表4ADC和EGFR突变型非小细胞肺鳞癌靶向药联合用药对A549细胞迁移的抑制率

本发明研究发现，ADC与吉非替尼联合用药对于非小细胞肺鳞癌的治疗产生了显著的协同增效，ADC能够作为吉非替尼的增效剂，与吉非替尼联合，能够显著增强吉非替尼对于非小细胞肺鳞癌的治疗效果，联合用药可以降低吉非替尼的剂量，减少毒副作用，并提高治疗效果。

应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。