木豆素在制备预防和/或治疗药物性肝损伤的药物中的应用
阅读说明：本技术 木豆素在制备预防和/或治疗药物性肝损伤的药物中的应用 (Application of cajanin in preparation of medicine for preventing and/or treating drug-induced liver injury ) 是由 闫明珠 常琪 靳苏维 王智 夏天吉 刘永广 于 2021-08-30 设计创作，主要内容包括：本发明属于医药技术领域,具体涉及木豆素在防治药物性肝损伤中的新用途。本发明通过动物实验首先证明并公开了木豆素能够有效地治疗对乙酰氨基酚所致的药物性肝损伤。本发明进一步公开了木豆素用于制备预防和/或治疗药物性肝损伤药物的用途。本发明为研制以木豆素为活性成分的保肝药物提供了科学依据,具有重大的应用价值。(The invention belongs to the technical field of medicines, and particularly relates to a new application of cajanin in preventing and treating drug-induced liver injury. Animal experiments prove and disclose that the cajanin can effectively treat drug-induced liver injury caused by acetaminophen. The invention further discloses application of the cajanin in preparing a medicine for preventing and/or treating drug-induced liver injury. The invention provides scientific basis for developing the liver-protecting medicine taking the cajanin as the active ingredient and has great application value.)
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及木豆素(Cajaninstilbene acid，CSA)(化学名：2-羧基-3-羟基-4-异戊烯基-5-甲氧基芪，2-carboxyl-3-hydroxy-4-prenyl-5-methoxystilben)在制备预防和/或治疗药物性肝损伤的药物中的应用。
背景技术
药物性肝损伤(drug-induced liver injury，DILI)是指由各类处方或非处方的化学药物、生物制剂、传统中药、天然药、保健品、膳食补充剂及其代谢产物乃至辅料等所诱发的肝损伤。我国目前报道的急性DIL1约占急性肝伤住院比例的20％，并且发病率在逐渐升高。DILI作为最常见和最严重的药物不良反应之一，重者可致急性肝衰竭甚至死亡。因此，DILI已经成为一个不容忽视的公共卫生问题。对乙酰氨基酚(Acetaminophen，APAP)是世界上应用最广泛、用量最大的解热镇痛非处方药物。但是APAP服用不当可导致严重的肝损伤，是很多国家急性肝衰竭的最常见原因。在我国，APAP所致肝损伤发病率也呈逐年上升趋势。除此之外，APAP诱导急性肝损伤也是常见药物性肝损伤模型，常用于评估药物保肝护肝的潜力。
木豆素(Cajaninstilbene acid)(见附图1)是从木豆叶中分离提取制得的一个芪类化合物。有研究表明，木豆素具有抗抑郁、改善学习记忆、抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗疱疹病毒及降血糖的药理活性。申请人前期从木豆叶中利用现代先进的提取技术制备了木豆素，对其在APAP所致药物性肝损伤中的保护作用进行研究，发现木豆素可显著降低APAP肝损伤小鼠血清中的谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平，减少肝脏坏死面积，表明木豆素在APAP所致药物性肝损伤中具有良好的保护和治疗作用。
发明内容
本发明的目的是提供木豆叶中的芪类化合物木豆素的药物新用途。上述目的通过以下技术方案来实现：
本发明所提供的木豆素的药物新用途为木豆素在制备具有下述功能的产品中的应用：
1)预防和/或治疗药物性肝损伤；
2)抑制药物性肝损伤引起的血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平的升高；
3)抑制药物性肝损伤引起的肝细胞坏死。
所述应用中，药物性肝损伤可为药物导致的急性肝损伤。
本发明还提供一种预防和/或治疗药物性肝损伤的药物，其含有木豆素。该药物组合物由有效量的木豆素与药学上可接受的载体、赋型剂或稀释剂配合而成。
本发明首次发现木豆素对APAP导致的肝损伤具有良好的治疗作用。本发明揭示了木豆叶中的一种活性成分木豆素具有防治药物性肝损伤的作用，对APAP诱导的急性肝损伤具有良好的治疗作用，本发明为研制以木豆素组分为基础的保肝药物提供了科学依据，具有重大的应用价值。
附图说明
图1木豆素的化学结构
图2实验例1各组小鼠肝组织切片H&E染色图
图3实验例2各组小鼠肝组织切片H&E染色图
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实验例1.灌胃给予木豆素对APAP所致药物性肝损伤的治疗作用
1.实验材料
实验动物：C57BL/6N雄鼠，体重20-22g，24只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证：SCXK(京)2016-0006。小鼠常规饲料由维通利华实验动物技术有限公司提供。小鼠在SPF级环境中饲养(中国医学科学院药用植物研究所实验动物房[SYXK(京)2018-0020])，维持12h光照：12h黑暗昼夜节律，温度23-25℃，湿度45％-65％，各组均为6只/笼，自由饮水和饮食。实验经中国医学科学院药用植物研究所实验动物管理与动物福利委员会审查批准(审批号：SLXD-20191219001)。
药物及试剂：木豆素：由本实验室制备所得，HPLC纯度检查达98％。给药前药物用含有5％浓度Solutol HS-15的生理盐水溶解配制。APAP(货号：HY66005)购自MedChemExpress，给药前用55℃的生理盐水配制。
2.实验方法
分组及给药：小鼠分为空白对照组、APAP肝损伤模型组、木豆素低剂量治疗组(50mg/kg)和高剂量治疗组(75mg/kg)，在动物房适应环境7天。正式实验前小鼠禁食不禁水16小时。空白对照组注射生理盐水，APAP肝损伤各组按照300mg/kg剂量注射APAP溶液，木豆素治疗组小鼠在给予APAP后的30分钟再灌胃给予木豆素。给药体积均为0.2mL/10g。给予APAP造模后24小时麻醉小鼠，腹腔主动脉取血液，摘取肝脏后实施安乐死。
血清生化指标检测：全血于4℃，1500×g下离心15分钟，收集上层血清用于后续检测。使用全自动生化仪(贝克曼AU480)和中生北控试剂盒(货号：020003，020013)检测血清中谷丙转氨酶(Alanine transaminase，ALT)和谷草转氨酶(Aspartateaminotransferase，AST)的含量。
病理检测：小鼠肝脏使用福尔马林固定24小时后，进行常规石蜡包埋、切片、苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining，H&E染色)。
数据分析：H&E染色结果中的坏死面积采用Image J软件计算。所有数据均采用SPSS19.0软件进行统计分析，最终以平均值±标准误(mean±SEM)表示。数据先采用Shapiro-Wilk法检验正态性，如若满足正态分布，再进行方差齐性检验。如果数据同时满足正态分布，且各组数据方差齐，则采用单因素方差分析，选用LSD方法进行多组间均数的两两比较。如果数据不满足正态分布，或各组数据方差不齐，则采用非参数检验。
3.实验结果
(1)木豆素对小鼠血清生化指标的影响
结果(见表1)显示，与空白对照组相比，小鼠腹腔注射APAP后血清中的ALT和AST水平显著增加(P＜0.001)，表明药物性肝损伤模型造模成功。灌胃给予低剂量和高剂量木豆素均可以显著降低小鼠血清中ALT(P＜0.01，P＜0.001)和AST(P＜0.01，P＜0.01)的水平，表明木豆素具有治疗APAP药物性肝损伤的作用。
表1.木豆素对APAP肝损伤小鼠血清中ALT和AST的影响(mean±SEM，n＝5-6)
与空白对照组比较，***P＜0.001；与模型组比较，##P＜0.01，###P＜0.001；i.p.：腹腔注射，i.g.：灌胃。
(2)木豆素对小鼠肝脏病理损伤的影响
小鼠肝组织切片H&E染色显示，空白对照组小鼠肝组织未见肝细胞坏死，肝细胞界板完整，汇管区未见炎细胞浸润，整体无明显病理学异常(图2A)。APAP过量可致肝血窦淤血/出血，肝小叶中央大块状坏死，并且伴有中等量的单核及淋巴细胞灶状浸润(图2B；表2，P＜0.001)。木豆素低剂量和高剂量治疗组小鼠肝脏中肝小叶结构存在，未见肝细胞脂肪变性；偶见点灶状肝细胞坏死和少量单核淋巴细胞灶状浸润(图2C和2D)。与APAP药物性肝损伤模型组相比，木豆素可显著地降低肝脏坏死面积(表2，P＜0.001)，减轻肝脏坏死程度。以上结果表明木豆素可治疗APAP所致肝细胞坏死。
表2.木豆素对APAP肝损伤小鼠肝脏坏死面积的影响(mean±SEM，n＝6)
与空白对照组比，***P＜0.001；与模型组相比，###P＜0.001；i.p.：腹腔注射，i.g.：灌胃。
实验例2.腹腔注射木豆素对APAP所致药物性肝损伤的治疗作用
1.实验材料
实验动物：实验经中国医学科学院药用植物研究所实验动物管理与动物福利委员会审查批准(审批号：SLXD-20200103001)。其他同实验例1。
药物及试剂：同实验例1。
2.实验方法
分组及给药：小鼠分为空白对照组、APAP肝损伤模型组、木豆素低剂量治疗组(50mg/kg)和高剂量治疗组(75mg/kg)，在动物房适应环境7天。正式实验前小鼠禁食不禁水16小时。空白对照组注射生理盐水，APAP肝损伤各组按照300mg/kg剂量注射APAP溶液，木豆素治疗组小鼠在给予APAP后的1.5小时再注射木豆素。以上给药方式均为腹腔注射，注射体积为0.2mL/10g。给予APAP造模后24小时麻醉小鼠，腹腔主动脉取小鼠血液，摘取肝脏后实施安乐死。
血清生化指标检测：同实验例1。
病理检测：同实验例1。
数据分析：同实验例1。
3.实验结果
(1)木豆素对小鼠血清生化指标的影响
结果(见表3)显示，与空白对照组相比，小鼠腹腔注射APAP后血清中的ALT和AST水平显著增加(P＜0.001)，表明药物性肝损伤模型造模成功。腹腔注射低剂量和高剂量木豆素均可以显著降低小鼠血清中ALT和AST的水平(P＜0.001)，表明木豆素具有治疗APAP药物性肝损伤的作用。
表3.木豆素对APAP肝损伤小鼠血清中ALT和AST的影响(mean±SEM，n＝5-6)
与空白对照组比较，***P＜0.001；与模型组比较，i.p.：腹腔注射。
(2)木豆素对小鼠肝脏病理损伤的影响
小鼠肝组织切片H&E染色显示，空白对照组小鼠肝组织未见肝细胞坏死，肝细胞界板完整，汇管区未见炎细胞浸润，整体无明显病理学异常(图3A)。APAP过量可致明显的肝血窦淤血/出血，肝小叶中央大块状坏死，并且伴有中等量的单核及淋巴细胞灶状浸润(图3B；表4，P＜0.001)。腹腔注射低剂量和高剂量木豆素后，小鼠肝脏中肝小叶结构存在，未见肝细胞脂肪变性；偶见点灶状肝细胞坏死和少量单核淋巴细胞灶状浸润(图3C和3D)。与APAP药物性肝损伤模型组相比，木豆素可显著地降低肝脏坏死面积(表4，P＜0.001)，减轻肝脏坏死程度。以上结果表明木豆素可治疗APAP所致肝细胞坏死。
表4.木豆素对APAP肝损伤小鼠肝脏坏死面积的影响(mean±SEM，n＝6)
与空白对照组比，***P＜0.001；与模型组相比，###P＜0.001；i.p.：腹腔注射。
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