一种治疗结直肠癌的药物
阅读说明：本技术 一种治疗结直肠癌的药物 (Medicine for treating colorectal cancer ) 是由 方媛 邓海军 李永盛 沈智勇 刘玥琛 张展侨 李振康 于 2021-05-25 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种治疗结直肠癌的药物,包括siRNA,所述siRNA的正义链如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。本发明通过基础实验在细胞水平证实干扰巨噬细胞的MS4A4A表达的siRNA可抑制巨噬细胞向M2型极化。通过体内动物实验发现,干扰MS4A4A表达的siRNA可通过抑制巨噬细胞M2型极化继而促进肿瘤浸润CD8+T细胞的活化,进而发挥抗肿瘤作用。(The invention provides a medicine for treating colorectal cancer, which comprises siRNA, wherein a sense strand of the siRNA is shown as SEQ ID NO. 1 or SEQ ID NO. 2. The invention proves that siRNA interfering MS4A4A expression of macrophages can inhibit the macrophage from polarizing to M2 type at a cellular level through basic experiments. In vivo animal experiments show that siRNA interfering with expression of MS4A4A can inhibit macrophage M2 type polarization, so that activation of tumor infiltrating CD8+ T cells is promoted, and an anti-tumor effect is further exerted.)
技术领域
本发明涉及一种治疗结直肠癌的药物。
背景技术
结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是临床上常见恶性肿瘤之一，全球发病率居于恶性肿瘤的第3位，死亡率居第2位。在我国，结直肠癌的发病率和死亡率有逐年上升及年轻化趋势，严重威胁我国人民的生命健康。
MS4A4A属于MS4A蛋白家族的一员，在肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associatedmacrophage，TAM)中特异性表达，与巨噬细胞脂筏中Dectin-1受体的功能相关，并且为Syk依赖性信号通路完全激活所必需。MS4A4A在巨噬细胞质膜和细胞内均可表达，其表达可调控巨噬细胞分泌某些可溶性蛋白。最近的研究表明，MS4A4A可能是M2型巨噬细胞的新型标志物，并且与胃癌、肾癌预后不良相关。然而，在结直肠癌中，MS4A4A在TAM中发挥的功能、参与调控免疫微环境的分子机制及与肿瘤发生发展的关系依旧不明。
动物用siRNA(in vivo siRNA)是采用特殊化学修饰并且可以直接注射动物的siRNA化合物，具有高效、特异、稳定、低毒的优势。目前，全球范围已有上百种RNAi药物进入临床研究，2018年首个siRNA药物获得美国FDA批准上市。在动物实验中，in vivo siRNA给药方法可分为系统给药(如静脉给药、腹腔给药等)和局部给药(如皮下注射，玻璃体给药，鞘内给药等)。一般系统给药每次注射5～20nmol/20g体重，局部给药则需每次注射1～5nmol/20g体重，给药频率为一周2～3次，可以根据实验研究目的灵活调整给药方案。已有不少in vivo siRNA相关研究成果发表。由于缺乏相关研究，目前尚无针对MS4A4A基因的动物用siRNA的实验研究成果报道。
发明内容
本发明的目的在于克服结直肠癌治疗技术的缺陷和不足而提供了一种治疗结直肠癌的药物，本发明提供了MS4A4A基因作为靶点的用途。
为实现上述目的，所采取的技术方案：一种治疗结直肠癌的药物，包括siRNA，所述siRNA的正义链如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。。
本发明提供了MS4A4A基因作为靶点在筛选或制备治疗结直肠癌的药物中的用途。
本发明提供了抑制或阻断MS4A4A基因表达的试剂在制备治疗结直肠癌的药物中的用途。
优选地，所述试剂包括siRNA。
优选地，所述siRNA的正义链如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。
有益效果：
本发明通过基础实验在细胞水平证实干扰巨噬细胞的MS4A4A表达的siRNA可抑制巨噬细胞向M2型极化。通过体内动物实验发现，干扰MS4A4A的表达的siRNA可通过抑制巨噬细胞M2型极化继而促进肿瘤浸润CD8+T细胞的活化，进而发挥抗肿瘤作用。
附图说明
图1为本发明实施例1中干扰MS4A4A表达可抑制巨噬细胞向M2型极化，其中图1A为qPCR检测干扰巨噬细胞MS4A4A表达的结果，图1B为western blot检测干扰巨噬细胞MS4A4A表达的结果，图1C为M2型巨噬细胞标记物表达水平的变化结果。
图2为本发明实施例2中干扰MS4A4A表达显著抑制小鼠体内肠癌细胞生长图片。
图3为本发明实施例3中清除小鼠体内CD8+T细胞可逆转MS4A4A siRNA所致的肿瘤生长抑制图片。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。本研究用于动物实验的in vivo siRNA(siMS4A4A)购自广州市锐博生物科技有限公司(产品编号：siBDMV002)。
实施例1
MS4A4A促进巨噬细胞M2极化。实验方法和结果如下(结果如图1所示)：
利用IL4(20ng/ml)将小鼠骨髓来源的巨噬细胞(Bone marrow derivedmacrophage,BMDM)诱导成M2型巨噬细胞，然后利用MS4A4A siRNA(siRNA1和siRNA2)及对照siRNA(siNC)转染BMDM，qPCR及western blot检测干扰MS4A4A表达的结果分别如图1A和图1B所示。与siNC组相比，MS4A4A的mRNA和蛋白水平表达显著受抑制。针对MS4A4A基因的siRNA正义链分别如下：
siRNA1：5’-CCUUGGGAUUGUGCAGAUUTT-3’；
siRNA2：5’-GCAGCCUAGGCUUGAACAUTT-3’。
使用qPCR实验检测干扰巨噬细胞的MS4A4A的表达，M2型巨噬细胞标记物表达水平的变化。如图1C所示，与siNC组相比，转染MS4A4A siRNA后，M2型巨噬细胞标记物Fizz1、Arg1和Tgfb1的mRNA表达被显著抑制。
实施例2
抑制MS4A4A表达显著抑制小鼠体内肿瘤细胞生长，实验方法和结果如下(结果如图2所示)：
图2A-B：利用鼠源性结肠癌细胞MC38构建C57BL/6小鼠皮下瘤模型。检测MS4A4AsiRNA瘤内注射的抑癌效果，如图2A-B，从图2A-B的实验结果可以得出，在体内2种MS4A4AsiRNA对结肠癌细胞的生长均有显著抑制效果。
图2C-D：利用流式检测小鼠皮下瘤组织，结果显示：与对照组相比，肿瘤内耗竭CD8+T细胞(LAG3+CD8+T细胞和TIM3+CD8+T细胞)的比例显著减少，而CD11b+F4/80+巨噬细胞的比例在两组间则无明显差异。
图2E-F：利用流式检测小鼠皮下瘤组织，结果显示：与对照组相比，肿瘤内浸润的IFN-γ+CD8+T细胞以及Ki67+CD8+T细胞的比例显著增加。
图2G-H：利用流式检测小鼠皮下瘤组织，结果显示：与对照组相比，肿瘤内浸润的CD206+F4/80+巨噬细胞的比例显著减少。
实施例3
清除小鼠体内CD8+T细胞可逆转干扰MS4A4A表达所致的肿瘤生长抑制作用(结果如图3所示)：
图3A-B：利用鼠源性结肠癌细胞MC38构建C57BL/6小鼠皮下瘤模型。小鼠分组处理，实验组小鼠腹腔注射CD8中和抗体且瘤内注射MS4A4A siRNA2。对照组小鼠腹腔注射IgG抗体且瘤内注射MS4A4A siRNA2，检测MS4A4A siRNA的抗肿瘤作用是否依赖于CD8+T细胞，结果表明：体内清除CD8+T细胞可减弱MS4A4A siRNA的抗肿瘤作用。
图3C-D：利用流式检测小鼠皮下瘤组织验证实验组小鼠内CD8+T细胞的清除效率，结果显示：与IgG组相比，CD8中和抗体处理组内CD8+T细胞的比例显著减少。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。