阅读说明：本技术 不同含碳量c18液相半制备色谱柱装填方法 (Different phosphorus content C18 liquid phases half prepare chromatography column packing method ) 是由 韩海峰 吴妹 徐飞 于 2018-05-25 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种装填不同含碳量C18液相半制备色谱柱的方法,主要解决半制备柱峰形易拖尾和前沿、柱效不高等问题。本发明装填方法包括以下步骤：1)配置顶替液：采用混合有机溶剂和去离子水2种顶替液分段使用；2)制备匀浆液：一定比例混合溶剂配置成匀浆液体,加入C18反相填料于锥形瓶中,超声搅拌配置成匀浆液。3)色谱柱装填：以压缩空气为气源,以气动放大泵为装填高压泵,把制备好的匀浆液倒入连接好半制备柱管的匀浆罐中,用顶替液将匀浆液替换出来,继续冲洗一段时间后关闭气源,待系统压力降至常压后,静置10～15分钟,卸下色谱柱。4)半制备柱评价。本发明实现了色谱柱快速、高效的装填。(The present invention relates to a kind of methods loaded different phosphorus content C18 liquid phases half and prepare chromatographic column, and mainly solution semi-preparative column peak shape is easily trailed and forward position, column imitate the problems such as not high.1) packing method of the present invention is the following steps are included: configure displacement fluid: being used using the 2 kinds of displacement fluid segmentations of mixed organic solvents and deionized water；2) prepare homogenate: certain proportion mixed solvent is configured to homogenate liquid, C18 reverse phase filler is added in conical flask, ultrasonic agitation is configured to homogenate.3) chromatographic column is loaded: using compressed air as gas source, it is filling high-pressure pump with pneumatic amplification pump, the homogenate prepared is poured into the homogenate tank for connecting semi-preparative column pipe, homogenate is replaced out with displacement fluid, continue to close gas source after rinsing a period of time, after system pressure is down to normal pressure, 10~15 minutes are stood, chromatographic column is unloaded.4) semi-preparative column is evaluated.The present invention realizes chromatographic column and fast and efficiently loads.)

不同含碳量C18液相半制备色谱柱装填方法

技术领域

本发明方法涉及半制备柱的装柱方法，具体涉及一种不同含碳量C18液相半制备柱装填方法。

背景技术

色谱柱是液相色谱的主要部件，而色谱柱的装填方法，对确定的固定相又是实现色谱柱高效能，良好的对称性的关键技术。对于高效能柱，特别是最常使用的5μm填料色谱柱，则必须使用湿法，即匀浆装柱法。匀浆法装柱是指选择一种或数种溶剂作分散，悬浮介质、经超声处理使微粒在介质中高度分散并呈悬浮状半透明匀浆，然后在高压下把匀浆压入柱管中，制成具有均匀紧密填充床的色谱柱。半制备柱的装填方法区别于动态轴向压缩柱（DAC柱），DAC柱由于其活塞可以上下移动，反复装填，采用异丙醇等单一溶剂为匀浆液。而一般的半制备柱两端筛板是固定的，要保证柱头两端平整，为此采用两种不同极性的试剂进行混合配置成匀浆液，这样可以使填料悬浮于液体中，消除因填料颗粒间静电作用和表面能的加大，倾向于聚集和黏结的不良作用，使装填的柱床密实，色谱柱寿命延长。

在装填过程中因每次装柱都会由于随机偶然因素导致床层不一样，造成色谱柱的前沿或者后拖，这样在其他试验条件都不变的情况下对样品进行色谱分离或纯化就会得到不同的结果，降低了试验重复性和产品稳定性。针对以上问题，本发明采用混合溶剂和去离子水解决色谱柱前沿和拖尾问题，实现了C18半制备色谱柱装填方法稳定，高效可重复。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种方便，简单易重复的装填及制备方法，在无粉尘的净化装柱间，控制环境温度在25℃，在把匀浆液和填料混合配置匀浆液体时边搅拌边超声，这样能使填料更好的悬浮于匀浆液中。而通过两种顶替液分段接替使用，解决了因操作差异性造成色谱峰的前沿或者后拖情况。

本发明通过下述技术方案解决其技术问题。

不同含碳量C18液相半制备色谱柱装填方法，按下述步骤进行。

1．配置顶替液

采用2种顶替液分时段使用，一种以甲醇和异丙醇以2:1的体积比混合超声10分钟左右后配置成顶替液，另一种以去离子水作顶替液。

2．制备匀浆液

取四氯甲烷和异丙醇以1:9～9:1的不同比例体积混合，配置成匀浆液体，排气超声10分钟。加入粒径5um的C18反相填料于锥形瓶中，超声并搅拌3分钟配置成匀浆液。

3．装柱

在无粉尘净化装柱间，控制装柱环境温度为25℃后，以压缩空气为气源，以气动放大泵为装填高压泵，把制备好的匀浆液倒入连接好半制备柱管的匀浆罐中；顶替液倒入顶替液瓶中，打开装柱机气动阀门，缓慢将装柱压力提升至300 bar,先将甲醇和异丙醇混合的顶替液打入匀浆罐中，待色谱柱中流出顶替液体积1000～1500ml时，调整装柱机顶替液方向阀，将去离子水继续打入匀浆罐中，待色谱柱流出去离子水顶替液体积1000～1200ml为止，关闭装柱机气动阀门，停止加压，待系统压力降至常压后，静置10～15分钟，卸下色谱柱。

4．半制备柱进行评价

本发明方法成本低、易操作、装填紧密、柱效高、色谱峰对称性好。

表一：含碳量为20%的C18柱填料装填的色谱柱评价结果

峰号	保留时间	名称	理论塔板数	拖尾因子
					1	13.573	萘	15299	1.09

色谱条件：色谱柱，10mm *250mm;流动相，甲醇：水=85:15；流速：3ml/min；

紫外检测器波长，254nm。

表二：含碳量为17%的C18柱填料装填的色谱柱评价结果

峰号	保留时间	名称	理论塔板数	拖尾因子
					1	12.633	萘	18975	1.01

色谱条件：色谱柱，10mm *250mm；流动相，甲醇：水=85:15；流速：3ml/min；

紫外检测器波长，254nm。

表三：含碳量为15%的C18柱填料装填的色谱柱评价结果

峰号	保留时间	名称	理论塔板数	拖尾因子
					1	11.463	萘	22864	1.01

色谱条件：色谱柱，10mm *250mm;流动相，甲醇：水=85:15；流速：3ml/min；紫外检测器波长，254nm。

附图说明

图1 是含碳量为20%的C18柱填料装填的色谱峰评价图。

图2 是含碳量为17%的C18柱填料装填的色谱峰评价图。

图3 是含碳量为15%的C18柱填料装填的色谱峰评价图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例1

含碳量20%的C18半制备柱的装填。

1.配置顶替液

采用2种顶替液分时段使用，一种以甲醇和异丙醇以2:1的体积比混合超声10分钟左右后配置成4L顶替液，另一种以去离子水作顶替液，取4L。

2.制备匀浆液

取四氯甲烷和异丙醇以1:9～9:1的不同比例体积混合，配置成150ml的匀浆液体，排气超声10分钟，称取16g粒径5μm的C18反相填料同匀浆液体混合于锥形瓶中，超声并搅拌3分钟配置成匀浆液。

3.装柱：

把制备好的匀浆迅速倒入已连接好半制备柱管10mm *250mm的匀浆罐中，再与装柱机相连。开动装柱机，缓慢将装柱压力提升至300bar,先将甲醇和异丙醇混合的顶替液打入匀浆罐中，待色谱柱中流出顶替液体积1500 ml时，调整装柱机打出顶替液方向阀，将去离子水继续打入匀浆罐中，待色谱柱流出去离子水顶替液体积1000 ml为止，关闭装柱机，停止加压，待系统压力降至常压后，静置10～15分钟，卸下色谱柱进行评价。

4.半制备柱进行评价

评价的色谱条件及评价结果见表一说明，色谱图见图1。表明用本发方明技术装柱的色谱柱有高的柱效，理论塔板数为61196万/米，色谱峰的对称性好，拖尾因子为1.09，显示出自装柱有很好的色谱性能。

实施例2

含碳量为17%的C18半制备柱的装填。

1.配置顶替液

采用2种顶替液分时段使用，一种以甲醇和异丙醇以2:1的体积比混合超声10分钟左右后配置成4L顶替液，另一种以去离子水作顶替液，取4L。

2.制备匀浆液

取四氯甲烷和异丙醇以1:9～9:1的不同比例体积混合，配置成150ml的匀浆液体，排气超声10分钟，称取16g粒径5μm的C18反相填料同匀浆液体混合于锥形瓶中，超声并搅拌3分钟配置成匀浆液。

3.装柱：

把制备好的匀浆迅速倒入已连接好半制备柱管10mm *250mm的匀浆罐中，再与装柱机相连。开动装柱机，缓慢将装柱压力提升至300bar,先将甲醇和异丙醇混合的顶替液打入匀浆罐中，待色谱柱中流出顶替液体积1500 ml时，调整装柱机打出顶替液方向阀，将去离子水继续打入匀浆罐中，待色谱柱流出去离子水顶替液体积1000 ml为止，关闭装柱机，停止加压，待系统压力降至常压后，静置10～15分钟，卸下色谱柱进行评价。

4.半制备柱进行评价

评价的色谱条件及评价结果见表二说明，色谱图见图2。表明用本发方明技术装柱的色谱柱有高的柱效，理论塔板数为75900万/米，色谱峰的对称性好，拖尾因子为1.01，显示出自装柱有很好的色谱性能。

实施例3

含碳量为15%的C18半制备柱的装填。

1.配置顶替液

采用2种顶替液分时段使用，一种以甲醇和异丙醇以2:1的体积比混合超声10分钟左右后配置成4L顶替液，另一种以去离子水作顶替液，取4L。

2.制备匀浆液

取四氯甲烷和异丙醇以1:9～9:1的不同比例体积混合，配置成150ml的匀浆液体，排气超声10分钟，称取16g粒径5μm的C18反相填料同匀浆液体混合于锥形瓶中，超声并搅拌3分钟配置成匀浆液。

3.装柱：

把制备好的匀浆迅速倒入已连接好半制备柱管10mm *250mm的匀浆罐中，再与装柱机相连。开动装柱机，缓慢将装柱压力提升至300bar,先将甲醇和异丙醇混合的顶替液打入匀浆罐中，待色谱柱中流出顶替液体积1500 ml时，调整装柱机打出顶替液方向阀，将去离子水继续打入匀浆罐中，待色谱柱流出去离子水顶替液体积1000 ml为止，关闭装柱机，停止加压，待系统压力降至常压后，静置10～15分钟，卸下色谱柱进行评价。

4.对半制备柱进行评价

评价的色谱条件及评价结果见表三说明，色谱图见图3。表明用本发方明技术装柱的色谱柱有高的柱效，理论塔板数为91456万/米，色谱峰的对称性好，拖尾因子为1.01，显示出自装柱有很好的色谱性能。