一种用于检测6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质的方法
阅读说明：本技术 一种用于检测6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质的方法 (Method for detecting 6-chloro-1, 3-indoline-2-ketone related substances ) 是由 陈年根 于 2021-07-29 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种用于检测6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质的方法,采用的色谱条件为：色谱柱为InertsilODS-3(4.6×250mm,5μm),柱温为25～35℃,检测波长210～220nm,流动相为以磷酸盐缓冲液体(磷酸调节pH＝2.9～3.1)为A相,以乙腈为B相,流速为0.9～1.1ml/min。利用本发明的方法可以准确地进行6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮中有关物质定量分析,可以有效将6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮与杂质分离,专属性、精密度、耐用性均符合要求,检测效果良好。(The invention provides a method for detecting 6-chloro-1, 3-indoline-2-ketone related substances, which adopts chromatographic conditions as follows: the chromatographic column is InertsilODS-3(4.6 multiplied by 250mm, 5 mu m), the column temperature is 25-35 ℃, the detection wavelength is 210-220 nm, the mobile phase is phosphate buffer liquid (the pH value is adjusted to be 2.9-3.1) as the phase A, the acetonitrile as the phase B, and the flow rate is 0.9-1.1 ml/min. The method can accurately perform quantitative analysis on related substances in the 6-chloro-1, 3-indoline-2-ketone, can effectively separate the 6-chloro-1, 3-indoline-2-ketone from impurities, meets the requirements on specificity, precision and durability, and has good detection effect.)
技术领域
本发明涉及一种高效液相色谱分析方法，尤其是一种用于检测6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮的有关物质方法。
背景技术
齐拉西酮(Ziprasidone)由辉瑞于1987年研制合成，该药口服剂型和肌注剂型分别于1998年和2000年9月在瑞典上市。2001年2月25日，该公司的盐酸齐拉西酮胶囊获准在美国上市；2002年6月21日，甲磺酸齐拉西酮注射剂获准在美国上市，商品名为Geodon，此后相继在瑞典、新西兰等超过89个国家上市。齐拉西酮的适应证包括精神分裂症、双相情感障碍急性燥狂发作及混合性发作。
2004年，有临床数据表明，用于治疗精神分裂症的Geodon与原有药物相比，在有效性、剂量灵活性、不良反应耐受等方面具有独特优势，该药销售额增长强劲。2006年，该药成为美国增长最快的非典型抗精神病药物。2009年，Geodon位列美国品牌药零售销售额TOP200，销售额为8.74亿美元。2011年，Geodon在美国的销售额约为8.59亿美元。
6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮(1)为齐拉西酮合成步骤中的重要中间体，其主要是通过1,4-二氯-2-硝基苯经缩合、脱羧、还原和环合制备得到。
现有技术对6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮中的杂质并无相应的分析检测方法，其存在的杂质可能会传导至盐酸齐拉西酮中影响产品的质量，因此，为不断提高药品的安全性和有效性，迫切需要建立一种操作简便、灵敏度高、重现性好的中间体有关物质检测方法。
根据6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮的合成路线，其可能存在的杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的化学结构式分别为：
发明内容
鉴于此，本发明的目的在于提供一种6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮及有关杂质的分析检测方法，用于监控质量。该方法具有分离度高，操作简单，分析时间短，重复性及耐用性良好，结果稳定可靠的优点。
为了实现本发明目的，发明人通过大量的验证，本发明的技术方案是这样实现的：
一种用于检测6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质的方法，所述方法采用高效液相色谱对6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮及有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为Inertsil ODS-3(4.6×250mm，5μm)，流动相A为磷酸盐缓冲液体系(pH＝2.9～3.1)，流动相B为乙腈，检测波长为210～220nm，柱温为25～35℃，流速为0.9～1.1ml/min。
优选的，所述磷酸盐缓冲液体系是由磷酸二氢钾和水混合，并用磷酸调节pH值至2.9～3.1的磷酸二氢钾溶液。
优选的，磷酸二氢钾溶液的pH为3.0。
优选的，磷酸二氢钾溶液为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液。
优先的，检测波长为215nm。
优选的，柱温为30℃。
优选的，流速为1.0ml/min。
优选的，本发明所述用于检测6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质的方法，可通过以下步骤实现：
S1、配制供试品溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品适量，用溶剂溶解并配制成供试品溶液；
S2、配制杂质对照品贮备液：
取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E标准对照品，用溶剂溶解并配制成杂质对照品贮备液；
S3、配制混合溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品，加入杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E对照品贮备液，再加入溶剂配制成混合溶液；
S4、设置高效液相色谱仪的条件，分别吸取等量的供试品溶液和混合溶液，注入高效色谱仪中进行测定；
其中，高效液相色谱仪的条件为
色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6×250mm，5μm)；
以磷酸盐缓冲液(取0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至3.0)为流动相A，以乙腈为流动相B。
检测波长：210～220nm；
柱温：25～35℃；
流速：0.9～1.1ml/min；
洗脱程序：
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
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60
40
优选的，所述溶剂为乙腈。
优选的，每1ml供试品溶液含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮1mg。
优选的，每1mL杂质对照品贮备液含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各1mg。
优选的，每1ml混合溶液含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮0.01～2mg，含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各10μg。
优选的，每1ml混合溶液含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮1mg，含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各10μg。
优选的，所述杂质A的结构式如(a)所示；所述杂质B的结构式如(b)所示；所述杂质C的结构式如(c)所示；所述杂质D的结构式如(d)所示；所述杂质E的结构式如(e)所示；
优选的，分别吸取等量的供试品溶液和混合溶液为分别吸取10μL的供试品溶液和混合溶液。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明提供了6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质测定方法，6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮和杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E进行分离检测的方法，本发明采用不同于现有技术的色谱条件，在HPLC图谱中6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮和杂质之间有一定距离，能够准确测定6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质，能够有效将6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮与杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E分离，分离度均高于1.5，在进行破坏性试验时，也可保证6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮与杂质不受干扰。该方法操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠，可用于6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。
(2)本发明的分离检测方法，其分离度、专属性、精密度、耐用性等方面均经详细验证，且各项验证结果均符合相关法规和指导原则的要求，实际检测效果良好。
(3)本发明所述的高效液相色谱法，其测定条件中所包含的范围内均为有效值，即：在各参数范围内取任意值后，也能准确的检测出6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质，且能对杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E进行有效分离。在实际检测过程中，便于检测人员对参数的调整和避免人为误差对检测结果产生的影响，而且本发明的方法实用性强，检测过程简单、快捷，适宜推广使用。
附图说明
图1为本发明实施例1的空白溶液的HPLC图谱；其中空白溶液为10μL未加样品的乙腈；
图2为本发明实施例1的混合溶液的HPLC图谱；
图3为本发明实施例1的供试品溶液的HPLC图谱；
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明提出了一种用于检测6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质的方法，杂质为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E，即主要是对6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮中的杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E进行分离检测。
以下5个典型实施例均选取自制的相同批号(190923批)的6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品进行方法学研究。
实施例1系统适用性试验
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6×250mm，5μm)；
以磷酸盐缓冲液(取0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至3.0)为流动相A，以乙腈为流动相B。
检测波长：215nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
洗脱程序：
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
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40
实验步骤：
S1、配制供试品溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品适量，用乙腈溶解并配制成每1mL含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮1mg的供试品溶液；
S2、配制杂质对照品贮备液：
取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E标准对照品，用乙腈溶解并配制成每1mL含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各1mg的杂质对照品贮备液；
S3、配制混合溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品，加入杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E对照品贮备液，再加入乙腈配制成每1mL含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮1mg，含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各10μg的混合溶液；
S4、设置高效液相色谱仪的条件，分别吸取10μL的供试品溶液和混合溶液注入高效色谱仪，考察各杂质及主成分分离情况；
由上表数据结果可知，主成分保留时间为23.220min，各杂质及主成分峰的分离度均大于1.5，说明该条件下分离度能满足分析要求。
实施例2精密度试验
实验仪器与条件：
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6×250mm，5μm)；
以磷酸盐缓冲液(取0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至3.0)为流动相A，以乙腈为流动相B。
检测波长：215nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
洗脱程序：
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
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实验步骤：
S1、配制供试品溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品适量，用乙腈溶解并配制成每1mL含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮1mg的供试品溶液；
S2、配制杂质对照品贮备液：
取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E标准对照品，用乙腈溶解并配制成每1mL含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各1mg的杂质对照品贮备液；
S3、配制混合溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品，加入杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E对照品贮备液，再加入乙腈配制成每1mL含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各10μg的混合溶液；
S4、设置高效液相色谱仪的条件，分别吸取10μL的供试品溶液和混合溶液注入高效色谱仪，取分别由两人配制的12份供试品，每人各配制6份，按外标法测定其有关物质，并计算12份有关物质相对标准偏差；
由上表数据可知，不同时间、不同人员在不同仪器上重复测定本品供试品6份，杂质A检出，其他已知杂质均未检出，6份供试品的有关物质结果均一致；12组数据结果基本一致，中间精密度良好。
实施例3耐用性试验
实验仪器与条件：
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：Inertsil ODS-3或YMC-Pack ODS-A(4.6×250mm，5μm)；
以磷酸盐缓冲液(取0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至2.9～3.1)为流动相A，以乙腈为流动相B；
检测波长：210～220nm，；
柱温：25～35℃；
流速：0.9～1.1ml/min；
洗脱程序：
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
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30
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实验步骤：
S1、配制供试品溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品适量，用乙腈溶解并配制成每1mL含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮1mg的供试品溶液；
S2、配制杂质对照品贮备液：
取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E标准对照品，用乙腈溶解并配制成每1mL含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各1mg的杂质对照品贮备液；
S3、配制混合溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品，加入杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E对照品贮备液，再加入乙腈配制成每1mL含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各10μg的混合溶液；
S4、设置高效液相色谱仪的条件，分别吸取10μL的供试品溶液和混合溶液注入高效色谱仪，并计算供试品有关物质；
注1：正常条件的色谱条件同实施例1；
注2：以正常条件为准，当检测条件中的流速、柱温、检测波长、pH或色谱柱变化时，其他条件不变；
由上表数据可知，柱温变化±5℃、流速变化±0.1ml/min、检测波长变化±5nm、流动相ApH变化±0.1、色谱柱条件下等色谱条件下等色谱条件的微小变化时，系统适用性满足要求，有关物质检测结果无明显差异，耐用性良好。
实施例4专属性试验
实验仪器与条件：
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6×250mm，5μm)；
以磷酸盐缓冲液(取0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至3.0)为流动相A，以乙腈为流动相B。
检测波长：215nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
洗脱程序：
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
60
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60
40
实验步骤：
S1、配制供试品溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品适量，用乙腈溶解并配制成每1mL含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮1mg的供试品溶液；
S2、配制杂质对照品贮备液：
取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E标准对照品，用乙腈溶解并配制成每1mL含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各1mg的杂质对照品贮备液；
S3、配制混合溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品，加入杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E对照品贮备液，再加入乙腈配制成每1mL含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮1mg，含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各10μg的混合溶液；
S4、取本品适量，用乙腈溶解，并在各降解条件下进行破坏，再配制成每1ml含本品1mg的本品溶液。
S5、设置高效液相色谱仪的条件，分别吸取10μL的供试品溶液、混合溶液和本品溶液注入高效色谱仪；
由实验结果可知，主成分性质较为稳定，在上述条件下均无明显降解，仅在酸和碱条件下略有降解；其他条件相对稳定，产生的降解杂质与主峰和各已知杂质的分离度均符合要求；各降解条件下，主成分的主峰纯度角均小于阈值；降解前后物料守恒均在90～110％之间。上述实验结果表明，该方法可以有效检查所有已知杂质和未知杂质，且各杂质之间及杂质与主峰之间的分离度均符合要求，说明该方法具有较好的专属性。
实施例5检测限试验
实验仪器与条件：
仪器：高效液相色谱仪
色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6×250mm，5μm)；
以磷酸盐缓冲液(取0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至3.0)为流动相A，以乙腈为流动相B。
检测波长：215nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
洗脱程序：
时间(min)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
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40
实验步骤：
S1、配制杂质对照品贮备液：
取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E标准对照品，用乙腈溶解并配制成每1mL含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各1mg的杂质对照品贮备液；
S1、配制混合溶液：
取6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮样品，加入杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E对照品贮备液，再加入乙腈配制成每1mL含6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E各10μg的混合溶液；
S3、设置高效液相色谱仪条件，取混合溶液用乙腈逐级稀释，精密量取上述溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以信噪比不小于3作为检测限。
样品
S/N
检测限(ng)
主成分
3.77
0.49
杂质A
3.53
0.23
杂质B
4.04
0.50
杂质C
3.35
0.53
杂质D
3.50
0.50
杂质E
3.27
0.36
由上表数据结果可知，各杂质灵敏度均能满足要求。
综上，由实施例1至实施例5的检测结果可知，6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质检测过程中，在本发明色谱条件的各参数范围内，对流速、柱温、流动相pH、波长、色谱柱等进行调整后，均能对6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质结果无影响，且其检测结果均有效、准确，说明本发明的分离检测方法能够准确测定6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮有关物质，能够有效将6-氯-1,3-二氢吲哚-2-酮与杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E分离。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。