一种pt-1或其有效成分在病原微生物检测的新用途及基于pt-1的核酸检测裂解液
阅读说明：本技术 一种pt-1或其有效成分在病原微生物检测的新用途及基于pt-1的核酸检测裂解液 (New application of PT-1 or effective components thereof in pathogenic microorganism detection and PT-1-based nucleic acid detection lysate ) 是由 张乃元 王彬 于 2021-08-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种PT-1或其有效成分在病原微生物检测的新用途及基于PT-1的核酸检测裂解液,1L裂解液中含有1-100ml浓度为0.5％-5％的PT-1；本发明发现PT-1或其有效成分能够灭活病原微生物但不会影响病原微生物免提取核酸检测结果的灵敏度和准确性,从而通过病原微生物样本处理的裂解液或其它免提取核酸样本处理液体在消除检测过程中病原微生物污染、传染的风险同时,不影响核酸免提取、直接扩增快速核酸检测的结果。(The invention discloses a new application of PT-1 or its effective component in pathogenic microorganism detection and PT-1-based nucleic acid detection lysate, 1L lysate contains 1-100ml PT-1 with concentration of 0.5% -5%; the invention discovers that PT-1 or effective components thereof can inactivate pathogenic microorganisms without influencing the sensitivity and accuracy of the detection result of pathogenic microorganism extraction-free nucleic acid, so that the lysate or other hands-free nucleic acid sample treatment liquid for treating the pathogenic microorganism sample can eliminate the risk of pathogenic microorganism pollution and infection in the detection process, and simultaneously does not influence the results of nucleic acid extraction-free and direct amplification rapid nucleic acid detection.)
技术领域
本发明涉及生物检测领域，特别是一种PT-1或其有效成分在病原微生物检测的新用途及基于PT-1的核酸检测裂解液。
背景技术
采用以核酸检测为代表，对病原微生物进行快速免提取核酸检测的常见步骤为：样本的采集、样本的处理、样本的检测及感染性废物处理。其中快速免提取核酸检测样本的处理通常是采用核酸裂解液处理样本中的病原微生物。
常见的消毒剂是通过使病原微生物的蛋白质、酶、核酸发生致死性结构变化，从而达到使病原微生物失活的效果。而在采用以免提取核酸检测为代表的方法对病原微生物进行快速检测的过程中，为了保证检测的灵敏度与准确性，通常要求病原微生物核酸结构或其反应所需相关酶类活性不能发生改变。所以，常用的核酸裂解液，仅具有核酸裂解的作用，而不具备病原微生物的灭活作用。由此，在随后的样本检验及废弃物的处理过程仍存在污染的风险。
PT-1是一种从芸香科果实/果肉/籽提取物的产品、材料中开发出的，已经应用在纳希尔德消毒液中，但是只知道具有病原微生物的灭活作用。
现有技术还未找到在灭活病原微生物的同时能够不影响核酸检测灵敏度、准确性的裂解液，本发明通过发现PT-1的新用途而解决这样的问题。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种PT-1或其有效成分在病原微生物检测的新用途及基于PT-1的核酸检测裂解液，本发明发现PT-1能够灭活病原微生物但不会影响病原微生物免提取核酸检测结果的灵敏度和准确性，从而在消除污染的风险同时，不影响核酸免提取、直接扩增快速检测测试结果。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种PT-1或其有效成分在病原微生物检测的新用途，用于灭活病原微生物但不会改变病原微生物的抗原结构的核酸样本处理。
前述的一种PT-1或其有效成分在病原微生物检测的新用途，PT-1为香橼果提取物CAS#92346-89-9和柑橘果肉CAS#68514-76-1的混合物。
前述的一种PT-1或其有效成分在病原微生物检测的新用途，PT-1有效成分来源于芸香科果实/果肉/籽提取物。
前述的一种PT-1或其有效成分在病原微生物检测的新用途，PT-1来源于纳希尔德消毒液。
一种基于PT-1的核酸检测裂解液，1L裂解液中含有1-100ml浓度为0.5％-5％的PT-1。
前述的一种基于PT-1的核酸检测裂解液，1L裂解液中含有1-100ml浓度为0.5％-3％的PT-1，氯化钠0.7-1.0g/100ml，EDTA 1-1.5g/100ml，pH为7-7.5。
前述的一种基于PT-1的核酸检测裂解液，1L裂解液中含有1-100ml浓度为0.5％-2％的PT-1。
前述的一种基于PT-1的核酸检测裂解液，1L裂解液中含有1-100ml浓度为0.5％-2％的PT-1，氯化钠0.7-1.0g/100ml，EDTA 1-1.5g/100ml，pH为7-7.5。
本发明的有益之处在于：
本发明发现PT-1能够灭活病原微生物但不会影响病原微生物免提取核酸检测结果的灵敏度和准确性，从而通过病原微生物样本处理的裂解液或其它免提取核酸样本处理液体在消除检测过程中病原微生物污染、传染的风险同时，不影响核酸免提取、直接扩增快速核酸检测的结果；
本发明发现PT-1在裂解液的浓度低于0.5％的浓度下，就无法实现对病毒灭活效果；常用浓度为0.5％-3％。
附图说明
图1是本发明实验一的实验结果示意图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
一种PT-1在病原微生物检测的新用途，用于灭活病原微生物但不会改变病原微生物的抗原结构的核酸样本处理。
PT-1为香橼果提取物CAS#92346-89-9和柑橘果肉CAS#68514-76-1的混合物；PT-1来源于芸香科果实/果肉/籽提取物；PT-1来源于纳希尔德消毒液。纳希尔德消毒液的所有成分均为FDA认定为安全，在美国药典(USP)中上市，且还被新西兰(EPA)批准为“非冲洗”消毒剂。
一种基于PT-1的核酸检测裂解液，1L裂解液中含有1-100ml浓度为0.5％-5％的PT-1；作为一种实施例，1L裂解液中含有1-100ml浓度为0.5％-3％的PT-1，氯化钠0.7-1.0g/100ml，EDTA 1-1.5g/100ml，pH为7-7.5。需要说明的是其它病原微生物免提取核酸样本处理液体同样适用，只要是将PT-1用于灭活但不改变病原微生物结构的用途均在本发明的保护范围内。
作为一种优选，1L裂解液中含有1-100ml浓度为0.5％-1％的PT-1；作为一种实施例，1L裂解液中含有1-100ml浓度为0.5％-1％的PT-1，氯化钠0.7-1.0g/100ml，EDTA 1-1.5g/100ml，pH为7-7.5。
实验一：用以下实验验证PT-1在浓度为0.5％和1％时具有优秀的灭活性能：
将20uL病毒样本原液分别与不同核酸裂解液(PBS、生理盐水和3种不同待检核酸裂解液)进行混合，使其混合和后液体浓度都处于0.5％，1.0％两种浓度。混合15秒后取样，各取2uL对HEK293细胞进行感染，感染44h后进行荧光显微镜分析。如荧光显微镜下有荧光信号，则表示病毒对细胞进行了感染，病毒未被灭活；如无荧光信号则证明病毒已经被全部灭活，对HEK293细胞无感染能力。
病毒样本：慢病毒(RNA病毒，带包膜)，病毒滴度6x108 TCID50/mL
结果如图1所示。
结果分析：裂解液A(0.5％，1.0％PT-1)，裂解液B(0.5％，1.0％PT-1)，裂解液C(0.5％，1.0％PT-1)均可在15秒内对慢病毒样本实现灭活，HEK293细胞显示无荧光信号。
实验二：验证PT-1不影响快速核酸免提取、直接扩增检测实验：
将PT-1浓度为0.5％，1.0％两种浓度核酸裂解液，以及未加入PT-1的裂解液(三种裂解液仅PT-1浓度差异，其它成分一致)，分别用甲型流感病毒的阳性参考品、阴性参考品进行裂解后检测，每个参考品用不同裂解液各测3次，记录流感核酸检测试剂(PCR)的结果，从而判断检测结果是否一致。
测试结果阳性，表示为“+”。阴性结果用“-”表示。
病毒样本：
甲型流感病毒阳性参考品和阴性参考品。
其中S1：滴度不高于8.0×103copies/mL，检测结果应为甲型流感病毒阳性；S2：滴度不高于1.2×104copies/mL，检测结果应为甲型流感病毒阳性；S3：滴度不高于1.8×103copies/mL，检测结果应为甲型流感病毒阳性。
其中NC1-10为阴性参考品，检测结果应为阴性。
检测结果如下表1所示：
表1
补充结果分析：由以上实验可知：从S1-3,N1-10的测试结果，加了PT-1的新裂解液和没有加PT-1组分的常规裂解液，反复3次测试，阴阳性结果完成一致，所以没有区别。如果不能作为裂解液组分的话，没有相容性，测试结果就会出现与常规无PT-1组分的裂解液不一致结果。
综上所述：本发明发现PT-1能够灭活病原微生物但不会改变病原微生物的核酸结构和对反应酶活性影响，从而在消除污染、传染的风险同时，不影响快速核酸免提取、直接扩增检测的裂解液；同时发现PT-1在裂解液的浓度要高于0.5％，低于这个浓度，就无法实现对病毒灭活效果。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。