发明内容

本申请的发明人发现，烟酰胺单核苷酸、白藜芦醇和人参皂苷的联合施用可以显著提高小鼠脑、肝脏和肌肉组织中的NAD⁺的浓度，这说明白藜芦醇和人参皂苷共同联合NMN施用可发挥协同作用，促进NMN的吸收，显著提高小鼠脑，肝脏和肌肉组织中NAD⁺的水平。

在第一方面，本申请涉及一种组合物或药盒，其可以用于提高体内NAD⁺水平。所述组合物或药盒包含作为第一活性成分的烟酰胺单核苷酸，作为第二活性成分的白藜芦醇，以及作为第三活性成分的人参皂苷。

本文所用的术语“烟酰胺单核苷酸”通常被称为NMN(Nicotinamidemononucleotide)，其包括α-异构体和β-异构体或为β-异构体。在本申请上下文中，“烟酰胺单核苷酸”与“NMN”可互换使用。

本文所用的术语“白藜芦醇”是指作为单体或低聚物的白藜芦醇及其衍生物，特别是顺式-白藜芦醇，反式-白藜芦醇，白藜芦醇酯，甲基化或乙酰化白藜芦醇。特别地，“白藜芦醇”可以指3,5,4'-三羟基均二苯乙烯的顺式或反式形式，及其混合物。

本文所用的术语“人参皂苷”是指人参中含有的糖苷，例如，可以包括人参皂苷Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rg3、Rg5、Rg6、Rh1、Rh2、Rh3、Rh4、Rk1、Rk2、Rk3、Rs1、Rs2、Rs3、Rs4、Rs5、Rs6、Rs7、F4、Rgk351、原人参二醇(PPD)、原人参三醇(PPT)等。所述人参皂苷可以是单一一种人参皂苷或者不同人参皂苷的混合物。本申请的人参皂苷可以是分离的人参皂苷化合物或分离并进一步合成的人参皂苷。

在一个实施方案中，所述人参皂苷是人参皂苷Rg3和Rh2的混合物。

本文所用的术语“活性成分”是指在提高体内的NAD⁺水平方面起作用的生物学、生理学或药学活性物质的分子和试剂。该术语是相对于“可药用的载体”、“赋形剂”、“辅剂”等术语而使用的。

应当理解，对各种活性成分的所有提及包括相同活性成分的溶剂加成形式(溶剂化物，例如水合物、乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等)或其各种晶体形式(例如无定型、多晶型物等)。

本文所述组合物既可以仅包含规定的活性成分，也可以另外包含其他药剂和/或一种或多种药学上可接受的固体或液体载体、赋形剂和/或辅剂等。

本文所述的药盒可以包含三种独立的制剂单元，其中第一制剂单元包含治疗有效量的烟酰胺单核苷酸以及任选地一种或多种药学上可接受的固体或液体载体、赋形剂和/或辅剂等；第二制剂单元包含治疗有效量的白藜芦醇以及任选地一种或多种药学上可接受的固体或液体载体、赋形剂和/或辅剂等；第三制剂单元包含治疗有效量的人参皂苷以及任选地一种或多种药学上可接受的固体或液体载体、赋形剂和/或辅剂等。所述药盒还可以包括盛装分开的制剂单元的容器，例如分隔开的瓶子或分隔开的箔包装物，但也可以将第一、第二和第三制剂单元盛装于同一个未分隔的容器中。药盒还可以包括用于指导用药的使用说明书。本文所用术语“制剂单元”指药物制剂的单位剂量形式，其可以是包含烟酰胺单核苷酸而不包含白藜芦醇和人参皂苷的药物或药物组合物，或者包含白藜芦醇而不包含烟酰胺单核苷酸和人参皂苷的药物或药物组合物，或者包含人参皂苷而不包含烟酰胺单核苷酸和白藜芦醇的药物或药物组合物。

本申请的组合物或药盒中的制剂单元的剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、丸剂、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。本申请的组合物或药盒中的制剂单元可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

在一些实施方式中，本申请的组合物或药盒中的制剂单元的剂型为口服施用剂型，例如片剂或胶囊剂。

为了将本申请的组合物或药盒中的制剂单元制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将本申请的组合物或药盒中的制剂单元制成胶囊，可以将有效成分与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将活性成分先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备胶囊。

此外，如需要，也可以向组合物或药盒中的制剂单元中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

本申请的活性成分在其药物组合物或制剂单元中的含量可以根据实际需要(例如剂型、施用方式、施用对象等)进行调整，例如为0.1-95重量％，例如1-95重量％，5-90重量％，10-80重量％等。

可以根据实际需要(例如剂型、施用方式、施用对象等)调整本申请的组合物或药盒中活性成分的比例。例如，在一些实施方式中，作为第一活性成分的烟酰胺单核苷酸、作为第二活性成分的白藜芦醇和作为第三活性成分的人参皂苷的重量比可以为(50-2)：(5-0.2)：(5-0.2)，例如(20-5)：(2-0.5)：(2-0.5)，例如10:1:1。

在一些实施方式中，本申请的组合物或药盒中包含0.01-10g，例如0.1g，1g的烟酰胺单核苷酸。在一些实施方式中，本申请的组合物或药盒中包含0.001-1g，例如0.01g，0.1g的白藜芦醇。在一些实施方式中，本申请的组合物或药盒中包含0.001-1g，例如0.01g，0.1g的人参皂苷。

在第二方面，本申请涉及烟酰胺单核苷酸、白藜芦醇和人参皂苷的组合在制备组合物或药盒中的用途，所述组合物或药盒用于提高哺乳动物体内(例如脑，肝脏和肌肉组织中)NAD⁺水平。

提高体内NAD⁺水平也可以涵盖例如体内NMN、烟酰胺核糖苷(NR)和/或烟酰胺(NAM)水平的提高。

所述NAD⁺水平、NMN水平、烟酰胺核糖苷(NR)水平和/或烟酰胺(NAM)水平的提高可以通过超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS)方法来检测。所述检测可以采用本领域常用的UPLC-QQQ-MS仪器来测量，例如Agilent UHPLC-QQQ-MS(6460)。UPLC-QQQ-MS具有更高的灵敏度和更宽的线性范围，通过调节驻留时间，还可进一步针对性提高目标分析物的检测灵敏度，降低离子化的偏向性，定量结果更为真实可靠。

用于提高体内NAD⁺水平例如是用于预防和/或治疗与体内NAD⁺水平降低相关的疾病，和/或用于预防和/或治疗通过提高体内NAD+水平而改善或治疗的疾病。与体内NAD⁺水平降低相关的疾病或通过提高体内NAD+水平而改善或治疗的疾病可以包括，例如，

代谢疾病，例如，II型糖尿病、肥胖症、高血糖症、葡萄糖耐受不良、胰岛素抵抗、高胆固醇血症、高血压、高脂蛋白血症、血脂异常、高甘油三脂血症、心血管疾病、动脉粥样硬化、外周血管疾病、肾脏疾病、酮症酸中毒、血栓性疾病、肾病、糖尿病性神经病、糖尿病性视网膜病变、性功能障碍、皮肤病、消化不良、低血糖症或水肿；

神经变性疾病，诸如色素性视网膜炎、痴呆、阿尔兹海默症、帕金森病、亨廷顿症、共济失调、紧张性精神分裂症、癫痫症、神经阻滞剂恶性综合征、皮质基底神经节变性、肌张力障碍、智力迟钝、神经棘红细胞增多症、进行性核上性麻痹、缺血性中风、脊髓病变、外伤性脑损伤或缺氧症；

慢性炎症疾病，诸如乳糜泻、血管炎、狼疮、慢性阻塞性肺病(COPD)、肠易激综合征、动脉粥样硬化、关节炎或牛皮癣；

DNA损伤，诸如药物、辐射毒性或活性氧的产生引起的DNA损伤；

线粒体疾病，例如慢性进行性眼外肌麻痹、与破碎红纤维病有关的肌阵挛性癫痫症、福原综合征、利伯病、利氏脑病以及皮尔森病。

在一些实施方式中，本申请涉及烟酰胺单核苷酸、白藜芦醇和人参皂苷的组合在制备抗衰老或延长细胞寿命的药物或保健品中的用途。

抗衰老或延长细胞寿命可以包括延长细胞的增殖能力、延缓细胞衰老、促进细胞存活、延迟细胞中的细胞衰老、增加细胞对应激的抵抗力或防止细胞凋亡中的一种或更多种。所述细胞可以存在于受试者的血液中或受试者的组织或器官中。

抗衰老或延长细胞寿命可以包括对疾病或症状的治疗，所述疾病或症状可以包括皮肤皱纹、接触性皮炎、特应性皮炎、湿疹、光化性角化病、角质化紊乱、天疱疮、剥脱性皮炎、脂溢性皮炎、红斑、多形性红斑、结节性红斑、由太阳或其他光源引起的损伤、盘状红斑狼疮、皮肌炎；烧伤(例如一度、二度或三度烧伤、热烧伤、化学烧伤或电烧伤)；与衰老相关的疾病(例如帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化、肌营养不良、暴发型肝炎、克-雅病、色素性视网膜炎、小脑变性、再生障碍性贫血、心肌梗死、中风、酒精性肝炎、骨关节炎、动脉粥样硬化、脱发、扁平苔癣、皮肤萎缩或白内障)。

术语“哺乳动物”、“受试者”或“患者”在本文可互换使用，并包括但不限于人、狗、猫、马、猪、牛、猴、兔、小鼠和实验动物。优选的哺乳动物为人。

在第三方面，本申请提供了一种用于提高哺乳动物体内NAD⁺水平，例如在有此需要的哺乳动物中预防和/或治疗与体内NAD⁺水平降低相关的疾病，和/或用于预防和/或治疗通过提高体内NAD⁺水平而改善或治疗的疾病，和/或用于抗衰老或延长细胞寿命的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳动物施用治疗有效量的作为第一活性成分的烟酰胺单核苷酸，作为第二活性成分的白藜芦醇，以及作为第三活性成分的人参皂苷。

所述治疗有效量的作为第一活性成分的烟酰胺单核苷酸，作为第二活性成分的白藜芦醇，以及作为第三活性成分的人参皂苷可以包含在上文所述的组合物或药物或药盒或保健品中。

术语“治疗有效量”指可引发研究人员或临床医生所寻求的组织、系统或动物(例如哺乳动物)的生物学或医学应答的药物的量。

第一活性成分、第二活性成分、第三活性成分或者包含其的组合物、制剂单元、药物或保健品的施用途径可为口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。在一些优选的实施方式中，所述施用途径为口服。

第一活性成分、第二活性成分和第三活性成分可以同时施用，或者可以以任何顺序相继或以一定的时间间隔(例如1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24小时)施用。

第一活性成分、第二活性成分、第三活性成分或者包含其的组合物、制剂单元、药物或保健品的施用频率可以由相关领域的技术人员确定，例如为1天1次、2天1次、3天1次、4天1次、5天1次、6天1次、1天2次、1天3次等。

本申请的第一活性成分、第二活性成分、第三活性成分或者包含其的组合物、制剂单元、药物或保健品的施用剂量可以由临床医师根据实际情况(例如患者的病史、体重、病情严重程度等)来确定。例如，本申请的第一活性成分的日剂量可以为1-150mg/kg体重，例如10mg/kg体重，50mg/kg体重，55mg/kg体重，100mg/kg体重等；第二活性成分的日剂量可以为0.1-15mg/kg体重，例如1mg/kg体重，5mg/kg体重，5.5mg/kg体重，10mg/kg体重等；第三活性成分的日剂量可以为0.1-15mg/kg体重，例如1mg/kg体重，5mg/kg体重，5.5mg/kg体重，10mg/kg体重等。

本申请人出乎意料地发现，与仅仅应用本文公开的组合中的活性成分之一的单一治疗相比，烟酰胺单核苷酸、白藜芦醇和人参皂苷的组合在提高体内NAD⁺水平中显示出有益的协同作用。而且，这种协同可以在治疗中产生的额外的益处，例如，功效的延长、停药后治疗效果得到更好的持续、更少的副作用、治疗更多的症状或并发症、施用剂量减少、施用频率降低、患者依从性改进等。

本领域技术人员能够理解，在本申请的一个方面中描述的定义和优选项同样适用于其他方面。本领域技术人员能够明了本申请各个方面的实施方式可以以各种方式组合，而不偏离本申请的主题和思想，这些组合也包括在本申请的范围内。