油酸类活性物质在预防和/或治疗炎症性疾病中的应用
阅读说明：本技术 油酸类活性物质在预防和/或治疗炎症性疾病中的应用 (Use of oleic acid active substances for the prophylaxis and/or treatment of inflammatory diseases ) 是由 曹雪涛 陈坤 于 2020-05-29 设计创作，主要内容包括：本公开涉及油酸类活性物质在预防和/或治疗炎症性疾病中的应用。具体公开了油酸类活性物质在制备用于预防、调控和/或治疗对象中炎症性疾病和/或征状的产品中的应用,用于预防、调控和/或治疗对象中炎症性疾病和/或征状的产品,以及检测巨噬细胞内油酸水平的物质在制备用于诊断炎症性疾病状况、预后、风险评估和/或用于选择炎症性疾病治疗药物的产品中的应用。本公开的应用和产品可抑制巨噬细胞过度活化及炎症因子过量产生,调控机体免疫稳态,消退炎症反应,保护脏器免于炎症损伤,治疗炎症引起的脏器纤维化,具有广泛的应用前景。(The present disclosure relates to the use of oleic acid-based actives in the prevention and/or treatment of inflammatory diseases. Specifically disclosed is the use of an oleic acid-based active substance in the manufacture of a product for the prevention, modulation and/or treatment of an inflammatory disease and/or condition in a subject, and the use of a substance that detects the level of oleic acid in macrophages in the manufacture of a product for the diagnosis of an inflammatory disease condition, prognosis, risk assessment and/or for the selection of a medicament for the treatment of an inflammatory disease. The application and the product of the present disclosure can inhibit excessive macrophage activation and excessive production of inflammatory factors, regulate and control the immune homeostasis of an organism, eliminate inflammatory reaction, protect organs from inflammatory injury, treat organ fibrosis caused by inflammation, and have wide application prospects.)
技术领域
本公开涉及生物技术和医学领域。具体而言，本公开涉及油酸(Oleic acid，OA)、其偶合物和/或类似物在治疗和/或预防感染和感染引起的炎症性疾病、控制炎症损伤中的效应、实施方法和用途。
背景技术
通常，适时且适度的炎症反应对于宿主清除病原体的感染、维持机体免疫平衡发挥着关键的作用。然而，炎症反应的失调常会导致机体免疫系统功能的紊乱、组织损伤和慢性炎症的发生，成为炎症免疫性疾病(Inflammatory diseases)如炎症性肠炎(Inflammatory bowel disease，IBD)、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化症(MS)等的主要诱因。这些炎症性疾病严重影响了患者的生活质量，给人类的健康带来了极大的危害。
巨噬细胞(Macrophage)是机体天然免疫应答中一类重要的细胞，其广泛存在于脾脏、胸腺、淋巴结等淋巴器官以及几乎所有的非淋巴组织和器官中。它是连接天然免疫和适应性免疫的纽带，在机体的炎症反应和炎症消退、以及维持机体稳态中发挥重要的作用。巨噬细胞功能异常会引起过度的炎症反应，与炎症免疫性疾病的发生发展密切相关。巨噬细胞通过细胞表面的模式识别受体(Pattern Recognition Receptors，PRRs)识别病原体的感染，并进一步激活细胞内的信号级联反应，诱导促炎性细胞因子(如Il-6、TNF-α等)的产生，引起炎症反应启动天然免疫应答[Cao,Nat.Rev.Immunol.,2016,16(1):35]。
尽管巨噬细胞介导的炎症反应有利于宿主抵抗外界的感染，但过度的炎症反应会导致组织损伤以及一些慢性炎性疾病的发生，如炎症性肠炎、类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等[Wynn等，Nature,2013,496(7446):445]。
因此，精确且特异性的调节巨噬细胞的活化，及时且适时的启动巨噬细胞介导的炎症消退(Resolution)对维持机体稳态和控制慢性炎性疾病的发生是至关重要的。例如，由于巨噬细胞介导的炎症反应不能及时消退而导致IL-6的过度分泌，可以通过打破机体Treg/Th17细胞平衡从而引起免疫性的病理损伤，阻断IL-6等炎症信号通路已经成为炎症免疫性疾病的治疗手段之一[Liu等，Nat.Immunol.,2014,15(7):612-622]。
过去认为，炎症消退在免疫应答过程中属于一种被动的细胞事件，然而随着由ω-3(或n-3)必需脂肪酸(EFA)合成的具促消退能力的代谢中间产物的鉴定，急性炎症的控制和消除被认为是免疫活动中的一种主动免疫调节过程[Serhan等，J.Exp.Med.,2000,192(8):1197-204]。而且，相较于机体的抗炎机制，促炎症消退的方式是促进炎症的终止，而非抑制炎症的强度，因此，促炎症消退产生的免疫抑制副作用远远弱于抗炎机制。此外，研究表明，促炎症消退机制不仅可以有效的终止炎症反应，还可以通过增强巨噬细胞的吞噬能力以显著的增强细胞的抗感染活性。然而，参与调节体内主动的炎症消退的小分子介质还有待于进一步筛选和鉴定，且调节体内促炎症消退的分子机制尚不清楚。
细胞的新陈代谢为生长、增殖提供了重要的物质和能量基础，并且参与代谢的酶类同样还广泛参与调节免疫细胞的分化发育、活化和信号转导等多种重要的免疫过程[Kelly等，Cell Res.,2015,25(7):771-784]。如研究发现在细菌感染过程中，胆固醇25-羟基氢化酶(Ch25h)在巨噬细胞中表达上调，从而抑制转录因子SREBP2活化以及胆固醇的合成，进而抑制炎性因子IL-1β的释放和线粒体损伤，从而控制过度的炎症反应[Dang等，Cell,2017.171(5):1057]。由此可见，细胞代谢的改变对于免疫应答的调节、机体稳态的维持具有重要的作用。再者，细胞内代谢分子在免疫细胞的分化和功能中发挥重要的作用。例如，谷氨酰胺分解产生的α-酮戊二酸(α-KG)可以促进巨噬细胞抑制性相关基因的表观重编程，并通过抑制Ikkβ激酶的活性从而抑制促炎型相关基因的表达，抑制了巨噬细胞的炎症反应[Liu等，Nat.Immunol.,2017,18(9):985]。由此可见，代谢酶的活性、小分子代谢产物的丰度对于调节免疫细胞的功能和效应发挥了至关重要的作用，但是参与调节巨噬细胞功能的代谢小分子种类还尚不明确。
油酸(Oleic acid)是一种单不饱和脂肪酸(Monounsaturated fatty acid，MUFA)，它是日常饮食中含量较为丰富的一种脂肪酸，约占整个脂肪成分的27％。并且，它在哺乳动物体内具有高度的一致性。油酸在体内由硬脂酰辅酶A去饱和酶1(Stearoyl-Coenzyme A desaturase 1，SCD1)催化C18:0形成。研究表明，SCD1以及它的代谢产物油酸在多种慢性代谢性疾病如非酒精性脂肪肝、高脂血症、II型糖尿病等的发展中其重要的作用。然而，油酸在感染引起的炎症反应中的功能尚不明确。
因此，本领域迫切需要研究和开发出一种可有效的调控巨噬细胞功能、抑制炎症反应、促进炎症消退的特异性且副作用极小的生物活性小分子。
发明内容
本公开正是提供了油酸类活性物质在有效的调控巨噬细胞功能、抑制炎症反应、促进炎症消退中的应用。本公开中还进一步提供了油酸类活性物质在预防和/或治疗炎性疾病和/或病症中的应用。本公开还提供了包含本公开油酸类活性物质的产品。
在本公开的第一方面中，提供了油酸类活性物质在制备用于预防、调控和/或治疗对象中炎症性疾病和/或征状的产品中的应用。在一些实施方式中，所述油酸类活性物质选自下组：具有式(I)或式(II)的化合物，其药学上可接受的盐或酯、偶合物、或其前体及其代谢酶：
其中，R＝H、C1-6烷基、CH3(CH2)n、NH2、被1-2个C1-6烷基取代的NH2，其中n为0～6的整数(例如1、2、3、4、5或6)。
在一些实施方式中，本公开的产品用于选自下组中的一种或多种：调控巨噬细胞相关的炎症反应；降低炎症因子(例如Il-6、Il-12、Ccl2、Ccl7、Cxcl1)的表达和/或分泌水平；和/或促使炎症反应消退。
在一些实施方式中，本公开的产品抑制巨噬细胞炎症因子的基因表达和蛋白的分泌和/或抑制炎性细胞(巨噬细胞、中性粒细胞、单核细胞等)在组织中的浸润。
在一些实施方式中，所述活性物质为选自下组中的一种或多种：
油酸、反式油酸或其酰胺化或酯化产物，例如油酸甘油酯、油酸酰胺、油酸乙醇胺、反式油酸甘油酯、反式油酸酰胺、反式油酸乙醇胺；
油酸或反式油酸的偶合物，例如油酸或反式油酸与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、兔血清白蛋白(RSA)、重组人白蛋白(rHSA)的偶合物；
油酸或反式油酸的代谢前体，其可任选地与代谢酶一起提供，例如硬脂酸以及可任选的硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)；
油酸或反式油酸的合成酶或其促进剂，例如硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)、其表达载体、转录和/或表达促进剂；
以上活性物质药学上可接受的盐或溶剂合物，例如通过化合物的羧基形成的无机盐或有机盐。
在一些实施方式中，所述活性物质为(Z)-9-十八(碳)烯酸(即油酸)，其化学式为C18H34O2、或其第1位的上酰胺化或酯化产生的系列油酸衍生物。
在一些实施方式中，所述活性物质为反式油酸或其第1位的上酰胺化或酯化产生的系列衍生物。
在一些实施方式中，油酸类活性物质为溶液、悬浮液、脂质体、微球、纳米颗粒形式，例如位于BSA水溶液中，所述水溶液中BSA的浓度为0.01mM～5mM，BSA与活性物质的摩尔比为1:1～1:15或1:2～1:10或其间的任意比值。
在一些实施方式中，所述对象选自：人、非人灵长类动物(如猴、猿、猩猩)、啮齿类动物(如大鼠、小鼠、豚鼠)、犬、猫、马、牛、羊。
在一些实施方式中，炎症性疾病和/或征状选自：感染诱发的炎症性疾病和/或征状、自身免疫性炎症性疾病、移植物排斥。
在一些实施方式中，炎症性疾病和/或征状选自：炎性反应、败血症、炎性肠病、急性呼吸窘迫症、感染引起的肺纤维化。
在一些实施方式中，本公开的产品促使巨噬细胞相关炎症反应消退。
在一些实施方式中，本公开的产品促使炎性反应、败血症、炎性肠病、急性呼吸窘迫症、感染引起的肺纤维化中的炎症消退。
在一些实施方式中，感染为选自下组中的一种或多种：细菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生虫感染、化学毒素引起的感染、物理因素引起的感染，优选所述细菌感染相关疾病和/或其症状为选自下组的一种或多种因细菌感染引起的疾病和/或症状：细菌感染后巨噬细胞的过度活化及炎症因子(例如Il-6、Il-12)的过量产生；败血症；内毒素性休克(例如由败血症导致)；急性呼吸窘迫症；器官(例如肺脏、脾脏、肾、肠道)的炎性损伤、纤维化；多器官功能衰竭；
在一些实施方式中，细菌感染和/或其症状是由选自下组的一种或多种细菌引起的：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌。
在一些实施方式中，病毒感染和/或其症状是由选自下组的一种或多种病毒引起的：水疱性口炎病毒、单纯疱疹病毒、冠状病毒(包括SARS、MERS、COVID-19病毒等)、流感病毒等。
在一些实施方式中，自身免疫性疾病选自：炎症性肠病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、哮喘、慢性肾炎、特发性肺纤维化。
在一些实施方式中，产品为药物组合物、药盒、保健品组合物。
在一些实施方式中，产品的形式适于如下给予方式：口服、胃肠道外(例如静脉注射、肌肉注射、皮下注射)、吸入(例如吸入式粉剂)、雾化、粘膜给予。在一些实施方式中，产品还包含选自下组的一种或多种物质：药学上可接受的载剂；其他抗炎类活性物质。
在一些实施方式中，所述其它活性物质选自：临床常用抗生素(包括β-内酰胺类、青霉素类和头孢菌素类、氨基糖甙类、四环素类、氯霉素类、大环内脂类、抗真菌抗生素、抗结核类抗生素)中的一种或多种；临床常用抗病毒药物(三环胺类、焦磷酸类、蛋白酶抑制药、核苷类药物及干扰素、反义寡核苷酸类等)中的一种或多种；临床常用免疫抑制剂(包括糖皮质激素、环磷酰胺、氯喹、环孢霉素A、雷公藤、中药制剂、抗TNF单克隆抗体)中的一种或多种。
在一些实施方式中，产品为注射用的粉针或水针制剂，注射的日剂量为1-10mg/kg患者体重。
在一些实施方式中，所述产品为口服液体制剂或固体制剂或鼻内吸入式粉剂，日剂量为1-10mg/kg患者体重。
在本公开的第二方面中，提供了一种用于预防、调控和/或治疗对象中炎症性疾病和/或征状的产品，其包含：
(A)具有式(I)或式(II)的化合物，其药学上可接受的盐或酯、偶合物、或其前体及其代谢酶：
其中，R＝H、C1-6烷基、CH3(CH2)n、NH2、被1-2个C1-6烷基取代的NH2，其中n为0～6的整数(例如1、2、3、4、5或6)；以及
(B)可任选的，药学上可接受的载体。
在一些实施方式中，所述产品具有如前文所述的特征。
在本公开的第三方面中，提供了一种预防、调控和/或治疗对象中炎症性疾病和/或征状的方法，所述方法包括：给予有需要的对象有效量的本申请的活性物质或产品。
在本公开的第四方面中，提供了一种调控巨噬细胞相关的炎症反应、降低炎症因子(例如Il-6、Il-12、Ccl2、Ccl7、Cxcl1)的表达和/或分泌水平、和/或促使炎症反应消退的方法，所述方法包括给予有需要的对象有效量的本申请的活性物质或产品。
在一些实施方式中，本公开的产品促使巨噬细胞相关炎症反应消退。
在一些实施方式中，本公开的产品促使炎性反应、败血症、炎性肠病、急性呼吸窘迫症、感染引起的肺纤维化中的炎症消退。
在一些实施方式中，所述感染为选自下组中的一种或多种：细菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生虫感染、化学毒素引起的感染、物理因素引起的感染。
在一些实施方式中，所述细菌感染相关疾病和/或症状为选自下组的一种或多种因细菌感染引起的疾病和/或症状：细菌感染后巨噬细胞的过度活化和炎症因子的过量产生；内毒素性休克或死亡；器官的炎症损伤；多器官功能衰竭。
在一些实施方式中，所述炎症因子为选自下组的一种或多种：Il-6、Il-12、Ccl2、Ccl7、Cxcl1，优选Il-6。
在一些实施方式中，所述器官选自：肺脏、脾脏、肾、肠道。
在本公开的第五方面中，提供了检测巨噬细胞内油酸水平的物质在制备用于诊断炎症性疾病状况、预后、风险评估和/或用于选择炎症性疾病治疗药物的产品中的应用。
在一些实施方式中，巨噬细胞内油酸水平较正常水平的提高提示炎症的存在。
在一些实施方式中，巨噬细胞内油酸水平较正常水平的提高提示该炎症性疾病处于感染后期，需促使炎症反应的消退。
在一些实施方式中，若已处于感染后期或巨噬细胞介导了过激的炎症反应而巨噬细胞内油酸水平偏低(例如低于正常水平或低于感染后期应有的平均油酸水平)，则选择油酸类活性物质或包含所述活性物质的药物来进行治疗。
在一些实施方式中，所述产品为检测试剂盒。
在本公开的第六方面中，提供了一种诊断炎症性疾病状况、预后、风险评估和/或用于选择炎症性疾病治疗药物的方法，所述方法包括检测巨噬细胞中的油酸水平。
在一些实施方式中，巨噬细胞内油酸水平较正常水平的提高提示炎症的存在。
在一些实施方式中，巨噬细胞内油酸水平较正常水平的提高提示该炎症性疾病处于感染后期，需促使炎症反应的消退。
在一些实施方式中，若已处于感染后期或巨噬细胞介导了过激的炎症反应而巨噬细胞内油酸水平偏低(例如低于正常水平或低于感染后期应有的平均油酸水平)，则选择油酸类活性物质或包含所述活性物质的药物来进行治疗。
本领域的技术人员可对前述的技术方案和技术特征进行任意组合而不脱离本公开的发明构思和保护范围。本公开的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
附图说明
下面结合附图对本公开作进一步说明，其中这些显示仅为了图示说明本公开的实施方案，而不是为了局限本公开的范围。
图1：脂多糖(LPS)诱导下，巨噬细胞内油酸(油酸，OA)含量的检测结果。
其中：
图1A显示巨噬细胞在LPS诱导的不同时间下，OA在细胞内含量变化的情况；
图1B显示在LPS诱导的不同时间下，OA(C18:1)与其上游代谢物硬脂酸(C18:0)之间比值的变化情况，表明OA在体内的合成逐渐增加；
图1C显示在LPS诱导的不同时间下，催化OA合成的酶SCD1的表达变化情况，即在LPS刺激下SCD1的表达从8小时开始逐渐升高。
图2：BSA-OA处理巨噬细胞可抑制LPS诱发的巨噬细胞炎症反应。其中：
图2A显示与对照组BSA相比较，BSA-OA处理组的巨噬细胞在LPS诱导下炎症细胞因子Il-6、Il-12p40的表达受到了极显著的抑制(n.s.,无显著性差异；UD，未检出)；
图2B显示与对照组BSA相比较，BSA-OA处理组的巨噬细胞在LPS诱导下炎症细胞因子Il-6、Il-12的分泌受到了极显著的抑制(“*”，P<0.05,“**”,P<0.01)。
图3：BSA-OA治疗可促进小鼠腹腔注射LPS诱导的败血症中的炎症消退。
其中：
图3A显示小鼠在腹腔注射LPS不同时间下，血清中炎症因子Il-6的分泌水平，与对照BSA治疗组相比较，BSA-OA治疗组的小鼠血清中的Il-6更早的恢复到初始水平，表明BSA-OA具有显著促进腹腔注射LPS诱导败血症的炎症消退的功能；
图3B显示小鼠在腹腔注射LPS不同时间下，肺脏组织的苏木素-伊红(H&E)染色情况，与对照BSA治疗组相比较，BSA-OA治疗组有效的清除了腹腔LPS注射16小时后引起的炎性细胞在肺脏中的浸润以及肺间质破坏(比例尺，200μm)。
图4：BSA-OA治疗可减轻葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导的小鼠肠道炎症症状。其中：
图4A显示在DSS诱导的小鼠肠炎模型中，与对照BSA治疗组相比较，OA治疗可有效的缓解DSS引起的小鼠体重减轻；
图4B显示在DSS诱导的小鼠肠炎模型中，与对照BSA治疗组相比较，BSA-OA治疗可有效的缓解DSS引起的小鼠结肠变短(B)的症状(“*”，P<0.05,“**”,P<0.01)。
图5：小鼠在鼻内注射LPS引起的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)中的体温监测。PBS为正常小鼠对照组，与之相比较，LPS气管注射后小鼠体温显著下降，而在该组中，相较于对照BSA治疗组，BSA-OA治疗组小鼠在LPS鼻内注射48小时后，体温有效的恢复到正常水平(“*”，P<0.05,“**”,P<0.01)。
图6：LPS引起的ARDS模型中，小鼠肺泡灌洗液(BALF)和肺脏组织中炎性细胞比例的分析。其中：
图6A显示LPS鼻内注射96小时后，与对照BSA治疗组相比较，BSA-OA治疗组有效的减少了炎性细胞如单核细胞(标记为Cd11b+Ly6chigh)和中性粒细胞(标记为Cd11b+Ly6cmid)在肺泡灌洗液中的比例；
图6B显示BSA治疗组和BSA-OA治疗组中每只小鼠的BALF中单核细胞和中性粒细胞比例的统计图；
图6C显示LPS鼻内注射96小时后，与对照BSA治疗组相比较，BSA-OA治疗组有效的减少了炎性细胞如单核细胞(标记为Cd11b+Ly6chigh)和中性粒细胞(标记为Cd11b+Ly6cmid)在肺脏组织中的比例；
图6D显示对照BSA治疗组和BSA-OA治疗组中每只小鼠的肺脏组织中单核细胞和中性粒细胞比例的统计图(“*”，P<0.05,“**”,P<0.01，“***”,P<0.001)。
图7：LPS引起的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型中，BSA-OA治疗可有效的消退小鼠肺脏中的炎症反应。其中：
图7A显示在ARDS模型中，与对照BSA治疗组相比，BSA-OA治疗组小鼠肺脏组织中炎症细胞因子Il-6的表达水平显著降低；
图7B显示，在该模型中，与对照BSA治疗组相比，BSA-OA治疗组小鼠血清中炎症因子Il-6的分泌水平显著减少；
图7C显示，在该模型中，与对照BSA治疗组相比，BSA-OA治疗组小鼠肺泡灌洗液中的炎症因子Il-6的分泌水平显著减少。
图8：ARDS模型中的小鼠肺脏组织的H&E染色情况，与对照BSA治疗组相比较，BSA-OA治疗组有效的清除了LPS气管注射96小时后引起的炎性细胞在肺脏中的浸润(比例尺100μm)。
图9：在博来霉素(Bleomycin，缩写Bleo)诱导的小鼠肺脏纤维化模型中，小鼠肺脏组织的染色情况。其中：
图9A显示在该肺纤维化模型中，肺脏组织的H&E染色情况，与对照BSA组相比较，BSA-OA预防组有效的清除了博来霉素鼻内注射所引起的炎性细胞在肺脏中的浸润；
图9B显示在该模型中，肺脏组织的马松三色(Masson’s trichrome)染色情况，与对照BSA组相比较，BSA-OA预防组有效的抑制了博来霉素鼻内注射所引起肺脏纤维化的病变。
图10：在博来霉素引起的肺纤维化模型中，使用BSA-OA预防可有效的消退小鼠肺脏中的炎症反应。其中：
图10A显示小鼠肺脏组织中炎性细胞比例的分析。与对照BSA组相比较，使用BSA-OA预防有效的减少了炎性细胞如单核细胞(标记为Cd11b+Ly6chigh)和中性粒细胞(标记为Cd11b+Ly6cmid)在肺脏组织中的比例；
图10B显示在该模型中小鼠肺脏组织中炎症因子和趋化因子的表达分析，与对照BSA治疗组相比，BSA-OA预防组小鼠肺脏组织中炎症细胞因子Il-6和趋化因子Ccl2、Ccl7、Cxcl1的表达水平显著降低(“*”，P<0.05,“**”,P<0.01，“***”,P<0.001)。
图11：在博来霉素引起的肺纤维化模型中，BSA-OA预防可有效的抑制小鼠肺脏的纤维化病变。其中：
图11A显示小鼠肺脏组织中纤维化标志基因α-SMA、Timp1和Spp1的表达水平，与BSA对照组相比较，BSA-OA预防组小鼠的肺脏中上述基因的表达显著降低；
图11B显示纤维化标志基因α-SMA的蛋白水平，与对照BSA治疗组相比较，使用BSA-OA预防可有效的减少肺脏中α-SMA的蛋白水平；
图11C显示小鼠肺脏组织中羟脯氨酸检测，与对照BSA组相比较，BSA-OA预防组小鼠肺脏中的羟脯氨酸水平显著降低。
具体实施方式
近年来的研究表明，代谢调控与机体的免疫应答、炎症反应密切相关，而代谢紊乱是导致多种免疫相关疾病、炎症性疾病发生和发展的关键因素之一。因为，代谢调控网络属于基因调控网络的下游，所以与基因调节的多样性相比，代谢层面的多样性小。因此，针对代谢通路开发新型的治疗药物，是改善和提高炎症性疾病的治疗效果的新思路和策略，具有广阔的应用前景。
本发明人通过广泛而深入的研究和动物模型实验，发现油酸类活性物质在促进巨噬细胞炎症反应消退发挥重要的作用。在感染性疾病中，OA能有效的调控巨噬细胞活性、抑制感染后所导致的巨噬细胞的活化、炎症因子的产生、缓解器官的病变、改善器官功能状态。
本公开从小鼠巨噬细胞的代谢组学中筛选出了在巨噬细胞感染后期呈现高丰度的一种单不饱和脂肪酸分子油酸(Oleic acid)，化学式C18H34O2(或CH3(CH2)7CH＝CH(CH2)7COOH)。在初始状态下，油酸在巨噬细胞内的水平较低，而在感染后尤其是感染后期，油酸的水平显著升高。感染后期正是巨噬细胞促进炎症消退的主要时期。在巨噬细胞感染后的活化过程中，外源性添加油酸-BSA偶合物可以显著的降低感染所引起的巨噬细胞内炎症因子的表达和分泌。使用油酸类似物治疗患有感染所引起的炎症性疾病小鼠，可有效的抑制炎症细胞在组织中的浸润，抑制炎症因子的产生，显著的缓解炎症引起的组织损伤。实验进一步证实了在油酸及其类似物具有显著的预防和/或治疗炎症性疾病(例如感染所引起的炎症性疾病)的功能。
具体而言，本公开针对新型代谢小分子OA及其衍生物(例如偶联物)，对免疫细胞中巨噬细胞活化及炎症因子的产生进行了研究，并且验证了应用该分子对败血症、实验性肠炎、急性呼吸窘迫综合征、炎症引起的肺纤维化的治疗和保护作用。研究结果证明：
1、在培养的巨噬细胞中，外源性添加OA可以有效的抑制巨噬细胞的活化，在LPS刺激后炎症因子的表达和产生显著降低；
2、在LPS诱导的小鼠败血症模型中，使用OA注射治疗，可以缩短小鼠炎症消退的时间，抑制血清中炎症因子的产生，抑制败血症导致的肺脏损伤；
3、在DSS诱导的小鼠肠炎模型中，使用OA治疗可以显著缓解DSS引起的结肠变短，阻止由肠炎产生的体重减少；
4、在LPS诱导的急性呼吸窘迫综合征模型中，使用OA治疗可以有效抑制肺脏组织和肺泡灌洗液中炎性细胞的浸润，抑制血清和肺泡灌洗液中炎症因子的产生，抑制肺脏的损伤；
5、在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中，使用OA可以显著的抑制肺脏的纤维化，减少肺脏羟脯氨酸(机体胶原蛋白的主要成分之一，其含量可作为衡量胶原纤维量从而作为肺纤维化指标来判断纤维化程度)的产生，抑制肺脏组织中炎性细胞的浸润和炎性细胞因子的表达。
通过上述研究工作，证实了使用OA类活性物质可预防和/或治疗炎症性疾病(如败血症、急性呼吸窘迫综合征、炎症性肠炎、炎症引起的肺纤维化等)，包括调控巨噬细胞活化和/或炎症因子的水平，从而提供了预防和/或治疗炎性疾病(尤其是感染性疾病)的产品、方法和策略。
此外，油酸含量的检测可应用于炎症性相关疾病中功能的检测和风险评估，对炎症性疾病的诊断、治疗和预后等给出提示或指导信息。针对油酸在体内含量的调控，包括干扰抑制和高表达其催化酶SCD1、给药或注射油酸等一切影响油酸含量的干预手段，可应用于炎症相关疾病的治疗。
本公开可以辅助完成调控巨噬细胞的活化和炎症反应，通过实现对免疫应答的正向或负向的调控，发挥抑制自身免疫性疾病进展或抗肿瘤逃逸转移的效果，从而达到治疗疾病的目的。在此基础上，完成了本公开。
油酸类活性物质
如本文所用，术语“活性物质”或“本公开的活性物质”或“油酸类活性物质”可互换使用，是指具有式(I)或式(II)的化合物，其药学上可接受的盐或酯、偶合物、或其前体及其代谢酶。应理解，该术语还包括如上化合物的几何同分异构体，它的光学活性形式如对映异构体、非对映异构体，以及它的外消旋体形式，及其药学可接受的盐和药学活性衍生物。
如本文所用，“C1-C6烷基”指具有1～6个碳原子的烷基。C1-C6烷基的例子包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基等等。
本公开的活性物质包括但不限于选自下组中的一种或多种：油酸(即(Z)-9-十八(碳)烯酸即油酸，化学式为C18H34O2，或CH3(CH2)7CH＝CH(CH2)7COOH))、反式油酸或其酰胺化或酯化产物(例如第1位的上酰胺化、酯化的系列油酸衍生物)，例如油酸甘油酯、油酸酰胺、油酸乙醇胺、反式油酸甘油酯、反式油酸酰胺、反式油酸乙醇胺；油酸或反式油酸的偶合物，例如油酸或反式油酸与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、重组人白蛋白(rHSA)偶合物；油酸或反式油酸的代谢前体，其可任选地与代谢酶一起提供，例如硬脂酸以及可任选的硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)；油酸或反式油酸的合成酶或其促进剂，例如硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)、其表达载体、转录和/或表达促进剂；以上活性物质药学上可接受的盐，例如通过化合物的羧基形成的无机盐或有机盐。本公开的活性物质还可包括如上化合物的溶剂合物，例如水合物。
“药学可接受的盐”指本申请活性化合物的盐。所述盐的例子包括，但不限于，与诸如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐以及氨之类的有机或无机碱，或与有机的伯、仲或叔烷基胺反应形成的碱加成盐，所述金属阳离子为，例如，选自碱金属(钠、钾或锂)、碱土金属(例如，钙或镁)。甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、吗啉胺盐、N-甲基-D-葡萄糖胺、N,N’-二(苯甲基)-1,2-乙二胺、氨丁三醇(tromethamine)、乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基吗啉(morpholine)、普鲁卡因、哌啶、哌嗪、精氨酸、胆碱、赖氨酸等衍生的胺盐预计在本公开范围内。
如本文所用，术语“油酸偶合物”或“油酸复合物”可互换使用，是指包含偶合或包封或包覆的载体部分的油酸活性物质。可用于本公开中的油酸偶合物包括但不限于与如下物质通过强或弱的物理和/或化学方式(例如H键、共价键、离子键等)形成的偶合物：白蛋白(如牛血清白蛋白、人血清白蛋白、重组人白蛋白(rHSA))或修饰衍生物(例如，如张建军等，白蛋白作为药物载体的研究，化学进展，Vol.23，No.8，1747-1754页，2011年8月)。本公开的油酸类活性物质可采用各种形式，例如溶液、悬浮液、纳米粒、微球、脂质体等。例如，可将油酸溶解于BSA水溶液中，所述水溶液中BSA的浓度为0.01mM～5mM，BSA与活性物质的摩尔比为1:1～1:15或1:2～1:10或其间的任意比值。
血清白蛋白(BSA)由于其本身的可生物降解、无毒、无抗原性、生物利用度高等特点，已成为生物医药领域中广泛使用的药物载体。研究表明OA在正常生理条件下能够与BSA结合，在体内转运，并且游离的OA从脂肪细胞释放到血液中的这一运输过程也依赖于白蛋白这一载体。通过使OA与白蛋白组合，可以显著的提高其在水中的溶解性[Dole,V.P.1956.J.Clin.Invest.35:150]。通过x射线晶体衍射研究发现并证实在白蛋白中有多个脂肪酸的结合位点，并且这些结合位点在中/长链脂肪酸是高度保守的[Fujiwara S,Amisaki T.Biochim Biophys Acta.2013；1830(12):5427-5434.]。由于OA水溶性低，利用BSA与OA在体外组合是提高OA水溶性的有效手段，已广泛的应用于细胞学和动物模型实验。
“衍生物”或“药学活性衍生物”指施用于对象时能直接或间接地提供本文所揭示的活性的化合物。用语“间接”还包括通过内源性酶或外加的酶或代谢可转化成药物活性形式的药物前体。所述药物前体包括活性药物化合物本身和化学掩蔽基团。所述掩蔽基团可以是酯的部分(例如，通过掩蔽羧酸基或羟基部分得到)。
炎性疾病或病症
炎性疾病的特征为炎症和组织破坏，或它们的组合作用。“炎性疾病”包括免疫介导的炎性过程，其中引发过程或免疫应答的靶涉及非自身抗原，包括同种异体抗原、异种抗原、病毒抗原、细菌抗原、未知抗原或过敏原。
出于本公开的目的，术语“炎性疾病”包括“自身免疫疾病”。本文使用的术语“自身免疫”一般理解为包括涉及“自身”抗原的免疫介导的炎性过程。在自身免疫疾病中，自身抗原引发了宿主的免疫应答。
本公开也包括治疗与组织移植排异相关的炎症。“移植排异”或“移植物排异”指宿主产生的抗移植物，包括HLA抗原、血型抗原等的免疫应答。本公开也可用于治疗移植物抗宿主病，例如与骨髓移植有关的疾病。在这种移植物抗宿主病中，供体骨髓含有淋巴细胞和将成熟成为淋巴细胞的细胞。供体的淋巴细胞将受者的抗原认作非自身抗原并产生炎性免疫应答。因此，本文所用的“移植物抗宿主病”或“移植物抗宿主反应”指其中供体淋巴细胞与宿主抗原反应的T细胞介导的免疫应答。
本文中术语“治疗”包括治愈、治疗、缓解、减轻、改变、补救、改善、提高或影响自身免疫疾病和/或炎性疾病、自身免疫疾病和/或炎性疾病相关的任何症状、或患自身免疫疾病和/或炎性疾病的易感性。
可利用以下筛选技术来评价临床应答：例如磁共振成像(MRI)扫描、x-射线照相成像、计算机化断层显像(CT)扫描、流式细胞术或荧光激活细胞分选(FACS)分析、组织学、总病理学和血液化学，包括但不限于用ELISA、RIA、层析等检测发生的变化。
药物、药物组合物或试剂盒
本公开还提供了一种药物、药物组合物或试剂盒，其中含有有效量的本公开的油酸类活性物质，以及药学上或免疫学上可接受的载体。
在较佳的实施方案中，所述药物组合物可用于预防和/或治疗与过度炎性反应相关的疾病(例如感染性炎症、过敏性疾病、自身免疫性疾病、移植排斥反应)、感染导致的慢性炎症性疾病和/或其征状。例如，本公开的药物组合物可用于预防或治疗与现有技术中已知可治疗或预防细菌感染性疾病，例如细菌感染后炎症因子的过量产生；内毒素性休克或死亡；器官的炎性损伤；多器官功能衰竭。
如本文所用，术语“含有”或“包括”包括了“包含”、“基本上由……构成”、和“由……构成”。如本文所用，术语“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。如本文所用，术语“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在《雷明顿药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。
在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地，pH约为6-8。
本公开的产品中的活性物质占组合物总重量的0.001～99.9wt％；优选为组合物总重量的1～95wt％，较优选为5～90wt％，更优选10～80wt％。余量为药学上可接受的载体以及其它添加剂等物质。
如本文所用，术语“单位剂型”是指为了服用方便，将本公开的组合物制备成单次服用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如片剂)、液体剂、胶囊剂、缓释剂、喷雾剂等。
在本公开的另一优选实施方式中，所述组合物为单位剂型或多剂型，且其中活性物质的含量为0.01～2000mg/剂，优选0.1～1500mg/剂，更优选1～1000mg/剂。在本公开的另一个优选例中，每天施用1～6剂本公开的组合物，优选施用1～3剂；最优选的，每天服用的剂量为1剂。
应理解，所用活性物质的有效剂量可随待施用或治疗的对象的严重程度而变化。具体情况根据对象的个体情况(例如对象体重、年龄、身体状况、所需达到的效果)来决定，这在熟练医师可以判断的范围内。
本公开的组合物，可以为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液)或其它合适的形状。给药途径可采用但不限于：口服、胃肠道外(例如静脉注射、肌肉注射、皮下注射)、吸入(例如吸入式粉剂)、雾化、粘膜给予。
此外，本公开的产品中还可含有用于改善和治疗炎性疾病的其它活性物质，所述的其它活性物质选自下组：临床常用抗生素(包括β-内酰胺类(青霉素类和头孢菌素类)、氨基糖甙类、四环素类、氯霉素类、大环内脂类、抗真菌抗生素、抗结核类抗生素)的一种或多种。
本文中提供的所有数值范围旨在清楚地包括落在范围端点之间的所有数值及它们之间的数值范围。可对本公开提到的特征或实施例提到的特征进行组合。本说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
如本文所用，“含有”、“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由……构成”、“基本上由……构成”、和“由……构成”；“主要由……构成”、“基本上由……构成”和“由……构成”属于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。
本公开的主要优点包括但不限于：
1、证明了油酸的水平升高对于促进巨噬细胞炎症消退是必需的，在巨噬细胞中添加油酸后能够实现对巨噬细胞炎症反应的抑制；
2、为炎症相关性疾病的诊断治疗和预后提供了简便而有效的工具和方法；
3、本公开可应用于调控巨噬细胞的活化和/或功能，和/或进一步用于调控机体免疫稳态、防治感染引起的炎症性疾病、自身免疫性疾病等、免疫干预方案选择和/或预后评估，具有广泛的应用前景；
4.油酸类活性物质，尤其是油酸，是体内存在的天然物质，具有安全性高的特性。
实施例
下面结合具体实施例，进一步阐述本公开。应理解，这些实施例仅用于说明本公开而不用于限制本公开的范围。本领域技术人员可对本公开做出适当的修改、变动，这些修改和变动都在本公开的范围之内。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，可采用本领域中的常规方法，例如参考《分子克隆实验指南》(第三版，纽约，冷泉港实验室出版社，New York：Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989)或按照供应商所建议的条件。DNA的测序方法为本领域常规的方法，也可由商业公司提供测试。
除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本公开方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1.脂多糖(LPS)诱导下的巨噬细胞中油酸(OA)含量的变化
取8周龄雄性C57BL/6小鼠(购自Sipper BK公司)肱骨和股骨骨髓细胞，以含重组M-CSF(10ng/ml，购自Peprotech公司)的RPMI 1640培养基培养5天，诱导分化形成巨噬细胞。以100ng/ml LPS(又称脂多糖，为TLR4的配体，购自Sigma公司)处理上述巨噬细胞(1×106个细胞/ml)4小时、24小时后，收集细胞。将细胞样品送至麦特绘谱公司进行脂肪酸质谱检测分析。
分析结果如图1A和1B所示。结果显示，在LPS诱导下，巨噬细胞中OA逐步提高，且OA(C18:1)与其上游代谢物硬脂酸(C18:0)之间比值的也逐步提高。以上结果表明，表明LPS诱导下，巨噬细胞中OA的合成和水平逐渐增加。
还进一步研究了LPS诱导后SCD1基因的表达水平变化。取8周龄雄性C57BL/6小鼠(购自Sipper BK公司)肱骨和股骨骨髓细胞，以含重组M-CSF(10ng/ml，购自Peprotech公司)的RPMI 1640培养基培养5天，诱导分化形成巨噬细胞。以100ng/ml LPS(购自Sigma公司)处理上述巨噬细胞(1×106个细胞/ml)2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、24小时后，收集细胞，使用Trizol法提取细胞的RNA(Trizol试剂购自Invitrogen公司)，分析SCD1基因的表达水平。
结果如图1C所示。结果显示：在LPS诱导的不同时间下，SCD1基因表达水平大幅提高，在第16和24小时时甚至于达到了极显著提高。由于SCD1基因是OA合成中的关键酶，上述结果表明LPS诱导的巨噬细胞中OA酶促合成增加。
以上结果提示OA与巨噬细胞参与的炎症反应密切相关。
实施例2.BSA-OA对巨噬细胞活化及炎症因子产生的抑制作用
取8周龄雄性C57BL/6小鼠(购自购自Sipper BK公司)肱骨和股骨骨髓细胞，以含重组M-CSF(10ng/ml，购自Peprotech公司)的RPMI 1640培养基培养5天，诱导分化形成巨噬细胞。
油酸-白蛋白(BSA-OA)储液的制备方法如下：配制BSA(购自Sigma公司，货号B2064)水溶液(浓度2.5mM)并在37℃下进行预热，向该BSA溶液中缓缓加入摩尔浓度为其1/6的OA(购自Sigma公司，货号O1383)，在37℃下震荡孵育4小时直至溶液变澄清，即为BSA-OA储液，可用于后续的细胞和小鼠实验。
使用BSA-OA及对照物BSA预处理如上所得的小鼠巨噬细胞1小时，处理浓度为100μM。接着，以100ng/ml LPS(购自Sigma公司)处理上述巨噬细胞(1×106个细胞/ml)4小时、16小时后，收集细胞和培养上清液，细胞采用Trizol法提取RNA(Trizol试剂购自Invitrogen公司)，检测炎症因子Il-6、Il-12p40的基因表达水平，培养上清液用CBA检测试剂盒(购自BD pharmingen公司)检测炎症因子的分泌水平。
炎症因子的表达水平和分泌水平的结果分别如图2A和图2B所示。
结果显示：BSA-OA可以显著抑制脂多糖(LPS)诱导的炎症因子Il-6和Il-12的基因表达和分泌。表明OA可以预防并抑制巨噬细胞的炎症反应。
实施例3：BSA-OA治疗促进败血症小鼠的炎症消退
构建败血症小鼠模型，方法如下：小鼠(8周雄性，SPF级C57BL6小鼠，购自SipperBK公司)腹腔内注射LPS(2.5mg/kg)，1小时后腹腔内注射BSA-OA(4mg/kg，实施例2中的储液)进行治疗。分别在4小时、8小时、12小时、16小时、24小时眼球取血法收集小鼠血清，用CBA法(购自BD pharmingen公司)检测血清中炎症因子Il-6的产生，并在16小时和24小时解剖小鼠，收取其肺脏组织，切片做H&E染色，观察肺脏的显微病理改变：如炎症细胞浸润、肺间质损伤等。
CBA分析小鼠血清中炎症因子Il-6的水平结果如图3A所示。
结果显示：BSA-OA治疗的小鼠血清中Il-6的水平在LPS腹腔注射8小时后显著降低，并于16小时恢复到初始水平，其降低幅度明显大于对照小鼠，且恢复到初始水平的时间远早于对照小鼠Il-6恢复到初始水平的时间(16小时vs.24小时)。该结果提示：BAS-OA处理可有效缩短败血症小鼠中炎症因子Il-6水平的恢复，从而可缩短炎症消退的时间。
小鼠肺脏纤维病理观察结果如图3B所示。
结果显示：腹腔注射BSA-OA治疗，可以明显的降低肺脏组织内炎性细胞浸润和肺间质破坏。该结果表明：OA可以抑制败血症所导致的肺脏损伤。
实施例4：腹腔注射BSA-OA的治疗可抑制DSS诱导的小鼠肠炎症状
构建葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导的小鼠肠炎模型，方法如下：在C57BL/6小鼠(雄性，8周，购自Sipper BK公司，每组10只)饮用水中添加3％(质量体积比)的DSS(购自Millipore公司)，连续喂养7天，分别在喂养的第1、3、5天腹腔注射BSA-OA(4mg/kg)，进行OA(购自sigma)治疗，每天记录小鼠体重，并在第7天解剖小鼠，测量小鼠结肠的长度。
小鼠体重和结肠长度检测结果如图4A和4B所示。
结果显示：BSA-OA治疗的小鼠体重减少的现象得到明显的改善(图4A)，且结肠的长度也明显长于对照治疗的小鼠(图4B)。该结果表明：OA治疗可以抑制DSS诱导的肠炎症状。
实施例5：油酸鼻内给药治疗LPS诱导的急性呼吸窘迫综合征
构建小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型，方法如下：8周龄的雄性C57BL/6小鼠(购自Sipper BK公司)经过2％的异氟烷麻醉，接着鼻内注射LPS(8μg/kg)，以鼻内注射相同体积的PBS缓冲液作为ARDS模型的对照组；1小时后，使用上述相同的方法(即鼻内注射)给予BSA-OA(6mg/kg)进行治疗。每隔24小时对小鼠进行腹部体温测量，同时分别在第48小时、第96小时眼球取血法收集小鼠血清，解剖小鼠，收集小鼠的肺泡灌洗液(BALF)和肺脏组织。
小鼠血清和BALF上清用于CBA分析炎症因子的水平，BALF和部分肺脏组织用于流式细胞术分析炎性细胞的比例，部分肺脏组织用于RNA的提取并检测炎症因子的表达水平，部分肺脏组织进行组织切片制备，进行H&E染色，观察肺脏的纤维病理改变。
小鼠体温测量如图5所示。
结果显示：相对于模型对照组(PBS组)，LPS诱导后，24小时时显著使小鼠体温下降(PBS组中的BSA治疗组v.s.LPS模型组中的BSA治疗组)，而使用BSA-OA治疗的小鼠体温在48小时后恢复到初始水平，BSA对照治疗组不能在48小时体温恢复到初始水平，且在对照组小鼠(PBS组)中，BSA-OA治疗的小鼠体温没有明显变化。
流式细胞术分析BALF和肺脏组织中炎性细胞比例的结果如图6所示。
结果显示：BSA-OA治疗可显著的抑制炎性细胞如单核细胞(标记为Cd11b+Ly6chigh)和中性粒细胞(标记为Cd11b+Ly6cmid)在BALF(图6A和6B)和肺脏(图6C和6D)中的比例，且在对照组小鼠(PBS组)中，BSA-OA治疗不影响以上炎性细胞在小鼠BALF和肺泡灌洗液中的比例。
炎症因子的表达分析结果和CBA检测血清、BALF中炎症因子分泌的分析结果图7所示。
结果显示：BSA-OA治疗48小时后可以显著的抑制急性呼吸窘迫综合征下的炎症因子Il-6在肺脏组织中的表达(图7A)，同时BSA-OA治疗48小时和96小时也可以显著抑制小鼠血清(图7B)和BALF(图7C)中炎症因子Il-6的产生。
肺脏组织H&E染色的分析结果如图8所示。
结果显示：BSA-OA治疗可以明显的降低肺脏组织内炎性细胞浸润和肺间质破坏。
上述结果表明：OA可以有效的抑制急性呼吸窘迫综合征的症状，包括促进小鼠体温恢复到正常水平，抑制炎性细胞在肺脏组织中的浸润，抑制炎性细胞因子的产生，抑制急性呼吸窘迫综合征的肺脏损伤。此外，OA治疗对小鼠没有明显的副作用。
实施例6：BSA-OA鼻内给药预防博来霉素(Bleomycin)诱导的肺脏纤维化
构建博来霉素(Bleomycin)诱导的小鼠肺纤维化模型，方法如下：将8周龄的雄性C57BL/6小鼠(购自Sipper BK公司)经过2％的异氟烷麻醉，接着鼻内注射博来霉素(5mg/kg)(购自Selleck公司)，鼻内注射相同体积的PBS缓冲液作为肺纤维化模型的对照组；在构建博来霉素诱导的肺脏纤维化小鼠的前6小时，对小鼠进行鼻内注射BSA-OA或其对照药物BSA进行肺脏纤维化的预防，每只小鼠鼻内注射(6mg/kg)。
分别在第3天、7天、14天、21天检测BSA-OA预防肺脏纤维化进程的效果，眼球取血法收集小鼠血清，收集小鼠的肺脏组织。小鼠血清用于CBA分析炎症因子的水平，部分肺脏组织用于流式细胞术分析炎性细胞的比例，部分肺脏组织用于RNA的提取并检测炎症因子、肺脏纤维化标志基因表达水平，部分肺脏组织进行总蛋白的提取并检测肺纤维化的标志蛋白水平，部分肺脏组织进行羟脯氨酸检测，部分肺脏组织进行组织切片制备，进行H&E染色和马松三色(Masson’s trichrome)染色，观察肺脏组织的病理改变，如炎性细胞浸润、肺间质损伤、纤维化等。
小鼠肺脏纤维病理观察结果如图9所示。
结果显示：使用BSA-OA预防博来霉素诱导的肺脏纤维化小鼠21天后，可以有效的抑制炎性细胞在肺脏中的浸润和肺间质损伤(图9A)，有效的抑制肺脏的纤维化病变(图9B)。
流式细胞术分析肺脏组织中炎性细胞比例以及肺脏组织中炎症因子表达的分析结果如图10所示。
结果显示：在BSA-OA预防组的小鼠中，博来霉素诱导的第3天肺脏组织中的炎症细胞的浸润便显著低于对照组(BSA组)，并且这种炎性细胞浸润的减少一直持续到博来霉素诱导的第21天(图10A)。同时，BSA-OA预防也可以显著的抑制炎症因子Il-6，趋化因子Cxcl1、Ccl2、Ccl7在肺脏组织中的表达(图10B)。
肺脏组织中纤维化标志物的基因水平和蛋白水平的检测以及羟脯氨酸含量的检测结果如图11所示。
结果显示：BSA-OA预防可显著的抑制肺脏纤维化基因如α-SMA、Timp1、Spp1在肺脏中的表达(图11A)，也可显著的抑制肺脏中α-SMA的蛋白水平(图11B)。此外，BSA-OA预防组小鼠的肺脏组织中羟脯氨酸的含量也显著的低于对照组(BSA组)(图11C)。
以上结果表明：OA可以有效的抑制博来霉素诱导炎症所引起的肺纤维化，包括有效的抑制炎症细胞在肺脏中的浸润，抑制炎症细胞因子的表达、纤维化标志基因的表达以及显著的抑制肺脏纤维化病变。并且，OA鼻内注射对小鼠没有明显的副作用。
在本公开提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本公开的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本公开作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
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