一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物及其制备方法和应用 (Composition containing cycloolivil 4' -glucoside and preparation method and application thereof ) 是由 肖军平 陈梁 毛金娣 刘胜 张小梅 旷春兰 张洪军 于 2021-08-31 设计创作，主要内容包括：本发明属于医药技术领域,具体涉及一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物及其制备方法和应用。所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物,包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷、丁香素、β-萘黄酮、槲皮素。该组合物制备方法简单,能够有效提高组合物治疗颈椎病的效果,同时,药物的利用率较高,在有效降低成本的同时减少药物副作用。(The invention belongs to the technical field of medicines, and particularly relates to a composition containing cycloolivil 4' -glucoside, and a preparation method and application thereof. The composition containing cycloolivil 4' -glucoside comprises the following components: cycloolivil 4' -glucoside, olivil diglycoside, syringin, beta-naphthalene flavone, and quercetin. The preparation method of the composition is simple, the effect of the composition in treating cervical spondylosis can be effectively improved, meanwhile, the utilization rate of the medicine is high, the cost is effectively reduced, and meanwhile, the side effects of the medicine are reduced.)
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
颈椎病又称颈椎综合征，是颈椎骨关节炎、增生性颈椎炎、颈神经根综合征、颈椎间盘脱出症的总称,是一种以退行性病理改变为基础的疾患。主要由于颈椎长期劳损、骨质增生，或椎间盘脱出、韧带增厚，致使颈椎脊髓、神经根或椎动脉受压，出现一系列功能障碍的临床综合征。表现为椎节失稳、松动；髓核突出或脱出；骨刺形成；韧带肥厚和继发的椎管狭窄等，刺激或压迫了邻近的神经根、脊髓、椎动脉及颈部交感神经等组织，引起一系列症状和体征。
现有技术中治疗颈椎病的多以消炎镇痛的药物为主；相关药物多种多样，如中国专利申请CN01109396.X公开了一种新的治疗颈椎病的药物，它是以丹参、白术、白芍、木瓜、杜仲、西红花、羌活、葛根为原料，根据每味中药的不同药性，分别予以粉碎、水煎提取、烘干、消毒等预处理，经筛选按比例配制，制成的丸剂；临床检验，疗效显著。
中国专利申请CN201710535200.0公开一种治疗腰颈椎病的中药配方，包括：枸杞子20～25份、蝮蛇10～15份、黄精8～15份、山药20～30份，桑葚10～15份、肉桂6～10份、茯苓10～20份。该配方中的各味药的最佳重量份数比：枸杞子24份、蝮蛇12份、黄精12份、山药24份、桑葚12份、肉桂8份、茯苓15份。该中药配方适用于下元亏损、督脉不通的患者，此类患者卧床休息后基本无症状，晨起较为舒适，仅在午后或活动劳累后出现酸麻胀痛，服用此配方药见效快，且效果明显。
现有技术中的药剂多数原料种类较多，虽然起到一定的缓解颈椎病的病症的效果，但并没有有效提高药物的利用效率，疗效仍然有待提高，同时原料间的相互作用不明确，患者使用过程中，副作用较大。
本发明的目的在于提供一种治疗颈椎病的组合物，能够有效提高组合物治疗颈椎病的效果，同时，药物的利用率较高，在有效降低成本的同时减少药物副作用。
发明内容
为克服以上技术问题，本发明提供了一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，具有较好的治疗颈椎病的功效，其制备方法简单，成本低，有助于推广应用。
为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：
一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷、丁香素、β-萘黄酮、槲皮素。
优选地，按照重量份数计，所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷5-10份、橄榄素二糖苷1-10份、丁香素5-15份、β-萘黄酮1-10份、槲皮素1-5份。
优选地，按照重量份数计，所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷5-8份、橄榄素二糖苷1-5份、丁香素5-7份、β-萘黄酮2-4份、槲皮素2-3份。
本发明的另一目的在于提供所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)在蒸馏水中加入表面活性剂A，制成水相溶剂；
(2)在加热的条件下，将环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷、丁香素依次溶解于水相溶剂中，搅拌形成溶液1；
(3)在溶液1中加入表面活性剂B后，再加入β-萘黄酮、槲皮素，形成溶液2；搅拌，即可制得所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物。
优选地，步骤(1)中，所述表面活性剂A为辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷、十二烷基-β-D-吡喃麦芽糖苷和N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺中的任一种或多种。
优选地，步骤(1)中，所述表面活性剂A为质量比为1-3：1的辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷和N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺的混合物。
优选地，所述表面活性剂A的加入量为蒸馏水质量的0.1-0.5％。
优选地，所述蒸馏水的加入量为环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷和丁香素总质量的2-3倍。
优选地，表面活性剂B为茶皂素，所述茶皂素的加入量为β-萘黄酮、槲皮素总质量的0.1-1％。
优选地，所述茶皂素的制备方法为：
取茶籽饼粉碎后在加入热水中浸泡提取，过滤后，将提取液经过大孔吸附树脂处理后，使用乙醇水溶液洗脱，干燥即可制得茶皂素。
优选地，所述热水的温度为60-80℃，提取时间为3-4h。
优选地，所述提取过程中加入碳酸钠，碳酸钠的加入量为茶籽饼质量的5-10％。
优选地，所述大孔吸附树脂的种类为D3520或D4006型大孔吸附树脂。
所述乙醇水溶液洗脱的具体过程为，先使用体积分数为80-95％的乙醇水溶液洗脱除杂，再使用30-45％的乙醇洗脱并收集洗脱液。
优选地，所述体积分数为80-95％的洗脱速率为1-3BV/h，用量为1-2BV。
优选地，所述体积分数为30-45％的洗脱速率为1-3BV/h，用量为3-5BV。
本发明的另一目的在于提供所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物在制备颈椎病药物中的应用。
本发明的另一目的在于提供所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制剂，所述制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。
与现有技术比，本发明的技术优势在于：
(1)本发明中提供的含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物具有较好的治疗颈椎病的功效，同时，与橄榄素二糖苷、丁香素、β-萘黄酮、槲皮素具有较好的协同作用。
(2)本发明中在制备组合物的过程中加入表面活性剂，一方面能够提高组合物的药物存储稳定性，另一方面能提高药效稳定性。
(3)本发明中在制备过程中加入茶皂素一方面能够有效促进组合物的稳定性，另一方面茶皂素还能和β-萘黄酮、槲皮素协同作用，促进组合物的药效。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷8份、橄榄素二糖苷5份、丁香素7份、β-萘黄酮4份、槲皮素3份。
所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷和丁香素总质量3倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入蒸馏水质量0.3wt％的质量比为2：1的辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷和N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺的混合物，制成水相溶剂；
(2)在加热的条件下，将环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷、丁香素依次溶解于水相溶剂中，搅拌形成溶液1；
(3)取β-萘黄酮、槲皮素总质量0.5wt％的茶皂素，加入溶液1中，再加入β-萘黄酮、槲皮素，形成溶液2；搅拌，即可制得所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物。
其中，所述茶皂素的制备方法为：
取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中，加入茶籽饼质量6wt％的碳酸钠浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D3520型大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为90％的乙醇水溶液，按照洗脱速率2BV/h，洗脱除杂，再使用4BV的体积分数为40％的乙醇，按照洗脱速率2BV/h，洗脱并收集洗脱液，干燥即可制得茶皂素。
实施例2
一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷5份、橄榄素二糖苷10份、丁香素5份、β-萘黄酮1份、槲皮素5份。
所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷和丁香素总质量的2倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入蒸馏水质量0.1wt％的质量比为1：1的辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷和N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺的混合物，制成水相溶剂；
(2)在加热的条件下，将环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷、丁香素依次溶解于水相溶剂中，搅拌形成溶液1；
(3)取β-萘黄酮、槲皮素总质量0.1wt％的茶皂素，加入溶液1中，再加入β-萘黄酮、槲皮素，形成溶液2；搅拌，即可制得所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物。
其中，所述茶皂素的制备方法为：
取茶籽饼粉碎后在加入60℃的热水中，加入茶籽饼质量5wt％的碳酸钠浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D4006型大孔吸附树脂处理后，先使用1BV的体积分数为80％的乙醇水溶液，按照洗脱速率1BV/h，洗脱除杂，再使用3BV的体积分数为30％的乙醇，按照洗脱速率1BV/h，洗脱并收集洗脱液，干燥即可制得茶皂素。
实施例3
一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷10份、橄榄素二糖苷1份、丁香素15份、β-萘黄酮10份、槲皮素1份。
所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷和丁香素总质量的2倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入蒸馏水质量0.5wt％的质量比为3：1的辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷和N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺的混合物，制成水相溶剂；
(2)在加热的条件下，将环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷、丁香素依次溶解于水相溶剂中，搅拌形成溶液1；
(3)取β-萘黄酮、槲皮素总质量1wt％的茶皂素，加入溶液1中，再加入β-萘黄酮、槲皮素，形成溶液2；搅拌，即可制得所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物。
其中，所述茶皂素的制备方法为：
取茶籽饼粉碎后在加入80℃的热水中，加入茶籽饼质量10wt％的碳酸钠浸泡提取4h，过滤后，将提取液经过D3520型大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为95％的乙醇水溶液，按照洗脱速率3BV/h，洗脱除杂，再使用5BV的体积分数为45％的乙醇，按照洗脱速率3BV/h，洗脱并收集洗脱液，干燥即可制得茶皂素。
实施例4
一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷8份、橄榄素二糖苷5份、丁香素7份、β-萘黄酮4份、槲皮素3份。
所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷和丁香素总质量3倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入蒸馏水质量0.3wt％的辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷，制成水相溶剂；
(2)在加热的条件下，将环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷、丁香素依次溶解于水相溶剂中，搅拌形成溶液1；
(3)取β-萘黄酮、槲皮素总质量0.5wt％的茶皂素，加入溶液1中，再加入β-萘黄酮、槲皮素，形成溶液2；搅拌，即可制得所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物。
其中，所述茶皂素的制备方法为：
取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中，加入茶籽饼质量6wt％的碳酸钠浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D3520型大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为90％的乙醇水溶液，按照洗脱速率2BV/h，洗脱除杂，再使用4BV的体积分数为40％的乙醇，按照洗脱速率2BV/h，洗脱并收集洗脱液，干燥即可制得茶皂素。
实施例5
一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷8份、橄榄素二糖苷5份、丁香素7份、β-萘黄酮4份、槲皮素3份。
所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷和丁香素总质量3倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入蒸馏水质量0.3wt％的N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺，制成水相溶剂；
(2)在加热的条件下，将环橄榄树脂素4’-糖苷、橄榄素二糖苷、丁香素依次溶解于水相溶剂中，搅拌形成溶液1；
(3)取β-萘黄酮、槲皮素总质量0.5wt％的茶皂素，加入溶液1中，再加入β-萘黄酮、槲皮素，形成溶液2；搅拌，即可制得所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物。
其中，所述茶皂素的制备方法为：
取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中，加入茶籽饼质量6wt％的碳酸钠浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D3520型大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为90％的乙醇水溶液，按照洗脱速率2BV/h，洗脱除杂，再使用4BV的体积分数为40％的乙醇，按照洗脱速率2BV/h，洗脱并收集洗脱液，干燥即可制得茶皂素。
对比例1
与实施例1相比，区别在于使用含环橄榄树脂素4’-糖苷替换橄榄素二糖苷。
一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，按照重量份数计，包括以下组分：环橄榄树脂素4’-糖苷13份、丁香素7份、β-萘黄酮4份、槲皮素3份。
所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取环橄榄树脂素4’-糖苷和丁香素总质量3倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入蒸馏水质量0.3wt％的质量比为2：1的辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷和N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺的混合物，制成水相溶剂；
(2)在加热的条件下，将环橄榄树脂素4’-糖苷、丁香素依次溶解于水相溶剂中，搅拌形成溶液1；
(3)取β-萘黄酮、槲皮素总质量0.5wt％的茶皂素，加入溶液1中，再加入β-萘黄酮、槲皮素，形成溶液2；搅拌，即可制得所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物。
其中，所述茶皂素的制备方法同实施例1。
对比例2
与实施例1相比，区别在于使用橄榄素二糖苷替换环橄榄树脂素4’-糖苷。
一种组合物，按照重量份数计，包括以下组分：橄榄素二糖苷13份、丁香素7份、β-萘黄酮4份、槲皮素3份。
所述组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取橄榄素二糖苷和丁香素总质量3倍的蒸馏水，在蒸馏水中加入蒸馏水质量0.3wt％的质量比为2：1的辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷和N-十二烷基-N-甲基葡萄糖酰胺的混合物，制成水相溶剂；
(2)在加热的条件下，将橄榄素二糖苷、丁香素依次溶解于水相溶剂中，搅拌形成溶液1；
(3)取β-萘黄酮、槲皮素总质量0.5wt％的茶皂素，加入溶液1中，再加入β-萘黄酮、槲皮素，形成溶液2；搅拌，即可制得组合物。
其中，所述茶皂素的制备方法同实施例1。
对比例3
与实施例1相比，区别在于茶皂素的制备方法不同。
一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，组分同实施例1。
所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)-(3)同实施例1。
其中，所述茶皂素的制备方法为：
取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中浸泡提取3h，过滤后，将提取液经过D3520型大孔吸附树脂处理后，先使用2BV的体积分数为90％的乙醇水溶液，按照洗脱速率2BV/h，洗脱除杂，再使用4BV的体积分数为40％的乙醇，按照洗脱速率2BV/h，洗脱并收集洗脱液，干燥即可制得茶皂素。
对比例4
与实施例1相比，区别在于茶皂素的制备方法不同。
一种含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物，组分同实施例1。
所述含环橄榄树脂素4’-糖苷的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)-(3)同实施例1。
其中，所述茶皂素的制备方法为：取茶籽饼粉碎后在加入70℃的热水中浸泡提取3h，过滤后，浓缩制得浓缩液；使用浓度为90wt％的乙醇沉淀，乙醇与浓缩液体积比4：1，醇沉温度60℃、醇沉时间3h，过滤，将沉淀干燥，即可制得茶皂素。
功效评价
1、椎动脉型颈椎病模型
SPF级健康雄性Wistar大鼠72只，体重200±20g，分为12组，每组6只，分别为模型组、假手术组、阳性药物组、实施例1-5组、对比例1-4组。将麻醉后的大鼠固定于固定板上，要求大鼠的腹部和固定板紧贴，四肢粉笔固定在两侧，背部朝上。对其颈后部位的毛发进行剪除处理，通过碘伏消毒后，以手术刀在大鼠颈背部后正中线位置纵向切开皮肤，切口长度2.5cm。假手术组大鼠手术切开后即常规止血缝合。模型组和实施例1-5组、对比例1-4组和阳性药物对照组借助血管钳等器材，逐层钝性分离肌肉，切断颈部浅层与深层肌肉组织。术后予以常规止血、缝合处理，观察大鼠情况，并继续饲养。
造模1个月后，假手术组大鼠每日定点予以固定处理，但不予以其他手段干预。模型组大鼠造模成功后不予以任何干预。
干预方法：实施例1-5组、对比例1-4组使用各自对应实施例或对比例中的方法制备的组合物，按照有效含量为50mg/kg/d的剂量灌胃干预；阳性药物组大鼠在造模成功后使用归芪活血胶囊(鲁南厚普制药有限公司，规格：0.53g×36粒/盒)灌胃干预，使用剂量为1粒/d，连续干预4周；
分别称重大鼠，予以致死量腹腔麻醉，确定大鼠麻醉到位后，于低温条件下进行相关实验操作。保留大鼠枢椎，实施枕骨后的断头处理。
用手术刀顺着大鼠颈后部正中线纵向切开皮肤，钝性分离各层肌肉和软组织，取下C2～7颈椎骨，手术过程中务必保证椎间盘以及软骨完整性。采用PBS液体清洗干净取下的组织，用4％多聚甲醛将部分椎间盘组织固定1～2d，用于免疫组化检测。剩下的组织用液氮保温瓶冷冻，并尽快置于-80℃冰箱保存。
使用IL-6、IL-8免疫组化SP试剂盒(美国BIO-RAD公司)，采用免疫组织化学法检测IL-6、IL-8的含量。结果见表1：
表1干预效果数据
同一列表中，不同字母或符号间具有显著性差异，P＜0.05。
由表1可知，与模型组相比，实施例1-5组和对比例1-4组提供的组合物能够有效控制大鼠的颈椎间盘软骨细胞IL-6、IL-8水平，这说明本发明提供的组合物能够有效防治干预颈椎病。同时，组合物的原料组成和制备方法对其效果具有较大的影响。
2、二甲苯致大鼠耳廓肿胀抗炎作用实验
SPF级健康雄性Wistar大鼠66只，体重200±20g，分为11组，每组6只，分别为空白组、阳性药物组、实施例1-5组、对比例1-4组。每只大鼠右耳双面涂抹二甲苯，50ul/只，30min后按以下分组给药：空白组不给予任何药物；实施例1-5组及对比例1-4组分别按照有效含量0.5mg/kg给予对应组制备的组合物，双面涂抹大鼠右耳后适当按摩促进药物吸收；阳性药物组使用市售洛索洛芬纳凝胶膏(湖南九典制药)，双面涂覆大鼠右耳后适当按摩促进药物吸收。1h后颈椎脱臼处死动物，用6mm直径打孔器分别双侧耳朵在相同部位打下圆耳片，用精密扭力天平称质量，计算肿胀度和肿胀率，结果见表2。
表2肿胀度和肿胀率数据
同一列表中，不同符号间具有显著性差异，P＜0.05。
由表1可知，与空白组相比，实施例1-5组和对比例1-4组提供的组合物能减轻二甲苯致大鼠耳廓的肿胀度，这说明本发明提供的组合物具有较好的抗炎作用。同时，组合物的原料组成和制备方法对其效果具有较大的影响。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。