灵芝酸a在治疗银屑病药物中的应用
阅读说明：本技术 灵芝酸a在治疗银屑病药物中的应用 (Application of ganoderic acid A in medicine for treating psoriasis ) 是由 肖成根 陈翔 刘洪� 周星辰 陈军臣 李旺 欧家芮 于 2021-10-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了灵芝酸A在治疗银屑病中的应用以及灵芝酸A的提取方法,灵芝酸A直接从灵芝中提取获得,成分天然,无毒,无副作用,且灵芝酸对于银屑病有显著的治疗作用,可长期使用。(The invention discloses application of ganoderic acid A in treating psoriasis and an extraction method of ganoderic acid A, wherein ganoderic acid A is directly extracted from ganoderma, is natural in component, non-toxic and free of side effect, has a remarkable treatment effect on psoriasis, and can be used for a long time.)
技术领域
本发明属于银屑病治疗技术领域，具体涉及灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用。
背景技术
银屑病俗称“牛皮癣”，是一种常见的高复发性皮肤疾病。银屑病具有病程长、迁延难愈等特点，严重时可致残甚至危及患者生命，给患者造成生理-心理的双重负担。然而，银屑病的发病机制复杂，时至今日临床仍无根治性药物可用。
目前银屑病的口服及外用药物以阻断过度活化的免疫系统为主，但仍有少部分银屑病患者对现有的生物制剂响应轻微、无效或伴随严重不良反应，大部分治疗有效的患者存在停药复发、继发耐药的问题，由于上述药物均只能暂时来缓解银屑病症状，且继发感染、肝肾功能损伤等毒副作用大，价格昂贵，难以长期维持，故寻找一种可长期维持的使用，同时可调节过度活化的免疫系统的药物迫在眉睫。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了利用灵芝酸A治疗银屑病，药物成分天然无毒害，效果显著。
为了达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现的：
灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用；
优选的，所述药物为口服类药物；
优选的，所述口服类药物包括颗粒剂、胶囊、片剂；
优选的，所述药物为外用类药物；
优选的，所述外用类药物包括软膏剂、乳膏剂、霜剂；
优选的，所述灵芝酸A的提取方法，包括以下步骤：
S1：取灵芝在烘干机中进行充分干燥；
S2：将干燥后的灵芝用粉碎机进行粉碎至200-300目；
S3：将粉碎后的灵芝粉末用乙醇水溶液浸提3次，每次取浸提液，最后一次合并3次浸提液；
S4：将S3中得到的浸提液在温度为60-70°，压力为-0.1MPa条件下减压浓缩得到灵芝酸浸膏；
S5：将S4中的灵芝酸浸膏与水按照1:5-1:7的比例进行混合，得到混合液，然后加入混合液质量5％的NaHCO3,搅拌均匀后过滤，滤液用质量百分比浓度为10％的盐酸水溶液调PH值为2；
S6：将S5中PH值为2的滤液用5倍体积的氯仿萃取3次，每次均取氯仿层，合并3次的氯仿层；在温度40-50°，压力为-0.1MPa条件下浓缩得浓缩液；
S7：将S6所得浓缩液用硅胶柱进行纯化，以氯仿作为装柱溶剂，氯仿：丙酮体积比为10:1-3:1梯度冲洗，收集得到灵芝酸A粗品；
S8：在LH-20常压凝胶柱上，用质量百分比浓度为51％的甲醇水溶液对灵芝酸A粗品将其全部洗脱，然后在温度40°，压力为-0.1MPa下浓缩至干，得到纯度为99％以上的灵芝酸A；
S9：将S8得到的99％的灵芝酸A用氯仿溶解，再加入甲醇，在4°条件下放置至其有白色晶体析出，过滤，得到灵芝酸A。
本发明的有益效果是：
本发明利用灵芝酸A治疗银屑病，灵芝酸A直接从灵芝中提取获得，成分天然，无毒害，不会对人体造成毒副作用，且灵芝酸对于银屑病有显著的治疗作用；无毒，可长期维持服用，不易复发。
附图说明
图1是动物实验结果实物图片；
图2是HE染色切片观察结果图；
图3是细胞实验结果数据统计图。
具体实施方式
为了进一步体现本发明的方案及作用效果，下面通过具体实施例来详细说明。
实施例1
灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用；
优选的，所述药物为乳膏剂。
实施例2
灵芝酸A的提取方法，包括以下步骤：
S1：取灵芝在烘干机中进行充分干燥；
S2：将干燥后的灵芝用粉碎机进行粉碎至200目；
S3：将粉碎后的灵芝粉末用乙醇水溶液浸提3次，每次取浸提液，最后一次合并3次浸提液；
S4：将S3中得到的浸提液在温度为60°，压力为-0.1MPa条件下减压浓缩得到灵芝酸浸膏；
S5：将S4中的灵芝酸浸膏与水按照1:5的比例进行混合，得到混合液，然后加入混合液质量5％的NaHCO3,搅拌均匀后过滤，滤液用质量百分比浓度为10％的盐酸水溶液调PH值为2；
S6：将S5中PH值为2的滤液用5倍体积的氯仿萃取3次，每次均取氯仿层，合并3次的氯仿层；在温度50°，压力为-0.1MPa条件下浓缩得浓缩液；
S7：将S6所得浓缩液用硅胶柱进行纯化，以氯仿作为装柱溶剂，氯仿：丙酮体积比为10:1-3:1梯度冲洗，收集得到灵芝酸A粗品；
S8：在LH-20常压凝胶柱上，用质量百分比浓度为51％的甲醇水溶液对灵芝酸A粗品将其全部洗脱，然后在温度40°，压力为-0.1MPa下浓缩至干，得到纯度为99％以上的灵芝酸A；
S9：将S8得到的99％的灵芝酸A用氯仿溶解，再加入甲醇，在4°条件下放置至其有白色晶体析出，过滤，得到灵芝酸A。
实施例3
为了进一步验证实施例1中含有灵芝酸A的乳膏剂对银屑病的治疗作用，设计以下动物实验；
银屑病动物模型制作：选取6-8周龄，体重约18-20g，雌鼠40只，饲养于标准的清洁级动物饲养室；将小鼠用脱毛膏脱毛，脱毛面积为2cm*4cm；
将5％咪喹莫特乳膏按照62.5mg/只的剂量均匀涂抹于脱毛部位，持续5-7天，银屑病小鼠成模；
实验分组：正常对照组、银屑病组、银屑病+溶剂对照组，银屑病+灵芝酸A处理组；每组10只小鼠；
实验方法：灵芝酸A灌胃，2mg/kg，每日1次，正常对照组不予处理，溶剂对照组给予等量的溶剂，不加药。
实验结果：结果如图1所示，其中a为正常对照组，b为银屑病无处理组，c为银屑病+溶剂对照组，d为银屑病+灵芝酸A组；
银屑病无处理组：患部皮肤有明显成片红斑，鳞屑脱落多，大面积显著角化过度，棘层肥厚，皮表异常褶皱；
银屑病+溶剂对照组：较银屑病组无明显差异；
银屑病+灵芝酸A组：患部皮肤红斑基本消退，皮褶厚度变薄，鳞屑减少。
实施例4
细胞切片染色实验；
实验试剂：固定液：95％乙醇和冰丙酮；苏木精染液：称取苏木精0.5g，铵矾24g溶于70ml蒸馏水中，称取NaCl31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，过滤，取滤液得苏木精染液；伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中；稀盐酸乙醇溶液：用75％乙醇配制1％盐酸；
实验准备：取各组小鼠背部皮肤，制成切片；
实验步骤：S1：石蜡切片脱蜡：依次将切片放入二甲苯I10min-二甲苯Ⅱ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95％酒精5min-90％酒精5min-80％酒精5min-70％酒精5min-蒸馏水洗；
S2：苏木素染细胞核：切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗，1％的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6％氨水返蓝，流水冲洗；
S3：伊红染细胞质：切片入伊红染液中染色1-3min；
S4：脱水封片：将切片依次放入95％酒精I 5min-95％酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片；
S5：显微镜镜检，图像采集分析；
实验结果：如图2所示，其中a为正常对照组，b为银屑病无处理组，c为银屑病+软膏组，d为银屑病+灵芝酸A组；
切片结果分析：银屑病组表皮明显增厚，真皮层炎性细胞浸润明显，经灵芝酸A治疗后，表皮增殖明显改善，炎性细胞浸润减少(如图2中箭头所指方向)。
实施例5
细胞实验；
实验准备：取永生化人Hacat角质形成细胞，用不同的灵芝酸A进行干预(5μM/10μM/20μM/40μM)
实验方法：复苏人Hacat角质形成细胞，待长势良好时，种板，96孔板，每板5000个细胞，将培养皿置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养24小时后，加入不同浓度的灵芝酸A培养液，继续培养24小时，去除培养液，用CCK8后再孵育1-3小时，450nm度数，检测灵芝酸A对角质形成细胞增殖的抑制作用。
实验结果：如图3所示，灵芝酸A可明显抑制角质形成细胞的增殖，且呈浓度依赖性。
结果分析：灵芝酸A可明显抑制角质形成细胞的增殖。