一种二芳香基乙烯衍生物及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种二芳香基乙烯衍生物及其制备方法和应用 (Diarylethylene derivative and preparation method and application thereof ) 是由 吴泽辉 吉训明 程雪波 郑伟 陈华龙 于 2021-06-08 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种二芳香基乙烯衍生物,其结构式如式Ⅰ所示；其中,R-1为CH-3(甲基)或CD-3(氘代甲基)；R-2选自C1-8饱和烷氧基或烷氨基、取代的C2-6不饱和烷氧基或烷氨基；R-3选自或R-4选自或且R-3和R-4中至少一个为含N基团；R-5为离去基团；R-6为Boc酸酐或H。本发明还提供了上述二芳香基乙烯衍生物的制备方法及应用。本发明提供的二芳香基乙烯衍生物,对Aβ斑块具有更高的亲和力和特异性,且稳定性有所提高,有望提高靶向Aβ斑块相关疾病的诊断。(The invention provides a diaryl ethylene derivative, the structural formula of which is shown as a formula I; wherein R is 1 Is CH 3 (methyl) or CD 3 (deuterated methyl); r 2 Selected from C1-8 saturated alkoxy or alkylamino, substituted C2-6 unsaturated alkoxy or alkylamino; r 3 Is selected from Or R 4 Is selected from Or And R is 3 And R 4 At least one of which is an N-containing group; r 5 Is a leaving group; r 6 Boc anhydride or H. The invention also provides a preparation method and application of the diaryl ethylene derivative. The diaryl ethylene derivative provided by the invention has higher affinity and specificity to the A beta plaque, has improved stability, and is expected to improve the diagnosis of diseases related to the target A beta plaque.)
技术领域
本发明涉及药物化学和核医学
技术领域
，具体地说，涉及一类高亲和Aβ斑块的二芳香基乙烯衍生物及其制备方法和应用。背景技术
阿尔兹海默病(Alzheimer’s Disease，AD)是一种常见的神经退行性疾病，临床表现为认知和记忆功能下降，日常生活能力减弱，同时可伴有多种神经精神症状，以上种种对患者的身心健康和生活质量造成了巨大的损害。据统计资料显示，2015年全球共约有4680万AD患者，每年新发AD病例990万人，意味着每3.2秒增加1例，预计到2050年全球AD患病人数将达到1.315亿人，其中我国作为人口老龄化速度最快的国家之一，将拥有3000万AD患者，数量十分庞大；如果可以早期诊断AD，不仅能够为后续治疗提供指导作用，减轻患者痛苦，节省医疗开支，同时可以为相关的科学研究提供参考价值。因此无论对患者本身还是社会公共卫生事业乃至科学界而言，研究并找到AD的早期诊疗手段具有重要的意义。研究表明，AD脑内由Aβ斑块在神经细胞外异常聚集形成的老年斑(SPs)和细胞内的神经元纤维缠结(NFTs)是AD的两大主要病理特征，其中Aβ斑块的沉积可在疾病早期症状出现前发生。因此，以Aβ斑块为靶点，开发与之具有高亲和性和特异性的分子探针，通过正电子发射断层扫描技术(PET)可以从分子水平早期、非侵入性的诊断AD。
在既往的研究中，用于核医学PET显像的Aβ斑块显像剂发展迅速，在Th-T、CR等位点上开发出了很多显像剂并进入或完成临床试验阶段。如2-苯基苯并噻唑类衍生物11C-PIB已经成为目前研究最多的Aβ斑块显像剂，其类似物18F-GE-067已经通过了美国FDA批准上市；二苯乙烯类化合物18F-AV-45、18F-AV-1也通过了美国FDA批准并表现出了不错的显像效果。然而，迄今为止的所有Aβ斑块显像剂，如：性质最优良的Aβ斑块显像剂18F-AV-45也存在白质非特异性结合、亲和性低和稳定性差等问题，因此，仍需要研发新型的靶向Aβ板块的PET显像剂。
发明内容
为了克服现有靶向Aβ斑块显像剂特异性低问题，本发明通过改变二苯乙烯骨架中的N原子的个数和位置以及侧链的长短和亲疏水性，开发并合成一系列二苯乙烯类衍生物，通过生物评价筛选出比现有显像剂更优的18F的放射性诊断Aβ斑块相关疾病的药物。
本发明的目的之一在于，提供一类高亲和Aβ斑块的二芳香基乙烯衍生物。该类化合物与脑内Aβ斑块具有高亲和力，属于诊断和治疗Aβ斑块相关疾病的全新化合物，其结构式如式Ⅰ所示，
其中，
R1为CH3(甲基)或CD3(氘代甲基)；
R2选自C1-8饱和烷氧基或烷氨基、取代的C2-6不饱和烷氧基或烷氨基；
R3选自
R4选自且R3和R4中至少一个为含N基团；
R5为离去基团；
R6为Boc酸酐或H。
在根据本发明的一个实施方案中，结构式选自
中的任一种。
在根据本发明的一个实施方案中，当R2为取代的C2-6不饱和烷氧基或烷氨基时，取代基选自氢、氟、羟基或-(OCH2CH2)n，n＝1-6的整数。
在根据本发明的一个实施方案中，所述离去基团为磺酸酯或卤素。
在根据本发明的一个实施方案中，其中-R2-R5-基团为-(OCH2CH2)n-F，n＝1-6的整数；优选地，n＝3。
本发明进一步提供了上述二芳香基乙烯衍生物的制备方法，包括：
1)将第一反应物与第二反应物共溶于有机溶剂中，分别加入碳酸盐、四丁基溴化铵和醋酸钯，于70-80℃保温反应，经洗涤、萃取并干燥后，层析纯化，即得第一中间体；优选地，于油浴中保温反应；
2)将所述第一中间体的末端羟基替换为离去基团，并去除叔丁氧羰基(-Boc)，即得；
其中，所述第一反应物结构为第二反应物结构式为I-R4-OH；
优选地，步骤1)中所述第一反应物选自(5-乙烯基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯、(6-乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯、N-甲基-5-乙烯基嘧啶-2-胺或甲基(4-乙烯基苯基)氨基甲酸叔丁酯中的任一种；
优选地，所述第二反应物选自4-碘苯酚、2-(2-(2-(((5-碘吡啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇、2-(2-(2-(((5-溴嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇或2-(2-(2-(4-碘苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇中的任一种；
优选地，第一中间体的末端羟基先由OTs基团取代，再与三氟乙酸反应。
在根据本发明的一个实施方案中，步骤1)中所述第一反应物、第二反应物、碳酸盐、四丁基溴化铵和醋酸钯的摩尔比为10-13：6-15：20-33：17-28：1。
在根据本发明的一个实施方案中，所述洗涤为以饱和食盐水洗涤数次；优选的，所述萃取剂选自乙酸乙酯；更优选地，所述层析时以乙酸乙酯或以体积比为10:1混合的氯仿-甲醇溶液为流动相。
本发明还进一步提供了上述的二芳香基乙烯衍生物在制备PET显像剂中的应用；优选地，所述应用为用于阿尔兹海默病影像诊断的PET显像剂。
本发明的另一目的在于提供一种Aβ斑块显像剂，包含上述的二芳香基乙烯衍生物。
本发明的再一目的在于，提供所述Aβ斑块显像剂在诊断淀粉样病变的药物中的应用，包括AD和CAA的早期诊断。
本发明的上述技术方案的有益效果如下：
与已报道的Aβ斑块显像剂相比，基于本发明提供的二芳香基乙烯衍生物制备的显像剂对Aβ斑块具有更高的亲和力和特异性，且稳定性有所提高，有望提高靶向Aβ斑块相关疾病的诊断。
附图说明
图1为根据本发明制备的(E)-5-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基-18F)-N-甲基吡啶-2-胺的脑片自显影图；
图2为根据本发明制备的((E)-6-(4-(2-(2-(2-(2-(氟-18F)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基-18F)-N-甲基吡啶-3-胺注入体内5-10分钟micro-PET显像图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。
实施例1(E)-5-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-2-胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)(5-溴吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
将化合物5-溴-2-(甲基氨基)吡啶(1000mg，5.37mmol)溶于二氯甲烷，在冰浴条件下加入三乙胺(2ml，19.8mmol)和二碳酸二叔丁酯(2350mg，10.8mmol)，最后将4-二甲氨基吡啶(6mg，0.05mmol)加入反应瓶中。反应过夜，后处理：用水洗三次，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到目标化合物(600mg，38.9％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.37(s，1H)，7.67(s，2H)，3.36(s，3H)，1.51(s，9H)。HRMS calcd for C10H12BrN2O2，271.0082；found，272.0086[M+H]+。
2)(5-乙烯基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯
取250mL双口瓶，将化合物(5-溴吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(1500mg，5.24mmol)溶于无水甲苯，加入四三苯基磷钯(582mg，0.52mmol)，N2保护，在室温下搅拌30min后，将三丁基乙烯基锡(2160mg，6.81mmol)，逐滴加入反应瓶中，升温至120℃，反应24小时。后处理：旋干拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得到目标化合物(1.02g，83.6％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.40(s，1H)，7.72(d，J＝8.7Hz，2H)，6.69(dd，J＝19.6，9.0Hz，1H)，5.78(d，J＝17.6Hz，1H)，5.36(d，J＝11.0Hz，1H)，3.46(s，3H)，1.55(s，9H)。HRMS calcd for C13H18N2O2，234.1368；found，235.1482[M+H]+。
3)叔丁基(E)-(5-(2-(6-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯
取100mL圆底烧瓶，将化合物(5-乙烯基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，2.14mmol)和2-(2-(2-(((5-碘吡啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(1100mg，3.20mmol)用DMF溶解，分别加入碳酸钾(880mg，6.41mmol)，四丁基溴化铵(1720mg，5.34mmol)和醋酸钯(50mg，0.21mmol).在70℃条件下反应12小时。后处理：用饱和食盐水水洗三次，乙酸乙酯萃取，旋干拌样，柱层析纯化(纯乙酸乙酯)，得到目标化合物(0.4g，40.8％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.43(d，J＝2.0Hz，1H)，8.20(d，J＝2.2Hz，1H)，7.88–7.76(m，2H)，7.71(d，J＝8.7Hz，1H)，6.97(q，J＝16.4Hz，2H)，6.83(d，J＝8.6Hz，1H)，4.62–4.43(m，2H)，3.96–3.81(m，2H)，3.80–3.67(m，7H)，3.67–3.54(m，2H)，3.43(s，3H)，1.55(s，9H)。HRMS calcd for C24H34N3O6 +，460.2442[M+H]+；found，460.2020。
4)(E)-2-(2-(2-((5-(2-(6-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯
将叔丁基(E)-(5-(2-(6-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(400mg，0.87mmol)用二氯甲烷溶解，在冰浴条件下加入对甲苯磺酰氯(830mg，4.35mmol)，三乙胺(10mL)，最后加入4-二甲氨基吡啶(10mg，0.08mmol)，在室温下反应24小时，后处理：用水洗三次，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，后得到目标化合物(130mg，24.3)％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.42(s，1H)，8.19(s，1H)，7.80(d，J＝8.3Hz，4H)，7.71(d，J＝8.7Hz，2H)，7.42–7.21(m，2H)，6.96(q，J＝16.4Hz，1H)，6.80(d，J＝8.7Hz，1H)，4.57–4.38(m，2H)，4.26–4.08(m，2H)，3.91–3.76(m，2H)，3.77–3.51(m，6H)，3.42(s，3H)，2.41(s，3H)，1.54(s，9H)。HRMS calcd for C31H40N3O8S+，614.2531[M+H]+；found，641.1824。
5)(E)-(5-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
化合物(E)-2-(2-(2-((5-(2-(6-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(130mg，0.21mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，加入四丁基氟化铵(510mg，1.96mmol)，氮气保护，在50℃条件下反应3小时。后处理：旋干拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，后得到目标化合物(70mg，72.3％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.41(s，1H)，8.18(s，1H)，7.86–7.74(m，2H)，7.70(d，J＝8.7Hz，1H)，6.95(q，J＝16.4Hz，2H)，6.80(d，J＝8.6Hz，1H)，4.72–4.56(m，1H)，4.54–4.41(m，3H)，3.95–3.83(m，2H)，3.83–3.76(m，1H)，3.76–3.64(m，5H)，3.41(s，3H)，1.53(s，9H)。HRMScalcd for C24H33FN3O5 +，462.2399[M+H]+；found，462.1676。
6)(E)-5-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-2-胺
取50ml的圆底烧瓶，往化合物(E)-(5-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.065mmol)中加入1mL的三氟乙酸，在室温下搅拌1小时。后处理：旋干拌样，柱层析纯化(纯乙酸乙酯)，后得到目标化合物(20mg，85.23％)。1H NMR(300MHz，MeOD)δ8.21(d，J＝11.4Hz，2H)，8.08(dd，J＝8.9，2.1Hz，1H)，7.88(d，J＝1.7Hz，1H)，7.09–6.90(m，4H)，4.62–4.56(m，1H)，4.51–4.45(m，2H)，4.45–4.37(m，1H)，3.98(s，1H)，3.88(dd，J＝6.1，3.0Hz，2H)，3.81–3.74(m，1H)，3.74–3.61(m，5H)，3.05(s，3H)。HRMS calcd for C19H25FN3O3 +，362.1874[M+H]+；found，362.1865。
实施例2(E)-5-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基吡啶-2-胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)(E)-(5-(4-羟基苯乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
取100mL圆底烧瓶，将化合物(5-乙烯基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，1.29mmol)和4-碘苯酚(190mg，0.86mmol)用DMF溶解，分别加入碳酸钾(530mg，3.86mmol)，四丁基溴化铵(1000mg，3.22mmol)和醋酸钯(28mg，0.13mmol).在70℃条件下反应12小时。后用饱和食盐水水洗三次，乙酸乙酯萃取，旋干拌样，柱层析纯化(纯乙酸乙酯)，得到(E)-(5-(4-羟基苯乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.15g，35.6％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.41(s，1H)，7.78(d，J＝10.2Hz，1H)，7.64(d，J＝8.6Hz，1H)，7.37(d，J＝8.5Hz，2H)，7.00(d，J＝16.4Hz，1H)，6.92–6.77(m，3H)，3.44(s，3H)，1.56(s，9H)。HRMS calcd for C19H23N2O3 +，327.1703[M+H]+；found，327.1637。
2)(E)-2-(2-(2-(4-(2-(6-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)吡啶-3-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯
将(E)-(5-(4-羟基苯乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.46mmol)用DMF溶解，加入碳酸铯(0.75g，2.30mmol)在室温下搅拌30min，后加入(ethane-1，2-diylbis(oxy))bis(ethane-2，1-diyl)bis(4-methylbenzenesulfonate)(180mg，0.38mmol)，反应12小时。后用饱和食盐水水洗三次，乙酸乙酯萃取，旋干拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，得到(E)-2-(2-(2-(4-(2-(6-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)吡啶-3-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(0.20g，71.4％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.40(s，0H)，7.78(d，J＝8.2Hz，1H)，7.66(d，J＝8.6Hz，0H)，7.42(d，J＝8.6Hz，1H)，7.35–7.24(m，1H)，7.02(d，J＝16.4Hz，0H)，6.90(t，J＝8.0Hz，1H)，4.12(dd，J＝9.7，4.4Hz，2H)，3.91–3.77(m，1H)，3.75–3.55(m，2H)，3.40(s，3H)，2.40(s，1H)，1.52(s，3H)。HRMS calcd for C32H41N2O8S+，613.2578[M+H]+；found，613.2364。
3)(E)-(5-(4-(2-(2-(2-(2-氟代乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
(E)-2-(2-(2-(4-(2-(6-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)吡啶-3-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(60mg，0.08mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，加入四丁基氟化铵(210mg，0.8mmol)，氮气保护，在50℃条件下反应3小时。后处理：旋干拌样，柱层析纯化。纯化条件：石油醚：乙酸乙酯＝1：1，最后得到(E)-(5-(4-(2-(2-(2-(2-氟代乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，66.7％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.43(s，1H)，7.80(d，J＝9.9Hz，1H)，7.68(d，J＝8.7Hz，1H)，7.46(d，J＝8.7Hz，2H)，7.05(d，J＝16.4Hz，1H)，6.99–6.84(m，3H)，4.77–4.59(m，1H)，4.58–4.46(m，1H)，4.23–4.12(m，2H)，3.95–3.86(m，2H)，3.86–3.81(m，1H)，3.81–3.68(m，5H)，3.43(s，3H)，1.55(s，9H)。HRMS calcd for C25H34FN2O5 +，461.2446[M+H]+；found，461.2406。
4)(E)-5-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基吡啶-2-胺
取50ml的圆底烧瓶，往化合物(E)-(5-(4-(2-(2-(2-(2-氟代乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.087mmol)中加入1mL的三氟乙酸，在室温下搅拌1小时。后处理：旋干拌样，柱层析纯化(纯乙酸乙酯)，后得到(E)-5-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基吡啶-2-胺(26mg，82.78％)。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ8.19(d，J＝11.2Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.46(d，J＝8.7Hz，2H)，7.12–6.78(m，5H)，4.61(d，J＝8.2Hz，1H)，4.45(dd，J＝4.6，3.6Hz，1H)，4.15(dd，J＝5.4，3.7Hz，2H)，3.86(dd，J＝5.4，3.8Hz，2H)，3.81–3.76(m，1H)，3.76–3.60(m，5H)，3.02(s，3H)。HRMScalcd for C19H25FN3O3 +，361.1922[M+H]+；found，361.1849。
实施例3(E)-6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)(6-溴吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将3-氨基-6-溴吡啶(1000mg，5.78mmol)，置于100mL圆底烧瓶，加入蒸馏水，最后将二碳酸二叔丁酯(1510mg，6.94mmol)加入反应液，在35℃条件下反应1.5小时。后用乙酸乙酯萃取，旋干有机相并拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，后得到(6-溴吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.90g，57.0％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.28(s，1H)，7.88(s，1H)，7.41(d，J＝8.7Hz，1H)，6.85(s，1H)，1.52(s，9H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ152.41，139.97，135.01，134.32，128.55，127.94，81.68，28.22。
2)(6-乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
取250mL双口瓶，将(6-溴吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(900mg，3.30mmol)溶于无水甲苯，加入四三苯基磷钯(363mg，0.03mmol)，N2保护，在室温下搅拌30min后，将三丁基乙烯基锡(1350mg，4.27mmol)，逐滴加入反应瓶中，升温至120℃，反应24小时。后旋干拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，最后得到(6-乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.6g，82.6％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.38(d，J＝2.4Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.42–7.11(m，1H)，6.91(s，1H)，6.78(dd，J＝17.5，10.9Hz，1H)，6.08(d，J＝17.5Hz，1H)，5.40(d，J＝10.9Hz，1H)，1.53(s，9H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ152.64，150.38，139.48，136.11，134.25，126.05，121.21，116.73，28.26。
3)(6-乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
把(6-乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1200mg，5.45mmol)和氢化钠(650mg，27.2mmol)用DMF溶解，在冰浴条件下加入碘甲烷，反应3小时。后用饱和食盐水水洗三次，乙酸乙酯萃取，旋干拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得到(6-乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(780g，61.2％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.49(s，1H)，7.59(d，J＝7.6Hz，1H)，7.44–7.19(m，2H)，6.94–6.69(m，1H)，6.16(d，J＝17.5Hz，1H)，5.48(d，J＝10.8Hz，1H)，3.30(s，3H)，1.47(s，9H)。
4)叔丁基(E)-(6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸酯
取100mL圆底烧瓶，将(6-乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.24g，1.03mmol)和2-(2-(2-(((5-碘吡啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(540mg，1.53mmol)用DMF溶解，分别加入碳酸钾(420g，3.08mmol)，四丁基溴化铵(830g，2.56mmol)和醋酸钯(23mg，0.10mmol)。在70℃条件下反应12小时。后用饱和食盐水水洗三次，乙酸乙酯萃取，旋干拌样，柱层析纯化(纯乙酸乙酯)，得到叔丁基(E)-(6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸酯(0.3g，63.4％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.50(s，1H)，8.26(s，1H)，7.85(d，J＝8.7Hz，1H)，7.57-7.49(m，2H)，7.34(d，J＝8.5Hz，1H)，7.05(d，J＝16.1Hz，1H)，6.83(d，J＝8.7Hz，1H)，4.61–4.45(m，2H)，4.00–3.80(m，2H)，3.80–3.67(m，6H)，3.67–3.55(m，2H)，3.31(s，4H)，1.48(s，9H)。HRMScalcd for C24H34N3O6 +，460.2442[M+H]+；found，460.2027。
5)(E)-2-(2-(2-((5-(2-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡啶-2-基)乙烯基)吡啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯
将叔丁基(E)-(6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸酯(500mg，1.09mmol)用二氯甲烷溶解，在冰浴条件下加入对甲苯磺酰氯(1030mg，5.45mmol)，三乙胺(10mL)，最后加入4-二甲氨基吡啶(10mg，0.08mmol)，在室温下反应24小时，后用水洗三次，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，得到(E)-2-(2-(2-((5-(2-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡啶-2-基)乙烯基)吡啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(0.31g，46.3％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.51(s，1H)，8.27(s，1H)，7.85-7.79(m，3H)，7.61-7.51(m，2H)，7.41–7.29(m，3H)，7.07(d，J＝16.1Hz，1H)，6.81(d，J＝8.7Hz，1H)，4.60–4.38(m，2H)，4.26–4.10(m，2H)，3.95–3.78(m，2H)，3.76–3.52(m，6H)，3.31(s，3H)，2.44(s，3H)，1.48(s，9H)。HRMS calcd for C31H40N3O8S+，614.2531[M+H]+；found，614.1811。
6)叔丁基(E)-(6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸酯
(E)-2-(2-(2-((5-(2-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡啶-2-基)乙烯基)吡啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(50mg，0.08mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，加入四丁基氟化铵(210mg，0.8mmol)，氮气保护，在50℃条件下反应3小时。后旋干拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，最后得到叔丁基(E)-(6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸酯(30mg，81.1％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.51(d，J＝2.4Hz，1H)，8.27(d，J＝2.2Hz，1H)，7.85(dd，J＝8.7，2.4Hz，1H)，7.59(d，J＝8.2Hz，1H)，7.52(d，J＝16.1Hz，1H)，7.34(d，J＝8.5Hz，1H)，7.05(d，J＝16.1Hz，1H)，6.82(d，J＝8.7Hz，1H)，4.78–4.59(m，1H)，4.59–4.40(m，3H)，3.97–3.85(m，2H)，3.85–3.78(m，1H)，3.78–3.62(m，5H)，3.31(s，3H)，1.48(s，9H).HRMS calcdfor C19H25FN3O3 +，462.2399[M+H]+；found，462.1667。
7)(E)-6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺
取50ml的圆底烧瓶，往叔丁基(E)-(6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸酯(20mg，0.043mmol)中加入1mL的三氟乙酸，在室温下搅拌1小时。后处理：旋干拌样，柱层析纯化(纯乙酸乙酯)，后得到化合物(E)-6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺(12mg，，77.09％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.18(s，1H)，7.95(s，1H)，7.84(d，J＝7.8Hz，1H)，7.66(d，J＝7.2Hz，1H)，7.47–7.30(m，1H)，7.28–7.04(m，2H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.72–4.58(m，1H)，4.55–4.42(m，3H)，3.87(dd，J＝11.7，7.5Hz，2H)，3.83(s，1H)，3.78–3.63(m，5H)，2.90(s，3H)。HRMS calcd for C19H25FN3O3 +，362.1874[M+H]+；found，362.1870。
实施例4(E)-6-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)(E)-(6-(4-羟基苯乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
取100mL圆底烧瓶，将(6-乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，2.36mmol)和4-碘苯酚(350mg，1.57mmol)用DMF溶解，分别加入碳酸钾(650mg，4.72mmol)，四丁基溴化铵(1270mg，3.93mmol)和醋酸钯(35mg，0.16mmol)。在70℃条件下反应12小时。后用饱和食盐水水洗三次，乙酸乙酯萃取，旋干拌样，柱层析纯化(纯乙酸乙酯)，得到(E)-(6-(4-羟基苯乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.25g，32.5％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.47(d，J＝2.5Hz，1H)，7.60(d，J＝8.5Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.42–7.30(m，3H)，6.99(d，J＝16.2Hz，1H)，6.81(d，J＝8.5Hz，2H)，3.30(s，3H)，1.49(s，9H)。HRMS calcd for C19H23N2O3 +，327.1703[M+H]+；found，327.1591。
2)(E)-2-(2-(2-(4-(2-(5-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)吡啶基-2-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯
将(E)-(6-(4-羟基苯乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.61mmol)用DMF溶解，加入碳酸铯(830mg，2.56mmol)在室温下搅拌30min，后加入(乙烷-1，2-二基双(氧基))双(乙烷-2，1-二基)双(4-甲基苯磺酸盐)(，())(，)()(230mg，0.51mmol)，反应12小时。后用饱和食盐水水洗三次，乙酸乙酯萃取，旋干拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，得到(E)-2-(2-(2-(4-(2-(5-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)吡啶基-2-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(0.25g，66.7％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.47(s，1H)，7.77(d，J＝7.1Hz，2H)，7.51(dd，J＝18.1，7.3Hz，4H)，7.39–7.25(m，3H)，7.01(d，J＝16.1Hz，1H)，6.89(d，J＝7.8Hz，2H)，4.15-4.10(m，4H)，3.81(t，J＝3.7Hz，2H)，3.63-3.59(m，6H)，3.28(s，3H)，2.39(s，3H)，1.45(s，9H)。HRMS calcd forC32H41N2O8S+，613.2578[M+H]+；found，613.2364。
3)(E)-(6-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
(E)-2-(2-(2-(4-(2-(5-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)吡啶基-2-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(50mg，0.08mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，加入四丁基氟化铵(210mg，0.8mmol)，氮气保护，在50℃条件下反应3小时。后旋干拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，得到(E)-(6-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(23mg，62.2％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.49(d，J＝2.5Hz，1H)，7.62–7.45(m，4H)，7.33(d，J＝8.5Hz，1H)，7.03(d，J＝16.1Hz，1H)，6.93(d，J＝8.7Hz，2H)，4.73–4.61(m，1H)，4.57–4.43(m，1H)，4.22–4.11(m，2H)，3.96–3.85(m，2H)，3.85–3.79(m，1H)，3.78–3.67(m，5H)，3.30(s，3H)，1.47(s，9H)。HRMS calcd forC25H34FN2O5 +，461.2446[M+H]+；found，461.2243。
4)(E)-6-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺
取50ml的圆底烧瓶，往(E)-6-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺(35mg，0.076mmol)中加入1mL的三氟乙酸，在室温下搅拌1小时。后旋干拌样，柱层析纯化(纯乙酸乙酯)，后得到(E)-6-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺(27mg，91.12％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.98(s，1H)，7.60(d，J＝7.9Hz，1H)，7.52–7.24(m，4H)，7.12(dd，J＝19.1，11.7Hz，1H)，6.86(t，J＝8.0Hz，2H)，4.72–4.56(m，1H)，4.48(dd，J＝10.7，6.7Hz，1H)，4.14(s，2H)，3.98–3.66(m，8H)，2.86(s，3H)。HRMS calcd for C20H26FN2O3 +，361.1922[M+H]+；found，361.1686。
实施例5(E)-5-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基嘧啶-2-胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)N-甲基-5-乙烯基嘧啶-2-胺
将2-氨基-5-溴嘧啶(500mg，2.67mmol)溶解于无水甲苯之中，再加入四三苯基磷钯(308mg，0.27mmol)，使用水泵将瓶内空气抽走，加上N2气保护。在室温下搅拌30min，最后将三丁基乙烯基锡(1100mg，3.47mmol)，逐滴加入反应瓶中，最后升温至120℃，反应回流24小时。待反应完成后旋干拌样，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，最后得到N-甲基-5-乙烯基嘧啶-2-胺(300mg，83.2％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.32(s，2H)，6.46(dd，J＝17.7，11.1Hz，1H)，5.96(s，1H)，5.56(d，J＝17.7Hz，1H)，5.10(d，J＝11.1Hz，1H)，2.98(d，J＝5.1Hz，3H)，13C NMR(75MHz，CDCl3)δ162.31，155.86，155.79，130.72，120.35，111.76，28.41。
2)(E)-2-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇
将N-甲基-5-乙烯基嘧啶-2-胺(300mg，2.22mmol)和2-(2-(2-(4-碘苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇((()))(1100mg，3.33mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入碳酸钾(191mg，6.67mmol)，四丁基溴化铵(1790g，5.55mmol)，醋酸钯(50mg，0.2mmol)，在氮气保护下，置于70℃油浴反应10小时。后处理：乙酸乙酯萃取，饱和食盐水水洗。旋干拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-2-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(250mg，31.56％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.45(s，2H)，7.41(d，J＝8.7Hz，2H)，7.00–6.83(m，3H)，6.75(d，J＝16.5Hz，1H)，4.24–4.11(m，2H)，3.96–3.81(m，3H)，3.81–3.68(m，7H)，3.71-3.62(m，2H)，3.05(d，J＝5.1Hz，3H)。HRMScalcd for C19H26N3O4 +，360.1918[M+H]+；found，360.1815。
3)(E)-2-(2-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯
将(E)-2-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(130mg，0.36mmol)溶于二氯甲烷中，在冰浴条件下将甲苯磺酰氯(343mg，1.80mmol)，三乙胺(10mL)，最后加入4-二甲氨基吡啶(5mg，0.04mmol)，在室温下反应过夜，反应结束后用水洗三次，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-2-(2-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(100mg，53.93％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.45(s，2H)，7.81(d，J＝8.3Hz，2H)，7.37(dd，J＝22.0，8.4Hz，4H)，6.91(dd，J＝12.4，3.7Hz，2H)，6.78-6.72(m，2H)，4.26–4.08(m，4H)，3.98–3.78(m，2H)，3.78–3.55(m，6H)，3.04(d，J＝5.1Hz，3H)，2.44(s，3H)。HRMS calcd forC26H32N3O6S+，514.2006[M+H]+；found，514.1927。
4)(E)-5-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基嘧啶-2-胺
取50mL的圆底烧瓶，将(E)-2-(2-(2-(2-(4-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(100mg，0.19mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，抽除空气，N2气保护，加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.5mL)，在50℃下反应4小时。反应结束后旋干溶液，加入硅胶拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-5-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基)-N-甲基嘧啶-2-胺(60mg，87.48％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.45(s，2H)，7.41(d，J＝8.7Hz，2H)，7.00–6.83(m，3H)，6.75(d，J＝16.5Hz，1H)，4.75–4.59(m，1H)，4.58–4.45(m，1H)，4.23–4.06(m，2H)，3.99–3.85(m，2H)，3.84–3.62(m，6H)，3.04(d，J＝5.1Hz，3H)。HRMS calcd for C19H25FN3O3 +，362.1874[M+H]+；found，362.1733。
实施例6(E)-5-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)-N-甲基嘧啶-2-胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶基-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇
将N-甲基-5-乙烯基嘧啶-2-胺(300mg，2.22mmol)和2-(2-(2-((5-碘吡啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(1100mg，3.33mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入碳酸钾(920mg，6.67mmol)，四丁基溴化铵(1790mg，5.55mmol)，醋酸钯(50mg，0.2mmol)，在氮气保护下，置于70℃油浴反应10小时。后处理：乙酸乙酯萃取，饱和食盐水水洗。旋干拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶基-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(200mg，25.0％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.45(s，2H)，8.15(s，1H)，7.76(dd，J＝8.7，2.5Hz，1H)，6.85-6.76(m，3H)，5.44(s，1H)，4.50(dd，J＝5.5，4.0Hz，2H)，3.94–3.82(m，2H)，3.79–3.68(m，6H)，3.63(dd，J＝5.3，3.5Hz，2H)，3.04(d，J＝5.1Hz，3H)。HRMS calcd for C18H25N4O4 +，361.1870[M+H]+；found，361.1961。
2)(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶基-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯
将(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶基-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(200mg，0.55mmol)溶于二氯甲烷中，在冰浴条件下将甲苯磺酰氯(530mg，2.78mmol)，三乙胺(10mL)，最后加入4-二甲氨基吡啶(10mg，0.08mmol)，在室温下反应过夜，反应结束后用水洗三次，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶基-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(150mg，53.06％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.43(s，2H)，8.14(s，1H)，7.77-7.72(m，3H)，7.39–7.19(m，2H)，7.04–6.61(m，3H)，4.58–4.35(m，2H)，4.21–4.07(m，2H)，3.92–3.76(m，2H)，3.75–3.52(m，6H)，3.02(d，J＝5.0Hz，3H)，2.42(s，3H)。HRMS calcd forC25H31N4O6S+，515.1959[M+H]+；found，515.1653。
3)(E)-5-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)-N-甲基嘧啶-2-胺
将(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶基-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(80mg，0.16mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，N2气保护，加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.4mL)，在50℃下反应4小时。反应结束后旋干溶液，加入硅胶拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-5-(2-(6-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)-N-甲基嘧啶-2-胺(43mg，74.45％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.45(s，2H)，8.16(d，J＝2.2Hz，1H)，7.76(dd，J＝8.7，2.4Hz，1H)，6.98–6.61(m，3H)，4.74–4.61(m，1H)，4.49(dd，J＝8.9，4.4Hz，3H)，3.94–3.63(m，9H)，3.04(d，J＝5.1Hz，3H)。HRMS calcd for C18H24FN4O3 +，363.1827[M+H]+；found，363.1824。
实施例7(E)-5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基嘧啶-2-胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇
将N-甲基-5-乙烯基嘧啶-2-胺(360mg，2.67mmol)和2-(2-(2-(((5-溴嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(1200mg，4.00mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入碳酸钾(1100mg，8.01mmol)，四丁基溴化铵(2150mg，6.68mmol)，醋酸钯(59mg，0.27mmol)，在氮气保护下，置于80℃油浴反应过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，饱和食盐水水洗。旋干拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(189mg，19.6％)。1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.75(s，2H)，8.53(s，2H)，7.36(s，1H)，7.27–6.94(m，2H)，4.60–4.26(m，2H)，3.89–3.68(m，2H)，3.58–3.42(m，8H)，2.82(t，J＝7.5Hz，3H)。HRMS calcd forC17H24N5O4 +，362.1823[M+H]+；found，362.1296。
2)(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯
将(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(100mg，0.27mmol)溶于二氯甲烷中，在冰浴条件下将甲苯磺酰氯(260mg，1.38mmol)，三乙胺(10mL)，最后加入4-二甲氨基吡啶(10mg，0.08mmol)，在室温下反应过夜，反应结束后用水洗三次，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(60mg，43.2％)。HRMS calcd for C24H30N5O6S+，516.1911[M+H]+；found，516.1135。
3)(E)-5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基嘧啶-2-胺
将(E)-2-(2-(2-((5-(2-(2-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(50mg，0.10mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，N2气保护，加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.25mL)，在50℃下反应4h。反应结束后旋干溶液，加入硅胶拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基嘧啶-2-胺(30mg，85.2％)。1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.76(s，2H)，8.52(s，2H)，7.34(d，J＝4.8Hz，1H)，7.09(q，J＝16.8Hz，2H)，4.67–4.55(m，1H)，4.52–4.34(m，3H)，3.76-3.73(m，2H)，3.64–3.52(m，6H)，2.83(d，J＝4.7Hz，3H)。HRMS calcd for C17H23FN5O3 +，364.1779[M+H]+；found，364.1187。
实施例8(E)-6-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)(E)-(6-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
将(6-乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.73mmol)和2-(2-(2-(((5-溴嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(150mg，0.49mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入碳酸钾(202mg，1.46mmol)，四丁基溴化铵(393mg，1.22mmol)，醋酸钯(11mg，0.07mmol)，在氮气保护下，置于80℃油浴反应过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，饱和食盐水水洗。旋干拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-(6-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，28.3％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.70(s，2H)，8.54(s，1H)，7.62(dd，J＝8.4，2.3Hz，1H)，7.48(d，J＝16.2Hz，1H)，7.35(d，J＝8.4Hz，1H)，7.14(d，J＝16.2Hz，1H)，4.66–4.47(m，2H)，3.99–3.86(m，2H)，3.83–3.68(m，6H)，3.68–3.56(m，2H)，3.32(s，3H)，1.49(s，9H)。HRMS calcd for C23H33N4O6 +，461.2395[M+H]+；found，461.2060。
2)(E)-2-(2-(2-((5-(2-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡啶-2-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯
将(E)-(6-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.22mmol)溶于二氯甲烷中，在冰浴条件下将甲苯磺酰氯(210mg，1.09mmol)，三乙胺(10mL)，最后加入4-二甲氨基吡啶(5mg，0.04mmol)，在室温下反应过夜，反应结束后用水洗三次，柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到(E)-2-(2-(2-((5-(2-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡啶-2-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(60mg，43.2％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.70(s，1H)，8.55(d，J＝2.5Hz，1H)，7.80(d，J＝8.3Hz，1H)，7.66(d，J＝7.2Hz，1H)，7.51(d，J＝16.1Hz，1H)，7.36(t，J＝7.7Hz，1H)，7.15(d，J＝16.2Hz，1H)，4.64–4.49(m，2H)，4.24–4.10(m，2H)，3.94–3.79(m，2H)，3.77–3.54(m，6H)，3.32(s，3H)，2.45(s，3H)，1.49(s，9H)。HRMS calcdfor C30H39N4O8S+，615.2483[M+H]+；found，615.2033。
3)(E)-(6-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
将(E)-2-(2-(2-((5-(2-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡啶-2-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(100mg，0.16mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，N2气保护，加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.5mL)，在50℃下反应4小时。反应结束后旋干溶液，加入硅胶拌样，柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到(E)-(6-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，81.1％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.70(s，2H)，8.54(d，J＝2.5Hz，1H)，7.72(dd，J＝5.7，3.3Hz，1H)，7.64(d，J＝6.3Hz，1H)，7.57–7.48(m，1H)，7.45(s，1H)，7.36(d，J＝8.4Hz，2H)，7.15(d，J＝16.2Hz，1H)，4.68–4.61(m，1H)，4.61–4.53(m，2H)，4.52–4.45(m，1H)，4.31(t，J＝6.7Hz，1H)，3.98–3.88(m，2H)，3.84–3.67(m，6H)，3.32(s，3H)。HRMS calcd forC23H32FN4O5 +，463.2351[M+H]+；found，463.1959。
4)(E)-6-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺
取50ml的圆底烧瓶，往E)-(6-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(47mg，0.10mmol)中加入1mL的三氟乙酸，在室温下搅拌1小时。后处理：旋干拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，后得到化合物(E)-6-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺(36mg，98.5％)。1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.83(s，2H)，7.94(d，J＝2.7Hz，1H)，7.70(d，J＝8.9Hz，1H)，7.37(m，3H)，4.58(m，1H)，4.44(m，3H)，3.77(m，2H)，3.69(m，1H)，3.59(m，5H)，2.79(s，3H)。13C NMR(75MHz，DMSO)δ164.32，157.77，146.64，139.26，124.94，124.16，84.57，82.38，70.27，68.97，67.05，48.73，40.77，40.49，40.22，39.94，39.66，39.38，39.10，29.67。HRMS calcd for C18H24FN4O3 +，363.1827[M+H]+；found，363.0811。
实施例9(E)-5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟代乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-2-胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)叔丁基(E)-(5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯
将(5-乙烯基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(284mg，1.22mmol)和2-(2-(2-(((5-溴嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(250mg，0.81mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入碳酸钾(337mg，2.44mmol)，四丁基溴化铵(655mg，2.03mmol)，醋酸钯(18mg，0.08mmol)，在氮气保护下，置于80℃油浴反应过夜。后乙酸乙酯萃取，饱和食盐水水洗。旋干拌样，柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到叔丁基(E)-(5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(212mg，56.9％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.67(s，2H)，8.53(s，2H)，7.90(t，J＝5.8Hz，2H)，7.02(d，J＝4.9Hz，2H)，4.74–4.50(m，2H)，4.01–3.88(m，2H)，3.81–3.67(m，6H)，3.64(dd，J＝5.3，3.6Hz，2H)，3.53(s，3H)，1.57(s，9H)。HRMS calcd for C23H33N4O6 +，461.2395[M+H]+；found，461.1680。
2)(E)-2-(2-(2-((5-(2-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)吡啶-3-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯将叔丁基(E)-(5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(300mg，0.65mmol)溶于二氯甲烷中，在冰浴条件下将甲苯磺酰氯(620mg，3.26mmol)，三乙胺(10mL)，最后加入4-二甲氨基吡啶(10mg，0.08mmol)，在室温下反应过夜，反应结束后用水洗三次，柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到(E)-2-(2-(2-((5-(2-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)吡啶-3-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(198mg，49.6％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.65(s，2H)，8.45(s，1H)，7.94–7.68(m，4H)，7.35(d，J＝8.1Hz，2H)，6.99(q，J＝16.5Hz，2H)，4.62–4.48(m，2H)，4.23–4.07(m，2H)，3.95–3.81(m，2H)，3.75–3.55(m，6H)，3.44(s，3H)，2.45(s，3H)，1.55(s，9H)。HRMS calcd for C30H39N4O8S+，615.2483[M+H]+；found，615.1485。
3)(E)-(5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
将(E)-2-(2-(2-((5-(2-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)吡啶-3-基)乙烯基)嘧啶-2-基)氧基)乙氧基乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(100mg，0.16mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，N2气保护，加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.5mL)，在50℃下反应4小时。反应结束后旋干溶液，加入硅胶拌样，柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到(E)-(5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(65mg，87.9％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.64(s，2H)，8.43(s，1H)，7.90–7.65(m，2H)，6.97(q，J＝16.5Hz，2H)，4.72–4.60(m，1H)，4.60–4.53(m，2H)，4.52–4.45(m，1H)，3.95–3.85(m，2H)，3.84–3.67(m，6H)，3.42(s，3H)，1.54(s，9H)。HRMS calcd for C23H32FN4O5 +，463.2351[M+H]+；found，463.1485。
4)(E)-5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟代乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-2-胺
将(E)-(5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)吡啶-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.09mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，N2气保护，加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.23mL)，在50℃下反应3小时。反应结束后旋干溶液，加入硅胶拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，得到(E)-5-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟代乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-2-胺(31mg，96.2％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.71(s，2H)，8.14(dd，J＝9.4，2.0Hz，1H)，7.95(d，J＝1.7Hz，1H)，7.16–6.95(m，3H)，4.62–4.58(m，1H)，4.54(dd，J＝5.4，3.9Hz，2H)，4.48–4.41(m，1H)，3.91–3.83(m，2H)，3.82–3.75(m，1H)，3.75–3.64(m，6H)，3.35-3.31(m，1H)，3.03(s，3H)。HRMS calcdfor C18H24FN4O3 +，363.1827[M+H]+；found，363.0817。
实施例10(E)-4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基苯胺
结构式如下：
合成路线如下：
1)(E)-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
将甲基(4-乙烯基苯基)氨基甲酸叔丁酯(182mg，0.78mmol)和2-(2-(2-(((5-溴嘧啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(200mg，0.65mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入碳酸钾(263mg，1.95mmol)，四丁基溴化铵(524mg，1.63mmol)，醋酸钯(15mg，0.06mmol)，在氮气保护下，置于80℃油浴反应过夜。后处理：乙酸乙酯萃取，饱和食盐水水洗。旋干拌样，柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到(E)-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，43.6％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.65(s，2H)，7.46(d，J＝8.6Hz，2H)，7.27(d，J＝8.8Hz，2H)，7.07(d，J＝16.5Hz，1H)，6.90(d，J＝16.5Hz，1H)，4.74–4.49(m，2H)，4.02–3.83(m，2H)，3.74-3.67(m，6H)，3.74-3.62(m，2H)，3.29(s，3H)，1.48(s，10H)。HRMS calcd for C24H34N3O6 +，460.2442[M+H]+；found，460.1871。
2)(E)-2-(2-(2-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)苯乙烯基)嘧啶-2--2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯
将(E)-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.28mmol)溶于二氯甲烷中，在冰浴条件下将甲苯磺酰氯(270mg，1.41mmol)，三乙胺(10mL)，最后加入4-二甲氨基吡啶(10mg，0.08mmol)，在室温下反应过夜，反应结束后用水洗三次，柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到(E)-2-(2-(2-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)苯乙烯基)嘧啶-2--2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(98mg，57.1％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.65(s，2H)，7.81(d，J＝8.3Hz，2H)，7.47(d，J＝8.6Hz，2H)，7.35(d，J＝8.0Hz，2H)，7.27(d，J＝7.1Hz，1H)，7.08(d，J＝16.5Hz，1H)，6.91(d，J＝16.5Hz，1H)，4.62–4.50(m，2H)，4.21–4.10(m，2H)，3.92–3.83(m，2H)，3.75–3.57(m，6H)，3.29(s，3H)，2.45(s，3H)，1.48(s，9H)。HRMS calcd for C31H40N3O8S+，614.2531[M+H]+；found，614.1730。
3)叔丁基(E)-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯基)(甲基)氨基甲酸酯
将(E)-2-(2-(2-((5-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)苯乙烯基)嘧啶-2--2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)4-甲基苯磺酸乙酯(60mg，0.13mmol)用干燥的四氢呋喃溶解，N2气保护，加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.34mL)，在50℃下反应4小时，后除去溶液，加入硅胶拌样，柱层析纯化(乙酸乙酯)，得到叔丁基(E)-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯基)(甲基)氨基甲酸酯(45mg，75.1％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.65(s，2H)，7.47(d，J＝8.6Hz，2H)，7.27(d，J＝7.6Hz，2H)，7.04-6.89(m，2H)，4.70–4.61(m，1H)，4.61–4.54(m，2H)，4.54–4.45(m，1H)，3.98–3.88(m，2H)，3.85–3.79(m，1H)，3.79–3.68(m，5H)，3.29(s，3H)，1.48(s，9H)。HRMS calcd for C24H33FN3O5 +，462.2399[M+H]+；found，462.1682。
4)(E)-4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基苯胺
取50mL的圆底烧瓶，往叔丁基(E)-(4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)苯基)(甲基)氨基甲酸酯(34mg，0.07mmol)中加入1mL的三氟乙酸，在室温下搅拌1h。后处理：旋干拌样，柱层析纯化(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)，后得到(E)-4-(2-(2-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)嘧啶-5-基)乙烯基)-N-甲基苯胺(24mg，91.1％)。1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.75(s，2H)，7.34(d，J＝8.6Hz，2H)，7.18(d，J＝16.6Hz，1H)，6.84(d，J＝16.6Hz，1H)，6.58(d，J＝8.6Hz，2H)，4.59(m，1H)，4.42(dd，J＝8.4，4.1Hz，3H)，3.76(m，2H)，3.70(m，1H)，3.59(m，5H)，2.71(s，3H)。HRMS calcd for C19H25FN3O3 +，362.1874[M+H]+；found，362.0806。
实例11(E)-6-(2-(6-(2-(2-(2-(2-(氟-18F)乙氧基)乙氧基)乙氧基)吡啶-3-基)乙烯基)-N-甲基吡啶-3-胺的合成及稳定性
结构式如下：
反应式如下：
实验步骤：
a)将18F-从QMA柱上用1mL 18-crown/KHCO3溶液(160mg K222 in 18.6mLacetonitrile/29mg KHCO3 in 3.4mL water)洗脱进入反应管；
b)于120℃、N2吹扫下蒸干上述K222/K2CO3洗脱液；向蒸发残余物中加入1mL无水乙腈并再次蒸干，重复上述过程三次，制得干燥的18F-/K222/K2CO3络合物；
c)冷却反应液；向上述干燥的18F-/K222/K2CO3络合物中加入1mg标记前体溶液(1mL的乙腈溶解)；120℃反应10min；
d)向反应管中加入8mL水；将上述稀释后的反应溶液通过Oasis HLB固相萃取柱；
e)用10mL水冲洗上述Oasis HLB固相萃取柱；
f)向上步残余物中加入1mL 10％HCl，涡旋混匀，并置于120℃油浴中反应10min；后将反应液pH调为中性，后经半制备HPLC纯化(Phenomenex Gemini-Nx C18 110A(250×4.6mm×5μ，乙腈/0.1％甲酸水＝6/4)，出峰时间为12.5min，纯度大于95％。
h)将标记的放射性化合物至于PBS和小鼠血清中2小时，化合物没有变质，说明化合物稳定性有所提高。
实施例13(E)-6-(4-(2-(2-(2-(2-(氟-18F)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基-18F)-N-甲基吡啶-3-胺合成及稳定性
结构式如下：
实验步骤与实施例12类似，放射性出峰时间在13.2min，纯度>95％，稳定性有所提高。
实例14结合常数的测定实验
用一定浓度的Aβ42聚集体蛋白与一定浓度的放射性探针125I-IMPY反应，向反应体系中加入不同浓度的待测化合物与125I-IMPY竞争，待反应平衡后使用36孔细胞收集器冲洗分离，并收集滤纸，使用γ-检测器检测滤纸上的放射性，以此来计算IC50值。
实验步骤：配置PH＝7.4的Tris-HCl缓冲液和PBS缓冲液(0.2M)4L，将125I-IMPY配成0.02μCi/100μL的乙醇溶液。将待测化合物配成10-3～10-9mol/L的DMSO溶液。配置Aβ蛋白5mL，稀释成15nM的PBS溶液。在12×75mm硼硅玻璃管中分别加入20μL不同浓度的待测化合物溶液和200μL125I-IMPY、680μL PBS、100μL Aβ溶液。封闭试管后37℃孵育2h，用36孔细胞收集器收集反应液，用预冷的Tris-Hcl冲洗三遍，收集滤纸并用γ计数器测量放射性计数，得到数据后使用Graphpad Prism进行数据处理并得到IC50值。待测化合物的IC50见表1。从表中可以看出，与已报到的AV45相比，本发明所涉及的部分化合物与Aβ亲和性有所提高。
表1：化合物的IC50值、脑不同时相的摄取值和micro-PET不同时相比值
实例15(E)-5-(4-(2-(2-(2-(2-氟乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基-18F)-N-甲基吡啶-2-胺的切片自显影实验
将一定浓度的化合物分别与正常C57小鼠和5XFAD小鼠作用后，取脑切片用磷屏曝光并用储磷屏系统成像。
实验步骤：
配置500μCi/100μL的探针生理盐水溶液，吸取100μL作为初始活度，向5XFAD转基因小鼠和正常小鼠的尾静脉注射100μL探针盐溶液，残留注射器测活度，差量法计算探针计。30min后处死快速取脑，-80°液氮冷冻，包裹OCT。随后在-20℃下进行20μm切片，切片放在涂有凝胶的显微镜载玻片上，室温下风干。在自动放射线照相磁带中，将切片暴露在磷光荧光屏上2h，用储磷屏系统成像。如图1，化合物对Aβ具有较高的亲和性，白质非特异性结合有所改善。
实例16体内分布实验
通过向正常小鼠体内注射18F标记的探针，观察探针在小鼠体内的药代动力学性质。
实验步骤：取周龄一致，性别一致，并且体重在同一区间的小鼠20只(4个时相：2min，30min，60min，120min)，重复5组，取60μCi的探针，用氮气吹干，溶于生理盐水中，配制为2μCi/100μL。小鼠尾静脉注射100μL(2μCi)的待测化合物探针盐溶液，按时相处死。眼球摘除取血于预先称量好重量的伽马计数管中，快速解剖小鼠分别取脑组织、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、皮肤、肌肉、骨骼。所取各脏器分别装入预先称量好重量的塑料小袋中，对伽马计数管和塑料袋称重，并装样至计数管检测。将注射液稀释100倍，取出100μL测得其cpm，得到的cpm值记为本次试验的百分之一的注射计量，并做3次本底的测量，数据表现为％ID/g。％ID/g＝(脏器的放射性计数/对应的脏器重量)/百分之一的注射计量。具体值见表1。从表1可以看到与AV-45相比，本发明所涉及的化合物脑摄取高、清除率高，具有较好的药代动力学。
实例17
对5XFAD小鼠进行麻醉，将它们固定在鼠板上，麻醉后经尾静脉注射放射性化合物，并于给药后进行2小时的micro PET/CT动态扫描，将采集重建后的PET/CT图像传至工作站进行图像融合，以判断探针的放射性分布以及与Aβ斑块的结合情况等。从表1可以看到，与AV-45相比，本发明所涉及的化合物MicroPET显像结果与生物分布的结果基本一致，脑摄取高、清除率高，具有较好的药代动力学。从图2可以看出，(E)-6-(4-(2-(2-(2-(2-(氟-18F)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙烯基-18F)-N-甲基吡啶-3-胺对Aβ斑块成像与文献报道类似，对Aβ斑具有较好的靶向性。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。