肠道菌群丰度检测在肝纤维化、肝硬化中的应用
阅读说明：本技术 肠道菌群丰度检测在肝纤维化、肝硬化中的应用 (Application of intestinal flora abundance detection in hepatic fibrosis and liver cirrhosis ) 是由 沈悦 吴盛迪 蒋炜 于 2021-09-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种肠道菌群丰度检测在肝纤维化、肝硬化中的应用,属于生物医药技术领域。本发明通过收集慢性乙型肝炎病人的粪便标本,进行宏基因组菌群测序,获得相应属水平Streptococcus、Lactococcus、Veillonella、Faecalibacterium的丰度值；根据模型公式计算丰度值得分,根据得分评估患者是否有肝纤维化、肝硬化的风险。以菌群丰度特征为基础,通过对乙肝病人进行特异的肠道微生物群组合丰度的检测,获得对肝脏纤维化严重程度的评估结果和早期肝脏相关事件的预测,为对患者制定进一步优化的监测和干预策略提供参考；也避免了多次肝活检给患者带来的痛苦。(The invention relates to application of intestinal flora abundance detection in hepatic fibrosis and liver cirrhosis, and belongs to the technical field of biological medicines. The invention collects the stool sample of the chronic hepatitis B patient, carries on the sequencing of the metagenome flora, obtains the abundance value of the corresponding level Streptococcus, Lactococcus, Veillonella, Faecalibacterium; and calculating the abundance value score according to a model formula, and evaluating whether the patient has the risk of hepatic fibrosis and liver cirrhosis according to the score. Based on the flora abundance characteristics, the evaluation result of the liver fibrosis severity and the prediction of early liver related events are obtained by detecting the specific intestinal microbiota combination abundance of hepatitis B patients, and reference is provided for the further optimized monitoring and intervention strategy made by the patients; and the pain of the patient caused by multiple times of liver biopsy is also avoided.)
技术领域
本发明涉及一种肠道菌群丰度检测在肝纤维化、肝硬化中的应用，属于生物医药技术领域。
背景技术
慢性乙型肝炎目前仍然是我国慢性肝病和肝脏相关结局事件(包括：肝硬化失代偿、肝细胞癌和死亡)发生的主要原因。大约20％到30％的慢性乙型肝炎患者会发生肝脏相关结局事件，这一比例在乙肝代偿性肝硬化患者中会进一步升高。因此，对乙肝病人进行肝脏纤维化严重程度评估和早期肝脏相关事件的检测，对其进一步制定优化的监测和干预策略就非常重要。
目前在临床实践中，肝活检组织的病理结果被认为是评估乙肝病人肝脏纤维化严重程度的金标准。但肝活检是一种有创的检测方式，术中病人会面临出血的风险。肝活检过程还具有取样误差和结果判读主观性等缺点。同时，在临床实践中为了预测肝脏相关结局事件的风险或抗病毒治疗的效果，前后顺序或多次活检很难实现。
在早期胚胎学中，肝脏由前肠起源发育，在解剖和功能上都与肠道相辅相成，构成“肠-肝轴”。在乙型肝炎病毒的慢性感染中，肠道微生物能够激活全身免疫。此外，乙型肝炎病毒感染患者的肠道通透性发生改变，门静脉中细菌易位和内毒素负荷增加，促进免疫介导的肝损伤继而引发慢性炎症导致肝脏病变，因此，肠道菌群稳态失调在乙型肝炎病毒慢性感染中的作用也成为了国内外的研究热点。但是目前还没有研究将肠道菌群和乙肝无创诊断相结合，因此利用肠道菌群丰度特征为基础进行乙肝肝纤维化、肝硬化无创诊断具有一定独创性。
发明内容
本发明的目的是为解决如何利用肠道菌群丰度特征为基础进行乙肝肝纤维化、肝硬化无创检测的技术问题。
为达到解决上述问题的目的，本发明所采取的技术方案是提供一种肠道菌群丰度检测在肝纤维化、肝硬化中的应用，所述肠道菌群丰度检测是通过收集慢性乙型肝炎病人的粪便标本，进行宏基因组菌群测序，获得相应属水平Streptococcus、Lactococcus、Veillonella、Faecalibacterium的丰度值；根据模型公式计算得分：
5.090*Streptococcus+3.331*10^5Lactococcus+1.692*Veillonella+7.139*Faecalibacterium-0.944；
若得分大于0.658，则提示患者有肝纤维化、肝硬化的风险。
本发明提供一种肠道菌群丰度检测在制备乙肝肝纤维化和/或肝硬化诊断试剂盒中的应用。
本发明提供一种肠道菌群丰度检测在制备乙肝肝纤维化和/或肝硬化预后试剂盒中的应用。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明通过提取乙肝病人粪便中微生物菌群的DNA并测序从而获得微生物多样性、种类和丰度的特征，并以微生物的丰度特征为基础进行肝纤维化、肝硬化的预测。以菌群丰度特征为基础，结合慢性乙型肝炎病人肠道菌群测序和无创检测，建立慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化、肝硬化无创检测的肠道微生物群组合；通过对乙肝病人进行特异的肠道微生物群组合丰度的检测，获得对肝脏纤维化严重程度的评估结果和早期肝脏相关事件的预测，作为对患者制定进一步优化的监测和干预策略的参考；也避免了多次肝活检给患者带来的痛苦。
附图说明
图1为个属水平肠道菌群的检测ROC曲线。
图2为联合检测ROC曲线；检测阈值0.658，ROC曲线下面积：0.788
具体实施方式
为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下：
本发明提供了一种肠道菌群丰度检测在肝纤维化、肝硬化中的应用，肠道菌群丰度检测是通过收集慢性乙型肝炎病人的粪便标本，进行宏基因组菌群测序，获得相应属水平Streptococcus、Lactococcus、Veillonella、Faecalibacterium的丰度值；根据模型公式计算得分：
5.090*Streptococcus+3.331*10^5Lactococcus+1.692*Veillonella+7.139*Faecalibacterium-0.944；
若得分大于0.658，则提示患者有肝纤维化、肝硬化的风险。
本发明提供一种肠道菌群丰度检测在制备乙肝肝纤维化和/或肝硬化诊断试剂盒中的应用。
本发明提供一种肠道菌群丰度检测在制备乙肝肝纤维化和/或肝硬化预后试剂盒中的应用。
本发明基于肠道菌群丰度与乙肝肝纤维化病人、乙肝肝硬化病人特异的相关性，其相关性检测的方法，包括以下步骤：
1.提取乙肝病人(包括乙肝肝纤维化病人、乙肝肝硬化病人)粪便中微生物菌群的DNA并测序。
2.通过LEfSe分析(LDA Effect Size分析)，比较分析得到属(genus)水平乙肝肝纤维化、乙肝肝硬化病人中有明显差异的肠道菌群，作为检测指标预测乙肝肝硬化。
3.分别绘制差异菌的ROC诊断曲线，获得达到最高诊断效率的菌群组合。
在临床实践中，慢性乙型肝炎病人的粪便标本容易获得；同时随着测序技术的不断发展，目前宏基因组测序可以对菌群丰度进行快速、精确定量。通过结合慢性乙型肝炎病人粪便样本的宏基因组测序及基于菌群丰度的LEfSe分析，可以明确处于慢性乙型肝炎不同病程病人的差异菌群，进而构建诊断肝硬化的模型，推动慢性乙型肝炎的无创诊断。
实施例
如图1所示为个属水平肠道菌群的诊断ROC曲线；
如图2所示为联合诊断ROC曲线：其中阈值为0.658，ROC曲线下面积：0.788；
在临床实践中收集慢乙病人粪便标本，进行宏基因组菌群测序，获得相应属水平Streptococcus、Lactococcus、Veillonella、Faecalibacterium的丰度值。
根据联合诊断模型公式计算得分：5.090*Streptococcus+3.331*10^5Lactococcus+1.692*Veillonella+7.139*Faecalibacterium-0.944。若联合诊断模型指数大于0.658，则患者有肝纤维化、肝硬化的风险。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。