一种阴道外阴用组合物及其用途
阅读说明：本技术 一种阴道外阴用组合物及其用途 (Composition for vagina and vulva and application thereof ) 是由 曾忠铭 于 2019-11-11 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种阴道和/或外阴用组合物,具有较强的抑制假丝酵母菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等的作用,并具有促进阴道中的乳杆菌生长的作用,可用于阴道或外阴的卫生护理、保健,预防和治疗阴道感染性疾病。本发明还涉及一种有机酸配伍在制备阴道用和/或外阴用组合物或产品中的用途,可用于制备治疗性或非治疗性的阴道用或外阴用组合物或产品。本发明还进一步涉及一种抑制假丝酵母菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌,和促进阴道中的乳杆菌的方法,可用于调节阴道菌群、维护酸度酸度、消除阴道外阴不适、预防或治疗阴道感染性疾病。(The invention relates to a composition for vagina and/or vulva, which has the strong effects of inhibiting candida, escherichia coli, staphylococcus aureus and the like, has the effect of promoting the growth of lactobacillus in the vagina, and can be used for sanitary nursing and health care of the vagina or vulva and preventing and treating vagina infectious diseases. The invention also relates to the application of the organic acid in preparing compositions or products for vagina and/or vulva, which can be used for preparing therapeutic or non-therapeutic compositions or products for vagina or vulva. The invention further relates to a method for inhibiting candida, escherichia coli and staphylococcus aureus and promoting lactobacillus in vagina, which can be used for regulating vaginal flora, maintaining acidity and acidity, eliminating vaginal vulva discomfort and preventing or treating vaginal infectious diseases.)
技术领域
本发明涉及一种阴道和/或外阴用组合物，具有抑制假丝酵母菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等的作用，用于阴道具有促进阴道中的乳杆菌生长的作用，可用于阴道或外阴的卫生护理、保健，预防和治疗阴道感染性疾病。本发明还涉及一种有机酸配伍在制备阴道用和/或外阴用组合物或产品中的用途，可用于制备治疗性或非治疗性的阴道用或外阴用组合物或产品。本发明还进一步涉及一种用于抑制真菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，和促进阴道中的乳杆菌的方法，可用于调节阴道菌群、维护阴道酸度、消除阴道外阴不适、预防或治疗阴道感染性疾病。
背景技术
女性阴道黏膜表面适宜细菌、真菌等微生物栖居。健康状态下，女性阴道黏膜表面栖居的细菌通常以粗大的革兰阳性杆菌为主，称为“阴道正常菌群”。此类粗大革兰阳性杆菌大多数属于乳酸杆菌的范畴，以乳杆菌为主，能代谢阴道黏膜上皮细胞中的糖原产酸，使阴道酸度保持在pH值3.5～4.5的范围，具有抵抗病菌感染的作用。
很多因素均可干扰阴道正常菌群和阴道酸度，使女性阴道抵抗病菌感染的能力下降，因而妇女阴道微生物疾病极为常见。其中，又以真菌性阴道炎(Candidal vaginitis)、细菌性阴道病(Bacterial vaginosis)、细胞溶解性阴道病(Cytolytic vaginosis，CV)等较为常见。
阴道微生物疾病目前以抗菌治疗为主。抗菌治疗虽然能抑制或杀灭致病菌，但对阴道中有益的乳杆菌常常也具有抑制、甚至杀灭作用，导致抗感染力降低，使得阴道感染反复发生、或感染迁延不愈。如何保护好阴道中的乳杆菌和阴道酸度，提高阴道感染的预防治疗效果，仍然是当前医学研究的热点问题。
本发明人曾公开由苯甲酸和/或其盐、丙酸和/或其盐、脱氢乙酸和/或其盐、山梨酸和/或其盐、苯乙醇等抑菌剂配伍组成的多种组合物，据此制备的阴道用抑菌制剂可抑制假丝酵母菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌，但对阴道中乳杆菌的抑制作用不强，因而有利于阴道菌群恢复正常，如ZL201080036139、US8765819，PCT/CN2017/105296等公开的技术方案等。
在上述公开的抑菌剂配伍技术方案中，抑菌剂的使用量较低，以避免抑制阴道中有益的乳杆菌。如PCT/CN2017/105296公开的丙酸钠0.25～0.70％(w/v)、苯甲酸钠0.05～0.15％(w/v)的浓度，和ZL2010800-36139、US8765819公开的丙酸钠0.05～1.00％(w/v)、苯甲酸钠0.025～0.20％(w/v)的浓度等。上述较低用量的抑菌剂配伍可减轻甚至避免抑制阴道中的乳杆菌生长，但其对白假丝酵母菌的抑菌率，低于中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》(GB 15979-2002)所要求的抑菌制剂“对白假丝酵母菌的抑菌率＞50％”的标准，如本文的实验实施例一第6组、第7组，丙酸浓度达2.0％，苯甲酸钠浓度达0.2％，但二者配伍的溶液对白假丝酵母菌的抑菌率仍＜50％。
增加抑菌制剂中抑菌剂的浓度，可显著增强抑菌制剂或产品对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和假丝酵母菌的抑菌效力，抑制假丝酵母菌的抑菌率可达GB15979-2002中抑菌率＞50％的标准，但其对乳杆菌的抑制作用亦增强，用于阴道后将抑制阴道中的乳杆菌生长，导致阴道菌群难以恢复正常。如PCT/CN2017/105296中实验实施例一所示，当丙酸钠浓度为0.4％、0.5％时，乳杆菌生长未受显著抑制；当丙酸钠浓度为0.6％、尤其为0.7％时，乳杆菌的生长受到显著抑制。
再如，ZL201080036139和US8765819中实验实施例三所示，其中，第四组使用“9％麦芽糖+0.1％苯甲酸钠”的制剂，用药后16例病人中的13例(81.25％)其阴道菌群Nugent评分由＞7分降至≤3；第三组使用“9％麦芽糖+0.2％苯甲酸钠”的制剂，用药后15例病人中的10例(66.67％)其阴道菌群Nugent评分由＞7分降至≤3。Nugent评分≤3表示阴道菌群正常以乳杆菌为优势菌。可见随着苯甲酸钠浓度升高，阴道菌群恢复正常的比例降低。
在现有公开的其它技术文献中，未发现既能满足GB15979-2002中对假丝酵母菌的抑菌率＞50％的标准，又能促进阴道中的乳杆菌生长、使阴道菌群恢复正常的抑菌剂配伍的方法或组合物。
发明内容
本发明的目的是提供一种阴道用或外阴用组合物，所述组合物既具有抑制假丝酵母菌、大肠埃希氏菌、和金黄色葡萄球菌等的作用，又具有促进阴道中的乳杆菌生长的作用，可使阴道菌群恢复正常。
本发明的再一个目的，是提供一种有机酸配伍在制备阴道和/或外阴用组合物或产品中的用途。
本发明的进一步的一个目的，是提供一种抑制假丝酵母菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，和促进阴道中的乳杆菌的方法，所述方法可用于消除或减轻阴道外阴瘙痒、疼痛、性交痛等，和/或改善白带性状，和/或消除白带嗅味，和/或清洁护理阴道。
根据本发明的组合物或方法可以用于预防和/或治疗阴道感染，如预防或治疗假丝酵母菌阴道炎、或细胞溶解性阴道病、或阴道菌群失调、或细菌性阴道病、或老年性阴道炎。
本发明人在研究中发现：柠檬酸、苹果酸等二元酸、三元酸单独作用，对白假丝酵母菌的抑制作用较弱；与丙酸和/或其钠盐、苯甲酸和/或其钠盐、以及苯乙醇等抑菌剂配伍，对白假丝酵母菌的抑制作用并无显著的增效性、或协同性、或拮抗性。
但发现，柠檬酸可增强丙酸、苯甲酸、苯乙醇等抑菌剂配伍对阴道酸度、阴道菌群的调节作用，如增强PCT/CN2017/105296中0.25～0.70％(w/v)的丙酸钠、0.05～0.15％(w/v)的苯甲酸钠、及苯乙醇等抑菌剂配伍的凝胶对阴道酸度和阴道菌群的调节作用。更奇特的是，当柠檬酸、苹果酸等与更高浓度的、可抑制乳杆菌生长的抑菌剂，如0.15％(w/v)以上浓度的苯甲酸钠、0.7％(w/v)以上浓度的丙酸钠等配伍时，用于阴道后却可使阴道菌群快速恢复正常，阴道中的乳杆菌并没有受到较高浓度的苯甲酸钠、丙酸钠等的抑制！
这个现象十分反常，完全不符合抑菌剂“随着浓度升高其抑菌作用增强”的专业常识和前述体内体外实验研究的结果，充分显示了阴道微生态系统的复杂性。这个现象的机制尚未阐明，可能的机制之一，是柠檬酸等三元酸或二元酸通过改变阴道中不同细菌间的相互作用关系，导致了所述反常现象。
基于上述发现，本发明的组合物和制备方法创造性地将柠檬酸、苹果酸等二元酸、三元酸与丙酸、苯甲酸等有机酸抑菌剂配伍，以及与苯乙醇等芳香醇抑菌剂配伍，可兼顾抑制假丝酵母菌与保护乳杆菌，既符合GB15979-2002中要求的抑菌制剂对白假丝酵母菌的抑菌率＞50％的标准，又能促进阴道中的乳杆菌生长、使阴道菌群恢复正常，在女性健康领域具有重要理论和实践意义。
本发明提供一种阴道用或外阴用组合物，其特征在于每百克组合物中含有以下有机酸和/或其盐：(1)总量为0.3000～60.0000mmol的一种或多种选自下组的二元或多元有机酸和/或其盐：柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、马来酸；优选总量为1.5000～33.0000mmol的柠檬酸、苹果酸；(2)总量为0.3000～60.0000mmol的一种或多种选自下组的一元有机酸抑菌剂和/或其盐：乙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酸、乙酰丙酸，优选10.4103～33.0000mmol的丙酸；(3)总量为0.1000～10.0000mmol的一种或多种选自下组的芳香族有机酸抑菌剂和/或其盐：苯甲酸、对羟基苯甲酸、对甲氧基苯甲酸、水杨酸、肉桂酸；优选1.0000～2.5000mmol的苯甲酸；所述阴道用或外阴用组合物可为溶液剂、或喷雾剂、或泡沫剂、或软膏剂、或散剂、或微囊剂、或膜剂、或泡腾片剂、或胶囊剂、或栓剂、或片剂。
优选的所述组合物每百克含有总量为25.00～45.00mmol的有机酸和/或其盐。其中，所述有机酸的盐为钠盐。
优选的所述组合物每百克还含有总量为0.1000～10.0000mmol的一种或多种选自下组的芳香醇：苯甲醇、二氯化苯甲醇、苯乙醇、苯氧乙醇、肉桂醇，特别优选0.4000～5.0000mmol的苯乙醇。含芳香醇的本发明的组合物对假丝酵母菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等具有更强的抑菌或抗菌作用，或抗炎作用、或免疫调节作用等。
优选的所述组合物还含有总量为0.30～20.00％(w/w)的选自下组的一种或多种糖：葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、异麦芽酮糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、麦芽糖、异麦芽糖、异麦芽三糖、异麦芽四糖、异麦芽五糖、海藻糖、纤维二糖、蜜二糖、龙胆二糖、低聚龙胆糖、棉子糖、潘糖、麦芽寡糖、低聚异麦芽酮糖、低聚果糖、葡甘聚糖、糊精、淀粉、糖原或它们的混合物；特别优选总含量为1.00～6.50％(w/w)的葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽酮糖、异麦芽糖、海藻糖、麦芽寡糖、有异麦芽三糖、或它们的混合物。本发明的含糖的阴道用或外阴用组合物既可抑制假丝酵母菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等有害病菌，又具有促进阴道中的乳杆菌生长的作用，可调节阴道菌群、增强阴道酸度、维护阴道有益乳杆菌，适用于预防或治疗阴道乳杆菌减少、或阴道菌群失调、或细菌性阴道病，或用于阴道炎辅助治疗、或阴道治疗后恢复，或用于生殖道感染的治疗。
优选的所述组合物还含有0.001～1.00％(w/w)的一种或多种选自下组的雌激素类物质：己烯雌酚、己烷雌酚、雌二醇、雌酮、雌三醇、尼尔雌醇、炔雌醇、炔雌醇环戊醚、炔雌甲醚。本发明的含有雌激素类物质的阴道用组合物可促进阴道粘膜上皮细胞合成糖原，促进有益的乳杆菌生长，尤其适用于绝经期或绝经后用。
优选的所述组合物还含有0.001～1.00％(w/w)的一种或多种选自下组的植物雌激素类物质：大豆甙、黄豆苷元、黄豆黄素、拟雌内酯、金雀异黄酮、雌马醇、芹黄素、染料木甙、染料木素、鸡豆黄素、香豆雌酚、芒柄花黄素、白藜芦醇、亚麻木酚素、木脂素，本发明的含有植物雌激素类物质的阴道用组合物可具有更强的抑菌作用、抗炎作用，和促进阴道粘膜上皮细胞合成糖原、促进有益的乳杆菌生长的作用，尤其适用于绝经期或绝经后用。
优选的所述组合物还含有总量为1.0000～45.0000mmol的一种或多种选自下组的氨基酸和/或其盐：L-谷氨酸、谷氨酰胺、L-天冬氨酸、天冬氨酰胺、异亮氨酸、苯丙氨酸、颉氨酸、亮氨酸、脯氨酸、苏氨酸；特别优选总量为5.0000～30.0000mmol的谷氨酸、天冬氨酸和/或其盐。本发明的含氨基酸和/或其盐的阴道用或外阴用组合物或产品可减少乳酸菌产酸、减弱阴道酸度，适用于调节阴道微环境，治疗或辅助治疗细胞溶解性阴道病、乳杆菌性阴道病、和真菌性阴道炎。
所述组合物每百克还可选择性含有总量为0.1000～10.0000mmol的一种或多种单萜或倍半萜类化合物，包括但不限于：香茅醇、芳樟醇、香叶醇、橙花醇、桉叶醇、松油醇、香芹醇、薄荷醇、薰衣草醇。本发明的含单帖或倍半萜类化合物的组合物具有更强的抑菌或抗菌作用、或抗炎作用、或细胞调节作用、或免疫促进作用等。
所述组合物还可选择性含有总量为0.10～30.00毫克％(w/w)的一种或多种植物芳香精油类物质，包括但不限于：玫瑰精油、丁香油、麝香草油、薰衣草油、薄荷油、艾叶油、桉叶油、黄樟油、山苍子精油、肉桂精油、月桂叶油。本发明的含植物芳香精油的组合物具有更强的抑菌或抗菌作用、或抗炎作用、或细胞调节作用、或免疫促进作用等。
所述组合物还可选择性含有一种或多种选自下组的物质：0.01～5.0％(w/w)的芦荟提取物、0.001～1.0％(w/w)的维生素E、0.001～1.0％(w/w)的维生素A、0.001～1.0％(w/w)的维生素D、0.001～1.0％(w/w)的维生素C。本发明的含上述物质的阴道用组合物可用于保护阴道粘膜，促进损伤的阴道粘膜修复。
所述组合物还可选择性含有一种或多种抗菌药物，包括但不限于：甲硝唑、或替硝唑、或克霉唑、或氟康唑、或咪康唑、或酮康唑，优选甲硝唑、克霉唑。本发明的含甲硝唑或克霉唑的组合物或产品适用于治疗细菌性阴道病、或细菌性阴道炎、或真菌性阴道炎。
优选的所述组合物还可进一步选择性含有一种或多种抑菌剂或抗菌剂，包括但不限于：脱氢乙酸、脱氢乙酸钠、山梨酸、山梨酸钾、山梨酸钠、双乙酸、双乙酸钠、辛酸、辛酸钠、癸酸、葵酸钠、十一烯酸、十一烯酸钠、月桂酸、月桂酸钠、纳他霉素、乳铁蛋白、乳铁蛋白肽、溶菌酶、抑菌蛋白、抗菌肽、地衣酸、虎耳草素、环庚三烯酚酮、肉桂醛、土槿乙酸、氯原酸、黄藤素、丙烯苯氧乙醇、1，2-戊二醇、1，2-己二醇、1，6-己二醇、1，2-辛二醇、1，2-葵二醇、甲基丙二醇、乙基己基丙三醇、过氧化苯甲酰。所述抑菌剂或抗菌剂用于进一步增强本发明的阴道用或外阴用组合物或产品对假丝酵母菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、及对其它有害微生物包括但不限于对HIV、HPV等病毒的抑菌或抗菌作用。
优选的所述组合物为水溶液剂、水溶性凝胶剂；所述水溶液剂、水溶性凝胶剂的pH值为3.0～4.5，优选pH值为3.5～4.0。其中，所述水溶性凝胶剂含有非流动性、粘性、水溶性胶体基质，包括但不限于黄原胶、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、卡波姆、聚卡波非、，优选黄原胶。
本发明的水溶性凝胶剂可采用多种方式包装，包括但不限于单次剂量、无菌、密封包装，或包装于阴道用器械中，或包装于一次性阴道给药器中；优选单次剂量、无菌、密封包装。
本发明的有机酸组合物对假丝酵母菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有抑制作用，对阴道中的乳杆菌具有促进作用。
本发明的阴道用或外阴用组合物或产品可为治疗性的组合物或产品，包括但不限于药品、医疗器械、药物器械、消毒器械、健康产品、消毒剂、抗菌剂、抑菌剂、黏膜表面杀微生物剂、微生态调节剂、微环境调节剂、微生物调节剂、菌群调节剂、一次性使用医疗用品。本发明的阴道用或外阴用组合物或产品也可为消毒器械、或医疗器械、或药物器械的组成部分。
本发明的阴道用或外阴用组合物或产品可为非治疗性的组合物或产品，包括但不限于健康产品、保健用品、护理用品、化妆品、卫生用品、一次性使用卫生用品、清洁用品、日用品，可作为除异味剂、或润滑剂、或湿润剂、或洗剂、或清洁剂、或养护剂、或止痒剂、或清新剂。本发明的阴道用或外阴用组合物或产品也可作为卫生用品、或清洁护理品的组成部分，如作为卫生巾、或卫生护垫、或卫生棉条的组成部分。
本发明还提供一种有机酸配伍在制备阴道用或外阴用组合物中的用途，其中所述有机酸配伍为每百克所述组合物中含有以下种类的有机酸和/或其盐：(1)总量为0.3000～60.0000mmol的一种或多种选自下组的二元或多元有机酸和/或其盐：苹果酸、琥珀酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸，优选总量为1.5000～33.0000mmol的柠檬酸、苹果酸；(2)总量为0.3000～60.0000mmol的一种或多种选自下组的一元有机酸抑菌剂和/或其盐：乙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酸、乙酰丙酸，优选10.4103～33.0000mmol的丙酸；(3)总量为0.1000～10.0000mmol的一种或多种选自下组的芳香族有机酸抑菌剂和/或其盐：苯甲酸、对羟基苯甲酸、对甲氧基苯甲酸、水杨酸、肉桂酸，优选1.0000～2.5000mmol的苯甲酸。所述阴道用或外阴用组合物可为溶液剂、或喷雾剂、或泡沫剂、或软膏剂、或散剂、或微囊剂、或膜剂、或泡腾片剂、或胶囊剂、或栓剂、或片剂，优选水溶液剂、水溶性凝胶剂。
根据本发明的制备用途，其中每百克所述组合物中各种有机酸和/或其盐的总量为25.00～45.00mmol。
根据本发明的制备用途，其制备工艺、方法和辅料的选择，都是本领域普通技术人员可以根据本发明的公开内容结合其背景知识可以想见的。
例如，在制备水溶性胶体剂时，需选用非流动性、粘性、水溶性胶体基质，该基质使组合物与阴道粘膜均匀接触并停留较长时间从而发挥作用。该水溶性胶体基质的选择和使用方法在本领域普通技术人员的知识范围之内，根据本发明的制备用途，该基质为黄原胶、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、卡波姆、聚卡波非，优选黄原胶。
可按本领域技术人员已知的方法例如下述工艺流程制备：按比例定量取柠檬酸、和/或丙酸和/或其钠盐、苯甲酸和/或其钠盐、黄原胶及其它组分等，混匀，定量加蒸馏水，搅拌，各组分溶解、黄原胶溶胀呈均匀胶体；用酸和/或碱调组合物pH值至预设值。可进一步做灭菌处理，灭菌可选择如下工艺：辐射灭菌，高温灭菌(例如采用112.6℃、15～20分钟；或者100℃、30分钟灭菌)，间歇灭菌(如先80℃、30分钟处理，然后置36℃、5～10小时，再80℃、30处理，再置36℃、5～10小时，最后再80℃、30分钟处理)。或将苯甲酸和/或其钠盐等组分单独配制成溶液后滤过除菌，再添加到经灭菌的水溶性胶状基质中。
例如，当制备溶液剂时，可将除黄原胶以外的上述各组分混匀，加水，溶解各组分，灭菌，分装；或溶解各组分，过滤，分装。可用棉球或棉条浸湿用于阴道给药，或做成阴道用和/或外阴用洗剂。
例如，当制备阴道片时，可按本领域技术人员已知的方法，例如在奚念朱、顾学裘主编的《药剂学》中介绍的方法【1】，将定量的柠檬酸、丙酸钠、苯甲酸和/或其钠盐及其它组分等，与填充辅料混合均匀，直接压片，即得片剂；亦可加入辅料成分，如硬脂酸镁等润滑剂或羧甲基淀粉钠等崩解剂，混合均匀，压片。还可将制备好的片剂分装于给药器械、或消毒器械、或医疗器械、或药物器械中。
例如，当制备阴道栓剂时，可按本领域技术人员已知的方法例如下述工艺流程制备【2】：定量取柠檬酸、丙酸和/或其钠盐、苯甲酸和/或其钠盐及其它组分等，与吐温80混合研匀，加热至50℃左右；另将混合脂肪酸甘油酯(亦称固体脂肪，Solid Fat)加热至60℃熔化；然后将柠檬酸、丙酸钠、苯甲酸和/或其钠盐等与吐温80的混合液加入熔化的基质中，边加入边搅拌，待混匀后，于40℃左右(即凝固前)倾入模具中，稍冷后刮模，冷却，脱模，即得阴道栓。栓剂的基质除了混合脂肪酸甘油酯，亦可选用硬脂酸丙二醇酯、甘油明胶、吐温-61等。大量生产可采用自动化、机械化装置。还可将制备好的栓剂分装于给药器械、或消毒器械、或医疗器械、或药物器械中。
例如，当制备含本发明组合物的卫生巾、或卫生护垫、或卫生棉条时，可定量称取柠檬酸、丙酸钠、苯甲酸和/或其钠盐及其它组分等，加相应辅料组分制成散剂、或膜剂、或片剂、或微囊剂、或胶囊剂，通过适当的方式或工艺内置于卫生巾、或卫生护垫、或卫生棉条等的内部；或通过适当的工艺，将柠檬酸、丙酸钠、苯甲酸和/或其钠盐等组分以及辅料组分等，附着于卫生巾或卫生护垫或卫生棉条等的内层材料上。
根据本发明的制备用途，当制备泡腾片剂、或胶囊剂、或栓剂、或片剂等剂型时，其中所述柠檬酸的总用量，为每单位剂型含有0.0030mmol～3.0000mmol，优选0.0150mmol～1.6500mmol；丙酸和/或其钠盐的总用量，为每单位剂型含有0.0030～3.0000mmol，优选0.1041～1.6500mmol；苯甲酸和/或其钠盐的总用量，为每单位剂型含有0.0010～0.5000mmol，优选0.0100～0.1250mmol。其制备工艺、方法和辅料的选择，都是本领域普通技术人员可以根据本发明的公开内容结合其背景知识可以想见的。
本发明的用于制备用途的各种有机酸或其盐，如丙酸与丙酸钠，苯甲酸与苯甲酸钠，溶于水呈未电离的分子或电离的离子，二者间的比例，取决于溶液的pH值和该有机酸的电离常数PKa值。可见，有机酸与其盐在水中溶解后均为有机酸分子或有机酸根离子，从这个角度上看，二者没有实质性区别。
本发明还提供一种用于抑制假丝酵母菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，和促进阴道中的乳杆菌的方法，其中所述方法包括向有此需要的女性的阴道内给予有效量的本发明的组合物。
根据本发明的方法，其中所述方法为用于维护阴道正常酸度、和/或调节阴道微生态、和/或调节阴道微生物、和/或选择性阴道脱污染的方法，其中所述方法包括向有此需要的女性的阴道内给予有效量的本发明的组合物。
根据本发明的方法，其中所述方法为用于消除或减轻阴道外阴瘙痒、疼痛、或性交痛等不适感、或改善白带性状、或消除白带嗅味、或清洁阴道、或护理和/或调节阴道微生态的方法，其中所述方法包括向有此需要的女性的阴道内给予有效量的本发明的组合物。
根据本发明的方法，其中所述方法为用于预防和/或治疗阴道微生物疾病的方法，其中所述阴道微生物疾病为真菌性阴道炎，或细胞溶解性阴道病，或阴道菌群失调，或细菌性阴道病，或老年性阴道炎，其中所述方法包括向有此需要的女性的阴道内给予有效量的本发明的组合物。
根据本发明的方法，将所述组合物施用于女性阴道内，可用推注器将本发明的凝胶剂型的组合物施用于阴道内，或用棉条或棉球或阴道塞浸湿溶液剂型的本发明的组合物后放置于阴道内，或将栓剂或片剂剂型的本发明的组合物施用于阴道内，每日可用1～2次，每个疗程为2～7天，优选3～5天；治疗过程中应观察病人症状的变化并检测阴道pH值的变化，病人症状显著改善或消失，阴道pH值保持在3.8～4.3范围，即可停药或减量。
本发明的方法在有效抑制假丝酵母菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌及致病性乳酸杆菌的同时，促进阴道中的乳杆菌生长，增强阴道微生态生理功能，对女性健康具有重要价值，应用前景广阔。
具体实施方式
组合物实施例
实施例1：
将柠檬酸0.3mmol、丙酸0.3mmol、苯甲酸0.1mmol、黄原胶2.5克混匀，加入蒸馏水，使总重量为100克，搅拌，使柠檬酸、丙酸钠、苯甲酸钠溶解、黄原胶溶胀呈均匀粘性胶状；用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调pH至3.5，再115.6℃、15分钟灭菌，即得本发明的水溶性胶体组合物。
实施例2：
按下述配比称取原料，基本按实施例1的方法制备了100克凝胶组合物。
实施例3：
按下述配比称取原料，基本按实施例1的方法制备了100克凝胶组合物。
实施例4
按下述配比称取原料，基本按实施例1的方法制备了100克溶液组合物。
实施例5：
按下述配比称取原料，基本按实施例1的方法制备了100克凝胶剂型的组合物。
实施例6：
按下述配比称取原料，基本按实施例1的方法制备了100克凝胶组合物。
实施例7：
按下述配比称取原料，基本按实施例1的方法制备了100克组合物。
实施例8：
按下述配比称取原料，
实施例9：
按下述配比称取原料，基本按实施例1的方法制备了100克组合物。
苹果酸10.0mmol，苯甲酸1.0mmol，丙酸10.0mmol；
谷氨酸1.5mmol，谷氨酰胺1.5mmol，天冬氨酸1.5mmol，天冬酰胺1.5mmol，异亮氨酸1.5mmol，蛋氨酸1.5mmol，苯丙氨酸1.5mmol，颉氨酸1.5mmol，亮氨酸1.5mmol，脯氨酸1.5mmol
黄原胶2.5克，加净化水至总重量100克，pH调至4.5
实施例10：
按下述配比称取原料，基本按实施例1的方法制备了100克组合物。
实施例11
基本按照参考文献9的方法，制备每片含柠檬酸30毫克、苯甲酸钠5毫克、丙酸钠30毫克、蔗糖60毫克的片剂。
实施例12
基本按照参考文献10的方法，制备每粒含柠檬酸30毫克、苯甲酸钠5毫克、丙酸30毫克、麦芽糖60毫克的阴道栓剂。
实验实施例
实验实施例一
基本按照GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C的方法，实验研究不同溶液作用20分钟，对白假丝酵母菌ATCC10231的抑菌作用，具体如表1所述。结果显示：
1、pH值3.6，2.5％(w/w)丙酸、0.25％(w/w)苯甲酸钠、1.5％(w/w)柠檬酸分别单独作用，对白假丝酵母菌ATCC10231均无抑菌作用；
2、pH值3.6，2.00％(w/w)丙酸与0.20％(w/w)苯甲酸钠配伍，对白假丝酵母菌具有抑菌作用，但抑菌率＜50％；增加丙酸的浓度至2.50％(w/w)、增加苯甲酸钠的浓度至0.25％(w/w)，对白假丝酵母菌的抑菌率＞50％。可见，增加丙酸、苯甲酸钠的浓度，可使抑菌液对白假丝酵母菌的抑菌率，符合GB 15979-2002的要求。
3、pH值3.6，1.5％(w/w)柠檬酸对丙酸与苯甲酸钠配伍的溶液的抑菌作用，无显著增强或减弱。
表1.不同溶液对白假丝酵母菌ATCC10231的抑菌作用
序号
溶液pH
丙酸(％)
苯甲酸钠(％)
柠檬酸(％)
抑菌率(％)
1
3.60
2.50
--
--
-10.92
2
3.60
--
0.25
--
-6.15
3
3.6
--
--
1.50
-11.79
4
3.60
2.50
0.25
--
73.80
5
3.60
2.50
0.25
1.50
70.56
6
3.60
2.00
0.20
--
11.35
7
3.60
2.00
0.20
1.50
12.23
实验实施例二
基本按照GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C的方法，实验研究抑菌凝胶作用20分钟，对白假丝酵母菌ATCC10231的抑菌作用，具体如表2所述。结果显示：
1、pH值3.6，含0.18％(w/w)苯甲酸钠、1.15％(w/w)丙酸钠、0.45％(w/w)苯乙醇，对白假丝酵母菌的抑菌率＞50％，符合GB 15979-2002的要求。1.2％(w/w)柠檬酸对凝胶的抑菌作用，无显著影响。
2、如实验实施例一所示，0.20％(w/w)苯甲酸钠与2.0％(w/w)丙酸配伍，对白假丝酵母菌的抑菌率＜50％。而本实施例中苯甲酸钠0.18％(w/w)、丙酸钠1.15％(w/w)，再加0.45％(w/w)苯乙醇的配伍，对白假丝酵母菌的抑菌率＞50％。可见，苯乙醇与苯甲酸钠、丙酸对白假丝酵母菌具有协同抑菌作用。
表2抑菌凝胶对白假丝酵母菌的抑菌作用
序号
凝胶pH
苯甲酸钠
丙酸钠
苯乙醇
柠檬酸
抑菌率％
1
3.60
0.18
1.150
0.450
1.200
65.34％
2
3.60
0.18
1.150
0.450
--
69.13％
实验实施例三
不含柠檬酸的两组凝胶组合物每天1次、每次0.5毫升，连续5天恒河猴阴道内给药，取阴道拭子测pH值和涂片染色，观察凝胶对恒河猴阴道分泌物pH值和阴道菌群的影响，具体如表3所述。结果显示：
1、A、B两组凝胶除了所含丙酸钠的浓度分别为0.550％和0.575％之外，其余成分、含量完全相同，均不含柠檬酸。
2、含0.550％丙酸钠的A组凝胶用药5次，4只恒河猴中的3只其阴道酸度降至4.1或以下，阴道菌群恢复，以乳杆菌形态的细菌为主。含0.575％丙酸钠的B组凝胶用药5次，4只恒河猴中只有1只的阴道酸度和菌群恢复正常。
综上结果可见，本实施例中不含柠檬酸的抑菌凝胶，当丙酸钠的含量仅升高不到5％，其调节阴道酸度和菌群的作用即出现下降，多数恒河猴的阴道酸度和乳杆菌未能恢复正常。
表3.不含柠檬酸的抑菌凝胶对恒河猴阴道酸度和菌群的影响
注1：A含3％(w/w)麦芽糖、0.06％(w/w)苯乙醇、0.12％(w/w)苯甲酸钠、0.550％(w/w)内酸钢、黄原胶，调pH至3.25
注2：B含3％(w/w)麦芽糖、0.06％(w/w)苯乙醇、0.10％(w/w)苯甲酸钠、0.575％(w/w)丙酸钠、黄原胶，调pH至3.25
注3：Nugent评分为阴道分泌物涂片、革兰染色后显微镜镜检，根据细菌的染色、形态、数量进行评分，具体如下：
≥7分，阴道细菌以革兰阴性杆菌、和/或阴性球菌及阳性球菌为主，粗大阳性杆菌无或极少；
4～6分，阴道细菌以革兰阴性杆菌、和/或阴性球菌、和/或阳性球菌为主，粗大革兰阳性杆菌少；
0～3分，阴道菌群正常，细菌以粗大革兰阳性杆菌为主。
实验实施例四
不含柠檬酸的五组凝胶组合物每天1次、每次0.5毫升，连续5天恒河猴阴道内给药，取阴道拭子测pH值和涂片染色，观察凝胶对恒河猴阴道分泌物pH值和阴道菌群的影响，具体如表4所述。结果显示：
1、含0.40％苯乙醇、0.050～0.055％苯甲酸钠、0.443％丙酸的凝胶组合物，如1组、2组，用药3次，可使恒河猴的阴道酸度降至3.8或以下，菌群恢复以乳杆菌为主、Nugent评分0～3分。
2、第4、第5组分别与第1、第2组比较，仅苯乙醇的含量升高至0.45％。用药3次，4只恒河猴中只有1只的阴道酸度下降至3.8，3只仍为5.4；Nugent评分仅1只降至0～3分，3只仍＞7分。说明苯乙醇含量由0.40％升高至0.45％，导致凝胶调节阴道酸度和菌群的作用显著下降。
3、第3组与第2组比较，仅苯甲酸钠升高至0.060％。用药3次，3只恒河猴的阴道酸度均＞4.4，阴道菌群未恢复，Nugent评分2只为4～6分，1只＞7分。说明苯甲酸钠含量升高，导致凝胶调节阴道酸度和菌群的作用下降。
综上结果可见，本实施例的不含柠檬酸的凝胶，当苯乙醇的浓度由0.40％升高约10％至0.45％，或苯甲酸钠的浓度由0.055％升高约9％至0.06％，其调节阴道酸度和菌群的作用即下降，多数恒河猴的阴道酸度和乳杆菌未能恢复正常。
表4.不含柠檬酸的凝胶对恒河猴阴道酸度和菌群的影响
注1：1含3％(w/w)麦芽糖、0.40％(w/w)苯乙醇、0.050％(w/w)苯甲酸钠、0.443％(w/w)丙酸、黄原胶，调pH至3.5
注2：2含3％(w/w)麦芽糖、0.40％(w/w)苯乙醇、0.055％(w/w)苯甲酸钠、0.443％(w/w)丙酸、黄原胶，调pH至3.5
注3：3含3％(w/w)麦芽糖、0.40％(w/w)苯乙醇、0.060％(w/w)苯甲酸钠、0.443％(w/w)丙酸、黄原胶，调pH至3.5
注4：4含3％(w/w)麦芽糖、0.45％(w/w)苯乙醇、0.050％(w/w)苯甲酸钠、0.443％(w/w)丙酸、黄原胶，调pH至3.5
注5：5含3％(w/w)麦芽糖、0.45％(w/w)苯乙醇、0.055％(w/w)苯甲酸钠、0.443％(w/w)丙酸、黄原胶，调pH至3.5
注6：同实施例三的注3。
实验实施例五
基本按照GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C的方法，实验研究不同凝胶作用20分钟，对白假丝酵母菌ATCC10231的抑菌率，具体如表5所述。结果显示：
1、含0.15％(w/w)苯甲酸钠、0.60％(w/w)丙酸钠、0.45％(w/w)苯乙醇、1.2％(w/w)柠檬酸的凝胶，对白假丝酵母菌ATCC 10231的抑菌率＜50％；
2、含0.20％(w/w)苯甲酸钠、1.15％(w/w)丙酸钠、0.45％(w/w)苯乙醇、1.2％(w/w)柠檬酸的凝胶，对白假丝酵母菌ATCC 10231的抑菌率＞50％。
表5.不同抑菌剂配伍对白假丝酵母菌的抑菌作用
实验实施例六
不含柠檬酸的三组凝胶组合物每天1次、每次0.5毫升，连续5天恒河猴阴道内给药，每天取阴道拭子测pH值和涂片染色，观察凝胶对恒河猴阴道分泌物pH值和阴道菌群的影响，具体如表6所述。结果显示：
1、E组凝胶含苯乙醇为0.06％、苯甲酸钠0.15％。用药3次，两只恒河猴的阴道pH值分别为4.6、5.4，Nugent评分分别为4～6分和＞7分；用药5次，1只恒河猴的阴道pH值＜3.8、Nugent评分0～3分，另1只恒河猴的阴道pH值仍为5.4、Nugent评分＞7分。
2、G组凝胶含苯乙醇0.06％、苯甲酸钠0.12％、丙酸钠0.55％。用药3次，2只恒河猴的阴道pH值＜3.8、Nugent评分0～3分，1只恒河猴的阴道pH值为4.4、Nugent评分4～6分，1只恒河猴的阴道pH值仍为5.4、Nugent评分＞7分；用药5次，3只恒河猴的阴道pH值＜3.8、Nugent评分0～3分，1只恒河猴的阴道pH值仍为5.4、Nugent评分＞7分。
3、H组凝胶含苯乙醇0.06％、苯甲酸钠0.15％、丙酸钠0.55％。用药3次，两只恒河猴的阴道pH值分别为4.4、5.4，Nugent评分分别为4～6分和＞7分；用药5次，1只恒河猴的阴道pH值4.1、Nugent评分0～3分，另1只恒河猴的阴道pH值仍为5.4、Nugent评分＞7分。
综上结果，H组与G组比较，不含柠檬酸的凝胶，当苯甲酸钠的浓度由0.12％升高至0.15％时，凝胶对阴道酸度和阴道菌群的调节作用减弱。不含丙酸钠的E组，苯甲酸钠浓度为0.15％，其对阴道菌群和酸的调节作用，仍不及G组。
表6.不含柠檬酸的抑菌凝胶对恒河猴阴道酸度和菌群的影响
注1：E含3.5％(w/w)麦芽糖、0.06％(w/w)苯乙醇、0.15％(w/w)苯甲酸钢、黄原胶，调pH至3.3
注2：G含3.5％(w/w)麦芽糖、0.06％(w/w)苯乙醇、0.12％(w/w)苯甲酸钠、0.55％(w/w)丙酸钠、黄原胶，调pH至3.3
注3：H含3.5％(w/w)麦芽糖、0.06％(w/w)苯乙醇、0.15％(w/w)苯甲酸钠、0.55％(w/w)丙酸钠、黄原胶，调pH至3.3
注4：同实施例三的注3。
实验实施例七
含柠檬酸的两组凝胶组合物每天1次、每次0.5毫升，连续5天恒河猴阴道内给药，每天取阴道拭子测pH值和涂片染色，观察凝胶对恒河猴阴道分泌物pH值和阴道菌群的影响，具体如表7所述。结果显示：
1、第1组凝胶所含抑菌剂浓度较高，其中，苯乙醇为0.45％、苯甲酸钠为0.15％，丙酸为0.46％，含1.0％柠檬酸。用药3次，4只恒河猴的阴道pH值降至4.1及以下、Nugent评分0～3分。
2、第2组凝胶所含苯乙醇仍为0.45％，但苯甲酸钠为0.20％，丙酸为0.86％，含1.2％柠檬酸。参考前述实验实施例二的结果可知，第2组凝胶对白假丝酵母菌的抑菌率＞50％。本组的凝胶用药3次，3只恒河猴的阴道pH值降至4.1及以下、Nugent评分0～3分。
3、本实施例含柠檬酸1.0％的第1组、含柠檬酸1.2％的第2组，与前述实施例四中不含柠檬酸的第4组、第5组比较，苯乙醇浓度均为0.45％。如实施例四中所述，苯乙醇浓度由0.40％升高至0.45％，是实施例四中第4组、第5组效果变差的主要原因。而本实施例的第1组、第2组不但苯乙醇浓度为0.45％，而且苯甲酸钠和丙酸的浓度也更高，其中第2组的苯甲酸钠达0.20％，丙酸浓度更高达0.86％！远远高于实施例四中第4组、第5组的苯甲酸钠0.050～0.055％、丙酸0.443％的浓度。但因含1.0～1.2％柠檬酸，结果本实施例第1组、第2组的凝胶对阴道酸度、阴道菌群的调节作用，均显著优于实施例四第4组、第5组的凝胶。
4、本实施例第1组与实施例六中的E组、H组比较，苯甲酸钠均为0.15％，本实施例第1组与H组的丙酸或丙酸钠的含量接近，本实施例第1组苯乙醇0.45％的含量显著高于E组、H组的0.06％。因本实施例第1组的凝胶含1.0％柠檬酸，结果对阴道酸度、阴道菌群的调节作用，显著优于实施例六中的E组、H组。
综上所述，含柠檬酸的凝胶，不但可提升含较低浓度丙酸、苯甲酸钠的凝胶对阴道酸度、阴道菌群的调节作用，而且还可提升含较高浓度丙酸、苯甲酸钠、以及苯乙醇的凝胶对阴道酸度、阴道菌群的调节作用，从而使凝胶既对白假丝酵母菌的抑菌率＞50％，又对阴道酸度和阴道菌群具有良好调节作用。
表7.含柠檬酸的抑菌凝胶对恒河猴阴道酸度和菌群的影响
注1：1含3％(w/w)麦芽糖、0.45％(w/w)苯乙醇、0.15％(w/w)苯甲酸钠、0.46％(w/w)内酸、1.0％(w/w)柠檬酸、黄原胶，调pH至3.5
注2：2含3％(w/w)帕拉金糖、0.45％(w/w)苯乙醇、0.20％(w/w)苯甲酸钠、0.86％(w/w)丙酸、1.2％(w/w)柠檬酸、黄原胶，调pH至3.6
注3：同实施例三的注3。
实验实施例八
基本按照GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C的方法，研究二元酸与苯甲酸钠配伍的溶液作用20分钟，对白假丝酵母菌ATCC 10231的抑菌率，具体如表7所述。结果显示：
1、pH值3.6，30mmol％的琥珀酸、苹果酸、酒石酸、马来酸分别单独作用，对白假丝酵母菌的抑菌率较低，均未超过10％；
2、pH值3.6，30mmol％的琥珀酸、苹果酸、酒石酸、马来酸分别与0.25％(w/v)的苯甲酸钠配伍，对白假丝酵母菌的抑菌率仍较低，仍然均未超过10％。
3、综上结果，可见琥珀酸、苹果酸、酒石酸、马来酸分别与苯甲酸钠配伍，对白假丝酵母菌无协同抑菌作用。
表8.二元酸与苯甲酸钠配伍对白假丝酵母菌ATCC10231的抑菌作用
序号
溶液pH
苯甲酸钠(％)
二元有机酸(％)
抑菌率％
1
3.60
0.000
30mmol琥珀酸3.54g
9.74％
2
3.60
0.250
30mmol琥珀酸3.54g
9.23％
3
3.60
0.000
30mmol苹果酸4.02g
4.10％
4
3.60
0.250
30mmol苹果酸4.02g
3.08％
5
3.60
0.000
30mmol酒石酸4.50g
3.59％
6
3.60
0.250
30mmol酒石酸4.50g
6.67％
7
3.60
0.000
30mmol马来酸3.48g
6.15％
8
3.60
0.250
30mmol马来酸3.48g
-5.64％
实验实施例九
基本按照GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C的方法，研究二元或三元有机酸与苯乙醇配伍的溶液作用20分钟，对白假丝酵母菌ATCC 10231的抑菌率，具体如表8所述。结果显示：
1、pH值3.6，30mmol％的琥珀酸、苹果酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸分别单独作用，对白假丝酵母菌的抑菌率均未超过20％；
2、pH值3.6，30mm0l％的琥珀酸、苹果酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸分别与0.45％(w/v)的苯乙醇配伍，对白假丝酵母菌的抑菌率仍较低，仍然均未超过20％。
3、综上结果，可见琥珀酸、苹果酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸分别与苯乙醇配伍，对白假丝酵母菌无显著协同抑菌作用。
表9.二元或三元有机酸与苯乙醇配伍对白假丝酵母菌ATCC10231的抑菌作用
实验实施例十
基本按照GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C的方法，研究二元或三元有机酸与丙酸配伍的溶液作用20分钟，对白假丝酵母菌ATCC 10231的抑菌率，具体如表9所述。结果显示：
1、pH值3.6，30mmol％的琥珀酸、苹果酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸分别单独作用，对白假丝酵母菌的抑菌率均未超过10％；
2、pH值3.6，30mmol％的琥珀酸、苹果酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸分别与1.00％(w/v)的丙酸配伍，对白假丝酵母菌的抑菌率仍较低，仍然均未超过10％。
3、综上结果，可见琥珀酸、苹果酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸分别与丙酸配伍，对白假丝酵母菌无显著协同抑菌作用。
表10.二元或三元有机酸与丙酸配伍溶液对白假丝酵母菌ATCC10231的抑菌作用
实验实施例十一
基本按照GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C的方法，研究不同抑菌剂配伍的溶液作用20分钟，对金黄色葡萄球菌、白假丝酵母菌ATCC 10231的抑菌率，具体如表8所述。结果显示：
1、pH值3.5～3.8，含苯甲酸钠0.06％(w/w)，丙酸钠0.50％(w/w)，苯乙醇0.40％(w/w)的溶液，对金黄色葡萄球菌的抑菌率＞50％；但当pH值为4.0时，溶液对金黄色葡萄球菌的抑菌率＜50％。
2、pH值3.5～4.0，含苯甲酸钠0.06％(w/w)，丙酸钠0.50％(w/w)，苯乙醇0.40％(w/w)的溶液，对白假丝酵母菌的抑菌率＜50％。
表11.不同抑菌液对金黄色葡萄球菌、白假丝酵母菌的抑菌作用
参考文献：
1.奚念朱、顾学裘主编：《药剂学》，人民卫生出版社，1990年第二版，第292-349页；
2.奚念朱、顾学裘主编：《药剂学》，人民卫生出版社，1990年第二版，第377-386页。
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