野蔷薇苷在制备治疗炎性肠病的药物中的应用
阅读说明：本技术 野蔷薇苷在制备治疗炎性肠病的药物中的应用 (Application of multinoside in preparing medicine for treating inflammatory bowel disease ) 是由 刘艳丽 许琼明 王可昕 于 2021-03-22 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种野蔷薇苷在制备治疗炎性肠病的药物中的应用。本发明采用5％的DSS构建小鼠结肠炎模型评估野蔷薇苷对IBD的治疗作用,提供野蔷薇苷在制备治疗炎性肠病中的应用。发现野蔷薇苷能够治疗结肠炎,且具有不弱于阳性对照药物美沙拉嗪的药效。并且本发明还提供了野蔷薇苷治疗结肠炎是通过诱导DNA修复酶TRAX的水平上升来达到治疗目的的。通过SILAC蛋白质组学的方法,结合质谱分析发现野蔷薇苷可显著上调TRAX蛋白的表达,TRAX在DNA损伤修复中起到了非常关键的作用,可能有助于维持基因组的完整性。进而野蔷薇苷可以通过TRAX蛋白发挥治疗炎症性肠病的作用,修复肠道损伤。(The invention discloses an application of multinoside in preparing a medicament for treating inflammatory bowel disease. The invention adopts 5% DSS to construct a mouse colitis model to evaluate the treatment effect of the multinoside on IBD, and provides the application of the multinoside in preparing medicines for treating inflammatory bowel diseases. The multinoside is found to be capable of treating colitis and has the drug effect which is not weaker than that of the positive control drug mesalazine. The invention also provides a method for treating colitis by using rosapone, which achieves the aim of treatment by inducing the level of DNA repair enzyme TRAX to rise. Through a SILAC proteomics method, the combination with mass spectrometry shows that the multiflorose glycoside can significantly up-regulate the expression of TRAX protein, and the TRAX plays a very critical role in DNA damage repair and can help to maintain the integrity of genome. Furthermore, the multinoside can play a role in treating inflammatory bowel diseases through TRAX protein, and repair intestinal injury.)
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种野蔷薇苷在制备治疗炎性肠病的药物中的应用。
背景技术
炎症性肠病(IBD)为累及回肠、直肠、结肠的一种特发性肠道炎症性疾病。临床表现腹泻、腹痛，甚至可有血便。炎症性肠病包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。溃疡性结肠炎是结肠黏膜层和黏膜下层连续性炎症，疾病通常先累及直肠，逐渐向全结肠蔓延。克罗恩病可累及全消化道，为非连续性全层炎症，最常累及部位为末端回肠、结肠和肛周。
炎症性肠病的病因和发病机制尚未完全明确，目前已知肠道黏膜免疫系统异常反应所导致的炎症反应在IBD发病中起重要作用，可能是由于多因素相互作用所致，主要包括环境、遗传、感染和免疫因素。
IBD患者面临的最具威胁性的风险之一是由于胃肠道的慢性炎症状态而导致结直肠癌发生的风险。文献数据表明，慢性炎症是结肠炎相关结直肠癌的基础，可能占所有诊断出的结直肠肿瘤的25％。炎症期间，固有层和结肠黏膜中的中性粒细胞，巨噬细胞和树突状细胞的长期积累伴随着几种细胞因子的释放，例如TNF-α和IL-1β等可诱导基因突变。随后，DNA损伤可能导致原癌基因的激活。
蕨麻是蔷薇科植物鹅绒委陵菜的膨大块根，又名“人参果”，在西藏民间常被用来治疗营养失调、脾胃虚弱，腹泻等。野蔷薇苷是蕨麻小分子中含量较高的化合物，是蕨麻具有代表性的活性成分之一。野蔷薇苷具有抗氧化、抗病毒、抗炎等药理活性：如长期处于急性低压缺氧状态会增强氧化应激和炎症，高剂量的野蔷薇苷能减轻暴露于急性低压缺氧状态导致的大鼠骨损伤；在野蔷薇苷对心肌细胞氧化应激损伤的作用的研究中，野蔷薇苷通过降低Bax，Cyt-c，Caspase-9和Caspase-3的水平，增加Bcl-2，从而保护H9c2心肌细胞免受H2O2诱导的氧化应激和细胞凋亡，减少ROS和MDA的产生，抑制钙超载，并改善抗氧化酶活性，野蔷薇苷通过其抗氧化和抗凋亡作用，可能具有预防和治疗H2O2引起的心肌细胞氧化应激损伤的潜力。课题组前期也采用野蔷薇苷保护辐照引起的小肠损伤，主要通过氧化应激，在之前的文献中也是通过氧化应激这个途径来达到效果的相关表述。目前还没有野蔷薇苷在DNA损伤修复方面的研究报道。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明采用5％的DSS构建小鼠结肠炎模型评估野蔷薇苷对IBD的治疗作用，提供野蔷薇苷在制备治疗炎性肠病中的应用。
本发明的第一个目的是提供了一种野蔷薇苷在制备治疗炎性肠病的药物中的应用。
进一步地，所述的炎性肠病为结肠炎。
进一步地，所述的炎性肠病为直肠炎。
进一步地，所述的炎性肠病为回肠炎。
进一步地，所述的治疗炎性肠病的药物是诱导DNA修复酶TRAX的水平上升的药物。
进一步地，所述的治疗炎性肠病的药物的给药剂量为1-100mg/kg。
进一步地，所述的治疗炎性肠病的药物的剂型为口服制剂或注射剂。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
本发明发现野蔷薇苷能够治疗结肠炎，且具有不弱于阳性对照药物美沙拉嗪的药效。并且本发明还提供了野蔷薇苷治疗结肠炎是通过诱导DNA修复酶TRAX的水平上升来达到治疗目的的。通过SILAC蛋白质组学的方法，结合质谱分析发现野蔷薇苷可显著上调TRAX蛋白的表达，TRAX在DNA损伤修复中起到了非常关键的作用，可能有助于维持基因组的完整性。进而野蔷薇苷可以通过TRAX蛋白发挥治疗炎症性肠病的作用，修复肠道损伤。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细附图说明如后。
附图说明
图1为野蔷薇苷对DSS诱导的结肠炎小鼠体重评分的影响；野蔷薇苷以6mg/kg和12mg/kg的剂量灌胃给药，每日1次，共9天；美沙拉嗪连续灌胃给药，剂量为400mg/kg，共9天，给药24h后，用5％DSS诱导小鼠结肠炎，连续7天，诱导结肠炎后第8天处死小鼠；每天按照评分要求计算各组小鼠的体重评分；
图2为野蔷薇苷对DSS诱导的结肠炎小鼠粪便性状评分的影响；野蔷薇苷以6mg/kg和12mg/kg的剂量灌胃给药，每日1次，共9天；美沙拉嗪连续灌胃给药，剂量为400mg/kg，共9天，给药24h后，用5％DSS诱导小鼠结肠炎，连续7天，诱导结肠炎后第8天处死小鼠；每天按照评分要求计算各组小鼠的粪便性状评分；
图3为野蔷薇苷对DSS诱导的结肠炎小鼠血便评分的影响；野蔷薇苷以6mg/kg和12mg/kg的剂量灌胃给药，每日1次，共9天；美沙拉嗪连续灌胃给药，剂量为400mg/kg，共9天，给药24h后，用5％DSS诱导小鼠结肠炎，连续7天，诱导结肠炎后第8天处死小鼠；每天按照评分要求计算各组小鼠的血便评分；
图4为野蔷薇苷对DSS诱导的结肠炎小鼠DAI评分的影响；野蔷薇苷以6mg/kg和12mg/kg的剂量灌胃给药，每日1次，共9天；美沙拉嗪连续灌胃给药，剂量为400mg/kg，共9天，给药24h后，用5％DSS诱导小鼠结肠炎，连续7天，诱导结肠炎后第8天处死小鼠；每天按照评分要求计算各组小鼠的DAI评分；
图5为野蔷薇苷对DSS诱导的结肠炎小鼠结肠长度的影响；处死小鼠后量取各组小鼠结肠长度；
图6为野蔷薇苷对DSS诱导的结肠炎小鼠脾重的影响；处死小鼠后称量各组小鼠的脾重；
图7为野蔷薇苷对DSS诱导的结肠炎小鼠脾脏指数的影响；处死小鼠后称量各组小鼠的脾重，计算各组小鼠的脾脏指数；
图8为蛋白组学火山图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1：
小鼠结肠炎模型构建：首先正常喂养ICR小鼠5天，饲养期间自由饮水饮食。称重后将小鼠随机分组，包括正常对照组、DSS模型组、野蔷薇苷(6、12mg/kg)组、阳性药美沙拉嗪(400mg/kg)组。野蔷薇苷和美沙拉嗪灌胃给药，给药24h后，将DSS溶于小鼠饮用水中，模型组和给药组小鼠连续给予5％的DSS7天，每天称量体重，观察小鼠粪便性状并查看小鼠隐血/便血情况，并计算DAI评分，第8天给药后处死小鼠，取血、结肠、脾。量取结肠长度，称量结肠、脾的重量。
实施例2：
我们采用5％的DSS构建小鼠结肠炎模型评估野蔷薇苷对IBD的治疗作用，小鼠连续给予5％DSS7天，结果发现DSS造模3天时小鼠精神萎靡，粪便呈稀软，不成形状态，并存在隐血或便血情况，在造模第6天时，小鼠出现水样粪便，便血严重。统计实验数据发现，第4天开始野蔷薇苷12mg/kg组能明显降低小鼠的粪便评分，与模型组有显著性的差异(P<0.001)，并且与美沙拉嗪组小鼠粪便性状恢复效果相当(图2)。同样如图3所示，从第四天开始野蔷薇苷12mg/kg组显著性降低了小鼠的血便评分，与模型组小鼠相比有显著性统计学差异(P<0.01)。综合评估小鼠的DAI评分，从造模第3天起，DSS造模组的小鼠结肠炎病情开始加重，DAI评分升高，并在第6天达到顶峰，给予野蔷薇苷12mg/kg第4天开始小鼠DAI评分显著性下降(图4)，与模型组小鼠有显著性的差异(P<0.001)。以上实验结果可以说明，野蔷薇苷12mg/kg剂量组可以缓解小鼠结肠炎症状。
统计小鼠的结肠长度，结果如图5所示，DSS造模组小鼠的结肠长度与正常对照组相比有显著性的缩短(P<0.001)。野蔷薇苷12mg/kg剂量组和美沙拉嗪组均能使小鼠的结肠长度有所恢复，且效果相当，与模型组相比具有显著性的差异(P<0.05)。
称量小鼠的体重和脾重后，对不同组别小鼠的脾重进行统计并依据公式[脾脏指数＝脾脏重量/体重]计算脾脏指数。结果如图6、图7所示，DSS模型组小鼠的脾重与正常对照组相比有明显的增加，具有显著性差异(P<0.001)。而野蔷薇苷12mg/kg组和美沙拉嗪组在给药后能明显降低小鼠的脾重，可以恢复至正常水平，与模型组小鼠相比具有非常显著的统计学差异(P<0.001)，并且野蔷薇苷12mg/kg组的药效与美沙拉嗪组的药效相当。
实施例3：
我们将Caco2结肠细胞在SILAC培养基中生长并传代，至少传五代，直到超过95％的蛋白质被标记。之后将细胞接种在10cm的平板中，培养24h，将野蔷薇苷(50μM)或DMSO加入“重”或“轻”培养基培养的细胞中继续培养1h。然后，将“重”或“轻”培养基培养的的细胞均用DNA损伤试剂顺铂(20μM)处理4h。细胞经8M尿素缓冲液裂解以获得总蛋白，分别制备模型组和野蔷薇苷给药组总蛋白质样品。样品经Orbitrap Fusion Lumos质谱仪(ThermoFisher Scientific)分析，Max Quant软件进行数据处理，并将FDR≤0.01的蛋白质视为阳性。使用IBM SPSS软件(Ver19)独立样本t检验函数来计算已鉴定蛋白质的P值。倍数变化＞1.50或＜0.67且P＜0.05的蛋白质被认为是显著差异表达的蛋白质。
我们鉴定出总共4661种蛋白质，定量2184种蛋白质，其比例显示在火山图中(图8)。在定量的蛋白质中，倍数变化>1.50或<0.67且P<0.05的八个蛋白质组用红色(上调)或绿色(下调)点进行标记。与模型组比较，野蔷薇苷给药后TRAX的表达上调超过11倍，是改变最大的蛋白。TRAX是一种多功能蛋白，它能够通过与多个蛋白的相互作用参与不同的信号通路而发挥损伤修复作用。综上，我们认为野蔷薇苷是通过TRAX蛋白发挥治疗炎症性肠病的作用，修复肠道损伤。
以上仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：三叶苷在制备治疗急性肝损伤药物中的应用