一种盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法
阅读说明：本技术 一种盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法 (Method for detecting impurities in benidipine hydrochloride bulk drug ) 是由 王熙红 林丽丽 杨淑萍 宋晓娜 于 2019-10-14 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法,提供了一种高检出能力的盐酸贝尼地平杂质检测方法,并提供了一种盐酸贝尼地平原料药中β异构体的检测方法,解决了现有检测方法中盐酸贝尼地平原料药中β异构体杂质较难分离检测的技术问题。本发明提供一种盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法,该方法为采用液相色谱法进行检测,且检测限低、灵敏度高、准确度高。本发明广泛应用于盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法。(The invention relates to a method for detecting impurities in a benidipine hydrochloride raw material drug, provides a method for detecting benidipine hydrochloride impurities with high detection capability, provides a method for detecting beta isomers in the benidipine hydrochloride raw material drug, and solves the technical problem that the beta isomer impurities in the benidipine hydrochloride raw material drug are difficult to separate and detect in the existing detection method. The invention provides a method for detecting impurities in a benidipine hydrochloride raw material medicine, which adopts liquid chromatography for detection and has the advantages of low detection limit, high sensitivity and high accuracy. The method is widely applied to the impurity detection method in the benidipine hydrochloride bulk drug.)
技术领域
本发明涉及检测方法领域，具体涉及一种盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法。
背景技术
盐酸贝尼地平(benidipinehydrochloride)化学名为(±)-(R*)-1，4-二氢-2，6-二甲基-4-(间-硝基苯基)-3，5-吡啶羧酸甲酯[(R*)-1-苄基-3-哌啶醇酯]的盐酸盐，属于二氢吡啶类钙离子拮抗剂，能高效、特异性地与二氢吡啶类受体结合部位结合，对2+2+Ca通道有高效、特异性的抑制作用。贝尼地平不仅对肌肉型(L型)Ca通道有抑制作用，2+还对电压依赖型N型和T型Ca通道也有抑制作用，是目前唯一对上述三种通道均有作用的钙离子拮抗剂。另外，贝尼地平尚有对细胞膜的高亲和作用、血管选择性作用和肾保护作用，是一种理想的、安全有效的抗高血压和治疗肾实质性高血压、心绞痛等疾病药物。
在盐酸贝尼地平的分子中有两个手性原子，分别位于二氢吡啶环的4位和侧链的哌啶环的3’位，因此盐酸贝尼地平有(S)-(S)-(+)-α、(R)-(R)-(-)-α、(R)-(S)-(+)-β、(S)-(R)-(-)-β四种光学异构体，药用活性成分为(S)-(S)-(+)-α和(R)-(R)-(-)-α的混合物。因此在合成制备盐酸贝尼地平的后处理阶段必须进行α异构体与β异构体的拆分。
根据二氢吡啶主环合成的先后，盐酸贝尼地平的合成主要分为两类五条路线。其中先合成主环的有：1)二氢吡啶主环酰氯化后，与侧链相联，直接合成盐酸贝尼地平；2)二氢吡啶主环酰氯化后，先与3-哌啶醇相接，再接苄基。后合成主环的有：1)通过β-氨基巴豆酸酯合成主环；2)通过乙酰乙酸酯合成主环；3)用3-硝基苯甲醛与β-氨基巴豆酸酯和乙酰乙酸酯“一锅煮”的方法等。
EP0063365A1、EP0161877A2、JP57-171968A、EP0106275A2等公开了一种或多条合成盐酸贝尼地平及其类似物的路线，其中EP0106275A2还对盐酸贝尼地平的合成路线进行了总结，在上述文献中，均提示通过柱色谱分离的方法对合成制备的盐酸贝尼地平，进行α异构体与β异构体的拆分，从而获得可药用的(±)-α-盐酸贝尼地平。
所以，检测盐酸贝尼地平原料药中β异构体的含量对于盐酸贝尼地平片药效发挥具有较大影响。
现中国国内和日本药典均没有明确的盐酸贝尼地平β异构体检测方法，因此需要开发一种方法对其进行定量检测，且所开发的方法能保证盐酸贝尼地平的脱氢衍生物（杂质B）及工艺杂质（杂质A）也能够被有效检出，其它杂质能最大程度的被检出。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术的不足，依据盐酸贝尼地平手性分子的结构特点，提供一种可以有效检测相互盐酸贝尼地平原料药中β异构体杂质，且检测限低、灵敏度高、准确度高的盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是：
一种盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法，该方法为采用液相色谱法进行检测，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的配制：取本品25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇-水（1:1）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
(2) 对照品溶液的配制：精密称取盐酸贝尼地平对照品适量，加甲醇-水（1:1）溶解并定量稀释制成每1ml中约含盐酸贝尼地平1.0μg的溶液，作为对照品溶液；
(3)系统适用性溶液的配制：取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品、盐酸贝尼地平原料适量，精密称定，加甲醇-水（1:1）溶解并稀释制成每1ml中分别含杂质A、杂质B、杂质C1.0μg、盐酸贝尼地平0.5mg的溶液，作为系统适用性溶液；
(4)检测液相色谱条件：
照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）-甲醇-四氢呋喃（65:27:8）为流动相；柱温为25℃；检测波长为237nm；取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，调整流速使盐酸贝尼地平峰的保留时间约20分钟，贝尼地平峰与杂质C峰间的分离度应大于1.5，出峰顺序依次为：杂质A、杂质B、贝尼地平、杂质C后；再精密量取空白溶剂、供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
对照品溶液连续进样5针，贝尼地平峰面积的相对标准偏差应小于3.5%；供试品溶液记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中除溶剂峰外，如有杂质峰，杂质A的峰面积与杂质B峰面积（均乘以1.6进行校正）、杂质C峰面积及其他单个杂质的峰面积均不得大于对照品溶液主峰面积的0.5倍（0.1%），各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液主峰面积（0.2%）。
优选的，色谱柱为Agilent Pursuit柱，4.6mm×100mm，3μm或效能相当的色谱柱。
本发明的有益效果：
本发明的盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法，可以有效检测出盐酸贝尼地平原料药中β异构体杂质，检测限低、灵敏度高、准确度高。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明的内容。本发明中所使用的方法如无特殊规定，均为常规的生产方法；所使用的原料，如无特殊规定，均为常规的市售产品。
实施例
一种盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法， 该方法为采用液相色谱法进行检测，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的配制：取本品25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇-水（1:1）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
(2) 对照品溶液的配制：精密称取盐酸贝尼地平对照品适量，加甲醇-水（1:1）溶解并定量稀释制成每1ml中约含盐酸贝尼地平1.0μg的溶液，作为对照品溶液；
(3)系统适用性溶液的配制：取杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品、盐酸贝尼地平原料适量，精密称定，加甲醇-水（1:1）溶解并稀释制成每1ml中分别含杂质A、杂质B、杂质C1.0μg、盐酸贝尼地平0.5mg的溶液，作为系统适用性溶液；
(4)检测气相色谱条件：
照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱， AgilentPursuit柱，4.6mm×100mm，3μm或效能相当的色谱柱；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）-甲醇-四氢呋喃（65:27:8）为流动相；柱温为25℃；检测波长为237nm；取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，调整流速使盐酸贝尼地平峰的保留时间约20分钟，贝尼地平峰与杂质C峰间的分离度应大于1.5，出峰顺序依次为：杂质A、杂质B、贝尼地平、杂质C后；再精密量取空白溶剂、供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
对照品溶液连续进样5针，贝尼地平峰面积的相对标准偏差应小于3.5%；供试品溶液记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中除溶剂峰外，如有杂质峰，杂质A的峰面积与杂质B峰面积（均乘以1.6进行校正）、杂质C峰面积及其他单个杂质的峰面积均不得大于对照品溶液主峰面积的0.5倍（0.1%），各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液主峰面积（0.2%）。
总结，本发明的盐酸贝尼地平原料药中的杂质检测方法，可以有效检测出盐酸贝尼地平原料药中β异构体杂质，检测限低、灵敏度高、准确度高。
惟以上所述者，仅为本发明的具体实施例而已，当不能以此限定本发明实施的范围，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。