具体实施方式

I.通用

本发明涉及令人惊讶且意料之外的发现，相比一种或多种检查点抑制剂它们自身，使用CCR4拮抗剂和一种或多种免疫检查点抑制剂的联合疗法显著改进了癌症治疗。

II.缩写和定义

除非另有说明，术语“烷基”，本身或作为另一个取代基的一部分，是指具有指定碳原子数(即C_1-8是指1至8个碳)的直链或支链烃基。烷基的例子包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等等。术语“烯基”是指具有一个或多个双键的不饱和烷基。类似地，术语“炔基”是指具有一个或多个三键的不饱和烷基。这种不饱和烷基的实例包括：乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、1,2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基以及高级同系物和异构体。术语“环烷基”是指具有指定数量的环原子(例如，C_3-6环烷基)并且完全饱和或环顶点之间具有不超过一个双键的烃环。“环烷基”也可指代双环烃环和多环烃环，例如，双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷等。术语“杂环烷基”是指含一至五个选自N、O和S的杂原子的环烷基，其中，氮和硫原子任选地被氧化和氮原子任选地被季铵化。所述杂环烷基可以是单环、双环或多环体系。杂环烷基的非限制性示例包括：吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑啉酮、乙内酰脲、二氧戊环、邻苯二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二氧六环、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环，以及类似基团。杂环烷基可通过环碳或杂原子与分子的其他部分连接。对于诸如环烷基烷基和杂环烷基烷基，是指环烷基或杂环烷基通过烷基或亚烷基连接基团连接至分子的其余部分。例如，环丁基甲基-是连接至分子其余部分的亚甲基连接基团的环丁基环。

术语“亚烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指衍生自烷烃的二价基团，如-CH₂CH₂CH₂CH₂-所示。通常，烷基(或亚烷基)将具有1至24个碳原子，在本公开中优选具有10个或更少碳原子的那些基团。“低级烷基”或“低级亚烷基”是通常具有四个或更少碳原子的短链烷基或亚烷基。类似地，“亚烯基”和“亚炔基”分别是指具有双键或三键的“亚烷基”的不饱和形式。

除非另外说明，术语“杂烷基”本身或与另一术语组合是指稳定的直链或支链或环状烃基，或其组合，由所述数量的碳原子和一至三个选自O、N、Si和S的杂原子组成，以及其中氮和硫原子可任选被氧化，以及氮杂原子可任选被季铵化。杂原子O、N和S可位于杂烷基内的任何位置。杂原子Si可以位于杂烷基的任何位置，包括烷基与分子的其余部分连接的位置。实例包括：-CH₂-CH₂-O-CH₃、-CH₂-CH₂-NH-CH₃、-CH₂-CH₂-N(CH₃)-CH₃、-CH₂-S-CH₂-CH₃、-CH₂-CH₂、-S(O)-CH₃、-CH₂-CH₂-S(O)₂-CH₃、-CH＝CH-O-CH₃、-Si(CH₃)₃、-CH₂-CH＝N-OCH₃和-CH＝CH-N(CH₃)-CH₃。至多两个杂原子可以是连续的，例如-CH₂-NH-OCH₃和-CH₂-O-Si(CH₃)₃。类似地，除非另外说明，术语“杂烯基”和“杂炔基”本身或与另一术语组合表示分别是指包含所述数量的碳和具有一至三个选自O、N、Si和S的杂原子的烯基或炔基，以及其中氮和硫原子可任选被氧化，和氮杂原子可任选被季铵化。杂原子O、N和S可位于杂烷基内的任何位置。

术语“杂亚烷基”本身或作为另一个取代基的一部分，是指衍生自杂烷基的饱和或不饱和或多不饱和的二价基团，例如-CH₂-CH₂-S-CH₂CH₂-和-CH₂-S-CH₂-CH₂-NH-CH₂-、-O-CH₂-CH＝CH-、-CH₂-CH＝C(H)CH₂-O-CH₂-和-S-CH₂-C≡C-。对于杂亚烷基，杂原子也可以占据链末端中的一个或两个(例如，亚烷氧基、亚烷基二氧基、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等)。

术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)采用它们的传统意义，是指分别通过氧原子、氨基或硫原子与分子其他部分连接的那些烷基。另外，对于二烷氨基，烷基部分可以相同或不同，且可与其连接的氮原子合并以形成3-7元环。因此，用-NR^aR^b表示的基团包括哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、氮杂环丁烷基(azetidinyl)以及类似的基团。

除非另外说明，术语“卤代”或“卤素”它们本身或作为另一取代基的一部分，是指氟、氯、溴或碘原子。另外，诸如“卤代烷基”的术语意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“C_1-4卤代烷基”意在包括：三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基，以及类似基团。

除非另有说明，术语“芳基”是指多不饱和通常为芳香性的烃基，其可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(最多三环)。术语“杂芳基”是指含一至五个选自N、O和S的杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选地被氧化以及氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子与分子的其他部分连接。芳基的非限制性例子包括：苯基、萘基和联苯基；且杂芳基的非限制性例子包括：吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基(cinnolinyl)、酞嗪基(phthalaziniyl)、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异恶唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲哚啉嗪基(indolizinyl)、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶基、苯并噻唑基(benzothiaxolyl)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基以及类似基团。用于上述记载的每个芳基和杂芳基环系统的取代基选自后文所述的可接受的取代基。

为了简洁起见，当术语“芳基”与其他术语组合使用时(例如，芳基氧基、芳基硫基(arylthioxy)、芳基烷基)，芳基包括如上定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳基烷基”意在包括其中芳香基团连接至连接到分子其余部分的烷基的那些基团(例如，苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)。

在一些实施方式中，上述术语(例如，“烷基”、“芳基”和“杂芳基”)将包括所指示基团的取代和未取代形式。下面提供各种类型的基团的优选的取代基。为简便起见，术语芳基和杂芳基将指如下提供的取代或未取代的形式，而术语“烷基”和相关的脂族基团是指未取代的形式，除非指出被取代。

烷基基团(包括通常称为亚烷基、烯基、炔基和环烷基的那些基团)的取代基可以是选自以下的各种基团：-卤素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO₂R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)₂R’、-NH-C(NH₂)＝NH、-NR’C(NH₂)＝NH、-NH-C(NH₂)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)₂R’、-S(O)₂NR’R”、-NR’S(O)₂R”、-CN和-NO₂，以0至(2m’+1)的数量，其中m’为这些基团中的碳原子的总数。R’、R”和R”’各自独立地指氢、未取代的C_1-8烷基、未取代的杂烷基、未取代的芳基、被1-3个卤素取代的芳基、未取代的C_1-8烷基、C_1-8烷氧基或C_1-8硫代烷氧基，或未取代的芳基-C_1-4烷基。当R’和R”与相同的氮原子连接时，它们可与氮原子结合形成3、4、5、6或7元环。例如，-NR’R”意指包括：1-吡咯烷基和4-吗啉基。术语“酰基”(单独或作为另一个基团的一部分使用)是指烷基基团，其中最接近该基团的连接点的碳上的两个取代基被取代基＝O取代(例如，C(O)CH₃,-C(O)CH₂CH₂OR’等)。

类似地，用于芳基和杂芳基的取代基是变化的且通常选自：-卤素、-OR’、-OC(O)R’、-NR’R”、-SR’、-R’、-CN、-NO₂、-CO₂R’、-CONR’R”、-C(O)R’、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR”C(O)₂R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NH-C(NH₂)＝NH、-NR’C(NH₂)＝NH、-NH-C(NH₂)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)₂R’、-S(O)₂NR’R”、-NR’S(O)₂R”、-N₃、全氟(C₁-C₄)烷氧基和全氟(C₁-C₄)烷基，以从零至芳环系统上开放化合价的总数范围的数量；且R’、R”和R”’独立地选自：氢、C_1-8烷基、C_3-6环烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、未取代的芳基和杂芳基、(未取代的芳基)-C_1-4烷基和未取代的芳基氧基-C_1-4烷基。其他合适的取代基包括通过1-4个碳原子的亚烷基链连接到环原子的上述各芳基取代基。

芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的二个可以任选地被式-T-C(O)-(CH₂)_q-U-取代基所替换，其中，T和U独立地为-NH-、-O-、-CH₂-或单键，并且q是0至2的整数。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的二个可以任选地被式-A-(CH₂)_r-B-取代基所替换，其中，A和B独立地为-CH₂-、-O-、-NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)₂-、-S(O)₂NR’-或单键，以及r是1至3的整数。如此形成的新环的单键之一可以任选地被双键取代。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的二个可以任选地被式-(CH₂)_s-X-(CH₂)_t-取代基所替换，其中，s和t独立地为0至3的整数，以及X为-O-、-NR’-、-S-、-S(O)-、-S(O)₂-或-S(O)₂NR’-。在NR’-和-S(O)₂NR’-中的取代基R’选自：氢或未取代的C_1-6烷基。

如本文所用，术语“杂原子”意在包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。

对于本文提供的化合物，从取代基(通常是R基团)画至芳香环(例如苯、吡啶等)中心的键将被理解为指在芳香环的任何可用顶点提供连接的键。在一些实施方式中，该描述还将包括在与芳族环稠合的环上的连接。例如，画至吲哚的苯部分中心的键，将表示至吲哚的六元或五元环部分的任何可用顶点的键。

术语“药学上可接受的盐”意指包括用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐，这取决于本文所述化合物上存在的特定取代基。当本发明化合物含有相对酸性的官能团时，可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需碱(无溶剂或在合适的惰性溶剂中)接触来获得碱加成盐。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的实例包括：铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、三价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括取代的胺、环胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇以及类似基团。当本发明化合物含有相对碱性的官能团时，可以通过使这些化合物的中性形式与足够量的所需酸(无溶剂或在合适的惰性溶剂中)接触而获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些、以及衍生自如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等相对无毒的有机酸的盐。还包括氨基酸，例如精氨酸等的盐，以及有机酸，例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见，例如，Berge,S.M.等，“药用盐(Pharmaceutical Salts)”,药物科学杂志(Journalof Pharmaceutical Science),1977,66,1-19)。本发明的某些具体化合物同时含有碱性和酸性官能团，使得化合物可以转化为碱或酸加成盐。

化合物的中性形式可通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物而再生。化合物的母体形式在某些物理性质上不同于其各种盐形式，例如在极性溶剂中的溶解性，但是出于本发明目的在其他方面盐等同于化合物的母体形式。

除了盐形式外，本发明提供了以前药形式存在的化合物。本文所述化合物的前药是在生理条件下易于发生化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可以在离体环境中通过化学或生物化学方法转化成本发明的化合物。例如，当将前药放置在具有合适的酶或化学试剂的透皮贴剂储库中时，前药会缓慢地转化成本发明的化合物。

本发明的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水合形式。通常，溶剂化形式相当于非溶剂化形式，并且意图包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以以多晶或无定形形式存在。通常，所有物理形式对于本发明所设想的用途是等同的，并且意图在本发明的范围内。

本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体、非对映异构体、几何异构体、区域异构体和单个异构体(例如分离的对映异构体)均旨在包括在本发明的范围内。当本文提供的化合物具有确定的立体化学(以R或S表示，或以虚线或楔形键指示)时，本领域技术人员将理解那些化合物基本上不含其他异构体(例如，至少80％、90％、95％、98％、99％和高达100％不含其他异构体)。

本发明的化合物还可以在构成这些化合物的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。同位素的非自然比例可以定义为从自然界中发现的量到100％由所讨论的原子构成的量。例如，所述化合物可以掺入放射性同位素，例如氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)或碳-14(¹⁴C)或非放射性同位素，如氘(²H)或碳-13(¹³C)。这种同位素变化可以为本申请中其它地方描述的那些提供额外的效用。例如，本发明化合物的同位素变体可能发现其他用途，包括但不限于作为诊断和/或成像试剂，或作为细胞毒性/放射性毒性治疗剂。另外，本发明化合物的同位素变体可以具有改变的药代动力学和药效学特征，其可以有助于提高治疗期间的安全性、耐受性或功效。本发明化合物的所有同位素变体，无论是否是放射性的，均旨在被包括在本发明的范围内。

如本文所用，术语“选择性CCR4拮抗剂”是指高度识别能力的化合物，其抑制CCR4活性，且对非靶标蛋白(如CCR1、CCR2、CCR3、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CCR12、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6和/或CXCR7)很少或无交叉反应性。在一些实施方式中,当在本申请的实施例3中使用的测定中测试时，“选择性CCR4拮抗剂”具有比诸如CCR1、CCR2、CCR3、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CCR12、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6和/或CXCR7的蛋白的IC50值低至少10；100；500；1,000；2,000；5,000；或更多倍的的IC50值。在一些实施方式中，在本申请实施例2所用的测定中，“选择性CCR4拮抗剂”在1μM或更低的浓度下不抑制CCR1、CCR2、CCR3、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CCR12、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6和/或CXCR7。当在使用选择性CCR4拮抗剂的参考条件下，上述蛋白维持它们活性的100％、99％、95％、90％或85％时，它们被认为是“未被抑制”的。

III.使用CCR4拮抗剂和一种或多种免疫检查点抑制剂的联合治疗

本文提供了利用CCR4拮抗剂和免疫检查点抑制剂的协同作用治疗癌症的方法、组合物和试剂盒。与单独使用每一种相比，包括CCR4拮抗剂和一种或多种免疫检查点抑制剂的联合治疗在治疗癌症上更有效。

癌症通常包括各种恶性肿瘤中的任何一种，其特点是往往会侵入周围组织并转移到新的身体部位的未分化细胞的增殖。适合使用本公开的组合物治疗的不同类型的癌症的非限制性例子包括：卵巢癌、乳腺癌、肺癌(如非小细胞肺癌)、膀胱癌、甲状腺癌、肝癌、胸膜癌、胰腺癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、结肠癌、肛门癌、结肠直肠癌、胆管癌、胃肠类癌瘤、食道癌、胆囊癌、直肠癌、阑尾癌、小肠癌、胃(胃部)癌、肾癌(即肾细胞癌)、中枢神经系统癌症、皮肤癌、绒毛膜癌、头颈部癌症、骨癌、骨原性肉瘤、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤、黑色素瘤、白血病(如急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病或毛细胞白血病)、淋巴瘤(如非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤或伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma))和多发性骨髓瘤。

在一些实施方式中，所述癌症是肺癌(如非小细胞肺癌)、黑色素瘤、上皮癌(如前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌)或血癌(如白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤)。

在一些实施方式中，所述癌症是实体癌。在一些实施方式中，所述癌症是胰腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是结肠癌。

A.CCR4拮抗剂、

CCR4拮抗剂是减少或抑制CCR4活性的化合物。本领域已知许多这样的化合物。在一些实施方式中，本发明的CCR4拮抗剂是选择性CCR4拮抗剂。

在一些实施方式中，所述CCR4拮抗剂是具有下式(I)的CCR4的小分子抑制剂：

和其药学上可接受的盐，其中，

R¹选自：氢、C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、C_1-8羟烷基、C_3-8环烷基、卤素、-CN、-SO₂Me和-C(O)NH₂；

各个R²选自：C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、卤素、-CN和C_1-8烷氧基；或连接至相邻碳原子的两个R²基团任选地连接以形成5或6元环(脂肪族的或芳香性的，环烷基或杂环烷基)；

R³选自：氢、甲基和C_1-4卤代烷基；

R⁴选自：氢、C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基和C_1-8羟烷基；

各个下标n独立地为0至3的整数；

B为键或C(O)；

Q选自：C、CH、N、O、S、S(O)和SO₂：

W、X、Y和Z独立地选自：C、CH和N，但Q和W不均为N；

R⁵和R⁶不存在或独立地选自：H、-OH、C_1-8烷基、C_1-8羟烷基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基、-C(O)NR^aR^b、C_1-8亚烷基-C(O)NR^aR^b、-NH-C_1-4亚烷基-C(O)NR^aR^b、-C(O)-C_1-4亚烷基-NR^aR^b、-CO₂H和酸等排体、C_1-8亚烷基-CO₂H和酸等排体、-N(R^a)C(O)NR^aR^b、C_1-8亚烷基-N(R^a)C(O)NR^aR^b、-NR^aR^b、C_1-8亚烷基-NR^aR^b、C_1-8烷氧基、-C(O)OR^a、C_1-8亚烷基-C(O)OR^a、-CN、-C(O)R^a、-SO₂R^a和-N(R^a)C(O)R^b；

其中，

各个R^a和R^b独立地选自：氢、C_1-8烷基、C_1-8羟烷基、C_1-8卤代烷基和C_1-8烷氧基；以及

R⁷不存在或选自：氢、C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基。

在一组实施方式中，本文提供的化合物是其中X和Y不均为N的那些。在另一组实施方式中，R³为H，并且各个R²独立地选自：C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、卤素和-CN。

在另一组实施方式中，本文提供的化合物具有下式(Ia)：

其中，各个R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、X、Y、Z、W、Q、B和下标n如对式I所述。在选择的实施方式中，X为C或CH。

在另一组实施方式中，本文提供的化合物具有下式(Ib)：

其中，各个R²选自：C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、卤素和–CN，以及各个R¹、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、X、Z、W、Q、B和下标n如对式I所述。

在另一组实施方式中，本文提供的化合物具有下式(Ic)：

其中，各个R²选自：C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、卤素和–CN；下标n为0或1；以及各个R¹、R⁴、R⁶、R⁷、X、Y、Z和Q如对式I所述。在选择的实施方式中，n为1，并且R⁴为氢或甲基。

在另一组实施方式中，本文提供的化合物具有下式(Id)：

其中，各个R²为选自以下的成员：C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、卤素和–CN；下标n为0或1；以及各个R¹、R⁴、R⁶、R⁷、X、Z和Q如式I所述。在选择的实施方式中，n为1，并且R⁴为氢或甲基。

在另一组实施方式中，本文提供的化合物具有下式(Ie)：

其中，各个R²选自：C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、卤素和–CN；下标n为0或1；以及各个R¹、R⁴、R⁶、R⁷、Y、Z和Q如对式I所述。在选择的实施方式中，n为1，并且R⁴为氢或甲基。

在另一组实施方式中，本文提供的化合物具有下式(If)：

其中，各个R²选自：C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、卤素和–CN；以及各个R¹、R⁴、R⁶、R⁷和Q如对式I所述。在选择的实施方式中，R⁴为氢或甲基。

在另外其他的实施方式中，本文提供的化合物具有下式(I)、(Ia)和(Ib)，包括前文提供的具体实施方式，其中，B为C(O)。又进一步地，提供了其中具有Z作为环顶点的环选自吡咯烷和哌啶的化合物。在选择的实施方式中，提供了以下化合物，其中，具有Z作为环顶点的环选自吡咯烷-2-基和哌啶-2-基，并且R⁵、R⁶和R⁷中的至少一个不为氢。

在还其他的实施方式中，本文提供的化合物具有下式(I)、(Ia)和(Ib)，包括前文提供的具体实施方式，其中，B为键。在相关的实施方式中，B为键并且具有Z作为环顶点的环选自吡咯烷、哌啶和环己烷。在具体的实施方案中，B为键并且具有Z作为环顶点的环选自吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己烷。在另外其他的实施方式中，B为键并且具有Z作为环顶点的环选自下组：吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基和环己烷；以及R⁵、R⁶和R⁷中的至少一个不为氢。

在一组实施方式中，Z为CH或N。

在一些实施方式中，CCR4拮抗剂具有下式

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方式中，CCR4拮抗剂具有下式

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方式中，CCR4拮抗剂具有下式

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方式中，CCR4拮抗剂具有下式

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方式中，CCR4拮抗剂选自ChemoCentryx提交的WO2013/082490中公开的化合物或药物组合物。出于所有目的将其内容并入本文。

B.免疫检测点抑制剂

免疫检查点是刺激或抑制免疫应答的信号传导蛋白。靶向免疫检查点的组合物可以调节这些蛋白质，从而改变个体的天然免疫反应。因为特定的癌细胞可以绕过这些检查点，以逃脱另外的天然免疫反应，所以这种有靶向方法是有用的。两个特定的免疫检查点是程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)。

i.PD-1抑制剂

程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)是一种免疫检查点蛋白，最常见于T细胞上。正常情况下，PD-1与其天然配体PD-L1和PD-L2结合，在不同细胞表面表达。当与其天然配体相结合时，T细胞被认为处于“关闭”位置。值得注意的是，一些癌细胞表达了异常高水平的PD-L1，这意味着T细胞的活性和相关的抗癌免疫反应受到了异常的抑制。最关键的是，使用阻断与其天然配体的相互作用的PD-1抑制剂可以刺激免疫反应，以帮助抗癌。

本发明的PD-1抑制剂包括小分子和抗体。

在一些实施方式中，所述PD-1抑制剂为小分子PD-1/PD-L1抑制剂。

在一些实施方式中，小分子PD-1/PD-L1抑制剂具有下式：

在一些实施方式中，小分子PD-1/PD-L1抑制剂为具有式(II)的化合物

或其药学上可接受的盐；其中，

R¹选自下组：卤素、C_5-8环烷基、C_6-10芳基和噻吩基，其中，C_6-10芳基和噻吩基任选地被1至5个R^x取代基所取代；

各个R^x独立地选自下组：卤素、-CN、-R^c、-CO₂R^a、-CONR^aR^b、-C(O)R^a、-OC(O)NR^aR^b、-NR^bC(O)R^a、-NR^bC(O)₂R^c、-NR^a-C(O)NR^aR^b、-NR^aR^b、-OR^a、-O-X¹-OR^a、-O-X¹-CO₂R^a、-O-X¹-CONR^aR^b、-X¹-OR^a、-X¹-NR^aR^b、-X¹-CO₂R^a、-X¹-CONR^aR^b、-SF₅和-S(O)₂NR^aR^b，其中，各个X¹为C_1-4亚烷基；其中，各个R^a和R^b独立地选自：氢、C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基，或者当连接至相同的氮原子时，可以与氮原子结合形成五元或六元环，其具有0至2个选自N、O或S的额外杂原子的作为环成员；其中，所述五元或六元环任选都被氧代基取代；各个R^c独立地选自下组：C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基和C_1-8卤代烷基；以及任选地当两个R^x取代基在相邻原子上时，它们结合以形成稠和的五、六或七元碳环的或杂环，碳环的或杂环任选地被1至3个独立地选自下述的取代基取代：卤素、氧代基、C_1-8卤代烷基和C_1-8烷基；

各个R^2a、R^2b和R^2c独立地选自下组：H、卤素、-CN、-R^d、-CO₂R^e、-CONR^eR^f、-C(O)R^e、-OC(O)NR^eR^f、-NR^fC(O)R^e、-NR^fC(O)₂R^d、-NR^e-C(O)NR^eR^f、-NR^eR^f、-OR^e、-O-X²-OR^e、-O-X²-NR^eR^f、-O-X²-CO₂R^e、-O-X²-CONR^eR^f、-X²-OR^e、-X²-NR^eR^f、-X²-CO₂R^e、-X²-CONR^eR^f、-SF₅、-S(O)₂NR^eR^f、C_6-10芳基和C_5-10杂芳基，其中，各个X²为C_1-4亚烷基；各个R^e和R^f独立地选自：氢、C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基，或者当连接至相同的氮原子时，可以与氮原子结合形成五元或六元环，其具有0至2个选自N、O和S的额外杂原子的作为环成员，且任选地被氧代基取代；各个R^d独立地选自下组：C_1-8烷基、C_2-8烯基和C_1-8卤代烷基；

R³选自下组：-NR^gR^h和C_4-12杂环基，其中，所述C_4-12杂环基任选地被1至6个R^y所取代；

各个R^y独立地选自下组：卤素、-CN、-Rⁱ、-CO₂R^j、-CONR^jR^k、-CONHC_1-6烷基-OH、-C(O)R^j、-OC(O)NR^jR^k、-NR^jC(O)R^k、-NR^jC(O)₂R^k、CONOH、PO₃H₂、-NR^j-C_1-6烷基-C(O)₂R^k、-NR^jC(O)NR^jR^k、-NR^jR^k、-OR^j、-S(O)₂NR^jR^k、-O-C_1-6烷基-OR^j、-O-C_1-6烷基-NR^jR^k、-O-C_1-6烷基-CO₂R^j、-O-C_1-6烷基-CONR^jR^k、-C_1-6烷基-OR^j、-C_1-6烷基-NR^jR^k、-C_1-6烷基-CO₂R^j、-C_1-6烷基-CONR^jR^k和SF₅,

其中，R^y的C_1-6烷基部分任选地进一步被OH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、PO₃H₂、COO-C_1-8烷基或CO₂H取代，其中，各个R^j和R^k独立地选自：氢、任选地被1至2个选自OH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、PO₃H₂、COO-C_1-8烷基或CO₂H的取代基所取代的C_1-8烷基，和任选地被1至2个选自OH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、PO₃H₂、COO-C_1-8烷基或CO₂H的取代基所取代的C_1-8卤代烷基，或者当连接至相同的氮原子时，R^j和R^k可以与氮原子结合形成五元或六元环，其具有0至2个选自N、O或S的额外杂原子的作为环成员，且任选地被氧代基取代；各个Rⁱ独立地选自下组：–OH、C_1-8烷基、C_2-8烯基和C_1-8卤代烷基，其中每一个任选地被OH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、PO₃H₂、COO-C_1-8烷基或CO₂H所取代；

R^g选自下组：H、C_1-8卤代烷基和C_1-8烷基；

R^h选自任选地被CO₂H取代的：-C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、C_1-8烷基-COOH、C_1-8烷基-OH、C_1-8烷基-CONH₂、C_1-8烷基-SO₂NH₂、C_1-8烷基-PO₃H₂、C_1-8烷基-CONOH、C_1-8烷基-NR^h1R^h2、-C(O)-C_1-8烷基、-C(O)-C_1-8烷基-OH、-C(O)-C_1-8烷基-COOH、C_3-10环烷基、-C_3-10环烷基-COOH、-C_3-10环烷基-OH、C_4-8杂环基、-C_4-8杂环基-COOH、-C_4-8杂环基-OH、-C_1-8烷基-C_4-8杂环基、-C_1-8烷基-C_3-10环烷基、C_5-10杂芳基、-C_1-8烷基-C_5-10杂芳基、C₁₀碳环基、-C_1-8烷基-C_6-10芳基、-C_1-8烷基-(C＝O)-C_6-10芳基、-C_1-8烷基-NH(C＝O)-C_1-8烯基、-C_1-8烷基-NH(C＝O)-C_1-8烷基、-C_1-8烷基-NH(C＝O)-C_1-8炔基、-C_1-8烷基-(C＝O)-NH-C_1-8烷基-COOH和-C_1-8烷基-(C＝O)-NH-C_1-8烷基-OH；

R^h与其连接的N的结合为单、双或三肽，其包括1-3个天然氨基酸和0-2个非天然氨基酸，其中，

非天然氨基酸具有选自下组的α碳取代基：C_2-4羟烷基、C_1-3烷基-胍基和C_1-4烷基-杂芳基，

各个天然或非天然氨基酸的α碳任选地进一步被甲基取代，以及

单、双或三肽的终端部分选自下组：C(O)OH、C(O)O-C_1-6烷基和PO₃H₂，其中，

R^h1和R^h2各自独立地选自下组：H、C_1-6烷基和C_1-4羟烷基；

R^h的C_1-8烷基部分任选地进一步被1至3独立地选自以下地取代基取代：OH、COOH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、COO-C_1-8烷基、PO₃H₂和任选地被1至2个C_1-3烷基取代基取代地C_5-6杂芳基，

R^h的C₁₀碳环基、C_5-10杂芳基和C_6-10芳基部分任选地被1至3个独立地选自以下地取代基取代：OH、B(OH)₂、COOH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、PO₃H₂、COO-C_1-8烷基、C_1-4烷基、C_1-4烷基-OH、C_1-4烷基-SO₂NH₂、C_1-4烷基CONH₂、C_1-4烷基-CONOH、C_1-4烷基-PO₃H₂、C_1-4烷基-COOH和苯基以及

R^h的C_4-8杂环基和C_3-10环烷基部分任选地被1至4个R^w取代基取代；

各个R^w取代基独立地选自：C_1-4烷基、C_1-4烷基-OH、C_1-4烷基-COOH、C_1-4烷基-SO₂NH₂、C_1-4烷基CONH₂、C_1-4烷基-CONOH、C_1-4烷基-PO₃H、OH、COO-C_1-8烷基、COOH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、PO₃H₂和氧代基；

R⁴选自下组：O-C_1-8烷基、O-C_1-8卤代烷基、O-C_1-8烷基-R^z、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、-O-C_1-4烷基-C_6-10芳基和-O-C_1-4烷基-C_5-10杂芳基，其中，C_6-10芳基和C_5-10杂芳基任选地被1至5个R^z取代；

各个R^z独立地选自下组：卤素、-CN、-R^m、-CO₂Rⁿ、-CONRⁿR^p、-C(O)Rⁿ、-OC(O)NRⁿR^p、-NRⁿC(O)R^p、-NRⁿC(O)₂R^m、-NRⁿ-C(O)NRⁿR^p、-NRⁿR^p、-ORⁿ、-O-X³-ORⁿ、-O-X³-NRⁿR^p、-O-X³-CO₂Rⁿ、-O-X³-CONRⁿR^p、-X³-ORⁿ、-X³-NRⁿR^p、-X³-CO₂Rⁿ、-X³-CONRⁿR^p、-SF₅、-S(O)₂RⁿR^p、-S(O)₂NRⁿR^p，和三至七元碳环或四至七元杂环，其中，所述三至七元碳环或四至七元杂环任选被1至5个R^t所取代，其中，各个R^t独立地选自下组：C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、-CO₂Rⁿ、-CONRⁿR^p、-C(O)Rⁿ、-OC(O)NRⁿR^p、-NRⁿC(O)R^p、-NRⁿC(O)₂R^m、-NRⁿ-C(O)NRⁿR^p、-NRⁿR^p、-ORⁿ、-O-X³-ORⁿ、-O-X³-NRⁿR^p、-O-X³-CO₂Rⁿ、-O-X³-CONRⁿR^p、-X³-ORⁿ、-X³-NRⁿR^p、-X³-CO₂Rⁿ、-X³-CONRⁿR^p、-SF₅和-S(O)₂NRⁿR^p；

其中，各个X³为C_1-4亚烷基；各个Rⁿ和R^p独立地选自：氢、C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基，或者当连接至相同的氮原子时，可以与氮原子结合形成五元或六元环，其具有0至2个选自N、O或S的额外杂原子的作为环成员，且任选地被氧代基取代；各个R^m独立都选自下组：C_1-8烷基、C_2-8烯基和C_1-8卤代烷基；且任选地当两个R^z取代基在相邻原子上时，它们结合形成任选地被氧代基取代的稠和的五或六元碳环或杂环；

n为0、1、2或3；

各个R⁵独立地选自下组：卤素、-CN、-R^q、-CO₂R^r、-CONR^rR^s、-C(O)R^r、-OC(O)NR^rR^s、-NR^rC(O)R^s、-NR^rC(O)₂R^q、-NR^r-C(O)NR^rR^s、-NR^rR^s、-OR^r、-O-X⁴-OR^r、-O-X⁴-NR^rR^s、-O-X⁴-CO₂R^r、-O-X⁴-CONR^rR^s、-X⁴-OR^r、-X⁴-NR^rR^s、-X⁴-CO₂R^r、-X⁴-CONR^rR^s、-SF₅、-S(O)₂NR^rR^s，其中，各个X⁴为C_1-4亚烷基；各个R^r和R^s为独立地选自：氢、C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基，或者当连接至相同的氮原子时，可以与氮原子结合形成五元或六元环，其具有0至2个选自N、O或S的额外杂原子的作为环成员，且任选地被氧代基取代；各个R^q独立地选自下组：C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基；

R^6a选自下组：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

各个R^6b独立地选自下组：F、C_1-4烷基、O-R^u、C_1-4卤代烷基、NR^uR^v，其中，各个R^u和R^v独立地选自：氢、C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基，或者当连接至相同的氮原子时，可以与氮原子结合形成五元或六元环，其具有0至2个选自N、O或S的额外杂原子的作为环成员，且任选地被氧代基取代；以及

m为0、1、2、3或4。

在一些实施方式中，所述化合物，或其药学上可接受的盐，具有式(IIa)

在一些实施方式中，所述化合物，或其药学上可接受的盐，具有式(IIb)

在一些实施方式中，R¹选自下组：苯基和噻吩基，其中，所述苯基和噻吩基任选地被1至5个R^x取代基所取代。在一些实施方式中，R¹为任选地被1或2个R^x所取代的苯基，其中，各个R^x独立的选自：卤素、C_1-8烷基、O-C_1-8烷基、O-C_1-8卤代烷基、-NR^aR^b和CN，并且任选地当两个R^x取代基在相邻原子上时，它们结合形成任选地被1至3个独立地选自以下的取代基所取代的稠合的六元杂环：氧代基、C_1-8卤代烷基和C_1-8烷基。在一些实施方式中，R¹为任选地被F取代的苯基。在一些实施方式中，R¹选自下组：

在一些实施方式中，各个R^2a、R^2b和R^2c独立地选自下组：H、卤素、-CN、-R^d、-NR^eR^f、-OR^e、-X²-OR^e、-X²-NR^eR^f，其中，X²为C_1-4亚烷基；各个R^e和R^f独立地选自：氢、C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基，或者当连接至相同的氮原子时，可以与氮原子结合形成五元或六元环，其具有0至2个选自N、O或S的额外杂原子的作为环成员，且任选地被氧代基取代；各个R^d独立地选自下组：C_1-8烷基、C_2-8烯基和C_1-8卤代烷基；在一些实施方式中，R^2b和R^2c均为H且R^2a选自下组：卤素、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_1-3卤代烷基、-CN、-OMe和OEt。在一些实施方式中，R^2b和R^2c均为H且R^2a为卤素。在一些实施方式中，R^2b和R^2c均为H且R^2a为Cl。

在一些实施方式中，n为0、1或2并且各个R⁵独立地选自下组：卤素、-CN、-R^q、-NR^rR^s和-OR^r，其中，各个R^r和R^s独立地选自：氢、C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基并且各个R^q独立地选自下组：C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基。在一些实施方式中，n为0。

在一些实施方式中，R^6a为H。在一些实施方式中，m为0。在一些实施方式中，m为1且R^6b选自下组：F、C_1-4烷基、O-R^u、C_1-4卤代烷基和NR^uR^v,其中，各个R^u和R^v独立地选自：氢、C_1-8烷基和C_1-8卤代烷基。在一些实施方式中，m为1且R^6b为F。

在一些实施方式中，为

在一些实施方式中，为

在一些实施方式中，R⁴选自下组：O-C_1-4烷基、O-C_1-6烷基-R^z、C_6-10芳基、C_5-10杂芳基、-O-C_1-4烷基-C_6-10芳基和-O-C_1-4烷基-C_5-10杂芳基，其中，所述C_6-10芳基和所述C_5-10杂芳基任选地被1至2个R^z取代，其中，各个R^z独立地选自下组：卤素、-CN、-R^m、-CO₂Rⁿ、-CONRⁿR^p、-C(O)Rⁿ、-OC(O)NRⁿR^p、-NRⁿC(O)R^p、-NRⁿC(O)₂R^m、-NRⁿ-C(O)NRⁿR^p、-NRⁿR^p、-ORⁿ、-S(O)₂NRⁿR^p、三至七元碳环和四至七元杂环，其中，所述三至七元碳环或四至七元杂环任选地被1至2个R^t取代，其中，各个R^t独立地选自下组：C_1-8烷基、C_1-8卤代烷基、-CO₂Rⁿ、-CONRⁿR^p、-C(O)Rⁿ、-OC(O)NRⁿR^p、-NRⁿC(O)R^p、-NRⁿC(O)₂R^m、-NRⁿ-C(O)NRⁿR^p、-NRⁿR^p、-ORⁿ和-S(O)₂NRⁿR^p。在一些实施方式中，R⁴选自下组：O-C_1-4烷基、O-C_1-6烷基-CN、苯基、吡啶基、-O-C_1-2烷基-吡啶基、-O-C_1-2烷基-嘧啶基、-O-C_1-2烷基-哒嗪基和-O-C_1-2烷基-苯基，其中，所述吡啶基、苯基、嘧啶基和哒嗪基任选地被1至2个R^z取代，其中，各个R^z独立地选自下组：卤素、-CN、-CO₂Rⁿ、-NRⁿR^p、-ORⁿ和任选地被OH取代的哌啶基。

在一些实施方式中，R⁴选自下组：

在一些实施方式中，R⁴为

在一些实施方式中，R³选自下组：NR^gR^h和C_4-6杂环基，其中，所述C_4-6杂环基任选地被1至3个R^y取代，其中，R^g选自下组：H、C_1-8卤代烷基和C_1-8烷基，并且其中，R^h为被1至3个独立地选自以下的取代基取代的-C_1-8烷基：OH、COOH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、COO-C_1-8烷基、C_5-6杂芳基、C_5-6杂环基和PO₃H₂，其中，C_5-6杂芳基和C_5-6杂环基任选地被1至3个独立地选自以下的取代基取代：OH、B(OH)₂、COOH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、PO₃H₂、COO-C_1-8烷基、C_1-4烷基、C_1-4烷基-OH、C_1-4烷基-SO₂NH₂、C_1-4烷基CONH₂、C_1-4烷基-CONOH、C_1-4烷基-PO₃H₂和C_1-4烷基-COOH并且其中，所述C_5-6杂环基还任选地被氧代基取代。在一些实施方式中，R³选自下组：氮杂环丁基、吡咯烷基和哌啶基，其中，所述氮杂环丁基、吡咯烷基或哌啶基通过氮原子连接，并且其中，所述氮杂环丁基、吡咯烷基或哌啶基任选被1至3个R^y取代，其中，各个R^y独立地选自下组：-CO₂H、CONOH、PO₃H₂、OH、SO₂NH₂、CONH₂和COO-C_1-8烷基。在一些实施方式中，R³为NHR^h，其中，R^h为被1至2个独立地选自以下的取代基取代的-C_1-8烷基：OH、COOH、CONH₂、PO₃H₂、四唑基、四唑酮基(tetrazolonyl)和吡唑基。在一些实施方式中，R³选自下组：

在一些实施方式中，R³为-NR^gR^h。在一些实施方式中，R^h与其连接的N结合为单、双或三肽，其包括1-3个天然氨基酸和0-2个非天然氨基酸，其中，

所述非天然氨基酸具有选自下组的α碳取代基：C_2-4羟烷基、C_1-3烷基-胍基和C_1-4烷基-杂芳基，

各个天然或非天然氨基酸的α碳任选地进一步被甲基取代，以及

所述单、双或三肽的终端部分选自下组：C(O)OH、C(O)O-C_1-6烷基和PO₃H₂。

在一些实施方式中，R^h的各个天然氨基酸独立地选自下组：丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、天门冬氨酸、天冬酰胺、组氨酸和亮氨酸。

在一些实施方式中，R¹为任选地被1至3个R^x取代的苯基，R^6b为H，R⁴选自下组：O-C_1-4烷基、O-C_1-6烷基-CN、苯基、吡啶基、-O-C_1-2烷基-吡啶基、-O-C_1-2烷基-嘧啶基、-O-C_1-2烷基-哒嗪基和-O-C_1-2烷基-苯基，其中，所述吡啶基、苯基、嘧啶基和哒嗪基任选地被1至2个R^z取代，其中，各个R^z独立地选自下组：卤素、-CN、-CO₂Rⁿ、-NRⁿR^p、-ORⁿ和任选地被OH取代的哌啶基，和R³选自下组：NR^gR^h和C_4-6杂环基，其中，所述C_4-6杂环基任选地被1至3个R^y取代，其中，R^g选自下组：H、C_1-8卤代烷基和C_1-8烷基，并且其中，R^h为被1至3个独立地选自以下的取代基取代的-C_1-8烷基：OH、COOH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、COO-C_1-8烷基、C_5-6杂芳基、C_5-6杂环基和PO₃H₂，其中，C_5-6杂芳基和C_5-6杂环基任选地被1至3个独立地选自以下的取代基取代：OH、B(OH)₂、COOH、SO₂NH₂、CONH₂、CONOH、PO₃H₂、COO-C_1-8烷基、C_1-4烷基、C_1-4烷基-OH、C_1-4烷基-SO₂NH₂、C_1-4烷基CONH₂、C_1-4烷基-CONOH、C_1-4烷基-PO₃H₂和C_1-4烷基-COOH，并且其中，所述C_5-6杂环基还任选地被氧代基取代。

在一些实施方式中，R¹为任选地被1或2个R^x所取代的苯基，其中各个R^x独立地选自：卤素、C_1-8烷基、O-C_1-8烷基、O-C_1-8卤代烷基、-NR^aR^b和CN，其中，R^2b和R^2c均为H，R^2a选自下组：卤素、C_1-4烷基、C_1-3卤代烷基、-CN、-OMe和OEt，R^6a为H，m为0，n为0，R⁴为以及R³选自下组：NHR^h、氮杂环丁基、吡咯烷基和哌啶基，其中，所述氮杂环丁基、吡咯烷基或哌啶基通过氮原子连接，并且其中，所述氮杂环丁基、吡咯烷基或哌啶基任选被1至3个R^y取代，其中，各个R^y独立地选自下组：CO₂H、CONOH、PO₃H₂、OH、SO₂NH₂、CONH₂和COO-C_1-8烷基，以及其中，R^h为被1至2个独立地选自以下的取代基取代的C_1-8烷基：OH、COOH、CONH₂、PO₃H₂、四唑基、四唑酮基(tetrazolonyl)和吡唑基。在一些实施方式中，R^2a为卤素。

在一些实施方式中，小分子PD-1/PD-L1抑制剂选自ChemoCentryx在2017年6月26日提交的WO2018/005374中公开的化合物或药物组合物。出于所有目的将其内容并入本文。

在一些实施方式中，PD-1抑制剂为抗体。在一些实施方式中，PD-1抑制剂抗体选自：纳武单抗(Nivolumab)、派姆单抗(Pembrolizumab)和皮地珠单抗(Pidilizumab)。在一些实施方式中，PD-1抑制剂抗体为纳武单抗。在一些实施方式中，PD-1抑制剂抗体为派姆单抗。在一些实施方式中，PD-1抑制剂抗体为皮地珠单抗。

本发明的PD-1抑制剂可以使用本领域已知的方法制备。例如，可以使用SCID小鼠制备本公开的人单克隆抗体，人免疫细胞已被重组到其中，从而在免疫时可以产生人抗体反应。这样的小鼠例如在Wilson等人的U.S专利序列号5,476,996和5,698,767中描述。本公开的PD-1抑制剂可以被配制为延缓化合物或抗体的降解或使抗体的免疫原性最小化。本领域已知有多种技术实现这一目的。

ii.CTLA-4抑制剂

细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)是一种免疫检查点蛋白，最常见由活化的T细胞表达。与PD-1类似，CTLA-4也充当T细胞免疫功能的负调节因子。通过提供CTLA-4的抑制剂，减少了负调节，并提高了T细胞的抗肿瘤活性。

在一些实施方式中，CTLA-4抑制剂为抗体。在一些实施方式中，CLTA-4抑制剂抗体具有约10⁸M^-1或更高的结合亲和力。在一些实施方式中，CLTA-4抑制剂抗体具有约10⁹M^-1或更高的结合亲和力。在一些实施方式中，CTLA-4抑制剂抗体可抑制人CTLA-4与B7-1或B7-2的结合。

在一些实施方式中，CTLA-4抑制剂抗体选自：伊匹单抗(Ipilimumab)、曲美木单抗(Tremelimumab)、AGEN1884和AGEN2041。在一些实施方式中，CTLA-4抑制剂抗体为伊匹单抗。在一些实施方式中，CTLA-4抑制剂抗体为曲美木单抗。在一些实施方式中，CTLA-4抑制剂抗体为AGEN1884。在一些实施方式中，CTLA-4抑制剂抗体为AGEN2041。

在一些实施方式中，CTLA-4抑制剂选自WO/2009/100140或WO2017/194265公开的化合物或药物组合物。出于所有目的将各自内容并入本文。

本发明的CTLA-4抑制剂可以使用本领域已知的方法制备。例如，可以使用SCID小鼠制备本公开的人单克隆抗体，人免疫细胞已被重组到其中，从而在免疫时可以产生人抗体反应。这样的小鼠例如在Wilson等人的U.S专利序列号5,476,996和5,698,767中描述。本公开的CTLA-4抑制剂也可以被配制为延缓化合物或抗体的降解或使抗体的免疫原性最小化。本领域已知有多种技术实现这一目的。

IV.联合治疗的施用方法

在另一个方面，本公开提供了一种用于治疗癌症的联合疗法。联合疗法包括治疗有效量的CCR4拮抗剂和治疗有效量的一种或多种免疫检查点抑制剂。在一些实施方式中，一种或多种免疫检查点抑制剂为PD-1抑制剂。在一些实施方式中，一种或多种免疫检查点抑制剂为CTLA-4抑制剂。在一些实施方式中，一种或多种免疫检查点抑制剂为PD-1抑制剂和CTLA-4抑制剂。治疗药物的联合协同作用，影响癌症的治疗或预防。

术语“治疗有效量”是指研究者、兽医、医生或其他治疗提供者所寻求的将引起细胞、组织、系统或动物(如人)的生物或医学反应的目标化合物的量。

根据疾病状态和受试者的状况，本公开的化合物、抗体和制剂可以通过口服、肠胃外(例如，肌肉内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或输液、皮下注射或植入)、吸入、鼻腔、阴道、直肠、舌下或局部给药途径给药。此外，化合物和抗体可以单独或一起配制成合适的剂量单位制剂，其含有适合于每种给药途径的常规无毒药学上可接受的载体、佐剂和媒介物。本公开还考虑本公开的化合物和抗体以长效制剂施用。

应当理解，用于任何特定患者的剂量的具体剂量水平和频率可能改变并将取决于多种因素包括所用具体化合物的活性、代谢稳定性和化合物的作用时间、年龄、体重、遗传特性、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄速率、药物组合、特定疾病状态的严重程度，以及接受治疗的宿主。

联合治疗包括CCR4拮抗剂和一种或多种免疫检查点抑制剂的共同给药(co-administration)、CCR4拮抗剂和一种或多种检查点抑制剂的顺序给药、包含CCR4拮抗剂和一种或多种检查点抑制剂的组合物的给药，或单独的组合物(一种组合物含有CCR4拮抗剂以及一种或多种组合物含有一种或多种检查点抑制剂)的同时给药。在施用两种免疫检查点抑制剂的实施方式中，可以理解的是，每种免疫检查点抑制剂可以分别配制或配制在单剂量单位中。

共同给药包括在施用本公开的一种或多种免疫检查点抑制剂的0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20或24小时内施用本公开的CCR4拮抗剂。共同给药还包括同时给药、大约同时(例如，在彼此间大约1、5、10、15、20或30分钟内)给药，或以任何次序的顺序给药。此外，CCR4拮抗剂和一种或多种检查点抑制剂可以各自每天给药一次，或每天给药两次、三次或多次，以提供每天的优选剂量水平。

V.试剂盒

在某些方面，本文提供了含有CCR4拮抗剂和一种或多种免疫检查点抑制剂的试剂盒，这些试剂盒可用于治疗癌症。一个试剂盒可以包含含有CCR4拮抗剂化合物(例如CCR4的小分子抑制剂)的药物组合物以及一种或多种含有免疫检查点抑制剂(例如抗PD-1抑制剂和/或抗CTLA-4抑制剂)的药物组合物。在某些情况下，试剂盒包括书面材料，例如，化合物、抗体或其药物组合物的使用说明。不受限制地，试剂盒可包括缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头、注射器和具有执行本文公开的任何方法的说明包装插入物。

VI.实施例

实施例1：在小鼠肿瘤模型中，C-C趋化因子受体4(CCR4)拮抗剂可增强检查点抑制的效果(概要)

趋化因子及其受体影响着癌症的许多标志性过程：它们不仅作用于浸润的白细胞，而且还作用于成纤维细胞、内皮细胞，并直接作用于某些类型的肿瘤细胞。C-C趋化因子受体4(CCR4)及其配体被发现在多种类型的人肿瘤中高表达，并与不良预后有关。已证实CCR4拮抗剂可降低各种小鼠肿瘤模型的肿瘤生长。在这里，我们评估了CCR4的小分子抑制作为一种治疗剂来增强检查点抑制剂在CT26和KCM肿瘤模型中的效果。

方法

用皮下CT26结肠癌模型和原位KCM胰腺癌模型评估CCR4抑制剂(化合物1)与抗CTLA-4抗体(BioXcell：抗鼠CTLA-4(克隆(Clone)：9H10)，叙利亚仓鼠(Syrian Hamster)培养，用蛋白G纯化)联合的效果。将CT26细胞植入9周大雌性Balb/c小鼠的侧腹。根据第6天的肿瘤大小将小鼠随机分至研究组，第7天开始给药化合物1和抗CTLA-4。对于原位胰腺癌模型，KCM细胞直接植入胰腺，也在第7天开始给药化合物1和抗CTLA-4。化合物1每日口服2次，剂量为30mg/kg，抗CTLA-4在第7、11和15天腹腔注射(IP)给药，剂量为100μg/鼠。

结果

阻断CCR4明显增强了两种模型中抗CTLA-4的治疗效果。联合抗CTLA-4/CCR4抑制剂可显著降低CT26模型的肿瘤大小和增加长期存活者的比例。抗肿瘤反应是CT26特异性的；长期存活者对CT26细胞的再接种有抵抗力(不需要再给药任何一种药物)，但激发CT26存活者后4T1乳腺肿瘤生长良好。肿瘤衰退的小鼠表现出高比例的CD8 T细胞，其识别CT26特异性新抗原，如AH1肽-MHC四聚体染色所示。

虽然尚未对KCM模型的长期生存进行研究，但在3项独立的研究中，单独的化合物1可以显著降低肿瘤负荷。单独抗CTLA-4在该模型中提供了对肿瘤生长的实质性的抑制作用，化合物1进一步增强了这种作用。

实施例2：化合物1是高度有效且选择性的CCR4抑制剂

通过确定相对不同组的受体、酶和离子通道的IC₅₀值来测试化合物1的选择性。发现化合物1对CCR4具有高度特异性。见表1。

表1:化合物1选择性

化合物1在人和小鼠中的结合活性在表2中报告。

表2:跨物种活性

实施例3：使用KCM原位胰腺肿瘤模型的联合治疗。

如实施例1中简要介绍的，KCM胰腺癌模型用于评估CCR4抑制剂与抗CTLA-4抗体联合使用的有效性。研究设计如图1中所示。将小鼠分成4组(每组n＝12)：抗体同种型+媒介物；抗体同种型+化合物1；抗CTLA-4+媒介物；抗CTLA-4+化合物1。所用小鼠为7-8周龄的C57BL/6雌性小鼠。在第7、11和16天，以100μg/小鼠的剂量，腹膜内(i.p.)注射抗CTLA-4(BioXcell：抗鼠CTLA-4克隆(Clone)：9H10)，叙利亚仓鼠(Syrian Hamster)培养，用蛋白G纯化)和同种型匹配的对照抗体。每天两次(bid)p.i.给药化合物1(40mg/kg)和媒介物。将基底胶(matrigel)中的KCM细胞注入胰腺。

研究完成后，测量各组的肿瘤/胰腺重量。结果如图A-C中所示。如该图所显示的，单独或与抗CTLA-4联合的化合物1减少了KCM肿瘤模型中的肿瘤负载。在这个模型中，大多数小鼠在切口部位附近的腹壁上发展出继发性肿瘤。这些继发性肿瘤被解剖后，并且其重量包括在总肿瘤加胰腺重量中。因为原发性肿瘤与胰腺不能通过手术分离，将它们一起称重。脾脏重量也因化合物1处理而减少。通过测量第12天低谷时的血浆化合物浓度，确认了充足的化合物水平。

在本研究完成时，还测量了抑制性免疫细胞群的变化。KCM细胞接种后第25天，将原发性肿瘤(连同胰腺)和继发性肿瘤解剖、切碎并用胶原酶D消化，用于用流式细胞仪进行的免疫细胞分析。对来自假手术小鼠的胰腺进行处理和分析。图3A-F中显示了来自加工材料中着眼于T调节细胞、G-MDSC和M-MDSC的变化的结果。这些细胞群以每克组织的细胞数(组A-C)或以CD45+细胞的百分比(组D-F)显示。虽然没有观察到T调节(CD4+/FoxP3+)细胞的变化，但用a-CTLA-4/化合物1治疗相比于a-CTLA-4单独治疗，单核细胞和粒细胞骨髓源性抑制细胞(mMDSC-CD11b+/Ly6G-/Ly6C-高，gMDSC-CD11b+/Ly6G+/Ly6C-低)显示出下降趋势。

实施例4：使用CT26结肠癌模型的联合治疗。

如实施例1中简要介绍的，CT26结肠癌模型用于评估CCR4抑制剂与抗CTLA-4抗体联合使用的有效性。研究设计如图4中所示。将小鼠分成4组(每组n＝12)：抗体同种型+媒介物；抗体同种型+化合物1；抗CTLA-4+媒介物；抗CTLA-4+化合物1。所用小鼠为7-8周龄的C57BL/6雌性小鼠。在第7、11和16天，以100μg/小鼠的剂量，腹膜内(i.p.)注射抗CTLA-4(BioXcell：抗鼠CTLA-4克隆(Clone)：9H10)，叙利亚仓鼠(Syrian Hamster)培养，用蛋白G纯化)和同种型匹配的对照抗体。每天两次(bid)p.i.给药化合物1(40mg/kg)和媒介物。在研究开始时，皮下注射(s.c.)CT25细胞。

在整个研究过程中监测肿瘤体积和生存百分比。存活率绘制于图5中，并且平均肿瘤体积绘制于图6中。从图6中可以看出，化合物1与抗CTLA-4的组合减少了肿瘤的生长并提高了生存率。各治疗组的个体肿瘤大小如图7A-D中所示。请注意多么特别，在aCTLA-4+媒介物组(组C)中的小鼠的肿瘤对aCTLA-4治疗完全没有反应，而aCTLA+化合物1的组合显示，所有的肿瘤都响应了该治疗(组D)。

最后一次给药3个月后，将以前用a-CTLA-4(6只小鼠)或a-CTLA-4/化合物1(8只小鼠)处理过的，肿瘤完全消退的小鼠，用CT26肿瘤细胞在左侧腹皮下注射(s.c.)再激发，这些小鼠也在右侧腹经皮下注射(s.c.)被注入4T1小鼠乳腺癌细胞。结果如图8A-F所示。从该图中可以看出，之前用a-CTLA-4处理的6只小鼠中的1只发展了CT26肿瘤(组A)，以及之前用a-CTLA-4/化合物1处理的小鼠8只中没有小鼠，发展了CT26肿瘤(组B)。之前用a-CTLA-4治疗的所有6只小鼠没有发展4T1肿瘤(组D)，以及之前用a-CTLA-4/化合物1治疗的8只小鼠中的2只没有发展4T1肿瘤(组E)。所有5只空白小鼠都发展了CT26和4T1肿瘤(组C和F)。

在CT26再激发前和7天后，将图8中小鼠的血细胞用荧光标记的AH1肽染色。AH1是细胞毒T细胞对CT26肿瘤细胞响应的免疫显性肽，它可以标记CT26抗原反应性CD8+T细胞。这些样品的流式细胞术分析如图9A-C中所示。这些CT26抗原反应性的CD8+T细胞在空白小鼠的外周血中很大程度上不存在，但在最后一次给药3个月后，大部分存活的CT26小鼠中都有丰富的CD8+T细胞(组A和B)。用CT26细胞再激发进一步增加了之前处理的存活的小鼠中的这些细胞的数量，但在空白小鼠的影响很小(组C)。

尽管为了清楚理解的目的已经通过说明和实施例详细地描述了前述发明，但是本领域技术人员将理解，可以在所附权利要求的范围内实施某些改变和修改。另外，本文提供的每篇参考文献通过引用整体并入，其程度如同每篇参考文献通过引用单独并入。在本申请与本文提供的参考文献之间存在冲突的情况下，以本申请为准。