阅读说明：本技术 饵料绿藻营养活性的比色检测方法 (Colorimetric detection method for bait green algae nutrition activity ) 是由 赵文 王宇 魏杰 张湾 潘立峰 于 2021-01-12 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种饵料绿藻营养活性的比色检测方法,是利用绿藻摄食葡萄糖的特性,将葡萄糖氧化显色与碘量法测葡萄糖方法优化结合并将检测条件限定为较高的碱性,使藻类在碱性环境中无法存活而沉降,进而取上清液进行显色,避免绿藻本身具有颜色对葡萄糖显色的影响,可有效地通过显色来反映饵料藻的生长状况,进而迅速比对出鲜活藻液的细胞密度,从而确定绿藻的营养活性,无需养殖经验及血细胞计数仪等设备,具有操作简单、检测效率高等优点。(The invention discloses a colorimetric detection method for the nutritional activity of bait green algae, which utilizes the characteristic that green algae ingest glucose, optimally combines glucose oxidation color development with a method for measuring glucose by an iodometric method, limits the detection condition to be higher alkalinity, ensures that algae cannot survive and settle in an alkaline environment, further takes supernatant for color development, avoids the influence of the color of the green algae on the glucose color development, can effectively reflect the growth condition of the bait algae through color development, and further quickly compares the cell density of fresh and live algae liquid, thereby determining the nutritional activity of the green algae, does not need equipment such as culture experience, a blood cell counter and the like, and has the advantages of simple operation, high detection efficiency and the like.)

饵料绿藻营养活性的比色检测方法

技术领域

本发明涉及一种饵料绿藻营养活性的检测方法，尤其是一种饵料绿藻营养活性的比色检测方法。

背景技术

绿藻门是藻类中最庞大的一个门，种类繁多，分布极广，约90%生于淡水，仅约10%的种类在海水中生活。绿藻用途广泛，浮游种类如小球藻属、扁藻属、杜氏藻属等是海产经济动物幼体的重要饵料。实验表明饵料绿藻处于细胞活性强的指数生长期时，总脂肪含量和不饱和脂肪酸含量等营养成分高于衰亡期，故若投喂已经处于衰亡期的藻类，不仅会因养殖生物不摄食、营养活性低而影响生物生长，而且还会增加残饵量导致水质恶化，造成经济损失。然而，目前对于水产养殖业饵料绿藻管理，往往是通过显微镜观察活体状态、通过经验目测或血细胞计数板显微计数等方式测得藻类数量，无法准确地分析出绿藻的营养活性。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种饵料绿藻营养活性的比色检测方法。

本发明的技术解决方案是：一种饵料绿藻营养活性的比色检测方法，其特征在于按照如下步骤进行：

a. 向饵料绿藻藻液中加入无水葡萄糖并摇匀，封口后20~25℃下静置光照培养2h得培养液，所述藻液与无水葡萄糖的用量比为150ml：1.5g；

b. 取25ml培养液，加入5ml浓度为0.05mol/L的碘标准溶液及2ml浓度为2mol/L的氢氧化钠水溶液，摇匀后密封暗处理10~15min；

c. 向液体中加入1ml浓度为6mol/L的盐酸、25ml浓度为0.1mol/L的硫代硫酸钠水溶液及1ml质量分数为0.01的淀粉指示剂，摇匀；再加入2ml浓度为2mol/L的氢氧化钠水溶液及3ml浓度为0.5g/L的靛蓝胭脂红水溶液，静置两小时；

d. 以上清液体颜色与比色卡对比，确定饵料绿藻营养活性；所述比色卡是培养不同浓度梯度对应的鲜活藻液，按照步骤a~c操作后，按照浓度梯度对应的颜色制备而成。

本发明利用绿藻摄食葡萄糖的特性，将葡萄糖氧化显色与碘量法测葡萄糖方法优化结合并将检测条件限定为较高的碱性，使藻类在碱性环境中无法存活而沉降，进而取上清液进行显色，避免绿藻本身具有颜色对葡萄糖显色的影响，可有效地通过显色来反映饵料藻的生长状况，进而迅速比对出鲜活藻液的细胞密度，从而确定绿藻的营养活性，无需养殖经验及血细胞计数仪等设备，具有操作简单、检测效率高等优点。

附图说明

图1是本发明以鲜活小球藻为藻液d步骤按照浓度由高至低拍摄的图片。

图2是以图1所示图片颜色制作的比色卡。

图3是本发明以鲜活扁藻为藻液d步骤按照浓度由高至低拍摄的图片。

图4是以图3所示图片颜色制作的比色卡。

图5是本发明以鲜活盐藻为藻液d步骤按照浓度由高至低拍摄的图片。

图6是以图5所示图片颜色制作的比色卡。

具体实施方式

本发明的一种饵料绿藻营养活性的比色检测方法，按照如下步骤进行：

a. 向150ml被测的饵料绿藻藻液中加入1.5g无水葡萄糖并摇匀，以封口膜封口后22℃下静置光照培养2h得培养液，期间摇瓶1~2次，无需打氧；绿藻藻液可分别是小球藻属的蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidesa）、扁藻属的亚心型扁藻（Fetraselmis subcordiformis ）或杜氏藻属盐生杜氏藻（Dunaliella salina）；

b. 取25ml培养液，加入5ml浓度为0.05mol/L的碘标准溶液及2ml浓度为2mol/L的氢氧化钠水溶液，摇匀后密封暗处理15min；

c. 向液体中加入1ml浓度为6mol/L的盐酸、25ml浓度为0.1mol/L的硫代硫酸钠水溶液及1ml质量分数为0.01的淀粉指示剂，摇匀；再加入2ml浓度为2mol/L的氢氧化钠水溶液及3ml浓度为0.5g/L的靛蓝胭脂红水溶液，静置两小时；

d. 以上清液体颜色与比色卡对比，确定饵料绿藻营养活性；所述比色卡是培养不同浓度梯度对应的鲜活藻液，按照步骤a~c操作后，用像素2000~4000万的索尼A600相机进行拍摄，以与照片对应的颜色由高浓度到低浓度绘制比色卡。

制作比色卡所用鲜活绿藻藻液与被测藻液相对应，分别是小球藻属的蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidesa）、扁藻属的亚心型扁藻（Fetraselmis subcordiformis ）或杜氏藻属盐生杜氏藻（Dunaliella salina）等。

本发明操作时间较短，可忽略藻细胞光合作用等反应产生的胞外产物和细胞繁殖对实验结果的影响。所用试剂均为外购商品并按照现有方法配制不同浓度。

图1是本发明以鲜活小球藻为藻液d步骤按照10个浓度由高至低拍摄的图片。浓度梯度为0、1*10⁰cell/ml、1*10¹cell/ml、1*10²cell/ml、1*10³cell/ml、1*10⁴cell/ml、1*10⁵cell/ml、1*10⁶cell/ml、1*10⁷cell/ml、1*10⁸cell/ml 。

图2是以图1所示图片颜色制作的比色卡。

图3是本发明以鲜活扁藻为藻液d步骤按照8个浓度由高至低拍摄的图片。

浓度梯度为1*10⁰cell/ml、1*10¹cell/ml、1*10²cell/ml、1*10³cell/ml、1*10⁴cell/ml、1*10⁵cell/ml、1*10⁶cell/ml、1*10⁷cell/ml。

图4是以图3所示图片颜色制作的比色卡。

图5是本发明以鲜活盐藻为藻液d步骤按照8个浓度由高至低拍摄的图片。

浓度梯度为1*10⁰cell/ml、1*10¹cell/ml、1*10²cell/ml、1*10³cell/ml、1*10⁴cell/ml、1*10⁵cell/ml、1*10⁶cell/ml、1*10⁷cell/ml。

图6是以图5所示图片颜色制作的比色卡。